CHIMIE- SENZORI ELECTROCHIMICI

Cuprins
CHIMIE- SENZORI ELECTROCHIMICI................................................................................1
INTRODUCERE........................................................................................................................2
1. ELECTROZI CHIMIC MODIFICAI
ELECTROCATALITICI............................................................................................................3
1.1. Principiul de construcie i de funcionare...........................................................................3
1.2. Mediatori redox utilizai n construcia electrozilor chimic modificai...............................5
1.4. Aplicaiile mediatorilor redox..............................................................................................6
1.5. Electrozi chimic modificai bazai pe enzime......................................................................8
1.5.1. Bioelectrocataliza............................................................................................................10
2. APLICAIILE ELECTROZILOR CHIMIC MODIFICAI...............................................12
3. IMPORTANA DETERMINARII DOPAMINEI...............................................................19
3.1. Metode de determinare.......................................................................................................20
3.2. Reactivi i soluii ...............................................................................................................23
3.3. Aparatura ...........................................................................................................................23
BIBLIOGRAFIE.......................................................................................................................30

INTRODUCERE
Biochimia este o ramur de studiu a proprietilor i a comportamentului unor importante
substane biochimice de tipul proteinelor, enzimelor, hormonilor, imunoglobulinelor i a
acizilor nucleici. Cele mai recente cercetri n domeniul biologiei i medicinei se bazeaz pe
dezvoltarea noilor tipuri de electrozi cu membran ion-selectivi i a senzorilor cu membran
biocatalitici.
Lucrarea de fa intenioneaz s exemplifice noile domenii in care electrozii chimic
modificai i-au gsit utilitate precum i s prezinte o metod amperometric de determinare a
dopaminei.
Metoda se bazeaz pe folosirea unui electrod chimic modificat electrocatalitic (CME) a crui
construcie i funcionare va fi prezentat n partea experimental. Activitatea electrocatalitic
a senzorului chimic modificat permite obinerea unui rspuns optim la un potenial mic fat de
electrodul de Ag/AgCl. Electrodul chimic modificat prezint o stabilitate bun pe parcursul
utilizrii repetate, ct i n timp.
n ultimii ani s-a demonstrat c electrozii posednd anumite grupri chimice legate n mod
intenionat pe suprafaa lor, prezint anumite avantaje comparativ cu electrodul de baz. Una
din proprietile lor cele mai importante, care au fcut obiectul unor studii intensive, o
reprezint capacitatea CMEs de a cataliza oxidarea sau reducerea anumitor compui chimici
care prezint suprapoteniale mari la nivelul electrozilor nemodificai, ei putnd fi determinai
cantitativ prin intermediul metodei electrochimice tradiionale[1].
O alternativ pentru micorarea suprapotenialului o reprezint utilizarea CMEs coninnd
mediatori redox adecvai, imobilizai pe suprafaa electrozilor convenionali [2]. n scopul
studierii comportrii electrochimice a unor compui se folosesc deci aceti mediatori redox
pentru a facilita procesele de transfer a electronilor [3]. Deoarece CMEs conduc la micorarea
potenialului formal de oxidare sau reducere a unor compui chimici de importan
biochimic, aceti electrozi au implicaii directe n domeniul chimiei analitice.
n particular ei pot nbunti mult posibilitile de detecie electrochimic n cadrul
cromatografiei de lichide (LCEC) unde selectivitatea i sensibilitatea sunt direct dependente
de potenialul impus de electrod, n scopul realizrii reaciei dorite [4].
n acest sens, CMEs prin caracteristicile lor, i-au gsit multiple aplicaii ca detectori
amperometrici n cadrul cromatografiei de lichide de nalt performan (HPLC).

1. ELECTROZI CHIMIC MODIFICAI

ELECTROCATALITICI
1.1. Principiul de construcie i de funcionare
Un electrod chimic modificat poate definit ca reprezentnd o modificare raional
intenionat a structurii moleculare a suprafeei electrozilor convenionali n scopul utilizrii
lor n cadrul unor aplicaii specifice [5-13].
Electrozii chimic modificai (CMEs) se bazeaz pe fixarea unui centru redox pe
suprafaa electrodului. Acesta funcioneaz ca un mediator pentru transferul rapid de electroni
spre molecula de substrat, fiind oxidat sau redus lent (sau deloc n unele cazuri) la
suprafaElectrozii chimic modificai (CMEs) se bazeaz pe fixarea unui centru redox pe
suprafaa electrodului. Acesta funcioneaz ca un mediator pentru transferul rapid de electroni
spre molecula de substrat, fiind oxidat sau redus lent (sau deloc n unele cazuri) la suprafaa
unui electrod convenional.
Principiul de baz implicat n funcionarea unui CME electrocatalitic bazat pe un
mediator redox este reprezentat n figura 1.1., pentru un process general de oxidare.
n aceast secvent compusul de determinat difuzeaz din soluie spre suprafaa
electrodului, unde este oxidat n cadrul unei reacii chimice de ctre mediatorul n form
oxidat.
Potenialul electrodului este meninut la o valoare sufficient de pozitiv pentru ca
forma oxidat a mediatorului s fie forma stabil, iar forma sa redus sa fie rapid oxidat la
forma catalytic activ, n scopul reacionrii n continuare cu compusul de analizat.
n principiu, mediatorul poate fi considerat c funcioneaz cu un transportor de
electroni ntre electrod i compusul de analizat. Cazul discutat mai sus reprezint unul ideal,
care n practic poate fi mult mai complex.
Necesitatea unei astfel de medieri apare ori de cte ori viteza directa a transferului de
electroni este mic, atunci cnd la nivelul unui electrod convenional este necesar aplicarea
unui suprapotenial pentru a face ca reacia redox s aibe loc cu o vitez apreciabil [14-18].
Prin utilizarea unui CME oxidarea sau reducerea compusului de analizat are loc la
valoarea potenialului redox al mediatorului.
In concluzie, prin fixarea intenionat a unui mediator adecvat pe suprafaa
electrozilor convenionali, acetia pot cpta noi proprieti, cum ar fi: mrirea vitezelor de
reacie electrochimic i a selectivitii, eliminarea fenomenelor de adsorbie, precum i
obinerea unor caracteristici optice speciale.

Un electrod chimic modificat ideal pentru aplicaii analitice, ceea ce presupune

funcionarea continu de durat n sisteme n flux, trebuie s prezinte urmtoarele
caracteristici:
a)
O bun stabilitate mecanic i chimic att ale electrodului de baz i a
grupri modificatoare, precum i a legturii dintre electrod i acesta din urm;
b)
Reproductibilitatea pe o anumit perioad i stabilitate n timp a activitii
gruprii modificatoare fa de compusul de analizat;
c)

Flexibilitate n capacitatea de legare a gruprii modificatoare;

d)

Un domeniu larg de linearitate a pspunsului;

e)

Cureni de baz mici i stabili pe domeniul de potenial utilizat;

f)

Compatibilitatea cu o gam larg de solveni apoi i organici.

n ultima perioad au fost folosite diferite procese de imobilizare a unor compui chimici pe
electrozi de diferite tipuri (n ceea ce privete materialul i construcia acestora), dar
majoritatea proceselor au avut la baz cteva tehnici:
I.

Adsorbia direct a modificatorului pe suprafaa electrodului;

II.

Legarea covalent a modificatorului la un centru specific al suprafeei;

III.

Acoperirea fizic a suprafeei cu un polimer coninnd modificatorul;

IV.

Amestecarea modificatorului cu o matrice conductiv (past conductiv).

Dintre cele patru metode de fabricare prezentate, ultimele dou par s fac cea mai posibil
obinerea unui electrod ideal.
Folosirea CMEs n chimia analitic se bucur de un success considerabil. Prin
modificarea chimic a suprafeei electrozilor a fost posibil obinerea unei varieti de
electrozi chimic modificai prin intermediul crora pot fi determinai un numr mare de
compui chimici. Datorit selectivitii i sensibilitii mrite, electrozii chimic modificai
sunt ideali pentru electroanalize. CMEs i-au gsit largi aplicaii, dintre care n: electroanaliz,
preconcentrare, permeabilitate selectiv recunoatere specific, calea fiind nc deschis i
spre alte aplicaii [19-24].

1.2. Mediatori redox utilizai n construcia electrozilor

chimic modificai
Mediatorii redox sunt utilizai n construcia senzorilor biochimici utilizai n diferite
scopuri.
Datorit dificultilor de a realiza un transfer direct de electroni ntre enzyme i
electrozi s-a apelat la utilizarea unor molecule mici electroactive care se numesc mediatori,
acetia mrind viteza cu care are loc transferul de electroni.
Mediatorii redox sunt molecule chimice organice sau compleci organici care pot
avea proprieti catalitice asupra unor compui. Compusul de analizat (substratul n forma
redus Sred) difuzeaz n soluie spre suprafaa electrodului, unde este oxidat n urma reaciei
chimice cu forma oxidat a mediatorului (Mox). La nivelul electrodului se aplic un potenial
sufficient de pozitiv pentru ca forma stabil a mediatorului (Mred) rezultat n urma reaciei
electrochimice cu schimb de electroni s fie rapid reoxidat la forma activ catalytic.
1.3. Proprietile mediatorilor redox
Un mediator ideal prezint proprietile:
1.

stoechiometrie a reaciei cu transfer de electroni bine definit.

2.

un potenial formal E0 cunoscut.

3.

un transfer electronic omogen i heterogen rapid.

4.

solubilitate mare n mediu apos la pH apropiat de 7.

5.

stabilitate n forma oxidat ct i redus.

6.
s nu prezinte interferene optice n domeniul n care se face determinarea
compusului de analizat.
7.
s nu interacioneze cu compusul de analizat ntr-o manier care s altereze
potenialul su redox.
n general se recomand utilizarea mai multor mediatori redox n scopul studierii interaciei
dintre acetia i biocomponentul de analizat. Este de dorit ca potenialul redox al
biocomponentului s nu varieze, n caz contrar se poate presupune existena unei interacii
ntre mediatorul redox i biocomponent. Potenialulu formal al compusului de analizat este un
alt criteriu important n alegerea mediatorului. Potenialul formal al mediatorului ar trebui s
fie nul la nceperea studierii biocomponentului. Parametrul care urmeaz s fie msurat nu
trebuie s varieze la utilizarea unui variator, astfel interacia mediator-compus nu mai are loc
corespunztor.

