SINTEZA ADN

Sinteza ADN-ului

eveniment interfazic

(etapa S a ciclului celular) ce consta

in dublarea cantitatii de ADN prin

autoreplicare semiconservativa
 Ca urmare a sintezei ADN-ului,

prin diviziunea celulara

informatia genetica (parentala)

se conserva si apoi se

transmite (in mare parte nemodificata)

in celulele fiice
Ciclul celular
 MODELUL SINTEZEI ADN-ului
(IMAGINAT DE WATSON SI CRICK)

- valorifica structura tertiara a ADN

-replicarea este semiconservativa

prin modelul fermoarului

 Momentele sintezei
dublul helix se desface sub actiune enzimatica: HELICAZE

progresia ruperii legaturilor de hidrogen= asemanatoare unui fermoar

PRIMAZELE initiaza sinteza preferential in anumite puncte

bazele azotate expuse in urma desfacerii se cupleaza complementar cu

bazele azotate din mediu cu ajutorul ADN - POLIMEARZEI III

se refac cele 2 catene si apar 2 molecule noi

sub actiune enzimatica cele douq catene se rotesc formind helixul initial

LIMITE - sinteza nu poate fi sincrona pe ambele catene deoarece acestea sunt

antiparalele, iar ADN polimeraza III lucreaza numai in directia 5 -3
 REPLISOMUL

= un dispozitiv molecular complex care

realizeaza replicarea
 REPLISOMUL
este un complex alcatuit din structuri cu functii
specifice in cadrul replicarii:
POLIMERAZE (III si I)
HELICAZE
GIRAZE (topoizomeraze)- nu permit superspiralizari
PRIMAZE - ARN-polimeraze
LIGAZE
SSB (single strand binding)- PROTEINE ce nu permit
monocatenelor sa se apropie
PROTEINE ce remodeleaza dublul helix
 Complementaritatea
guverneaza modul de
alipire a nucleotidelor
pe catenele nou
formate: A =T, G C
Replicarea necesita
prezenta unei catene
matrita, de pe care
sa se copieze
informatia genetica.
Fiecare catena este o
matrita in replicarea
semiconservativa
 R

x
1 http://www.youtube.com/watch?v=teV62zrm2P0

3 http://www.youtube.com/watch?v=4jtmOZaIvS0

4 http://www.youtube.com/watch?v=hfZ8o9D1tus
http://www.youtube.com/watch?v=AGUuX4PGlCc
http://www.youtube.com/watch?v=cDlKrLJjRlY
2. http://www.youtube.com/watch?v=-mtLXpgjHL0

http://www.mcb.harvard.edu/Losick/images/TromboneFINALd.swf

Replicare mitoc /procariot

http://www.wwnorton.com/college/biology/mbio/animations/main.asp?chn
o=ch03a01
http://helicase.pbworks.com/Molecular+Biology+Movies+and+Animati
ons
La eucariote pot exista
mai multe origini de
replicare (ori) cu
aspect electronomicro-
scopic de BULE DE
REPLICARE (repliconi).
Replicarea are loc in
ambele sensuri in
fiecare replicon, pana
cand repliconii vecini
fuzioneaza si intreg
ADN-ul este duplicat.

Durata de replicare este

de 4-5 ore desi viteza
este de 5pb/secunda.
Complexul de initiere a replicarii
1) ADN polimeraza (tipurile ,,,,)
sintetizeaza ADN in prezenta dezoxinucleotid-trifosfatului
si a ionului de Mg2+

4dNTP + ADN parental ADN progen

- completeaza catena ADN in sens 5-3

2) trifosfati nucleotidici (dATP, dGTP, dTTP, dCTP )

3) ioni de magneziu
4) primer este un oligonucleotid ARN, sintetizat de primaza
sub actiunea ADN polimerazei este elongat in directia
5-3
localizarea si secventa primerului depind de
proteinele de recunoastere ce aleg situsul de aliniere
5) ADN parental ca matrita
6) Helicaza, topoizomeraza


