BIOCHIMIE CURS 2

Mineralele Sunt prezente n organismele vii att n compui organici, ct i anorganici. Se consider n general c pentru buna funcionare a unui organism sntos sunt necesare 17 substane minerale considerate eseniale, dei ele reprezint doar 4 !" din greutatea organismului. #ineralele nu pot fi nici sintetizate, nici consumate n organism, doar ingerate, respectiv eliminate. $le sunt elemente nutritive eseniale pentru via, prin ndeprtarea sau absena lor din diet apare o deficien durabil i reproductibil a unei funcii biologice. %n organism mineralele ndeplinesc att roluri plastice ct i funcionale& sunt constituente importante ale oaselor i dinilor intr n structura celulelor nervoase, a esuturilor moi sunt componente ale sngelui, sucului gastric, ale unor 'ormone particip la meninerea ec'ilibrului acido bazic n mediul intern, la meninerea permeabilitii celulare, a ec'ilibrului apei au rol n activarea unor 'ormone i enzime participa la contracia muscular, la transmiterea impulsului nervos particip la sinteza unor proteine i acizi nucleici Substanele minerale care conin (a, (l, ), #g, *a, S se gsesc n organism n cantiti mai mari +mg,, altele numite oligoelemente se gsesc n cantiti mult mai mici +g,. -uncie de rolul lor n organism, se clasific astfel& oligoelemente eseniale& -e, .n, Se, #n, (u, #o, (o, (r, oligoelemente neeseniale& elemente minerale de contaminare +/u, /g, /l, 0i, 1a, )b, (ercetrile moderne conduc la o nou grup de oligoelemente numite 2probabil eseniale3& 4, 0a, /s, 0r5, Sr, *i, Sn,. $6cluderea oligoelementelor eseniale din diet duce la unele tulburri specifice 7 3avitaminoze minerale8, ce pot fi nlturate prin adausul elementului respectiv. )rincipalele tulburri sunt ntrzieri n cretere i dezvoltare, modificri la nivelul oaselor i pielii, scderea rezistenei la infecii, scderea sau c'iar suprimarea capacitii de reproducere. Apa metabolit universal /pa poate ptrunde n organism pe cale e6tern 7 3apa e6ogen8, sub form de buturi, alimente +coninutul de ap este 97" pentru lapte, :4" pentru tomate, 94 97" pentru fructe, !; 9;" pentru carnea gtit, 57" pentru pine etc.,, sau se formeaz n organism 7 3apa endogen8, n urma reaciilor de o6idare. /pa reprezinta apro6imativ <!" din masa corporal a unui brbat adult i apro6imativ !!" din cea a unei femei. /pa e6istent n organism este ntr o permanent micare, rennoire. =ei apa este prezent n cantiti apreciabile n orice organism viu, 3gradul lor de 'idratare8 variaz cu specia. /stfel organismul unor animale marine inferioare este aproape tot att de bogat n ap +:<,4", ca i mediul n care triesc.. >rganismul uman i