1.4. Aplicaiile mediatorilor redox

Dintre mediatorii cu proprieti catalitice se menioneaz: ftalocianinele, porfirinele, compuii
fenantrolinici. Dintre cei mai bine cunoscui mediatori putem meniona Co-ftalocianinele
(depuse pe un electrod de pasta de crbune) i polimerul de ruteniu organic, electrodepus pe
electrodul de Pt sau de crbune sticlos.
Acetia au fost frecvent folositi datorit activitii lor catalitice pentru o mare
varietate de analii i datorit solubilitii limitate, care le permit s fie stabili dup depunerea
pe suprafaa electrodului.
Compuii asupra crora au aciune o-ftalocianinele depuse pe electrod sunt:
hidrazinele, tiolii, acidul uronic. n procesul redox ce are loc, se realizeaz electrooxidarea
Co(II) din centrul catalytic activ, la Co(III). Baldwin i colaboratorii si [25-29] au descries
metode pentru determinarea hidrazinei, cisteinei, glutationului, carbohidrailor i
polialcoolilor.
Ali mediatori sunt complecii cu Mn(III) i Fe(III) depui pe electrodul de past de crbune.
Ei pot cataliza reducerea oxigenului.
Recent, complecii de Fe(II)-fenantrolin au fost introdui ca mediatori pentru
electrozii de past de crbune n scopul oxidrii sau reducerii catalitice a oxizilor de azot, SO2
, clorailor i H2S, n sisteme speciale n flux.
Albastrul de Prusia prezint activitate catalitic fa de reducerea oxigenului sau a
compulor peroxidici n medii acide i a fost utilizat ca mediator depus pe electrod de Au.
A fost menionat i un grup de electrozi pe care se depun straturi de oxizi metalici.
Dei din punct de vedere ethnic nu puteau fi considerai CMEs, ei ei se asemnau cu acetia
datorit aplicaiilor numeroase n cromatografia de lichide. Dintre matalele folosite pot fi
amintite Pt, Au, Ni, Cu, Ru. La folosirea metalelor nobile ca Au sau Pt stratul de oxid a
dovedit o activitate catalitic capabil s medieze reacii de dehidrogenare sau oxidare a unui
numr important de compui. ntotdeauna produi de reacie ai procesului anodic sunt
puternic adsorbii pe metal, ceea ce conduce la ntreruperea semnalului, datorit blocrii
sistemelor active de pe suprafa, necesare pentru noi procese de oxidare.
Ali compui foarte importani detectai cu aceti electrozi sunt: carbohidraii,
derivai ai acestora, aminoacizi. Electrozii de past de crbune care conineau eteri coroan,
tropolone i fenantroline, au fost folosii la determinarea Co i Pb. Unii electrozi au fost
modificai prin folosirea la suprafaa lor a unui film polymeric care conine compui de tip
violagenic, chinone i bipiridin ruteniu legat de polivinil-piridina.
O serie de mediatori redox au fost utilizai n construcde mediatori redox au fost
utilizai n construcia electrozilor chimic modificai cu enzyme: ferocenii, O-fenilendiamine,
chinone, fenoxazine, fenazine, tetrahidrofulvene (TFF), tetraciano-quiodimetan. Dintre
acetia, ferocenii i derivaii lor au fost cel mai des folosii. Ferocenilor li s-a acordat o atenie
deosebit datorit proprietilor lor legate de hidrofobicitate, proprieti electrochimice,
posibilitii de a fi modificai structural inducndu-se astfel o modificare a potenialului lor
redox. Hidrofobicitatea este un factor important deoarece previne desprinderea mediatorului
de suprafaa electrodului cnd acesta este utilizat n sisteme apoase.

Electrozii enzimatici amperometrici pentru glucoz, acid lactic i acid glutamic au

fost construii utiliznd glucozo-oxidaza (GOX), lactatoxidaza i glutam-oxidaza imobilizai
pe un electrod crbune sticlos modificat cu polianilinometilferocen. n aceti biosenzori
enzimatici H2O2 format n reacia enzimatic a glucozei, acidului lactic i acidului glutamic
cu O2 n reacia enzimei corespunztoare a fost detectat la 50mV (v.s. Ag/AgCl).
Datorit deteciei la potential mic aplicat, compui electroactivi ca acidul ascorbic,
acidul uric nu interfer n analiz.
Un ferocen substituit mediaz transportul de electroni dintre
glucozoxidazaimobilizat Si un electrod de grafit. Acest sistem este independent de oxygen;
ionii de fericiniu nlocuiesc O2, drept cofactor al GOX. Odat redui, aceti ioni pot fi generai
la suprafaa electrodului.
Biosenzorii care au la baz enzyme din clasa oxido-reductazelor utilizeaz O2 ca
acceptor de electroni, avnd rolul de a reduce enzima n starea redox iniial. n tabelul 1.1.
sunt redate o serie de enzyme electroactive din clasa oxido-reductazelor.
Tab. 1.1. Oxidoreductaze electrocatalitic active

Enzime
Metilamina-Dehidrogenaza
Succinate-Dehidrogenaza
D-fructoza-Dehidrogenaza
Alcool-Dehidrogenaza
D-gluconat-Dehidrogenaza
Celobioza-Dehidrogenaza

Substratul reaciei de
electrod
Metilamina
Succinat
Fumarat
D-fructoza
Etanol
D-gluconat
Celobioza

Proces de electrod
Oxidare
Oxidare
Reducere
Oxidare
Oxidare
Oxidare
Oxidare

O problem care se ridic n cazul utilizrii oxidoreductazelor este aceea c O2 este

un factor limitative n condiiile operrii biosenzorilor la concentraii mari de substrt. De
asemenea, H2O2 rezultat n urma reaciei enzimatice conduce la inactivarea multor enzyme.
Dehidrogenazele sunt folosite mai rar n construcia unor astfel de electrozi
comparativ cu oxidorectazele, deoarece cofactorul enzymatic NAD+/NADH este mult mai
dificil de a fi redus n mod reproductibil la suprafaa electrozilor.
n majoritatea cazurilor de construire a unor senzori bazai pe dehidrogenaze este
aplicat reacia de oxidare. La nivelul electrozilor metalici aceast reacie apare le o valoare
de suprapotenial de 1 V i decurge printr-un mecanism radicalic, fapt care ridic o serie de
probleme legate de acoperirea suprafeei electrodului i interferenele posibile datorit unor
specii n solu posibile datorit unor specii n soluia de analizat. Toate acestea fac ca metoda
de regenerare a NAD+ s nu fie cea mai adecvat n cazul electrozilor enzimatici
ampermetrici.
Un numr de cercettori au cutat s gseasc suprafee de electrod catalitice la care
reacia s apara rapid la valori mici de potenial. Aceste studii au avut la baz electrozi chimic

modificai (CMEs). n cazul CMEs, un mediator redox este modificat pentru o metod
oarecare la suprafaa electrodului iar transferul de electroni dintre speciile de determinat din
soluie, NADH i electrod are loc prin intermediul acestuia.
n general un mediator trebuie s combine o cinetic omogen a reactivilor cu
molecula de interes cu o cinetic de electrod rapi.
Cercetrile iniiale au fost axate pe studiul ortochinonelor ca mediatori pentru
oxidarea NADH-ului, dar electrozii obinui nu ar fi putut fi folosii cu success n construcia
biosenzorilor datorit stabilitii lor reduse.

1.5. Electrozi chimic modificai bazai pe enzime

Unul din factorii care limiteaz aplicaiile practice n chimia analitic a senzorillor
chimici este selectivitatea. Folosirea enzimelor imobilizate, pe lng mediatorul redox (M) , la
construcia electrozilor rezolv problema selectivitii. Aprnd astfel i o nou clas de
detectori numii electrozi chimic modificai bazai pe enzime imobilizate (IECMEs).
Studile privind IECMEs au luat amploare mai ales n ultimii ani, IECMEs fiind
instrumente analitice care combin selectivitatea, specificitatea i capacitatea catalitic a
enzimelor pentru substratul lor natural cu avantajele deteciei electrochimice.
n ultima decad electrozii chimic modificai i-au gsit largi aplicaii n construcia
biosenzorilor, care sunt electrozi chimic modificai bazai pe enzime,ce combin
specificitatea, selectivitatea Si capacitatea catalitic a enzimelor fa de substratul lor natural
cu avantajele deteciei electrochimice.
Biosenzorii bazai pe enzime pot fi folosii n mod selective n cadrul analizei unor
compui diveri. Un factor care limiteaz atingerea ntregului potenial de proiectare i
realizare a acestor senzori este legat de proprietile enzimei ca atare.
n ultimii ani o atenie deosebit s-a acordat unei noi clase de enzyme,
quinoproteinel, care prezint diferite activiti enzimatice asupra unor substane de importan
biologic.
Se presupune c prin utilizarea acestor quinoproteine n construcia biosenzorilro se
poate realiza un transfer direct ntre centrul activ al enzimei i electrod eliminndu-se
utilizarea mediatorilor redox. Schimbul de electroni direct ( fr mediatori) ntre o grupare
redox a proteinei suprafaa electrodului a fost studiat pentru un numr de proteine ca:
citocromul, plastocianina, azurine, glucoz-oxidaza.
n ultimii ani au fost realizai biosenzori amperometrici i poteniometrici, care pe
lng mediatorul redox include Si biomolecule, rezultnd o nou clasa de detectori numii
electrozi chimic modificai bazai pe enzime imobilizate. n literature de specialitate exist o
serie de revievuri [30-39] prezentnd principiul de construcie funcionare, precum i
principalele caracteristici i aplicaiile electrozilor chimic modificai bazai pe enzyme
imobilizate.
Sunt doua ci de cuplare a procesului de electrod cu reacia enzimatic. Prima
aproximare este bazat pe utilizarea mediatorilor de mrime molecular mic. n acest caz

reacia de transfer de electroni are loc fr mediatori. Regenerarea mediatorului are loc pe
suprafaa electrodului.
Tehnicile de imobilizare constau n metode fizice i chimice de imobilizare ct i n
combinaii ale acestora.
Principalele metode fizice sunt adsorbia pe matrici insolubile i entraparea n geluri
insolubile.
Imobilizarea chimic este efectuat prin legarea covalent pe suporturi derivatizate
sau legarea ncruciat intermolecular a biomoleculelor.
Procedeele de imobilizare a enzimelor sunt prezentate sistematizat n tabelul 1.2.
Tab. 1.2. Procedee de imobilizare a enzimelor.
Metoda
1. adsorbia pe matrici
insolubile
2. Entraparea n gel

3. Legarea covalent de o
membran , de un support
insolubil ( celuloza, dextran,
collagen, gelatin, albumina,
rini schimbtoare de ioni,
policlorura de vinil, sticla
poroas).
4. Legarea ncruciat de un
agent multifuncional (cum ar
fi derivai ai bis-izocianat sau
bis-diazobenzidin
glutaraldehidei).
5. electropolimerizarea

Avantaje
Simpl, condiii de lucru
blnde, fr distrugere a
enzimei.

