Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
2
(6) ADN-topoizomerazele I i II. Despiralizarea dublului helix fr rotaia acestuia
creaz n aval de furca de replicare nite superhelixuri (asemntor separrii brute a firelor
rsucite dintr-o frnghie); topoizomerazele rup legturile fosfodiester la nivelul uneia
(topizomeraza I) sau a ambelor catene (topizomeraza II), produc rotaia liber a capetelor
helixului i apoi resudarea lor; n acest fel topoizomerazele detensioneaz (relaxeaz)
molecula de ADN.
(10) Ribonucleaza H1 (RNaza H1) ndeprteaz primerul ARN, folosit pentru iniiera
replicrii; lacuna rmas este completat de ADN-polimeraza , iar sudarea capetelor este
realizat de ctre o ADN-ligaz, refcnd continuitatea catenei.
3
Pe cele dou catene matri, ADN-polimeraza ataeaz secvenial i complementar
dezoxiribonucleotidele activate.
orii
o ori
r i
i
i
ori
Iisintez i
complet
ADN
Polimerizarea nucleotidelor se face diferit pe cele dou catene, care sunt antiparalele.
ADN-polimeraza nu poate ncepe sinteza prin legarea a dou nucleotide; ea poate doar s
adauge nucleotide la captul 3OH al unui lan preexistent (ADN-polimeraza poate numai s
alungeasc catena n curs de sintez); de aceea necesit utilizarea unui primer ARN, sintetizat
sub aciunea primazei. Sinteza se poate efectua numai n sensul 5-3. Astfel numai una din
cele dou catene, denumit caten conductoare sau directoare (leading strand) (catena care
are ca matri catena 5-3) poate fi sintetizat n mod continuu i n sensul deplasrii furcii de
replicare.
Cealalt caten - catena ntrziat (lagging strand) (catena care are ca matri catena
3-5) - este sintetizat discontinuu i mai lent, sub form de secvene scurte (100-1000
nucleotide) denumite fragmente Okazaki; sinteza fiecrui fragment are loc n sens opus celui
n care se deplaseaz furca de replicare.
Primerul este eliminat prin hidroliz i nlocuit cu secvene ADN, sub aciunea ADN-
polimerazei , iar fragmentele sunt unite de ctre o ADN-ligaz. Primerul este necesar numai
4
la nceputul replicrii pentru catena conductoare, iar pentru catena ntrziat la sinteza
fiecrui fragment Okazaki (fig. 5.3).
5 3
topoizomeraz
helicaz
3 5
proteine
SSBP
Caten Caten
conductoare ntrziat 3 5
3 5
sinteza 5 3 5 3 5
3
primer
ARN 3 fragment
(primaz) Okazaki
(pol , )
3
5 eliminare
primer
ARN unire 3
fragmente
(ADN-
ligaz) 5
3 5 3 5 3 5
5
5.1.3. Particularitile replicrii ADN la eucariote
(1) Datorit dimensiunii mari a genomului i asocierii cu proteine, viteza de replicare
este mai redus circa 50 nucleotide/secund (fa de 500 nucleotide/secund la procariote).
Replicarea ncepe n mai multe puncte de origine (secvene specifice de ADN) care
corespund unitilor de replicare numite repliconi. Replicarea progreseaz bidirecional pentru
fiecare replicon i, dup ce se termin, repliconii fuzioneaz treptat pn ce ntregul
cromozom este duplicat.
(2) Comportamentul proteinelor nucleozomale n timpul replicrii nc nu este
cunoscut cu precizie; se tie ns c, odat cu siteza ADN, n nucleu are loc i o intens sintez
de histone, necesare formrii de noi nucleozomi.
(3) Replicarea are loc n faza S a ciclului celular i dureaz, n celulele umane, circa 8
ore (la un ciclu celular de 24 de ore). Deoarece acest timp este scurt pentru replicarea celor
peste 3 miliarde de pb din genomul uman, uneori pot apare erori.
