Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Capcelea
Replicarea este procesul fundamental pentru toate organismele vii și reprezintă esența
eredității. Conform modelului complementarității a lui Watson și Crick, fiecare catenă ADN
conține o secvență de dezoxiribonucleotide, care activate se aranjează complementar(A-T, G-C),
în direcţia 5’→3’, fiind polimerizate de ADN polimeraze. Fiecare catenă ADN servește drept
tipar pentru formarea unei noi catene. Acordarea Premiului Nobel (1959) luiA. Korn'sOchoa şi
berg pentru descrierea mecanismului replicării ADN, explică astăzi obținerea celor mai puternice
antibiotice și antivirale care blochează replicarea genomului bacterian/viral.
1. Principiile replicării:
1
Biologie moleculară Replicarea ADN Reparația ADN L.Rotaru
Replicarea ADN începe în situsuri specifice ale genomului numite origini ale replicării
(ori), la care se fixează proteinele de inițiere ale replicării – numit complexul pre-replicativ
(pre-RC);
Secvenţa ori are următoarea structură :
La nivelul întregului genom au fost identificate aproximativ 30-50000 de ori, iar repliconii au o
lungime de 2000kb.
2
Biologie moleculară Replicarea ADN Reparația ADN L.Rotaru
3. Etapele replicării
Replicarea necesită un complex proteic numit ORC care recunoaşte punctul de origine a
acesteia şi o iniţiază. Proteina/proteinele de recunoaştere se leagă de ori şi iniţiază despiralizarea
locală a ADN în situsul DUE.
Complexul multifermentativ, numit replizoma, se mişcă de-a lungul ADN-ului şi
efectuează sinteza pe ambele catene ale ochiului replicativ. Replicarea ar putea fi văzută ca
creşterea continuă a noi catene de ADN în dublul helix. Este necesar de accentuat că:
Citirea matriţei se efectuează doar în direcţia 3′ 5′;
Sinteza catenei noi se efectuează doar în direcţia 5′3′.
3
Biologie moleculară Replicarea ADN Reparația ADN L.Rotaru
4
Biologie moleculară Replicarea ADN Reparația ADN L.Rotaru
5
Biologie moleculară Replicarea ADN Reparația ADN L.Rotaru
6
Biologie moleculară Replicarea ADN Reparația ADN L.Rotaru
ADN-polimeraza catenei lider – sintetizează o catenă nouă de ADN complementară matriței: citește nucleotidele catenei iniția
7
Biologie moleculară Replicarea ADN Reparația ADN L.Rotaru
ADN- helicazele, sunt enzime care hidrolizează ATP, producând ruperea legăturilor de hidrogen dintre cele două
catene parentale ADN;
ADN-topoizomerazele –relaxează dublul helix, scade numătul de spire/ kpb:
ADN- topoizomeraza I- induc rupturi monocatenare ADN;
ADN – topoizomeraza II – induc rupturi bicatenare ADN;
Proteinele SSB – facilitează activitatea ADN-polimerazelor:
ADN – polimerazele - asigură polimerizarea nucleotidelor, sintetizând o catenă nouă de ADN numai, în direcția
5’→3’. ADN – polimeraza nu începe sinteza unei catene noi de ADN, ci numai o extinde, adăugând fiecare nou
nucleotid la gruparea 3’OH a nucleotidului deja încorporat. Unele ADN
polimeraze au capacitatea de relectură, verifică erorile, înlătură ultimul
nucleotid încorporat greșit – asigură reparația replicativă.
Există 5 tipuri de ADN- polimeraze:
ADN polimerazaα– sinteza catenei întârziate și sinteza ARN primer;
ADN polimerazaβ – repararea ADN;
ADN polimerazaγ – sinteza și repararea ADNmitocondrial;
ADN polimerazaδ - sinteza catenei lider și repararea ADN;
ADN polimerazaε - sinteza catenei întârziate și repararea ADN;
8
Biologie moleculară Replicarea ADN Reparația ADN L.Rotaru
4. Modele de replicare
9
Biologie moleculară Replicarea ADN Reparația ADN L.Rotaru
Particularitățile telomerelor:
Telomerii sunt secvențe repetitive de ADN (TTAGGG)n localizate la terminațiile
cromozomilor la majoritatea organismelor eucariote, care asigură protecţia şi
stabilitatea cromozomilor.
Replicarea ADN la nivelul capetelor cromozomilor este incompletă: la capătul 5’
al catenei noi sintetizate există o mică regiune nereplicată;
Telomeraza- enzima ce asigură replicarea ADN telomeric şi “repară” telomerele.
Telomeraza este formată din:
Revers-transcriptaza telomerazică
TERT(complex proteic);
O moleculă de ARN – telomerazic TERC cu
lungimea de 451 n., ce include o scurtă regiune
complementară cu repetiţia telomerică: la om -
5’– CAAUCCCAAUC – 3’;
disckerina(DKS1) – proteina ce asigură
foldingul și stabilitatea Revers-transcriptazei.
1
Biologie moleculară Replicarea ADN Reparația ADN L.Rotaru
1
Biologie moleculară Replicarea ADN Reparația ADN L.Rotaru
şiînurmaacumulăriiuneicantităţisubstanţiale membraneiplasmatice;
de fosfolipideacidepefaţainternăa
ProteinaDnaB - funcţie de helicază; Topoizomeraza la procarioteestedenumită – giraza; ADN polimerazele I, II și
- Proteine SSB.