Dezavantaje
Legturile enzimei cu suportul
sunt puternic dependente de pH,
solvent i temperatur.
Bariere difuzionale latgi,
Procedur aplicabil oricrei pierderea activitii , posibila
denaturare a moleculei enzimei
enzyme, condiii blnde.
ca rezultat al apariiei unor
radicali liberi.
Complexul enzima-suport este Tehnica complicat, timp de
stabil, metoda este ideal
lucru mare, posibilitatea pierderii
pentru producia n mas i
activitii datorit reacilor n
comercializare.
care sunt implicate gruprile
eseniale pentru activitatea
biologic.
Procedura simpl, legturi
Dificulti n controlul reaciei,
chimice puternice a
necesit o cantitate mare de
biomoleculelor cu support; larg enzim, activitate enzimatica
folosit n stabilizarea fizic a relativ mic dup imobilizare.
enzimelor adsorbite pe un
support.
Procedura relativ simpl, se
Mecanismul proceselor cinetice
poate controla grosimea
este nc neelucidat.
filmului de polimer i implicit
cantitatea de enzim depus n
imediata apropiere a suprafeei
electrodului. Se poate folosi
uor la realizarea
microelectrozilor.

1.5.1. Bioelectrocataliza
Bioelectrocataliza se preocup cu utilizarea materialelor biologice drept catalizatori pentru
procesele electrochimice de oxidare i reducere[40]. Bioelectrocataliza se refer la transferul
direct de electroni fr mediatori.
n 1978 a fost demonstrat c enzime ca lacaza au capacitatea de a cataliza
electroreducerea.O2. a fost artat c O2 este redus la electrod n prezena lactazei print-un
mecanism direct (fr mediatori) [41].
O2 + 4H+ + e-

2H2O

Tot n acelai an s-a descoperit c citocrom b2 (FMN) i hemul su coninnd lactat

dehidrogenaza catalizeaz electro-oxidarea lactatului.
Lactat

citocrom

piruvat + 2H+ + 2e-

Electro-oxidarea lactatului a fost studiat pe un electrod de crbune modificat cu o sare

organic conductiv. Mecanismul de reacie al oxidrii lactatului implic transferul direct de
elecroni ntre enzim i electrod. Mecanismului de transfer de electroni pentru sistemul
enzime-catalizatori nu a fost elucidat. Ipoteza sugernd transferul de electroni mediat de
gruprile active de le suprafaa electrodului a fost propus de unii autori. S-a descries
electroreducerea H2O2 cu peroxidaza inclus n matrice polypyrrol pe suprafaa electrodului.
Enzima accelereaz electroreducerea H2O2, fiind mediat de gruprile active de la suprafaa
electrodului.
Proprietile electrocatalitice ale enzimelor redox au fost observate pe o varietate de electrozi
incluznd : crbune sticlos, electrod past de crbune, electrozi chimic modificai cu polimer
organic[42-44]. Studii ale transferului redox ale gruprilor prostetice ale enzimei indic
urmtoarele: posibilitatea sau imposibilitatea de a obine transferul electrochimic a gruprii
prostetice ale enzimei, nu indic prezena proprietilor electrocatalitice ale enzimei; gruparea
prostetica a enzimei nu poate fi considerat ca un mediator redox intramolecular.
Cercetri ale cineticii formale ale enzimelor-catalizatori ale reaciilor de electrod sunt valabile
pentru lacaz, hidrogenaz i peroxidaze. Modelele cinetice ale peroxidazei ( catalizator al
reducerii H2O2 ) au fost studiate amnunit i comparate cu datele experimentaledin care
reiese c 42% din cantitatea total de enzyme adsorbite pe suprafaa electrodului sunt
accesibile pentru transferul direct de elctroni. Aceste studii sunt eseniale pentru nelegerera
proceselor de electrocataliz.
n general, mecanismele catalizei enzimatice a reaciilor de electrod nu au fost nc cercetate
n detaliu. nc nu este clar ce parametric determina posibilitatea enzimelor redox de a cataliza
reaciile de electrod.
Exist o serie de nelmuriri n ceea ce privete:

rolul gruprilor prostetice ale enzimei n electrocataliz;

rolul moleculelor de protein n procesul de transfer de elctroni;


influena orientrii moleculelor de enzime pe suprafaa electrodului n
procesul de bioelectrocataliz;

influena naturii materialului din care este realizat electrodul i structura

suprafeei electrodului n bioelectrocataliz;

relaiile dintre mecanismul catalitic de aciune a enzimei i manifestarea

capacitii electrocatalitice.

2. APLICAIILE ELECTROZILOR
CHIMIC MODIFICAI
Folosirea electrozilor chimic modificai n chimia analitic se bucur de un success
considerabil. Prin modificarea chimic a suprafeei electrozilor a fost posibil obinerea unei
mari varieti de electrozi chimic modificai prin intermediul crora pot fi determinai un
numr mare de compui chimici. Datorit selectivitii i sensibilitii mrite, electrozii
chimic modificai sunt ideali pentru electroanalize. Electrozii chimic modificai i-au gsit
largi aplicaii i anume n: electrocataliz, preconcentrare, permeabilitate selectiv i
recunoatere specific. Datorit proprietilor lor deosebite electrozii chimic modificai i vor
gsi n continuare largi aplicaii n domeniul chimiei analitice.
n tabelul 2.1 sunt prezente diferite aplicaii ale electrozilor chimic modificai n
cadrul analizei chimice i biochimice.
Metalo-ftalocianinele reprezint o clas de compui care a fost foarte bine studiat
datorit activitii sale catalitice.
Cobalt-ftalocianinele au o eficien dosebit n reaciile n care sunt implicai
compuii : N2H4 , acidul oxalic, alpfa-cetoacizi, compui tiolici, cisteina, homocisteina,
glutation, tiopurine [45-49].

Tab. 2.1. Aplicatiile electrozilor chimic modificati

Nr. CME
Compuii analizai
1. CobaltHidrazina (N2H4)
ftalocianina n
pasta de crbune

2.

3.

4.

Caracteristici ale electrozilor chimic modificai

Oxidarea catalitic a N2H4 pe acest electrod chimic
modificat a fost folosit n FIA. Detecia a fost
realizat la o,1V v.s. Ag/AgCl n soluie de
NaOH 0,2 M, valoare care este cu mai mult de 100
mV mai mic comparativ cu cea necesar deteciei
electrochimice la nivelul unui electrod de crbune
nemodificat. Rspunsul liniar a fost observat
pentru concentraii de 10-8 10-3 M ale N2H4 ,
detecia limit fiind mai mic de 1 pmol.
CobaltCisteina,
Electrodul chimic modificat catalizeaz
ftalocianina n Homocisteina, N- electrooxidarea tiolilor la +0,75 +0,85 V v.s.
pasta de crbune acetilcisteina,
Ag/AgCl ntr-un mediu de H2SO4 0,5 M sau PO4-3
Glutation
0,5 M. Folosit n combinare cu cromatografia de
lichide , electrodul chimic modificat manifest un
rspuns liniar pentru cistein ntre 2,7 270 pmoli.
Electrodul a fost sufficient de stabil pentru
folosirea continu timp de o zi iar suprafaa sa a
putut fi regenerat cu o deviaie standard relativ
de o,7%. Metodele LCEC avand la baz electrozii
chimic modificai au fost utilizate pentru
determinarea cisteinei i glutationului n snge i
plasma.
CobaltTiopurine
Procedeul a fost realizat pentru determinarea 6ftalocianina n
mercaptotiopurinei, 6-tioguaninei i a altor
pasta de crbune
tiopurine din snge i plasm. Detecia limit a fost
de 1,58 pmoli, aproximativ cu un ordin de
mrime mai mare dect detecia prin absorbie n
U.V. sau prin fluorescen.
CobaltAc. Oxalic, -ceto- Electrodul chimic modificat catalizeaz oxidarea
ftalocianina n acizi, ac. Piruvic, acidului oxalic i a cetoacizilor la o valoare
pasta de crbune ac. Fenil piruvic, cuprins ntre + 0,75 + 0,90 V v.s. Ag/AgCl ntrac. -ceto glutaric un mediu de PO4-3 0,5 M, pH =2 care reprezint o
valoare cu 500 mV mai mic comparativ cu
potenialul aplicat unui electrod nemodificat. La
0,75 V rspunsul pentru acid oxalic a fost liniar
ntre 10-72*10-5 M, iar detecia limit este de o,3
pmoli. Pentru cetoacizi detecia limit variaz ntre
0,15 1,00 nmoli.

5.

6.

7.

8.