[Replicarea este reglat de o serie de proteine:
diferite cicline asigur trecerea din faza G1 n faza S, precum i progresia prin faza S;
CDK4 este o protein-kinaz activatoare
anumii factori de transcripie activeaz punctele de origine, iar alii stimuleaz
expresia genelor necesare intrrii n faza S;
Inhibitorii kinazelor dependente de cicline - CKI - blocheaz intrarea i progresia prin
faza S (prin inhibarea complexelor CDK-cicline i PCNA) atunci cnd apar leziuni ale ADN
sau cnd un esut a ncheiat diferenierea.]
Replicarea celor 20-80 de repliconi nu este sincron i se realizeaz ntr-o anumit
ordine, n funcie de structura cromatinei: la nceputul fazei S este replicat eucromatina, iar la
sfritul fazei S este replicat heterocromatina.
n mod normal, ntregul genom este replicat n faza S o singur dat.
(4) Replicarea telomerelor
Telomerele sunt alctuite din secvene hexamerice repetitive TTAGGG dispuse n
tandem pe o lungime de 5-20 kb. Un fenomen caracteristic telomerelor este pierderea de
secvene ADN la fiecare replicare, deoarece, la captul 5 al catenelor nou sintetizate
replicarea este incomplet, pierzndu-se la fiecare ciclu celular ntre 25 i 200 pb. Aceasta
duce la scurtarea progresiv a telomerelor i, dup un numr de replicri (maximum 80 la
6
celulele somatice, cnd este atins limita critic de circa 1,5 kb), la oprirea replicrii i a
diviziunii.
La nivelul celulelor germinale, n succesiunea generaiilor, lungimea telomerelor
rmne nemodificat datorit aciunii enzimei telomeraza. Telomeraza este o
reverstranscriptaz special care conine o secven scurt de ARN, complemetar secvenelor
repetitive telomerice; telomeraza adaug secvene TTAGGG la captul 3, fr a necesita o
matri (fig. 5.4.).
n majoritatea celulelor somatice, expresia genei telomerazei este inhibat nc din
stadiul embrio-fetal. Dispariia activitii telomerazei dup natere determin scurtarea
progresiv a telomerelor dup fiecare diviziune, pe msura naintrii n vrst. Cnd este
atins o lungime critic, diviziunea se oprete i ncepe senescena. Pierderea telomerelor
produce, de asemenea, instabilitate genomic, urmat adesea de rearanjamente cromozomiale.
Telomeraza este reactivat n celulele canceroase (vezi Cap. Boala canceroas).
(5) Procesul de replicare este realizat de ctre ADN-polimeraze cu mare fidelitate: rata
erorilor de mperechere (mismatch) este de circa 1/109.
ADN-polimeraza are, n primul rnd, capacitatea de a poziiona corect bazele
complementare (probabil pe baza conformaiei tridimensionale). n al doilea rnd, ADN-
polimerazele i au activitate de corectare (proofreading), nlturnd nucleotidele greit
ncorporate printr-o aciune 3-5- exonucleazic.
Puinele erori de mperechere care apar n prezena mecanismelor menionate sunt
reparate.
7
5 3
T T A G G G
A A U C C C
3 5
telomeraz
Sintez
ADN
5 3
T T A G G GT T A G G G
A A U C C C
3 5
Deplasarea telomerazei +
sintez ADN
5 3
T T A G G GT T A G G G T T A G G G
Etape multiple de sintez sub
aciunea telomerazei
5 3
T T A G G GT T A G G G T T A G G GT T A G G G
Elongarea catenei opuse de
ctre ADN-polimeraz
5 3
T T A G G GT T A G G G T T A G G GT T A G G G
T C C C
3 5
8
5.2. TRANSMITEREA INFORMAIEI GENETICE DE LA O CELUL
LA CELULELE-FIICE.
n celulele somatice, materialul genetic dublat n interfaz se distribuie n mod egal
celulelor-fiice prin procesul de diviziune mitotic. Celulele-fiice sunt identice din punct de
vedere genetic att ntre ele, ct i cu celula-mam. Procesele prin care o celul i replic
materialul genetic, l divide egal i l transmite celulelor-fiice au loc ntr-o ordine bine
determinat - ciclul celular.