animal conine apro6imativ <;" ap care se distribuie ntre vasele sanguine i limfatice, spaiile intracelulare i celule astfel& sectorul e6traceluler, care reprezint 5;" din greutatea corpului +1!" lic'idul intestiial, !" plasma sanguin, sectorul intracellular care reprezint apro6imativ !;" din greutatea corpului (ele dou sectoare sunt separate de membrane celular, a crei permeabilitate selectiv determin deplasrile apei i electroliilor. #embrana celular este impermeabil pentru ionii de *a? i anionii mari i permeabil pentru ionii @ ? i anionii mici. =rept urmare e6ist o diferen remarcabil ntre compoziia lic'idului e6tracelular +n esen o soluie de *a(l, i cel intracellular +o soluie de fosfai i proteinai de potasiu,. %n compartimentul e6tracelular plasma sanguin i lic'idul interstiial +Aic'idul interstiial, aflat ntre celule, provine din snge, ns spre deosebire de acesta, nu conine globule, dect leucocite mici i nici fibrinogen. Aic'idul interstiial ptrunde treptat n interiorul unor capilare, c'iar la nivelul spaiilor dintre celule, formnd limfa, sunt separate prin pereii vaselor capilare, permeabili pentru electrolii i molecule organice mici, dar nu ntotdeauna i pentru proteine. =e aceea n plasm vor fi concentraii mari de *a?, (l , proteine i mici de @?, )>4 . Aic'idul interstiial are concentraie asemntoare plasmei n anioni i cationic, dar concentraie mult mai sczut de proteine. Bot din lic'idul e6tracelular mai fac parte limfa +cea interstiial i din vasele limfatice, fluidele din esuturile conCunctive i cartilaCe, fluidele din oase i cele transcelulare +din tubul digestive, vezica urinar, biliar, lic'idul cefalora'idian,. Rolul apei n organism 1, Dol structural& /pa intra n compoziia diverselor geluri. /cestea pot fi imaginate ca reele ale unor constitueni organici n oc'iurile crora circul sau stagneaz apa, care este reinut prin capuilaritate. > parte din ap se gsete n spaiile libere dintre moleculele mari +n general proteine,. > alta parte din ap este unit cu moleculele proteice sau alte molecule din organism, fiind reinut fizic la suprafaa lor. /ceast 3ap legat8 se poate compara cu apa de 'idratare a ionilor. 5, Dol de solvent& $ste mediul interior n care sunt distribuite toate substanele solubile, organice i anorganice. =isperseaz i moleculele amfoprotice. =izolvnd o palet att de larg de substane, apa transport prin organism att compuii nutritivi +i mediatorii controlului umoral,, ct i produsele de e6creie rezultate n urma diverselor procese metabolice. E, Dol de metabolit universal& n unele reacii metabolice este reactant, n altele produs. =igestia alimentelor i dizlocarea maCoritii constituenilor organismului sunt reacii 'idrolitice, deci apa particip ca i reactant. Deaciile redo6 din organism sunt mai nti reacii de 'idratare urmate apoi de de'idrogenare. >6idarea 'idrogenului n lanul respirator i mobilizarea energiei n organism presupun i formarea de ap. 4, /liment indispensabil& apa asigur desfurarea normal a metabolismului tuturor celorlalte principii nutritive.

Propriet !ile "i#i$e ale apei /pa are punct de fierbere i de topire mult mai ridicat dect al celorlalte 'idruri nemetalice comparabile +F5S, F5Se, F5Be,, sau dect ale celor mai multe lic'ide. =ac am ine seama de valorile punctului de fierbere i de topire ale compuilor de mai sus, ar rezulta prin e6trapolare c apa ar trebui s aib p.f. G 1;; ( i p.t. G 9;(, deci la temperatura obinuit apa ar trebui s fie sub form de vapori. /pa are cea mai mare cldur specific dup ammoniac. =atorit ei ea poate primi i ceda o cantitate apreciabil de cldur fr a i modifica prea mult propria temperatur, proprietate foarte important pentru organismele vii. =ac nu ar fi apa mediul intern, care s nmagazineze o cantitate mare de cldur fr a i modifica temperatura, cldura eliberat n numeroase procese metabolice ar putea determina denaturarea compuilor macromoleculari din organism +proteine, enzime, acizi nucleici,, contribuind astfel la modificarea structurii lor tridimensionale i pierdera unor funcii biologice importante. =eci apa din organism acioneaz ca un tampon pentru cldur, fcnd ca temperatura organismului s rmn relativ constant atunci cnd temperatura mediului se modific. (ldura de vaporizare a apei +!4; calHg, este considerabil mai mare dect pentru oricare dintre substanele lic'ide obinuite +alcool etilic, metilic, aceton, benzene,. /ceast valoare reprezint msura direct a cantitii de energie necesar pentru nvingerea foerei de atracie dintre moleculele adiacente ale oricarui lic'id astfel c moleculele individuale se pot detaa unele de altele i trec n faza gazoas. .ilnic organismul pierde prin transpiraie i perspiraie n Cur de 15;; ml ap, corespunznd la apro6imativ <;: Ical, prentmpinndu se prin aceste pierderi supranclzirea corpului. Polaritatea apei% &eg turi 'e (i'rogen
0,096nm O H 104,5 H