Electrod de
Insulina
crbune sticlos
acoperit cu un
film de ruteniu
i cianur

Electrodul chimic modificat catalizeaz

electrooxidarea insulinei print-un mecanism
presupus ce implic oxidarea uneia sau mai multor
legturi SS. cataliza se realizeaz la un potenial
mai pozitiv + 0,9 V v.s. Ag/AgCl permind o
detecie FIA la o concentraie de 10-7 M.
Mn(III) mAcid ascorbic,
Electrozii de crbune sticlos coninnd compleci
tetrafenil
hidralazin,
porfirinici pe baz de Mn conduc la oxidarea
porfirin depus epinefrina
diferiilor compui biologici. Deoarece efectul
pe un electrod
apare la diferite poteniale pentru aceti compui,
de crbune
cataliza implic probabil interacii specifice ntre
sticlos
compusul de analizat i mediator i nu un process
de sarcin mediat. n FIA efectul primar al
electrodului chimic modificat const n micorarea
potenialuluinecesar oxidri cu 50360 mV
comparativ cu electrodul nemodificat.
Electrod de
Cistein, glutation Electrodul chimic modificat catalizeaz oxidarea
crbune acoperit
cisteinei i glutationului la un potenial cuprins
cu un film
ntre + 0,9 +1,0 V v.s. Ag/AgCl. n FIA detecia
compus din
limit a acestor compu a fost stabilit sub un
cianur i oxid
nivel microM, iar rspunsul a fost liniar pentru trei
de ruteniu
ordine de mrime. Stabilitatea n timp a
electrodului chimic modificat a fost foarte bun; nu
s-au osservat scimbri pentru mai mult de 200 de
injectri, timp de dou sptmni.
Electrod de
Compui tioici,
Electrodul chimic modificat este folosit ca sensor
crbune sticlos cistein, glutation amperometric n cromatografia de lichide. Acest
acoperit cu Coelectrod realizat prin electropolimerizare anodic a
ftalocianin
C0-4,4,4,4 tetra-amino-ftalocianina ofer
compatibilitatea fa de solvenii organici i , de
asemenea , stabilitate. Cu ajutorul acestui electrod
s-au putut determina diveri compui tiolici n
cantiti de pmoli. Pspunsul electrodului este
foarte stabil n timp, dup 40 de ore de funcionare
continu pstrndu-i aproximativ 80% din
activitatea iniial.

n ultima decad electrozii chimic modificai i-au gsit largi aplicaii n construcia
biosenzorilor, care sunt electrozi chimic modificai bazai pe enzyme, ce combin
specificitatea, selectivitatea i capacitatea catalitic a enzimelor fa de substratul lor natural
cu avantajele deteciei electrochimice.
Biosenzorii bazai pe enzime pot fi folosii n mod selective n cadrul analizei unor
compui diveri, un factor care limiteaz atingerea ntregului potenial de proiectare i
realizare a acestor senzori este legat de proprietile enzimei ca atare.
n ultimii ani o atenie deosebit s-a acordat unei noi clase de enzime,
quinoproteinele, care prezint diferite activiti enzimatice asupra unor substane de
importan biologic.

Se presupune c prin utilizarea acestor quinoproteine n construcia biosenzorilor se

poate realiza un transfer direct ntre centrul activ al enzimei i electrod eliminndu-se
utilizarea mediatorilor redox.
n ultimii ani, interesul chimitilor i biochimitilor analiti s-a axat pe realizarea i
caracterizarea IECMEs care ofer o alternativ amperometric de studiu i determinare a
multor compui chimici de importan biochimic:proteine redox, enzyme, diferite substrate,
utiliznd mediatori fie liberi n soluie, fie fixai pe suprafaa electrozilor. Datorit
proprietilor acestora studiile bioelectrochimice au fost canalizate n cteva direcii [20-24,
50].
Una dintre acestea a fost legat de folosirea CMEs n studiile bioelectrochimice n
scopul unei mai bune nelegeri a reaciei cu transfer de electroni n cadrul sistemelor
biologice. Prin folosirea CMEs a fost posibil studiul compuilor biochimici care prezint un
transfer heterogen de electroni ce se desfoar cu o vitez mic la nivelul electrozilor
convenionali, presupune n consecin, o comportare electrochimic ireversibil. S-a
demonstrat c electrozii chimic modificai reprezint o alternativ real pentru transferul
omogen de electroni cu ajutorul mediatorilor n soluie , ei putnd fi utilizai pentru
determinarea cantitativ a proteinelor i enzimelor.
Cercetarea caracteristicilor de oxido-reducere a sistemelor biologice este important
n nelegerea principalelor procese biologice. Tehnicile electrochimiei convenionale ca de
exemplu: titrarea poteniometric i titrarea coulometric, voltametria ciclic i polarografia
au fost utilizate n studiul biocomponentelor electroactive. Cteodat, multe specii biologice
urmeaz un mecanism heterogen de electroni cu viteza mic n consecin perzint un
comportament electrochimic ireversibil. Studii intense au fost realizate pentru a obine o
reacie de electrod reversibil sau cvasireversibil. De exemplu, electroliza reversibil sau
cvasireversibil a citocromului a fost realizat utiliznd oxidul de indiu. Utilizarea oxidului de
ruteniu a fost cercetat pentru a uura reaciile de electrod ale ctorva proteine : citocrom c,
azurin, rubredoxin, feredoxin i plastocianin.
O alternativ accesibil care a fost aplicat cu succes la obinerea informaiilor
electrochimice provind enzimele i proteinele a fost folosirea mediatorilor. Aceste specii care
au o comportare reversibil ideal sunt adugate la soluia de protein sunt utilizai ca
intermediary ai transferului de electroni n oxidarea sau reducerea macromoleculei. [52-55].
Alte studii legate de acest domeniu au demonstrat posibilitatea unui transfer direct
de electroni ntre gruparea redox a unei proteine i suprafaa electrodului . aceste studii
dezvolt o baz electrochimic pentru cercetarea structurii proteinelor, mecanismul
transformrilor redox al proteinelor i proceselor metabolice implicnd transformarea redox
[55-60].
Studiile existente pn la ora actual au indicat faptul c viteza schimbului de
electroni ntre centrul activ al enzimei i electrod este determinat de natura enzimei
materialul de electrod. Astfel, gsirea unor noi materiale de electrod care ar putea conduce la
un transport eficace de electroni este de interes theoretic i practice.
Un alt domeniu de interes pentru studiile electroanalitice bazate pe CME l
reprezint construcia i caracterizarea electrozilor modificai bazai pe enzyme imobilizate
(IECMEs) care combin specificitatea, selectivitatea i capacitatea catalitic a enzimei fa de

substratul ei natural cu avantajele oferite de detecia electrochimic. Cercetrile n domeniul

tehnologiei biosenzorilor se dezvolt foarte rapid; descoperirile recente n studiul moleculelor
i proceselor biochimice au un impact deosebit n diferite domenii ale electrochimiei, dintre
care unul din cele mai importante l reprezint electroanaliza.
n tabelul 2.2 sunt prezente o parte din aplicaiile CMEs n domeniul compuilor
chimici de importan biochimic.
Realizarea i caracterizarea IECMEs se afl nc la nceput este de ateptat ca
datorit proprietilor menionate, acetia s devin n perspectiva instrumente analitice
foarte utile n determinrile de interes chimic i biochimic [61-66].

Tab. 2.2. Aplicaiile CMEs bazai pe enzime

Compus de analizat

CMEs

L-lactat

Electrod pasta de crbune

modificat cu lactatoxidaz i
peroxidaz din hrean.

Glucoza

Glucoz-oxidaza

Acid lactic

Lactato-oxidaza

Acid glutamic

Glutam-oxidaza

Fenolii

Fenolii

Imobilizate pe un electrod
crbune sticlos modificat cu
peroxidaza-polianilinometil
ferocen.
Electrod past de crbune
modificat cu quinoproteinglucoza-dehidrogenaza

Electrod past de crbune

modificat cu Co-ftalocianin
cu polifenol-oxidaza
imobilizat pe suprafaa
electrodului fr mediator.

Caracteristici ale elctrodului

chimic modificat
Lactatoxidaza i peroxidaza pot
fi imobilizate prin adsorbie pe
particulele de grafit. Permite
detecia L-lactatului la
poteniale joase, cuprinse ntre
50 i 50 mV (v.s. Ag/AgCl).
Operand la un potenial de 50
mV i 50 mV (v.s. Ag/AgCl),
aceti electrozi sunt capabili s
msoare analiii dorii cu o
selectivitate ridicat i o bun
precizie.

Enzima este inclus n pasta de

crbune. Rspunsul
electrodului este bazat pe
regenerarea enzimatic.
Electrodul este poteniostatat la
500 mV (v.s. Ag/AgCl /0,1
mol/L KCl). Senzitivitatea cea
mai mare este obinut pentru
p-aminofenol care poate fi
determinat la nivelul
subnanomolar
Acest electrod permite detecia
fenolilor pe ntregul domeniu
de potenial (-0,2 la +0,5 V ) cu
oxidarea ncepnd la 0,2 V i
reducerea la poteniale mai
sczute.

Fructoza

Hemoglobina

Lactat

Electrod crbune sticlos

modificat cu un complex
format din particule de Au
colloidal i D-fructozodehidrogenaza.

Rspunsul curentului anodic la

D-fructoz a fost msurat prin
utilizarea unui electrod crbune
sticlos modificat cu complex la
+0,5 V (v.s. Ag/AgCl). Timp
de rspuns: 15s. n absena
enzimei nu se obine nici un
rspuns al curentului; deci
creterea curentului de oxidare
a fost confirmat a fi cauzat
de transferul de electroni de la
enzim la electrod.
Electrod chimic modificat cu Electrodul chimic modificat
riboflavin
este construit prin adsorbia
riboflavinei pe suprafaa de
grafit. Suprafaa acoperit este
de 9,6 x 10-10 mol/cm2. acest
electrod chimic modificat
permite electroreducerea
hemoglobinei care are loc la
poteniale joase
corespunztoare potenialului
de reducere a mediatorilor.
Electrod modificat cu flavin- Rspunsul bioelectrodului s-a
reductaza i riboflavina
bazat pe oxidarea la 0,1V v.s.
SCE a dihidroriboflavinei
generate enzymatic. Cu
imobilizarea flavin-reductazei
ia lactat-dehidrogenazei
conduce la un bioelectrod bazat
pe dehidrogenaza pentru
determinarea lactatului n
prezena riboflavinei i NAD+.