9
celulele hepatice). Atunci cnd condiiile menionate dispar, celulele pot reintra n G1 i pot
continua ciclul celular. Astfel, fazele G1 i G0 sunt dou stri fiziologice diferite ale celulei.
Sub influena unor factori inductori ai diferenierii, unele celule aflate n faza G 1
prsesc definitiv ciclul celular i trec n faza G 1D; celulele difereniate din G1D nu se mai
divid i mor dup un anumit timp.
b) Faza S
n faza S (synthesis) are loc sinteza de ADN prin replicare semiconservativ i sinteza
histonelor. n aceast etap este dublat ntregul genom, condiie esenial pentru declanarea
diviziunii celulare. Numrul de cromozomi rmne 46, dar fiecare cromozom va fi
bicromatidian, alctuit din dou cromatide identice, deci din dou molecule de ADN. n faza S
are loc i sinteza proteinelor care vor forma fusul de diviziune, precum i asamblarea
microtubulilor cu formarea centriolilor din vecintatea nucleului.
Replicarea ADN n faza S este asincron: segmentele de ADN bogate n G-C se
replic precoce, la nceputul fazei S, iar cele bogate n A-T se replic tardiv, la sfritul fazei S.
n faza S a ciclului celular se pot produce, n mod normal, ntre 7 i 10 schimburi egale
de material genetic ntre cromatidele surori (SCE sister chromatid exchange). Frecvena SCE
crete n anumite boli i dup expunerea organismului la substane mutagene sau carcinogene.
c) Faza G2
n faza G2 are loc sinteza de proteine necesare corectrii erorilor de replicare, precum
i de proteine i ARN necesare mitozei.
Fiecare cromozom este bicromatidian, despiralat. Spre sfritul fazei G2 se activeaz un
factor de declanare a mitozei (factor de condensare cromozomial) care determin
condensarea filamentelor de cromatin.
d) Diviziunea celular sau faza M cuprinde procesele prin care materialul genetic
(ADN din 46 cromozomi bicromatidieni) replicat n interfaz segreg, adic se distribuie n
mod egal i total n doi nuclei distinci, iar celula se mparte prin citokinez n dou celule-
fiice, identice cu celula din care au luat natere.
Diviziunea mitotic ncepe cu diviziunea nucleului i se termin cu diviziunea
citoplasmei (vezi Caiet de lucrri practice). Procesele mitozei au loc n general cu mare
precizie, asigurnd fidelitatea transmiterii informaiei genetice n succesiunea generaiilor de
celule. Erorile care survin genereaz anomalii cromozomiale.
b) Diferenierea
Celulele prsesc definitiv ciclul celular i se transform n celule specializate, cu
anumite structuri i funcii, care nu se mai divid i mor dup un timp determinat (de exemplu
neuronii, celulele musculare, hematiile adulte, granulocitele, etc.).
c) Stadiul de repaus
Unele celule (de exemplu celulele stem, limfocitele) prsesc ciclul celular n faza G 1
i rmn n faza G0, n care pstreaz o activitate minim metabolic i capacitatea de
diviziune. Aceste celule formeaz compartimentul neproliferativ. Sub aciunea unor stimuli
(factori de cretere, hormoni, stimulatori ai mitozei, etc.), aceste celule pot reintra n ciclul de
diviziune. De exemplu, limfocitele din sngele periferic sunt activate sub aciunea
fitohemaglutininei (PHA), transformndu-se n celule tinere limfoblati care se divid
intens.