#olecula de ap are o structur angular. =ac structura sa ar fi liniar ar fi o molecul nepolar. /tomul de o6igen puternic electronegativ tinde s atrag electronii legturilor, lsnd nucleele de 'idrogen dezgolite. (a urmare, fiecare atom de 'idrogen are o sarcin local parial pozitiv +?,, iar atomul de o6igen are o ncrcare parial negativ + , localizat n zona orbitalilor cu electroni neparticipani. /stfel, dei molecula de o6igen are o ncrcare global nul, ea este un dipol electric. /pa are o constant dielectric neobinuit de mare, iar densitatea sa ma6im este n stare lic'id nu solid. Starea solid ocup un volum mai mare ca starea lic'id. =atorit faptului c sunt dipoli, moleculele de ap se asociaz, grupndu se cte E, 4 sau mai multe, funcie de starea de agregare a apei. /ceast asociere nu este o simpl atracie ntre dipoli, ci corespunde unei adevrate legturi 7 legtura de 'idrogen. Aegturile de 'idrogen sunt relativ slabe n comparaie cu legturile covalente. S a estimat c legturile de 'idrogen din apa lic'id au o energie de 4,! IcalHmol, fa de 11;

IcalHmol a legturii covalente F > din ap. /ceast abilitate e6traordinar de a forma legturi de 'idrogen e6plic toate anomaliile din proprietile apei. Aegturile de 'idrogen nu sunt specifice doar apei, e6istnd numeroase legturi de 'idrogen de importan biologic& ntre o grupare 'idro6il i ap&
R O H O H

ntre dou lanuri peptidice&

R H CH N C O

C O

H N

CH

ntre o grupare carbonil i ap&

R C O R

H O H3C N O N H H O

H H2N N N N CH NH

ntre perec'ile de baze complementare din /*=&

%n sisteme apoase legturile de 'idrogen se formeaz i se desfac mult mai rapid dect legturile covalente. /cestea, mpreun cu specificitatea geometric i orientarea ofer legturii de 'idrogen un mare avantaC fa de legturile covalente n cadrul fenomenelor biologice care au loc cu viteze foarte mari, de e6emplu plierea proteinelor pentru obinerea conformaiei lor native. /pa este caracterizat de o tensiune superficial mare, mai mare dect a oricrui lic'id comun cu e6cepia mercurului. /ceasta mpreun cu densitatea determin ct de mult urc un lic'id ntr un sistem capilar. #icarea prin capilaritate a apei Coac un rol proeminent n viaa plantelor. Osmo#a 7 reprezint deplasarea apei dinspre soluiile concentrate spre cele diluate printr o membran semipermeabil. /ceast deplasare st la baza multor fenomene bioc'imice. )resiunea e6ercitat de soluia din compartimentul n care intr apa asupra membranei se numete presiune osmoti$ . %n concluzie organismele sunt sisteme apoase ntr o lume guvernat de ap.

1radul nalt de coeziune al apei lic'ide datorat legturilor de 'idrogen este folosit de ctre plantele superioare pentru transportul substanelor nutritive dizolvate de la rdcin spre frunze. Rolul 'e solvent al apei /pa dizolv electrolii +acizi, baze, sruri, formnd soluii n care acetia se gsesc sub form ionizat. =izolv de asemenea multe substante organice i anorganice polare ce conin atomi capabili s formeze legturi de 'idrogen cu moleculele de ap, deoarece interaciunile polare dintre solvent i solut sunt mai puternice dect atracia intermolecular datorat forelor van der Jaals mult mai slabe. /pa are o abilitate deosebit ca solvent de a interaciona cu ioni +'idratare,, mai mare dect tendina de atracie a ionilor cu sarcini opuse. *umrul de molecule de ap care 'idrateaz o particul ncrcat electric +un ion, depinde de raza saK ionii cu raza mai mic leag mai puternic apa dect cei cu raza mare& *a? *a? .9F5> rG;,;:9nm rG;,54nm @? @? .4F5> rG;,1EEnm rG;,17nm