3. IMPORTANA DETERMINARII
DOPAMINEI
Dopamina face parte din grupa unor importante substane numite catecolamine sau hormoni
medulosuprarenalieni. Este un intermediar important n biosinteza adrenalinei i a
noradrenalinei, principalele secreii ale acestor hormoni. Principalul effect fiziologic al
catecolaminelor este cel asupra sistemului circulator. n acelai timp sunt efectori ai strii
nervoase i au rol important n transmiterea fluxului nervos simpatic.
Rolul biochimic al catecolaminelor const n implicaiile lor n circuitul
hidromineral. Reglarea secreiilor hormonale se face cu ajutorul influxurilor nervoase
transmise cu ajutorul neurotran-smitorilor. Secreia de hormoni medulosuprarenali este
provocat de excitarea cilor nervoase transmise cu ajutorul dopaminei, noradrenalinei i
serotoninei.
Totodat, s-a demonstrat faptul c dopamine este un factor de inhibiie al prolactinei,
care este hormonal lactogen sau lactotrop ce acioneaz asupra secreiei glandei mamare prin
mrirea att a cantitii de esut glandular, ct i a produciei de lapte.
Cu ajutorul tehnicii de histofluorescen s-a putut alctui o hart a conexiunilor
dopaminei. Dopamine este unul dintre cei mai interesani neurotransmitori pentru c este
implicat n cteva funcii interesante cum este mobilitatea , atenia i capacitatea de nvare.
Degenerarea neuronilor dopaminergici ce conecteaz substan cenuie n circuitul
nervos cu nucleul cutat provoac boala lui Parkinson, caracterizat prin tremurul i
rigiditatea extremitilor, lipsa de echilibru i dificultate n iniierea micrilor. Dopamine este
implicat ca i substan neurotransmitoare n schizofrenie, o dereglare mental serioas,
caracterizata prin halucinaii, deziluzii i ntreruperea procesului normal logic, de gndire.
Prin descompunerea dopaminei se obine melanina, care este pigmentul pielii.
Scderea cantitii de dopamin poate avea loc prin inhibiia unor enzyme ca
tirozinhidroxilaza, DOPA-decarboxilaza prin dereglarea acumulrii de dopamin i acid
homovanilic, metabolitul principal al dopaminei n organismul uman. Obinerea efectului
scontat n tratamentele ce folosesc medicamente ce provoac stri antidepresive se bazeaz pe
buna funcionare a sistemului dopaminergic. Funciile terminaiilor nervoase ale sistemului
dopaminergic pot fi studiate n figura 3.1., n care:
Totodat , datorit implicrii n sistemul circulator, dopamine se folosete n tratarea
afeciunulor cardiace i n cazurile de edem pulmonar.
Avnd n vedere importana sa clinic i biochimic, n literature de specialitate sunt
prezentate o serie de procedee de determinare a acesteia.

3.1. Metode de determinare

Una din metodele de determinare a dopaminei a fost cea folosind tehnica perfuziei
push-pull care const din dou tuburi concentrice prin care lichidul fiziologic este n acelai
timp infuzat ( push) i scos (pull) [67].
Sensibilitatea ridicat a tehnicii cromatografiei de lichide cu deteci electrochimic,
face ca aceast tehnic cuplat cu tehnica
push-pull s devin ideal pentru aceste
analize. Astfel, compusul de analizat din sistemul nervos este scos i analizat prin orice
metod folosit pentru cantiti mici de prob.
Tot datorit prezenei n cantiti mici a dopaminei n sistemul nervos s-au folosit
markeri radioactivi.
Aceast metod seamn cu cea amintit nainte, doar c lichidul de perfuzie trece
prin membrana de dializ. Moleculele mici prezente n mediul extern pot difuza prin
membran i ndeprtate din sistemul nervos.
Experimentele in vivo necesit folosirea unor aparate foarte sensibile i n acelai
timp de dimensiuni mici. Electrozii voltametrici ndeplinesc aceste condiii i cu timpul au
devenit din ce n ce mai specializai [68-71].
Pentru a ndeplini cerinele de mrime, cercettorii au adoptat tehnica folosirii unui
electrod cu fibr de carbon. Fibra de carbon se nchide ntr-o capilar de sticl i I se las un
vrf ascuit la exterior. Aria sensibil a acestui vrf are o raz minim de 5 m i maxima de
35 m.
Pentru a se crete selectivitate pentru catecolamine, se fixeaz pe suprafaa
elctrodului o membran perfluorinat schimbtoare de ioni ( Nafion).
Folosirea membranelor schimbtoare de ioni este o tehnic des adoptat de
cercettori, simplicitatea metodei fiind un avantaj valoros.
Polimerii folosii ca membrane sunt diferii, avnd fiecare avantajele i
dezavantajele lor, dar toi i pastreaz caracteristica de baz, adic las s treac dopamine
care este protonat la pH fiziologic, celelalte substane fiind excluse. Pentru a se putea crete
timpul de rezoluie al acestei tehnici, s-au dezvoltat cteva tehnici electrohimice rapide.
O astfel de tehnic este cronoamperometria, tehnic n care se aplic un potenial
asupra unui electrod, sufficient pentru electroliza speciei care ne intereseaz [72-76].
Voltameria ciclic i mbuntirile aduse acestei metode sunt o tehnic folosit n
mod current pentru determinarea dopaminei. Se fac comparaii ntre metodele de
amperometrie la potenial constant i voltametria ciclic de scanare rapid ca tehnici de
monitorizare in vivo .
Datorit potenialului constant, prima metod este piin afectat de schimbarea de
current. Acest avantaj situeaz metoda, a doua dup cromatografoa de lichide, ca metod
uzual.

Determinrile de dopamin se realizeaz i enzymatic prin intermediul unor

preparate enzimatice obinute prin extracia enzimelor din diferite esuturi ale plantelor.
Folosind un sistem de injecie n flux se poate determina dopamine cu soluia de
enzim folosit ca purttor. Pentru acest sistem s-a determinat c soluia de enzim obinut
din frunze de spanac este mai adecvat dect cea obinut din pulp de banan [76-80].
Acest sistem de injecie n flux poate fi combinat cu folosirea de microelectrozi ca i
detectori amperometrici. Ca mediator redox se folosete tetratiofulvalena
tetracianochinodimetanul ( TTF-TC) care se amestec cu clorur de polivinil ( PVC) n raport
de 13: 1 i se suspend ntr-o soluie de tetrahidrofuran (THF).
Concluziile acestor determinri sunt acelea c, datorit unei cinetici de o rapiditate
rezonabil, dopamin prezint o sensibilitate mai mare dect acidul ascorbic i hidrochinon,
la diferene relativ mici n fraciunile ariei active a suprafeei investigate, astfel nct
sensibilitatea de detecie a dopaminei este mai mare.
In vivo , determinrile sunt mult mai dificile dect in vitro . De aceea determinrile de
acest tip trebuie s fie mult perfecionate.
Voltametria cu electrozi sufficient de mici pentru a putea fi introdui ntr-o celul, asigur un
mijloc de monitorizare cantitativ a substanelor uor oxidabile, atunci cnd concentraia lor
se schimb n citoplasma celulei. Aceast metod se bazeaz pe o diferen de potenial ntre
electrodul voltametric i electrodul de referin, ce duce la reacia de oxidare, result intensitate
msurabil n picoamperi.
Electroforeza capilar este o metod de nalt eficien, ce folosete volume foarte
mici ( picolitri), pentru separarea moleculelor ionice, metoda ce se bazeaz pe mobilitatea
electroforetic [81-83]. Cu ajutorul electroforezei capilare s-a determinat pentru prima dat
cantitatea relativ de neurotransmitor liber, respective vascularizat, din corpul cellular al
unei cellule nervoase singulare din Planorbis corneus.
Sensibilitatea i selectivitatea unei tehnici depinde de cele mai multe ori de natura
electrozilor. S-a demonstrat c , electrozii modificai chimic prezin o mai mare stabilitate i
selectivitate n determinrile bioanalitice.
Un exemplu de astfel de electrod chimic modificat, este electrodul din pasta de
crbune modificat cu stearat ( SMes). Modificrile de baz aduse de acest nou tip de electrod
sunt acelea ca prezint pe SMEs aresturilor carboxilice neprotonate la pH fiziologic ntrzie
electrooxidarea speciilor anionice, c ascorbatul i DOPAC, astfel nct speciile cationice de
dopamin pot fi determinate n prezena lor [84,85].
Cu toate avantajele metodei amperometrice , cercettorii au gsit o alt metod mai
eficient combinnd detecia electrochimic cu tehnica cromatografiei de lichide.
S-a descries o metod de microcromatografie de lichide cu detecie electrochimic
folosind un nou tip de electrod. Acest tip de electrod se obine , n principiu, prin
comprimarea i nclzirea a dou buci de polimer umplute cu crbune pe un fir metallic
introdus n dou capilare din silice care se alipesc. Obiectul obinut seamn mai mult sau mai
puin cu un cip folosit n electronic i de aceea a fost denumit electrodul Chip. Firul se

scoate cnd cipul este cald. Cele dou capilare silicioase conduc fluxul lichidului
cromatografic de-a lungul electrodului, parte a cipului. Volumul celulei de analiz este
determinat de dimensiunile firului i a capilarelor silicioase folosite [86]. Aceast metod s-a
folosit pentru determinarea catecolaminelor din urin i dintr-un amestec preparat.
O metod foarte recent i spectaculoas n acelai timp, presupune folosirea unor
lentile termice pentru determinarea spectrometric (TLS) a catecolaminelor dup oxidarea
acestora la aminocromi. n aceast derminarea se folosete o tehnic laser foarte sensibil
[87]. Substanele cu un spectru larg de absorbie molar la o lungime de und a pompei de
radiaie pot fi determinate prin TLS; substanele cu o absorban mic pot fi determinate,
deasemenea, prin aceast metod, chiar la o concentraie foarte mic. TLS permite
determinarea dopaminei la nivelul de concentraie gsit n probele fiziologice cu o
sensibilitate i reproductibilitate satisfctoare. La concentraii foarte mici, oxidarea d soluii
stabile de aminocromi. Stabilitatea ridicat permite ca oxidarea s poat avea loc la valori
mari de pH, avnd loc cu o vitez foarte mare.
Sensibilitatea asemntoare obinut pentru toate catecolaminele constituie un
avantaj dac se compar cu majoritatea metodelor fluorimetrice [89].
Caracteristicile analitice indic faptul c detecia TLS poate constitui o alternativ
valoroas n determinarea catecolaminelro folosind HPLC ( high performance liquid
chromatography).
Determinarea dopaminei din urina uman prin HPLC const din trei etape:
prepurificarea catecolaminelor, separarea catecolaminelor prin cromatografia perechilor de
ioni sau prin schimb de ioni i detecia prin metoda electrochimic sau fluorimetric. Aceste
procese pot fi automatizate i rezultatele obinute asigur utilizarea cu rezultate bune a acestei
metode pentru determinrile directe ale catecolaminelor din urin[90-91].
Construcia, caracterizarea i aplicaiile electrozilor modificai chimic posednd
suprafee funcionalizate specifice, reprezint un nou domeniu de cercetare electrochimic,
care n principiu poate deschide o serie de posibilitnd suprafee funcionalizate specifice,
reprezint un nou domeniu de cercetare electrochimic, care n principiu poate deschide o
serie de posibiliti analitice unice n domeniul electrochimiei [91-96].
Recent, pretatarea electrochimic a electrozilor de grafit realizat prin ciclizarea
potenialului ntre valori anodice i catodice extreme a permis daterminarea selectiv in
vivo a doapminei i acidului ascorbic.
Pn n present, n literature de specialitate sunt prezentate numeroase exemple de
ECM [91-96]. n majoritatea cazurilor, n literature de specialitate sunt prezentate numeroase
exemple de ECM [91-96]. n majoritatea cazurilor electrozii chimic modificai au fost
proiectai pentru a mima la nivel heterogen sistemele redox observate n soluprezentate
numeroase exemple de ECM [91-96]. n majoritatea cazurilor electrozii chimic modificai au
fost proiectai pentru a mima la nivel heterogen sistemele redox observate n soluii ( medii
omogene).
n mod obinuit, gruparea modificatoare selectat i legat pe suprafaa electroduuli
este o molecul electrolizabil reversibil, capabil s medieze un process de oxidare sau

reducere care n condiii normale are loc la valori mari de potenial datorit vitezei mici de
transfer a electronilor ntre compuii de analizat i electrodul nemodificat.
n aceast lucrare se examineaz posibilitatea utilizrii analitice a electrozilor chimic
modificai electrocatalitici, avnd la baz TMPD ( N,N,N,N- tetrametil fenilendiamin),
pentru determinarea dopaminei. Electrozii utilizai au fost ECM pe baz de past de crbune,
realizai prin includerea direct a TMPD n pasta de crbune.
S-au studiat att proprietule catalitice ale acestor ECM fa de dopamin, ct i
caracteristicile de rspuns.