-
-
-
1
Biologie moleculară Replicarea ADN Reparația ADN L.Rotaru
Astfel replicarea :
A. Asigură sinteza matricială a moleculelor de ADN cu dublarea exactă a IG;
B. Dublarea exactă a IG determină transmiterea
IG:
i. Altor celule prin mitoză sau
ii. Altor generații prin mitoză și fecundație;
C. Transmiterea IG din generație în generație asigură autoreproducerea celulelor /
organismelor și stă la baza eredității caracterelor de familie, de populație, de specie.
1
Biologie moleculară Replicarea ADN Reparația ADN L.Rotaru
6. Reparația ADN
In structura normală a ADNului bazele azotate se află sub forma tautomerică: keto sau
amino. In unele condiţii, care se întalnesc mai rar acestea pot trece in formele enol și imino, prin
deplasarea unui proton (H+) ce pot forma împerecheri greșite: C-A (forma rară), T-G (forma
rară).
Alchilarea bazelor poate induce împerecherea greșită a bazelor
Agenţii de intercalare (proflavina, acridin-oranj) se intercalează între perechile de baze
și mimează dispunerea acestora. In stare intercalată agenţii de intercalare favorizează deleţiile
sau inserţiile.
Razele ultraviolete pot induce formarea dimerilor de T (2 baze de pe aceeași catenă
formează legături covalente). Aceste legături pot fi de tip C5-C6 cu formare de structură de tip
ciclobutil sau pot fi de tip C4-C6.
1
Biologie moleculară Replicarea ADN Reparația ADN L.Rotaru
Modificarea bazelor poate avea loc prin reacţii de dezaminarea a altor baze. Dezaminarea C are
ca rezultat formarea U. Uracilul poate forma legături de H cu A, iar la replicarea ulterioară a
ADN pe catena nou sintetizată in locul G va fi A. In unele cazuri (forma ionizată a U) poate
forma legături de H si cu G. Dezaminarea 5-metil citozinei (se presupune că 5-metil-C participă
la inactivarea genelor) va avea ca rezultat o T.
Erorile datorate replicării (introduse de ADN polimerază) sunt rare, 1 la 100 mln
pb.Toate organismele posedă mecanisme de reparare a ADN. Mitocondria nu posedă mecanisme
de reparare a ADN, acest fapt explică rata mare a erorilor în ADNmt.
1
Biologie moleculară Replicarea ADN Reparația ADN L.Rotaru
• Mecanismele de reparare (MMR, BER, NER) diferă prin ţinta lor dar modul de acţiune
este asemănător (implicând multiple gene şi enzime “mutator”); Enzimele de reparare
sunt codificate de anumite gene (MSH, MLH, PMS) numite şi gene “mutator”
• Mutaţiile acestor gene → predispoziţie la cancer.
Figura 20. Mecanisme de reparație a leziunilor din ADN și factorii proteici specifici fiecărui tip de reparație
concordant cu tipul defecturlui. Abrevieri: AGT, O6-alkylguanine-DNA alkyltransferase; ATM, ataxia
telangiectasia mutated; BER, base excision repair; DR, direct repair; GG-NER, global genome NER; HR,
homologous recombination; 06MeG, O6-methylguanine; MMR, mismatch repair; NER, nucleotide excision
repair; NHEJ, non-homologous end joining.
• Etapele reparației:
– recunoaşterea defectului din molecula de ADN (biomarcatori specifici erorii);
– excizia fragmentului de ADN modificat (←endonucleaza)
– îndepărtarea şi degradarea fragmentului (←helicaza, exonucleaza)
– refacerea, sinteza secvenţei normale (←ADN polimeraze) = reparare
– legarea secvenței sintetizate în catena reparată (← ADN ligaza)
1
Biologie moleculară Replicarea ADN Reparația ADN L.Rotaru
Leziunile la nivelul unei singure catenei de ADN – sunt reparate pe baza informatiei de pe catena
complementară prin acţiunea unor mecanisme de excizie-reparaţie, ce taie secvența cu defect şi
resintetizează porţiunea de ADN după principiul complementaritații.
1
Biologie moleculară Replicarea ADN Reparația ADN L.Rotaru
B. prin excizia şi inserţia uneia sau a mai multor nucleotide - nucleotide excision
repair (NER) – repară defectele ce afectează una sau mai multe nucleotide prin:
2
Biologie moleculară Replicarea ADN Reparația ADN L.Rotaru
Diferiți factori mutageni exogeni sau endogeni, fizici, chimici sau biologici determină
diferite defecte în molecula de ADN. Erorile se pot produce în diferite perioade ale ciclului
celular. Gardienii ciclului celular semnalizează defectele, blochează evoluția ciclului celular și
activează sistemele de reparație corespunzătoare tipului de modificare în molecula de ADN,
pentru evitarea acumulării și transmiterii acestora altor generații de celule. În caz că reparația nu
s-a produs celula este încurajată să-și activeze mecanismul de apoptoză. Dacă celula nu poate
realiza reparația și evită apoptoza – mutațiile se acumulează, se transmit altor generații de celule
perturbînd dezvoltarea sau producînd clone tumorale (cancere).
Figura 24. Abbrevieri: cis-Pt and MMC, cisplatin and mitomycin C, respectively (both DNA-cross-linking agents); (6–4)PP and
CPD, 6–4 photoproduct and cyclobutane pyrimidine dimer, respectively (both induced by UV light); BER and NER, base- and
nucleotide-excision repair, respectively; HR, homologous recombination; EJ, end joining.