/pa de 'idratare care nconCoar ionii ca o ptur i mpiedic s se apropie ntre ei, uurndu le independena n diverse deplasri, ca de e6emplu travesarea membranei celulare. /ceste traversri au loc difereniat pentru diveri ioni funcie de mrimea ionilor 'idratai, fiind mai rapide la ionii cu raze mai mici i mai lente la cei cu raze mari. =atorit acestui fapt ptrunderea ionilor de @? prin maCoritatea membranelor biologice este mai uoar dect pentru ionii 'idratai de *a?. Fidratarea poate crea ns i neaCunsuri, n special cnd doi ioni ncrcai diferit sunt solicitai s participe la aceeai reacie i cnd combinarea lor este ngreunat de 'idratare. Aa dizolvarea substanelor nepolare moleculele de ap sufer o reorganizare, o remodelare a numeroaselor legturi de 'idrogen dintre ele, astfel nct 3s fac loc8, respective 3s nconCoare8 molecula de solute. #oleculele comple6e +proteine, acizi nucleici, poliglucide, se pot i ele nconCura de ap prin gruprile polare pe care le conin i care pot forma legturi de 'idrogen cu apa. %n soluii apoase diluate macromoleculele rein o parte din ap la suprafa, constituindu se aa numita 3ap legat8. #ediul n care se deplaseaz apa legat odat cu molecula pe care o 'idrateaz este 3apa liber8. $6istena apei legate este evideniat prin faptul c dac se aduce un esut animal sau vegetal la o temperatur foarte sczut + 5; <;(, se constat c o parte din ap se transform n g'eaK aceasta este apa legat de moleculele proteice sau ale unor constitueni citoplasmatici. )rin intermediul apei legate au loc n permanen unele fenomene de sc'imb, ca de e6emplu ntre ionii constitutive ai osului i cei corespunztori din plasm, n special ionii (a5? i fosfat. > comportare particular fa de ap o au moleculele amfifile, caracterizate prin afinitate dubl fa de ap i fa de solvenii nepolari. /ceste substane +acizi grai cu molecul mare, proteine, acizi nucleici, se orienteaz cu gruprile 'idrofile polare spre ap interacionnd cu ea, iar gruprile 'idrofobe nepolare se orienteaz ctre solvenii nepolari.

Ioni#area apei% Pro'usul ioni$ al apei LLL vezi seminarul 4alorile de pF ale unor lic'ide biologice sunt& sucul gastric 1,5 E urina ! 9 muc'i <,1 ficat <,: plasma sanguin, lic'idul interstiial 7,4 sucul pancreatic 7,9 9 amoniac 15,5 A$i#i )i ba#e LLL vezi seminarul Pro$ese bio$(imi$e "un'amentale prin $are se generea# a$i#i )i ba#e n organism (ile metabolice fundamentale ale glucidelor, lipidelor, proteinelor, sunt mari productoare de acizi& *%+li$oli#a& calea iniial de degradare a glucozei din metabolismul glucidic conduce la formarea de acid piruvic sau lactic&
C6H12O6 GLUCOZA CH3 C O COOH H 2 CH3 C COOH OH ACID LACTIC

ACID PIRUVIC

=ac degradarea glucozei este continuat pe calea aerob 7 decarbo6ilarea o6idativ a acidului piruvic i continuarea n ciclul acizilor tricarbo6ilici 7 are loc o producere suplimentar de protoni, conform ecuaiei globale&
2CH3 C O COO- + 5O2 4CO2 + 2HCO3- + 2H2O

(>5 ? F5> F5(>E F? ? F(>E 2%,egra'area trigli$eri'elor n metabolismul lipi'i$ are ca rezultat nc de la prima etap de desfacere 'idrolitic a acestora, eliberarea acizilor grai constitutive. %n etapa urmtoare 7 degradarea M o6idativ a acizilor grai, se formeaz corpii cetonici i cantiti apreciabile de (>5 care genereaz ioni F? din acidul carbonic corespunztor& Brigliceride glicerin ? /cizi grai M o6idare corpi cetonici +acid M 'idro6ibutiric, acid o6alilacetic,

F? (>5 ? F5> F5(>E F? ? (>E

F? ? (>5

E.Nltimul catabolit al metabolismului protei$ n organismul omului cu formarea ureei, este un process generator de acizi& 5*F4? ? F(>E F5* (> *F5 ? 5F5> ? F? Frana, datorit unor componeni alimentari, reprezint i ea o surs de ioni F ? n organism. /stfel, prin o6idarea complet a lecitinei +din creier, glbenu de ou, rezult cantiti pareciabile de protoni&
CH2O CO-R CHO CO-R CH2O PO3 CH2-CH2N+(CH3)2 "#$%&%n' + O2 H2N-CO-NH2 + 2H3PO4 + !CO2 + H2O ()## 6H+ !H+