3.2. Reactivi i soluii

N,N,N,N- tetrametil fenilendiamin ( TMPD) i dopamine s-au obinut de la firma
Aldrich Co i au fost folosite ca atare, fr o purificare ulterioar n ap deionizat.
Toate soluiile au fost proaspt preparate pentru fiecare experiment n parte i
deoxigenate prin barbotare de azot. Experienele s-au realizat n soluii tampon fosfat-acid
azotic de diferite pH-uri.

3.3. Aparatura
In cazul determinrilor s-a utilizat drept electrod inicator, electrodul pe baz de past
de crbune modificat cu TMPD.
Electrozii construii din materiale pe baz de past de crbune prezint curenti de
baz mici, ceea ce asigur un raport semnal/zgomot mic i de aceea sunt des utilizai n cazul
determinrilor electroanalitice.
Electrodul pe baz de past de crbune s-a preparat prin amestecarea ntr-un mojar a
5 grame de pulbere de grafit ( de puritate spectral Fluka) cu 3 mL de ulei de Nujol ( obinut
de la firma Mccarthy Scientific Co, Fullerton CA).
Electrozii chimic modificai s-au obinut n mod similar cu diferenta c, iniial,
mediatorul se amestec cu pulberea de grafit n cantitatea dorit, apoi se amestec cu eter
rezultnd un amestec eteric; ulterior se las eterul s se evapore. Acest amestec, pulbere de
grafit/mediator. Se introduce n ulei de Nujol, se mojareaz i se introduce ntr-un tub de
sering de unic folosin. Contactul se realizeaz cu ajutorul unui fir de platin.
s-au observat variaii mici ale curentului pentru diferite sarje de past de crbune
modificat, coninnd aceeai cantitate de mediator.
Din acest cauz este necesar realizarea unor noi curbe de calibrare ori de cte ori
se utilizeaz o nou sarj de past.
Curbele de calibrare redate corespund la media a trei voltamograme diferite realizate
pentru trei suprafee de electrod, diferite pentru fiecare concentraie. Curenii obinui pentru
dopamin au fost corectai prin scderea curentului de baz datorat oxidrii TMPD.

Varianta de obinere a electrozilor chimic modificai prin includerea mediatorului

redox n pasta de crbune reprezint metoda cea mai simpl de fabricare a acestuia. Ea ofer
posibilitatea obinerii unui electrod a crui suprafa modificat poate fi regenerat rapid i
reproductibil. Se pot obine cantiti mari de past de crbune modificat ntr-un timp scurt
( cteva minute) prin simpla amestecare normal a unor propotii adecvate de pulbere de
grafit, mediator i liant organic.
Utilizarea acestor electrozi n practic este limitat de folosirea lor n mediu apos
( pentru meninerea intact a suprafeei electrodului) i de fabricarea unor mediatori care s
prezinte o solubilitate redus n ap. Electrodul de referin utilizat a fost cel de Ag/AgCl , iar
cel auxiliar a fost de Pt. n figura 3.2. se red montajul voltametric utilizat n cadrul
determinrilor. Viteza de baleiere a potenialului a fost de 20 mV/s. Componenta principal a
echipamentuuli, necesar pentru controlul potenialului electrodului indicator i pentru
msurarea simultan a curentului, este reprezentat de analizorul voltametric (poteniostat).
Caracteristica principal a analizoarelor voltametrice moderne const n controlul
poteniostatic al potenialului electrodului inducator.
Circuitul este astfel realizat nct este posibil controlul potenialului dintre electrodul
indicator i electrodul de referin n timp ce curentul care circul ntre electrodul indicator i
cel auxiliar este msurat. Un astfel de poteniostat este cuplat cu un nregistrator x-y ,
obinndu-se voltamogramele ciclice. Volumul celulei electrochimice este de 10 mL. Soluiile
au fost deaerate prin barbotare de azot. Potenialul electrodului indicator s-a fixat la o valoare
sufficient de pozitiv comparativ cu potenialul formal de oxido-reducere al mediatorului ( Ef
=0,10 v ), astfel nct forma oxidat a acestuia s fie cea stabil la suprafaa electrodului.
3.4. Rezultate i discuii
Voltamograma ciclic tipic obinut pentru oxidarea TMPD la nivelul electrozilor de past
de crbune este redat n figura 3.3:
Fig. 3.3. Voltamogramele ciclice obtinute la nivelul electrozilor de pasta de carbune
pentru solutii ce contin: 2x10-4M TMPD, 1x 10-3 dopamina
Din toate punctele de vedere, comportarea anodic obsevat este similar cu cea
prezentat n cadrul studiilor electrochimice existente n literature de specialitate.
La pH-uri acide TMPD prezint dou oxidri bine definite implicnd un electron.
Prima prezint un pic de potenial la +0,10 V fa de Ag/AgCl, este reversibil i poate fi
ciclizat un timp indefinit, ce-a de a doua aprnd la +0,40 V care devine ireversibil datorit
unei reacii chimice ulterioare, probabil hidroliza produsului de reacie.
S-a evideniat faptul c TMPD poate cataliza oxidarea dopaminei la nivelul primei
unde i cea a NADH-ului la nivelul celei de a doua unde. n ambele cazuri a fost
evidenevideniat faptul c TMPD poate cataliza oxidarea dopaminei la nivelul primei unde i
cea a NADH-ului la nivelul celei de a doua unde. n ambele cazuri a fost evideiat prin
creterea dramatic a curentului anodic observat la nivelul undelor de oxidare ale TMPD
implicate n process i scderea corespunztoare a curentului catodic observat pentru aceste
unde prin baleierea n sens invers a potenialului. n cadrul lucrrii s-a studiat sistemul

electrocatalitic n mediu omogen (soluie) la nivelul electrozilor de past de crbune

nemodificai. Dopamine, ca atare a fost oxidat, prezentnd o serie de unde anodice avnd
potennd potenialul de pic la 0,26 V fa de Ag/AgCl. Voltamograma ciclic tipic
( comportarea electrochimic ) observat pentru soluii coninnd compusul de analizat
( dopamine) i catalizatorul (TMPD) n concentraie de 1x10-4 M este redat in figura 3.3.
Secventa de reacie urmeaz binecunoscutul mecanism
Q + ne-

P
Q+A

catalitic EC :

P+B

Unde: P = forma redus a TMPD; Q = forma oxidat; A = corespunde substratului

( dopamina).
De notat este faptul c terminologia utilizat este invers fa de cea convenional,
folosit de electrochimiti pentru a descrie un mecanism. Din punct de vedere al unui process
de elctrod primar, termenul de catalizator ar trebui utilizat pentru a ne referi la speciile A.
Totui, deoarece reacia de interes final este cea de-a doua, procesul redox chimic, TMPD este
privit a cataliza oxidarea dopaminei.

Electrozi chimic modificai coninnd TMPD

n principiu este posibil s se realizeze aceleai procese catalitice la nivelul ECM coninnd
TMPD.
ECM utilizai n acest studiu au fost electrozii pe baz de past de crbune
modificai chimic prin simpla adugare a cantitii dorite de TMPD n pulberea de grafit
naintea realizrii pastei de crbune. cest tip de ECM a fost ales datorit simplitii
construciei a posibilitii de variere a concentraiei de electrocatalizator i a uurinei de
generare a suprafeelor noi de electrod, prezentnd o reproductibilitate cantitativ.
Electrodul chimic modificat cu TMPD este stabil i reproductibil. Prin baleierea potenialului
n sens anodic, pe baz de past de crbune ce conine TMPD ca mediator, se observ apariia
unei unde de oxidare n domeniul de poteniale asemntor cu cel la care are loc oxidarea
TMPD n soluie.
ECM poate fi ciclizat repetitive nspre prima und de oxidare pe o perioad de 15-20
minute, fr s se observe o scdere notebil a intensitii curentului obinut. Totui, scanarea
potenialului nspre cea de-a doua und a TMPD face electrodul inutilizabil.
Electrodul poate fi inactivat fie prin meninerea acestuia n soluie timp de cteva ore,
sau prin aplicarea continu a potenialului corespunztor picului anodic timp de cteva
minute. n ambele cazuri inactivarea are loc datorit trecerii n soluie a mediatorului.
Activitatea electrodului poate fi uor refcut prin refacera suprafeei prin poliare,
ndeprtndu-se stratul extern i generndu-se o suprafa nou electrochimic activ. Elctrozii
rennoii prin aceast metod prezint o comportare electrochimic stabil i reproductibil pe
o perioad definit de timp ( cteva sptmni), funcie de numrul de determinri effectuate.

Suprafeele noi de electrod pot fi uor regenerate cu o reproductibilitate a picului anodic de 510%.