Pol III Catalytic Core:

(core polymerase: , , )
(dimerization core polymerase)
(dimeric clamp)
(clamp loader): mediaza transferul subunitatii pe
substratul in forma de duplex ADN - primer
ADN polimeraza (Pol) tip adauga pana la 20
de nucleotide, alungirea catenei fiind apoi
continuata de Pol (care are si proprietatea
de a cauta greselile) pe catena conducatoare
si respectiv Pol (aceeasi functie, de proof-
reading) pe catena decalata.
Pol este implicata in repararea ADN-ului,
excizand baze si sintetizand unele cu
adevarat complementare matritei
Pol de asemenea cu capacitate de cautare a
greselilor in directia 3 -5, replica si repara
ADN-ul mitocondrial
Complexul enzimatic care
participa la sinteza se numeste
PRIMOZOM ( Ssb proteine +
helicaza + primaza dupa unii
autori; complex de 7 proteine si
enzime dupa alti autori)
descris numai la procariote

Sinteza ADN se face diferit pe

cele 2 catene :
pe catena CONDUCATOARE se
face direct, in sensul de actiune
a ADN polimerazei-5-3
pe catena DECALATA se face
pe segmente scurte fragmente
OKAZAKI in prezenta
primerului.
ETAPELE REPLICARII ADN :

1. Desfacerea ( derularea ) helixului in prezenta ADN helicazei

2. SSB- proteinele nu permit monocatenelor sa se apropie

3. Replicarea incepe simultan pe ambele catene in directia 5-

3:
pe catena conducatoare este continua in prezenta ADN
polimerazelor alfa si apoi epsilon si dNTP.
pe catena decalata sinteza se face discontinuu in prezenta
ADNpolimerazelor alfa si apoi delta + dNTP+ primaza
+primer fragmentele Okazaki (unite prin ligaze, dupa
indepartarea si inlocuirea primer-ului cu ADN)

4. Cele 2 molecule nou formate se rasucesc

 Replicarea
catenei decalate
DnaB - Helicaza desface
catenele

DnaG - ARN Primaza

sintetizeaza si alipeste un
primer ARN, apoi ADN
polimeraza III (la procariote)
sau alfa (la eucariote) fixeaza
dNTP in directia 5 3
formandu-se fragmentele
Okazaki
 Replicarea
catenei decalate
ADN polimeraza va
repeta mereu alungirea
catenei decalate cu
fragmente Okazaki.
ADN polimeraza I (la
procariote) si nucleaza
RNaza H (la eucariote)
inlocuieste primerii ARN
cu ADN.
In final toate golurile
ramase in catena vor fi
eliminate prin interventia
ligazei, ce uneste
fragmentele Okazaki.
 Can you say Mechanical
Form follows function. The clamp part of
DNA Polymerase keeps the replication
machine on the DNA. Now thats just cool!
 TIPURI ARN - ROL BIOLOGIC

1. ARNm (mesager), copie a ADN-ului

nuclear, transporta informatia la

ribozomi, unde este citita, in vederea

sintezei proteice.
1. Structura genei
 Pentru ca ARNpm sa devina ARNm:

matisare
+ CAP
poliadenilarea capatului 3
acoperirea cu un strat proteic protector
SINTEZA ARNm
ARN MESAGER-ARNm
-reprezinta 2-4% din ARN celular
-preia informatia de la ADN fiind complementar cu
matrita/ catena antisens si avand secventa de baze
azotate de pe catena sens/ codificatoare (T U)
-odata transcris se exporta in citoplasma unde se leaga
de ribozomi
se degradeaza in componente nucleotidice in prezenta
ARN polimerazei.
-este heterogen- cu masa moleculara mica,
-are 150-12000 nucleotide,
- este monocatenar, spiralat
 2. ARNr (ribozomal) intervine in
construirea ribozomilor, dar este activ
catalitic si in realizarea legaturilor
peptidice
are zone dublu catenare
alternind cu zone
monocatenare
Functiile sale sunt inca
putin intelese
 ARN RIBOZOMAL-ARNr
80-85% din ARN celular
este constituentul major al ribozomilor
are la eucariote 3 forme moleculare in functie de constanta de
sedimentare:
5 S ARNr
18 S ARNr
28 S ARN (in functie de specie variaza de la 25 S la 30 S)
se sintetizeaza si matureaza in nucleol
in afara de 5 S ARNr se transcrie din ADN ribozomal existent pe cz.
Acrocentrici in regiunea organizatorului nucleolar (constrictia sec. de pe
bratul p)
masa moleculara mare: 106 - 104 daltoni,
28 S ARNr si 5 S ARNr sunt in subunitatea ribozomala 60S, pe cand 18
S ARNr in cea 80S (eucariote)
este implicat in sinteza de proteine.
A. DNA B. 5S rRNA C. Nucleolus D. (rDNA) E. Ribosome F.
Cytoplasm G. Proteins H. 5S rRNA I. 18S-OS(mRNA)
J. 4-(tRNA) K.Nuclear envelope L.Nucleopore M.Amino acid
N.tRNA O.Ribosome
 3. ARNt de transfer preia a.a. din
citoplasma si ii transporta la ribosomi
ARN DE TRANSFER-ARNt
-8-10% din totalul ARN

- - este scurt: 73 - 93 nucleotide,

-transfera aminoacidul specific pe lantul

polipeptidic la situsul ribozomal al sintezei
proteice in timpul translatiei,

-se sintetizeaza in nucleu,

-are structura spatiala de frunza de trifoi

-are dubla polaritate functionala:

1. o extremitate se temina cu secventa CCA-
unde se va fixa aminoacidul specific;
2. a doua polaritate este bucla centrala cu o
secventa de 3 nucleotide (ANTICODON),
complementara codonului de pe ARNm .
In toate ARNt se imperecheaza
bazele complementare dand
aspectul caracteristic (structura
secundara)
In bucle insa bazele nu sunt
complementare si deci nu pot
realiza punti de hidrogen.
Structura tridimensionala
tertiara face ca domeniile
functionale sa fie cat de
departe posibil una de alta:
bucla cu anticodonul
(corespunzator unui triplet de
baze azotate) si trunchiul
acceptor de a.a.
ARN DE TRANSFER-ARNt

trifoiul are in stanga bucla dihidrouracil, cu rol in

recunoasterea ARNt ului de catre aminoacil ARNt sintetaza,
care il incarca cu aminoacidul specific corespunzator
anticodonului

uneori diferite ARNt uri transporta acelasi aa.

trifoiul are in dreapta bucla T (PSI) C, unde PSI =

pseudouridin; aici se fixeaza ARNt ul de 5S- ARNr al subunitatii
mari a ribosomului
Alte tipuri de ARN NECODANT- (pe langa cel ribozomal si de

transfer) sunt ARN-urile reglatoare

ARN-ul regator:
poate controla expresivitatea genica
nu se transcrie in proteine (=necodant)
poate cataliza anumite reactii chimice
Exemple:
microARN (miRNA): 21- 22 nucleotide
small interfering RNAs (siRNA): 20 - 25 nucleotide
ambele tipuri pot determina o metilare tintita ce va amplifica sau diminua
transcriptia
ARN lung necodant: imbraca la femei cz. X ce are gena XIST (X inactivated
specific transcript) activa, adica cz. supus lyonizarii.
FUNCTIILE ACIZILOR NUCLEICI
ADN
o autocatalitica (autoreplicare, reparare)-conserva
informatia genetica;
o heterocatalitica-datorita structurii primare aperiodice
transcrie informatia genetica in ARN- proteine-
caracter.
o capacitate de mutageneza (variabilitate in cadrul
speciei)

ARN
ARNm-in transcriptie
ARNr-cupleaza ribozomii in procesul de translatie.
ARNt-transporta aminoacizii spre poliribozomi.