=ei obinerea de baze n organism are loc n mai mic msur, produsul final de o6idare n maCoritatea cazurilor este baza anionic F(> E , care se formeaz n cantiti apreciabile. #aCoritatea elementelor vegetale din 'ran sunt considerate surse alcalinizante tocmai pentru c n urma degradrilor genereaz baze anionice de tipul F(>E . %n concluzie organismul este confruntat n permanen cu tendine acidifiante respective alcalinizante care amenin meninerea constant a pF ului medciului intern. %mpotriva acestor tendine organismul se apr cu aCutorul sistemelor tampon i prin alte mecanisme fiziologice. Sistemele tampon Sistemele tampon sunt amestecuri n soluie a dou sau mai multe substane organice sau anorganice, avnd proprietatea de a se opune variaiilor mari de pF, la adugarea de cantiti mici de acizi tari sau baze tari. )entru ca o soluie s aib aceast proprietate ea trebuie s fie format din doi componeni& unul care s fi6eze ioni F? iar cellalt s elibereze ioni F?. =eci un sistem tampon este format dintr un acid i o baz. $6ist trei tipuri principale de sisteme tampon folosite n practic& tip *a/ ? /F, constituite din sarea de *a sau @ a unui acid slab i acidul slab corespunztor tip 0.F(l ? 0, constituit dintr o sare a unui acid tare cu o baz slab +0.F(l, i din acea baz slab tip amfolii, substane organice care conin n molecula lor att grupri acide ct i bazice (u ct cantitatea de acid sau baz necesare modificrii pF ului cu o anumit mrime este mai mare, cu att tamponul respective are o capacitate de tamponare mai mare.

%ndicele de tamponare 7 M reprezint variaia pF ului la adugarea unui acid sau baz tare. %ndicele de tamponare este minim cnd tamponul este format dintr un singur component i ma6im cnd cele dou componente sunt n cantiti ec'imoleculare. Sistemele tampon universal au capacitate de tamponare pe ntreg intervalul de pF, fiind formate din mai muli acizi sau baze. )entru obinerea unui sistem tampon cu un indice de tamponare constant pe ntreg intervalul de pF este nevoie de un numr foarte mare de acizi. Nn tampon universal mult folosit n practic este format din acid fosforic,, fenilacetic, boric, cu cantiti variabile de alcalii. %n studiul proceselor bioc'imice i al activitii enzimatice este foarte important a gsi tampoane care s stabilizeze pF ul mediului intern i s nu interfereze cu procesele biocimice analizate. %n organismele vii, n ordinea comple6itii lor crescnde, e6ist unul sau mai multe sisteme tampon dintre urmtoarele +n general ele trebuie s aib valoare p@a aproape de pFG7, iar componentele sale s fie compatibile cu mecanismele metabolice ale celulei,& sistemul tampon F5(>EHF(>E +e6tracelular,, present n toate fluidele organismuluiK cuprinde e6ces de component bazic +F(>E , sistemul tampon al fosfailor +mai ales intracellular,, aflat att n cellule ct i n afara lor. Sistemul tampon al fosfailor +*aF 5)>4, *a5F)>4, din compartimentul e6tracelular este mai puin efficient dect cel F5(>EHF(>E sistemele tampon ale unor acizi organici, sunt constituite mai ales din acid lactic i lactate alcalin, acid piruvic i piruvat alcalin, acid acetoacetic i o sare a sa alcalin sistemul tampon al 'emoglobinei, reprezentat de dou sisteme& 'emoglobin acidH'emoglobinat de potasiu i o6i'emoglobinHo6i'emoglobinat de potasiu. (apacitatea de tamponare a acestor sisteme se datoreaz numeroaselor resturi de Fis prezente n partea proteic a moleculei Sistemul tampon "os"at- .aH2PO/0.a2HPO/ Bamponeaz fluidul intracellular al celulei la pF ul fiziologic, deoarece p@5 este apropiat de cea a acestui pF. pF ul intracellular al maCoritii celulelor este meninut n domeniul <,: 7,4. -osfatul este un anion important al celulelor, att n forma anorganic, ct i ca un important substituent al moleculelor organice ce servesc ca metabolii sau precursori macromoleculari. %n ambele forme, valoarea p@5 arat c speciile ionice prezente la pF ul fiziologic sunt suficiente pentru a dona sau capta F? i a tampona orice sc'imbri n pF. =e e6emplu dac concentraia celular total de fosfat este 5; m# i pFG7,4 distribuia speciei fosfat maCoritare este dat de&
*H + *,2 + "0,4 + 0,2 + ".HPO42-/ .H2PO4-/ .HPO42-/ .H2PO4-/

Oi dac PF)>45 Q ? PF5)>4 Q G 5; m#, atunci avem PF)>45 Q G 15,5!m# i PF5)>4 Q G 7,7!m#.