Influena fa de pH
n ambel cazuri (TMPD n soluie i fixat n pasta de crbune), potenialele picurilor anodice
i catodice au fost influenate n mod identic de modificarea vitezei de baleiere a potenn
ambel cazuri ( TMPD n soluie i fixat n pasta de crbune), potenialele picurilor anodice i
catodice au fost influenate n mod identic de modificarea vitezei de baleiere a potenialului.
Pentru valori de pn la 50 mV/s potenialele de pic au fost independente de viteza de
baleiere, n timp ce pentru valori mai mari, att procesele de faz omogen ct i heterogen,
au fost deplasate spra valori mai mari de potenial. n plus, variaiile potenialelor de pic cu
pH-ul , au fost identice pentru ambele sisteme. n ambele cazuri graficul Ep-pH (figura 3.5.) a
prezentat un salt de 59 mV/unitate de pH la valori de pH mai mici dect 6,0, curbele
aplatizndu-se peste aceast valoare de pH.
Acest tip de dependen fa de pH sugereaz faptul c gruprile electroactive din ECM-PC se
comport ca adevrate center active de suprafa, influenate de condiiile din soluie, ele
nefiind ascunse n interior, ECM nu prezint o comportare ideal corespunztoare unui
monostrat (un singur strat de grupri modificatoare fixate pe suprafaa electrodului).
Criteriile experimentale utilizate n caracterizarea comportrii unui ECM sunt separarea
picului anodic de cel catodic, i dependena curenilor anodici i catodici asociai Ipa i Ipc
pentru astfel de elctrozi variaz direct proporional cu rdcina ptrat a vitezei de baleiere a
potenialului, specific electrozilor controlai de difuzie.
Aa cum rezult din figurile 3.3 i 3.4. pentru Ecm-PC folosind n acest studiu, forma i
separarea picurilor anodice i catodice observate pentru primul transfer electronic TMPD sunt
asemntore cu cele obinute pentru TMPD n soluie la suprafaa unui sensor nemodificat de
past de crbune; aceast comportare persist i pentru valori mici de baleiere a potenialului.
n final, au fost construii i comparai diferii ECM coninnd concentraii diferite de TMPD
n amestecul iniial de past de crbune. Aa cum se observ din tabelul 3.1., pentru ECM
fabricai din amestecuri de past coninnd 0,25% pn la 1% TMPD n greutate, curenii
obinui au fost proporionali cu concentraia de TMPD.
Tab. 3.1. Caracteristicile ECM funcie de concentraia modificatorului
Conc. TMPD %
1,00
0,75
0,50
0,25

Epa(V), v.s. Ag/AgCl

0,090
0,090
0,095
0,090

Ipa (A)
29,0+2,4
17,3+2,4
11,0+1,0
5,0+0,4

Concentraiile mai mari de 1% nu au fost folosite datorit curenilor necontrolai care

se obin. ncercrile de a folosi concentraii de 0,1% TMPD sau mai mici nu au fost
ncununate de success n privina obinerii unor ECM care s genereze unde semnificative.

Evident, comportarea catalitic a ECM este similar cu cea a TMPD n soluie fa de

dopamin, cataliz fiind evineniat printr-o cretere semnificativ a curentului anodic. n
plus, funcie de concentraiile de dopamin prezente n soluie, unda de reducere se
micoreaz sau dispare total n cazul scanrii n sens invers a potenialului.
Dependena de pH a procesuuli catalytic a fost studiat i a fost similar cu cea
anterioar observat pentru oxidarea TMPD.
n continuare au fost studiate dou aspecte legate direct de aplicaiile analitice ale
catalizei prin intermediul ECM i anume: depandena de concentraie i mrimea selectivitii.
Curbele de calibrare obinute pentru ECM coninnd diferote concentraii de TMPD i
corectate pentru curenii rezultai n absena compusului de analizat au prezentat domenii mari
de liniaritate. Domeniul cel extins de liniaritate s-a obinut pentru electrodul coninnd
cantitatea cea mai mare de TMPD.
La concentraTii mici de dopamin rspunsul electrodului a fost limitat de curentul de
baz existent datorat nsi oxidrii TMPD, n timp ce la concentraii mari de dopamin,
principala surs de interferene a constituit-o curentul de baz generat de oxidarea direct
necatalizat a dopaminei care apare la o valoare de potenial de +0,26 V vs. Ag/AgCl (aceeai
cu cea de la nivelu unui electrod de past de crbune nemodificat).
Determinarea unor concentaii mici de dopamin a fost limitat de primul effect i
favorizat de utilizarea unor concentraii minime de TMPD n past de crbune. Deci
sensibilitatea maxim s-a obinut la un electrod coninnd concentraii de 0,25% TMPD n
past de crbune. Limita de detecie folosind acest electrod a fost de 5x10-5 M dopamin,
comparabil cu cea obinut la nivelul unor electorzi nemodificai.
Domeniul de liniaritate pentru acest electrod a fost cuprins ntre 0,05-5,0 mM.
Reproductibilitatea msurtorilor picurilor de current pe domeniul menionat realizate cu
diferite suprafee de electrod a fost de 5-10%.
n general rezultatele obinute cu ajutorul ECM au fost comparabile ca precizie i
reproductibilitate cu cele obinute la nivelul electrozilor de past de crbune. Prin folosirea
ECM , totui curentul este urmrit la +0,1 V vs. Ag/AgCl valoare corespunztoare oxidrii
dopaminei la suprafaa electrodului de past de crbune. Cel mai important aspect al
performanelor Ecm-TMPD a fost aceast deplasare a potenialului care ofer posibilitatea
determinrii acestui compus n prezena altor specii care la nivelul electrozilor nemodificai
apar la aceeai valoare de potenial. Un exemplu n acest sens l reprezint dopamine i acidul
ascorbic care se oxideaz pe suprafaa electrozilor de past de crbune la poteniale de +0,26
V i respective 0,28 V. de fapt, determinarea separat a acestor doi compui este de
importan practic deoarece discriminarea acestor specii n esutul nervos a fcut obiectul
multor studii publicate n literatur, de cercettorii interesai n chimia proceselor de
neurotransmitere.
Voltamogramele pentru o soluie coninnd un amestec echimolecular de dopamin
i acid ascorbic obinute la suprafaa unui electrod de past de crbune i a unuia CM-TMPD
0,25% sunt redate n figura 3.9. Apar n mod clar dou unde anodice separate numai pentru
ECM, dopamine aprnd la prima oxidare a TMPD i acidul ascorbic la potenialul obinuit

de 0,28 V. deoarece voltamograma ciclic a fost trasat pn la valoarea de 0,35 V cea de-a
doua und pentru TMPD nu apare.
Avantajul oferit de ECM pentru determinarea a doi compui n amestec este redat
n tebelul 3.2., n care picul de current obinut pentru o soluie de concentraie 1x10-3 M este
constant n prezena unor concentraii diferite de acid ascorbic.
Tabel 3.3. curentul pentru dopamin n prezena acidului ascorbic
Dopamine (M)
1,0x10-3
1,0x10-3
1,0x10-3
1,0x10-3
1,0x10-3

Acid ascorbic (M)

5,2x10-4
210x10-4
1,1x10-4
5,2x10-4
2,0x10-4

Ipa (A)
36,0
33,0
30,4
32,3
29,7

Unde: a=rezult la +0,10 V vs. Ag/AgCl

Curba de calibrare obinut pentru diferite concentraii de dopamin n prezena unei
concentraii constante de acid ascorbic. 1x10-3 a fost liniar pe domeniul 0,05-5,0 mM
(coeficientul de corelaie 0.991).
n prezena acidului ascorbic, curba de calibrare prezint o pant mai mare
comparativ cu cea observat anterior pentru dopamin. Mult mai dificil dar, n acelai timp
mult mai realistic, este cazul n care compusul de analizat apare la cea de-a doua und i
inteferentul n exces la prima, este simultan de situaia invers implicnd determinarea unor
urme de acid ascorbic n prezena unui exces de dopamin.
Gradul mai mare de dificultate analitic rezult din faptul c, n aceste condiii cele
dou unde apar nc la poteniale distincte, cea de-a doua und corespunztoare acidului
ascorbic se suprapune pe coad poriunea final dar semnificativ a oxidrii dopaminei.
Aceasta depete cu mult selectivitatea obinut la nivelul electrozilor de pasta de crbune
nemodificai.
Interesant este de comparat rezultatele obinute cu cele ale lui Cheng pentru un
electrod de grafit/epoxi electrochimic pretratat prin ciclizarea iniial a electrodului ntre +0,7
i 0,2 V naintea determinrii.
n general, electrozii notri chimic modificai nu au fost capabili s conduc la o
discriminare mare ntre oxidrile dopaminei i ale acidului ascorbic, cum este cazul
electrozilor electrochimic pretratai. Unul dintre motive este acela c oxidarea dopaminei nu
este catalizat cu eficien de TMPD ncorporat fcnd ca oxidarea acesteia s fie separat de
cea necatalizat a acidului ascorbic i s fie de numai 0,18 V.

CONCLUZII
S-a proiectat i construit un electrod chimic modificat bazat pe includerea direct n
pasta de crbune a N,N,N,N- tetrametil p-fenilendiamin. Proprietile acestuia au fost
caracterizate prin voltametrie ciclic.
Electrozii astfel construii au prezentat dou unde de oxidare (dou oxidri)
dependente de pH la +0,1 V i +0,4 V vs. Ag/AgCl la fel ca i soluia de TMPD.
Curenii obsrvai (rezultai) au fost dependeni, direct proporionali cu concentraia
de TMPD adugat n pasta de crbune; suprafee noi de electrod pot fi generate n cteva
minute cu o reproductibilitate de 5-19%. Electrozii chimic modificai pe baz de TMPD pot
cataliza electrooxidarea dopaminei la nivelul primei unde anodice. Domeniul de liniaritate a
fost cuprins la nivelul primei unde anodice. Domeniul de liniaritate a fost cuprins ntre 5x10-3
M i 5x10-5 M dopamin.
Din punctul de vedere al simplitii, flexibilitii i reproductibilitii ECM pe baz
de past de crbune posed n mod clar proprieti attractive. Procesul de modificare utilizat
este unul din cele mai generale.

BIBLIOGRAFIE
1.

R.W. Murray, A.G Eewing and R.A. Durst, Anal. Chem. , 1987, 59, 379

2.

E. Wang, H. Hou, Electroanalysis, 1991, 3, 1

3.
P.T. Kissinger, Laboratory Techniques in Electroanalytical Chemistry, P.T.
Kissinger and W.R. Heineman, Eds., Dekker, New York, 1984, pp. 611-635
4.

D.S. Austin Harrison and D.S. Johnson, Electroanalysis, 1989, 1, 189

5.

H. Lee, L. J. Kepley, H.G. Hong and T.E. Mallouk, J. Am. Chem. Soc. , 1988,

6.

