HEMATOLOGIE

Recoltarea sngelui pentru examene hematologice

Efectuarea examenelor hematologice impune recoltarea probelor de snge de
obicei dimineaa, la aceeai or, recoltndu- se snge venos sau, mai rar, snge
capilar.
Sngele venos poate fi recoltat pe anticoagulant cnd testele necesit snge
integral sau plasm sau fr anticoagulant cnd determinrile se efectueaz din ser.
Recoltarea sngelui venos aduce o serie de avantae!
- dintr-o singur prob se pot efectua toate determinrile necesare precizrii
diagnosticului, chiar i "n dublu pentru creterea preciziei,
-se pot repeta sau completa examenele necesare "n lipsa pacientului,
-testele, cu excepia numrrii trombocitelor, pot fi efectuate mai trziu dup
recoltare dac se respect procedurile de pstrare a probelor,#la $%&' sau -()&' "n
flacoane "nchise*,
-constituie modalitatea preferat de recolt "n vederea executrilor
numrtorilor electronice ale elementelor figurate sanguine, mai ales "n ceea ce
privete numrarea trombocitelor.
+rotiurile executate din snge venos recoltat pe anticoagulant sunt calitativ
inferioare celor realizate din snge capilar din cauza modificrilor induse de
anticoagulant asupra morfologiei leucocitelor i trombocitelor ,cest dezavanta
poate fi evitat prin efectuarea de frotiuri din sngele de pe acul cu autorul cruia s-a
efectuat puncia venoas, acesta nevenind "n contact cu substana anticoagulant.
-ehnic! puncia venoas se realizeaz de obicei "ntr-o ven din regiunea
plicii cotului #vena cubital*. .e aplic un garou cam la o palm deasupra locului de
puncionat #garoul trebuie s fie strns ct s realizeze staza venoas fr s
"mpiedice circulaia arterial* i "n acelai timp i se cere pacientului s strng
pumnul. .e palpeaz vena de puncionat. .e dezinfecteaz tegumentul cu alcool sau
alcool-eter i se puncioneaz vena dup ce "nainte s-a fixat pielea cu autorul
degetelor. /up ce s-a ptruns "n ven sub un unghi ascuit se apleac acul ct mai
paralel cu pielea, se "mpinge "n lumenul venei si apoi se aspir cantitatea necesar de
snge. 0aroul se desface cnd sngele apare "n sering sau vacumtainer i pacientul
desface pumnul pentru c o staz venoas prelungit modific rezultatele. /up
recolterea cantitii necesare, acul se scoate uor i rapid din ven, locul puncionat
fiind presat cu tampon steril sau cu alcool pn la oprirea sngerrii.
Anticoagulante. 'el mai utilizat anticoagulant este sarea de sodiu sau de
potasiu a acidului etilendiaminotetraacetic #E/-,*. E/-,-ul este preferat heparinei,
amestecului de oxalai, citratului sau florurii deoarece nu modific volumul celulelor
i nu altereaz semnificativ morfologia leucocitelor. /in sngele recoltat pe E/-, se
pot efectua! numrtorile elementelor figurate sanguine #a eritrocitelor, leucocitelor,
eozinofilelor, trombocitelor, reticulocitelor*, msurarea concentraiei hemoglobinei,
determinarea hematocritului, precum i frotiul de snge. 1entru determinarea vitezei
de sedimentare a eritrocitelor #2.3* sngele venos se recolteaz pe citrat de sodiu,
soluie 4,5 6, anticoagulant folosit i cnd se urmrete efectuarea testelor de studiu
a hemostazei.
Sngele capilar se recolteaz la adult din pulpa degetului inelar sau mediu
iar la nou nscut de la nivelul feei plantare a clciului sau a halucelui, "n regiunea
lateral.
FFFFFFFFig
ssssdfddsdds
1entru probe speciale #determinarea timpului de sngerare* puncia se
realizeaz la nivelul lobului urechii.
-egumentul ce urmeaz a fi puncionat nu trebuie s prezinte modificri de
aspect sau temperatur.
-ehnic! dup dezinfectarea i degresarea regiunii respective i dup uscarea
alcoolului i eterului se puncioneaz tegumentul rapid i suficient de adnc astfel
"nct sngele s apar spontan sau dup o slab presiune. 1rima pictur se terge cu
tamponul steril colectndu-se urmtoarele picturi aprute spontan. Este interzis
stoarcerea regiunii de puncionat "n vederea obinerii picturii, sngele dilu"ndu-se "n
acest caz cu lichidul interstiial ceea ce modific rezultatele testelor efectuate.
7a sfritul recoltrii se aplic un tampon cu alcool pe regiunea puncionat,
pn la oprirea sngerrii.
Recoltm snge capilar "n cazul unor determinri de urgen, ori de cte ori
testele de efectuat necesit cantiti mici de snge sau cnd patul venos nu poate fi
abordat.
/in sngele capilar se poate efectua un numr limitat de teste!
hemoleucograma, numrtori de trombocite #mai ales pentru verificarea unor
trombocitopenii sau cnd trombocitele din sngele recoltat pe anticoagulant sunt
aglomerate*, frotiuri din snge patologic unde morfologia leucocitelor trebuie perfect
conservat. .ngele capilar permite obinerea celor mai frumoase frotiuri de snge
fr s existe diferene cantitative "ntre examenele morfologice efectuate din sngele
venos comparativ cu cele realizate din sngele capilar
Recoltarea de snge capilar se poate "nsoi de anumite inconveniente! puncie
insuficient de profund, oprirea sngerrii "naintea recoltrii cantitii necesare,
cianoz sau edem la locul punciei, numrul limitat de teste posibil de efectuat din
sangele capilar prin cantitatea mic obinut, etc.