Sistemul tampon bi$arbonate al plasmei sanguine- H2CO10HCO12 F5(>E F? ? F(>E p@a relevant este p@1 al F5(>E i este E,9; la E7(, destul de departe de pF ul normal al plasmei sanguine de 7,4. Aa pFG7,4 concentraia F 5(>E este doar o fraciune minuscul din concentraia F(>E , astfel c plasma pare slab proteCat mpotriva influ6ului de ioni F> &
*H + 0,4 + 3,1 +".HCO3-/ .H2CO3/ .HCO3-/ .H2CO3/ + 3911

=e e6emplu dac PF(>E Q G 4 m# atunci PF5(>EQ G 1# i o cantitate ec'ivalent de ioni F> va distruge sistemul tampon, cauznd o cretere periculoas a pF ului plasmei. (um poate aciona atunci efficient sistemul bicarbonateR /cesta poate lucra deoarece concentraia critic a F5(>E este meninut relative constant prin ec'ilibrul de dizolvare a (>5 produs n tesuturi i disponibil ca rezerv de (> 5 gazos n plmni. Am"oli!i
H3N+-CH-COOR H2N-CH-COOH R

%n soluii acide e6ist urmtoarele specii&

H3N+-CH-COOH R $'&%2n 3# 'm%n2'$%3 H2N-CH-COOH H3N+-CH-COOR R 'm4%2n 3# 'm%n2'$%3 'm%n2'$%3 51 (1) H3N+-CH-COO- + H+ R 52 (2) H2N-CH-COO- + H+ R 'n%2n 3# 'm%n2'$%3

H3N+-CH-COOH R H3N+-CH-COOR

>rice reacie c'imic este caracterizat de o constant de ec'ilibru, care d indicaii asupra deplasrii ecuaiei spre dreapta sau spre stnga&

51 +

.H3N+-CH(R)-COO-/6.H+/ .H3N+-CH(R)-COOH/ .H2N-CH(R)-COO-/6.H+/ .H3N+-CH(R)-COO-/ .H3N+-CH(R)-COO-/ .H3N+-CH(R)-COOH/ .H2N-CH(R)-COO-/ .H3N+-CH(R)-COO-/

"-51 + "-

.H3N+-CH(R)-COO-/ .H3N+-CH(R)-COOH/ .H2N-CH(R)-COO-/ .H3N+-CH(R)-COO-/

+ "-.H+/

6(-1)

52 +

"- 52 + "-

+ "-.H+/

6(-1)

*51 + - "* 52 + - "-

+ *H

+ *H
(3)

*H + *51 + "*H + *52 + "-

.H3N+-CH(R)-COO-/ .H3N+-CH(R)-COOH/ .H2N-CH(R)-COO-/ .H3N+-CH(R)-COO-/

(4)

=in ecuaiile +E, i +4, se observa c n cazul soluiilor tampon de aminoacizi pF ul soluiei depinde de valoarea p@ a acidului din soluie, precum i de raportul speciilor prezente n soluie. /stfel dac o soluie tampon realizat prin folosirea unui aminoacid este acidulat, ea se comport conorm ecuaiei +1,, adic amfolitul de aminoacid accept protonii adui n urma acidulrii i se transform n cation de aminoacidK deci amfionul acioneaz ca acceptor de protoni. /naliznd ec'ilibrul +1, spre dreapta, cationul se comport ca donor de protoni. =in relaia +E, se observ c&
*H + *5 + "$2n$6 '$$#*&2) 3# *)2&2n% $2n$6 32n2) 3# *)2&2n%

(orelnd ecuaia +5, cu relaia +4, aCungem la aceeai concluzie, deci de fapt la ecuaia Fenderson Fasselbac'.