L.L. Miller and M.R. Van de Mark, J. Am. Chem. Soc. , 1978, 100, 3223

7.

A. Merz and A.J. Bard, J. Am. Chem. Soc. , 1978, 100, 3222

8.

A.N.K. Lau and L.L. Miller, J. Am. Chem. Soc. , 1983, 105, 5271

110, 618

9.
J.M. Kalvert, R.H. Schmel, B.P. Sullivan, J.S. Facci, T.J. Meyer and R.W.
Murray, Inorg. Chem. , 1983, 22, 2151
10. R.N. Dominey, N.S. Lewis, J.A. Bruce, D.C. Bookbinder and M.S. Wrighton,
J. Am. Chem. Soc. , 1982, 104, 467
11.

K.M. Kost, D.E. Bartak, B. Kazee and T. Kuwana, Anal. Chem. , 1988, 60,

12.

M. Umaa and J. Waller, ibid. , 1986, 58, 2979

2379

13.

N.C. Foulds and C.R. Lowe, ibid., 1988, 60, 2473

14. H.D. Arbuna, P. Denisevich, M. Umaa, T.J. Mayer and R.W. Murray, J. Am.
Chem. Soc., 1981, 103, 1
15. C.R. Martin and L.S. Van Dyke, In Molecular Desing of Electrod Surface,
R.W. Murray, Ed., John Wiley, New York, 1992
16.

P.G. Pickup and R.W. Murray, J. Am. Chem. Soc., 1983, 105, 4510

17.

R.A. Bull, F.R. Fan and A.J. Bard, J. Electrochem. Soc., 1984, 131, 687

18.

N. Oyama and F.C. Anson, J. Electrochem. Soc., 1984,106, 1606

19.

C.A.H. Chambers and J.K. Lee, J. Electroanal. Chem., 1967, 14, 309

20.

R.N. Adams, Anal. Chem., 1976, 48, 1128A

21.

T. Kuwana and W.G. French, Anal. Chem., 1964, 36, 241

22.

F.A. Schultz and T. Kuwana , J. Electroanal. Chem., 1965, 10, 95

23.

D. Bauer and M.P. Gaillochct, Electrochim. Acta, 1974,19, 597

24. B.F. Walkins, R.J. Sehling, E. Karin and L.L. Miller, J. Am. Chem. Soc. ,
1975, 97, 3549
25.

D.A. Buttrey and F.C. Anson, J. Am. Chem. Soc. , 1982, 104, 4824

26.

N. Oyama and F.C. Anson, J. Am. Chem. Soc. , 1979, 101, 739

27.

M.N. Szentimary and C.R. Martin, Anal. Chem. , 1984, 56, 1898

28. A.F. Diaz and J. Batgon, In Handbook of Marcel Dekke, New York, 1986,
Vol. I, pp. 81-116
29.
105, 7002

M. Krishnan, J.R. White, M.A. Fox and A.J. Bard, J. Am. Chem. Soc. , 1983,

30. D.C. Bookbinder, J.A. Bruce, R.N. Dominey, N.S. Lewis and M.S. Wrighton,
Proc. Nat. Acad. Sci., USA, 1980, 77, 6280
31.

A. Fitch, Clays and Clay Minerals, 1990, 38, 391

32.

D.R. Rollinson, Chem. Rev., 1990, 90, 867

33.

K. Itaya, I. Uchida and V.D. Neff, Acc. Chem. Res., 1986, 19, 162

34.

C.A. Goss, C.J. Miller and M. Majda, J. Phys. Chem., 1991, 300, 377

35. A. Despic and V. Parkhutik, in Modern Aspect of Electrochemistry, J. Bokris,

R.E. White and B.E> Conway, Eds., Plenum, New York, 1989, chap. 6
36.

W. Kurner, T.J. Meyer and W.R. Murry, J. Electroanal. Hem., 1985, 195, 375

37.

J. Wang, T. Golden, K. Varughese and J. El- Rayes, Anal. Chem., 1989, 61,

38.

B.R. Shaw and K.E. Creasy, ibid., 1988, 60, 1460

39.

K.E. Creasy and B.R. Shaw, ibid., 1989, 61, 1460

40.

R.N. Adams, Anal. Chem. , 1958, 30, 1576

41.

R.N. Adams, Electrochemistry at Solid Electrodes, Marcel Dekker, New York,

508

1969

42.

C. Olson and R.N. Adams, Anal. Chim. Acta, 1960, 22, 582

43.

C. Olson, R.N. Adams, Anal. Chim. Acta, 1963, 29, 358

44.

E.S. Jacobs, Anal. Chem., 1963, 35, 2112

45.

G. Farsang, Acta Chim. Acad. Sci., Hung, 1965, 45, 163

46.

R. Landsberg and R. Thiele, Electrochim. Acta, 1966, 11, 1243

47.

H. Monien, H. Ipecker and K. Zinke, Fresenius Z. Anal. Chem., 1967, 225,

48.

J. Lindquist, J. Electroanal. Chem., 1974, 52, 37

49.

C.A.H. Chambers and J.K. lee, J. Electroanal. Chem., 1967, 14, 309

50.

R.N. Adams, Anal. Chem., 1976, 48, 1128A

51.

G.T. Cheek and R.F. Nelson, Anal. Lett., 1978, 11, 393

52.

T. Yao and S. Musha, Anal. Chim. Acta, 1979, 110, 203

53.

K. Ravichandran and R.P. Baldwin, J. Electroanal. Chem., 1981, 126, 293

54.

R.N. Adams, Rev. Polarog., 1963, 11, 71

55.

A.A. Kaplin, N.P. Pikula and E.Y. Neiman, Zh. Anal. Khim., 1990, 45, 2086

56.

A.A. Kaplin, N.P. Pikula and E.Y. Neiman, Zh. Anal. Khim., 1991, 45, 198

57.

M. tulikova and tulik, Chem. Listy, 1974, 68, 800

342

58. T.R. Mueller, C> Olson and R.N. Adams, in Advances in Polarography, J.S.
Langumir, Ed., Vol. I, Pergamon, London 1960, pp. 198
59. F. Vydra, K. tulik and E. Julkov, Electrochemical Stripping Analysis, Ellis
Horwood, Chichester, UK 1976
60.

J. Wang, Stripping Analysis, VCH, New York, 1985

61. G. Dryhust and D.L. McAllsiter, Laboratory Technique in Electroanalytical

Chemistry, P.T. Kisseger and W.R. Heineman, Eds., Marcel Dekker, New York 1985, pp. 294
62. R.J. Foster and J.G. Vas in Wilson & Wilson`s Comprehensive Analytical
Chemistry, Vol. XXVII: Analytical Voltammetry, M.R. Smish and J.G. Vos, Eds., Elsevier
Amsterdam, pp. 465
63. K. Khalcer, J. M- Kauffmann, J. Wang, I. Svancara, K. Vytras, C. Neuhold
and Z. Yang, Electroanalysis, 1995, 7, 5

64.

J. Wang, Anal. Chim. Acta, 1990, 243, 41

65.

G.J. Patriache and J.C. Vire, Anal. Chim. Acta, 1987, 196, 193

66.

Kh. Z. Brainina and V.V. Ahspur, Zavod. Lab., 1979, 45, 10

67.

Kh. Z. Brainina and M.B. Vydrevich, J. Electroanal. Chem. , 1981, 121, 1

68. N.A. Vlakhovich, E.P. Medyntseva and G.K. Budnikov, Zh. Anal. Khim.,
1993, 48, 980
69. I. Svancara, K. Vytras, F. Renger and M.R. Smyth, Sb. Ved. Pr., Vys. Sk.
Chemickotechnol, Padubice, 1992, 56, 21
70.

M.E. Rice, Z. Galus and R.N. Adams, J. Electroanal. Chem., 1983, 143, 89

71.

F.I. Cheng and C.R. Martin, Anal. Chem., 1988, 60, 2163

72.

J. Wang and J.M. Zadeii, J. Electroanal. Chem., 1988, 249, 339

73.

C. Urbaniczky and K. Lindstrm, J. Electeroanal. Hem., 1984, 176, 169

74.

J. Lindquist, Anal. Chem., 1973, 45, 1006

75.

R. Landsberg and R. Thiele, Electrochim. Acta, 1966, 11, 1243

76.

D.G. Davis and M.E. Everhard, Anal. Chem., 1964, 36, 38

77.

L.S. Chulkina, S.I. Siniakova and Y.K. Vulfson, Zh. Anal. Khim., 1970,25,

78.

R.C. Engstrom, K.W. Johnson and S. Des-Jarlais, Anal. Chem., 1989, 59, 670

79.

J. Wang, L.H. Wu and R. Li, J. Electroanal. Chem., 1989, 272, 285

80.

J.D. McLean, Anal. Chem., 1982, 54, 1169

1268

81. J. Wang, T. Martinez, D.R. Yaniv and L. McCormick, J. Electroanal. Chem.,

1990, 286, 265
82.

R. Neeb, I. Keihnast and A. Narayan, Fresenius Z. Anal. Chem., 1972, 262,

83.

Z. Gabes and R.N. Baldwin, Anal. Chem., 1984, 67, 866

84.

K. Ravinchandran and R.P. Baldwin, Anal. Chem., 1984, 56, 1744

339

85. A. Ciucu, Biosensors for Envirommental Monitoring, Niculescu Publishing

House, Bucharest 2000, pp. 200-245

86.

K.N. Thomsen and R.P. Baldwin, Electroanalysis, 1990, 2, 263

87.

J.W. Schlager and R.P. Baldwin, J. Chromatog., 1987, 390, 379

88.

J. Ye and R.P. Baldwin, Anal. Chem., 1988, 60, 2263

89.

K.N. Thomsen and R.P. Baldwin, Electroanalysis, 1990, 1, 236

90.

J. Ye, R.P. Baldwin, and J.W. Schlager, Electroanalysis, 1989, 1, 133

91.

S.V. Pralehu and R.P. Baldwin, Anal. Chem., 1989, 61, 852

92.

Idem, ibid., 1989, 61, 2258

93.

P. Luo, S.V. Prabhu and R.P. Baldwin, ibid., 1990, 62, 752

94.

X. Qi and R.P. Baldwin, Electroanalysis, 1991, 3, 119

95.

A. Ciucu and R.P. Baldwin, Electroanalysis, 1992, 4, 515

96.

X. Qi and R.P. Baldwin, Electroanalysis, 1993, 5, 547