Regiunea rep a plasmidelor

1. oriV formată din:

 regiunea ADN care poate susține replicarea.
 regiunea ADN în care va avea loc despărțirea catenelor.
 nucleotidul sau nucleotidele la care începe sint în reeza
catenei leadiding.
2. Regiunea care codifică proteina Rep, unica proteină
implicată în replicare codificată de plasmidă.
3. Gene „dirijor” a replicării plasmidei
 Mecanismul THETA
Regiunea oriV: OriV
 Cutii DnaA (sunt formate
Iteroni Rep
din cîte 9 bp, denumite 9- (cutii Rep)
meri) la care se atașează Cutii
DnaA
proteina DnaA Regiunea AT
 Iteroni (4-5 secvențe de
ADN la care se atașează
proteina Rep)
 Regiunea bogată în AT
de unde începe desfacerea
dublului helix.
 Mecanismul THETA

1. Proteinele Rep Iteroni Rep

se lipesc la iteroni
ceea determină o
curbare a molecu-
Proteine Rep
lei ADN în această
zonă
 Mecanismul THETA

2. Ataşarea Iteroni Rep

proteinelor DnaA
la cutiile dnaA
Proteine Proteine Rep
dnaA
 Mecanismul THETA

3. Ataşarea com- Iteroni Rep

plexului proteic Proteine Rep
dnaB-dnaC la
regiunea bogată în Proteine
DnaB
A/T. DnaB este dnaA

o helicază care DnaC

desface dublul helix

în această
zonă
 Mecanismul THETA
4. Sinteza unui ARN primer de
către ARN poli-meraza, care este
codificată de o genă cromozomală.
5. Începe asamblarea catenelor
fiice de ADN, pro ces catalizatla
(majoritatea plasmidelor de acest
tip), de către ADN polimeraza III.

6. Sinteza celor 2 catene (leading

şi lagging)
 Mecanismul THETA
! La plasmide sinteza catenelor după meca-nismul theta
se desfăşoară în majoritatatea cazurilor unidirecţional,
spre deosebire de replicarea cromozomului bacterian
care la marea majoritate a speciilor bacteriene se
desfăşoară bidirecţional.
! Sinteza celor două catene noi ale moleculei de ADN
este cuplată şi simultană.
! Proteinele de tip Rep sunt codificate plasmi-dial,
celelalte fiind codificate cromozomal
 Mecanismul STRAND-DISPLACEMENT (SD)
Denumirea provine din termenul strand-displacement şi se referă la faptul că în
timpul procesului de replicare are loc dislocarea uneia din cele 2 catene ADN.
Acest mecanism se întîlneşte în special la plasmidele promiscue din grupul de
incompatibilitate IncQ (de exemplu, RSF1010).

Regiunea oriV: OriV

Iteroni Rep
 3 secvenţe ADN (cutii Rep)
Regiunea
G/C Regiunea
de tip iteroni A/T

 Regiune bogată în
G/C (174 bp)
 Regiune bogată în
A/T (31 bp).
Mecanismul STRAND-DISPLACEMENT (SD)

1. Proteina Iteroni Rep

RepC (proteină
inițiator a rep-
licării) se Proteina RepC
(inițiator)

ataşează la
secvenţe iteroni
 Mecanismul STRAND-DISPLACEMENT (SD)

2. Proteina RepA Iteroni Rep

(helicaza) se
ataşează la
regiunea în A/T, Proteina RepC
determinând
desfacerea dub- Proteina RepA
(hrlicaza)
lului helix sub
forma buclei D
(forma literei D)
 Mecanismul STRAND-DISPLACEMENT (SD)

3. Proteina Proteina RepB

(prmaza)

RepB (primaza)
se ataşează la
bucla A/T şi
sintetizează un
primer ARN Proteina RepA
(helicaza)
 Mecanismul STRAND-DISPLACEMENT (SD)
4. Începe procesul de polimerizare a unei catene a ADN-lui plasmidial.
Această etapă finalizează cu formarea unei molecule de ADN d.c.
(plasmida replicată). Cea de-a doua catenă a plasmidei rămîne
nereplicată (ADN monocatenar).

ADN d.c + ADN m.c

Catena-„fiică” Catena-matice
 Mecanismul STRAND-DISPLACEMENT (SD)
5. Îniţiază un nou proces de replicare a ADN m.c. (cel
rămas) care va conduce la formarea catenei complementare,
şi deci, a celui de-al doilea plasmid.
 Mecanismul STRAND-DISPLACEMENT (SD)

! Sinteza celor două catene noi ale moleculei

de ADN nu este cuplată şi simultană.

! Procesul de replicare ADN nu depinde de

proteinele celulei “gazdă” (codificate
cromozomal ), ci de trei proteine RepA, RepB,
RepC codificate de genele plasmidiale.
 Mecanismul ROLLING-CIRCLE (RC)

Plasmidele ce se replică prin mecanism RC au

două sec-venţe ori, situate distanţat una de
alta:
dso (“double-stranded origin”), de la care
este iniţiată replicarea primei catene noi
(catena leading)
sso (“single-stranded origin”), de la care
este iniţiată sinteza celei de-a doua catene noi
(catena lagging)
 Mecanismul ROLLING-CIRCLE (RC)

Plasmidele ce se replică prin mecanism RC au

două secvenţe ori, situate distanţat una de
alta:
dso („double-stranded origin”), are două
regiuni “bind și“nick de la care este iniţiată
replicarea catenei leading.
sso („single-stranded origin”), de la care
iniţiază sinteza catenei lagging.
 Mecanismul ROLLING-CIRCLE (RC)
A. Replicarea catenei leading
1. Proteina Rep se ataşează la
regiunea „bind” a secventei dso.
2. Proteina Rep se ataşează la
regiunea „nick” a secventei dso unde
taie o legătură fosfodiesterică, astfel
producînd ruptura unei catene a
ADN-ului plasmidial.
3. Proteina Rep se leagă la capătul 5’
a catenei, iar capul al catenei 3’ va
ră-mîne liber, servind ca praimer
pentru începerea sintezei catenei
leading
Mecanismul ROLLING-CIRCLE (RC)
A. Replicarea catenei leading