activarea/inactivarea, n diferite
momente-cheie, a complexelor
formate din kinaze ciclin- Cdk4-ciclina D
Cdk6-ciclina D
dependente (CDK-Cyclin-
dependent kinase) i proteine
numite cicline. Fiecare faz a Punct de
restricie
ciclului celular are un control
specific (fig. 5.4). Cdk2-
ciclina A
n derularea ciclului celular
Cdk2-
exist nite pauze denumite ciclina E
11
Figura 5.4. Controlul ciclului celular (activarea ciclinelor
i a kinazelor ciclin-dependente)
puncte de control (checkpoints), n care se verific dac celula este pregtit pentru a trece
de la o faz n alta. n cazul identificrii unor anomalii, se oprete progresia n ciclul celular
pentru a permite repararea sau, dac aceasta nu este posibil, se induce apoptoza (moartea
celular programat). Astfel se asigur creterea normal i sunt nlturate defectele, pentru a
nu fi transmise celulelor-fiice.
Cel mai important punct de control intereseaz tranziia G1/S i este denumit punct de
restricie. Orice alterare a ADN sau perturbare fiziologic (hipoxie, etc.) activeaz gena p53
denumit i gardianul genomului uman. Proteina P53 activeaz gena care codific proteina
P21 care inhib complexele CDK-cicline i PCNA. Celulele sunt oprite astfel n G 1/S pentru a
fi corectate. Dac anomaliile, mai ales ale ADN, nu sunt reparate, este declanat apoptoza.
Desfurarea mitozei este riguros controlat prin trei puncte de control. Punctul de
control esenial se afl la tranziia G2/M, n care se decide dac celula intr n mitoz i asupra
cruia acioneaz complexul format din Cdc2 i ciclina B, denumit i MPF (M-phase
promoting factor). Prin activarea acestui complex este iniiat mitoza. Celulele care prezint
anomalii cromozomiale sau defecte ale aparatului mitotic sunt oprite s intre n mitoz prin
aciunea P53 i P21, un inhibitor al cdk, care blocheaz celula n G2.
Dup ce fiecare cromozom s-a aliniat n placa metafazic, procesul se oprete circa 20-
30 de minute la nivelul celui de-al doilea punct de control, n care se verific dac toi
cromozomii sunt perfect aliniai nainte de separarea cromatidelor. Dac nu se constat
perturbri, enzima ubiquitina degradeaz brusc proteina ISS (Inhibitor of Sister Chromatid
Separation), ceea ce permite separarea cromatidelor i iniierea anafazei.
n anafaz, exist cel de-al treilea punct de control, n care este inactivat complexul
Cdc2-ciclin B i care permite terminarea mitozei i trecerea ntr-o nou faz G1.
Proliferarea celular este reglat de factori extracelulari (hormoni, factori de cretere,
etc.) i de anumite gene. Genele proliferrii sunt denumite protooncogene, deoarece prin
mutaie sau activare anormal determin o proliferare anormal a celulelor i cancer. Genele
antiproliferative inhib proliferarea celular i sunt denumite gene supresoare ale tumorilor
(tumor supressor genes) sau antioncogene.
5.2.2. Mitoza
Mitoza este diviziunea caracteristic celulelor somatice ale organismului. Ea asigur
creterea organismului de la stadiul de celul unic zigotul, pn la cele aproximativ 1014
12
celule ale unui adult. n unele esuturi (mduv hematogen, esuturi epiteliale), mitoza are loc
continuu, pe tot parcursul vieii, asigurnd rennoirea celular. Pe de alt parte, prin mitoz
sunt compensate pierderile de celule mbtrnite, difereniate sau lezate.
Mitoza este o diviziune ecuaional, n urma creia dintr-o celul iniial (celula-
mam) cu 46 de cromozomi (diploid), rezult dou celule-fiice care au, de asemenea, 46 de
cromozomi. Durata mitozei la om este de circa o or. Mitoza permite transmiterea fidel a
informaiei genetice n succesiunea generaiilor, asigurnd astfel stabilitatea proceselor
ereditare.
13
numrul diploid de cromozomi (46) (vezi Caiet de lucrri practice); zigotul are astfel o
structur genetic nou, unic i constant denumit individualitate genetic.
14