Examenul sngelui proaspt
Examinarea sngelui proaspt se poate efectua prin urmrirea la microscopul
optic a preparatului "ntre lam i lamel sau folosind metode mai complicate ce
presupun folosirea microscopiei "n contrast de faz, microscopia pe fond "ntunecat,
ultramicroscopia etc.
1reparatul "ntre lam i lamel se obine plasnd o pictur de snge pe o
lamel, care , cu pictura "n os, se aplic pe o lam, sngele "ntinzndu-se uniform,
prin capilaritate, "ntre lam i lamel. Examinarea se face imediat, la microscop, cu
obiectiv uscat.
.e pot observa eritrocitele, discoidale, biconcave din profil i cu dublu contur
cnd sunt surprinse din fa8 "n general sunt de culoare galben, partea central a
celulei fiind mai clar8 pot fi deasemenea sesizate eventuale modificri ale formei
#poichilocitoz*, respectiv ale mrimii eritrocitare #anizocitoz*.
Eritrocitele se dispun normal "n fiicuri, dispoziie ce nu mai apare "n unele
stri patologice #anemii hemolitice cu autoanticorpi, sferocitoz etc.*. ,ezarea "n
fiicuri trebuie difereniat de aglutinarea eritrocitelor produs prin intervenia
izoanticorpilor sau autoanticorpilor. 1entru a le diferenia sngele se recolteaz pe
ser fiziologic. 9n acest caz aezarea in fiicuri nu se mai produce "n timp ce
aglutinarea indus de anticorpi se menine nefiind influenat de serul fiziologic.
Eritrocitele aglutinate sunt unite "ntre ele printr-o substan filamentoas # fenomenul
firului*.
Examinarea preparatului dup cteva ore arat schimbarea formei
eritrocitelor care devin sferice, cu suprafaa neted sau neregulat.
1reparatul proaspt, "ntre lam i lamel, permite i observarea leucocitelor
ce pot fi recunoscute dup mrimea lor, prin prezena granulaiilor care apar ca
puncte refringente incolore i datorit prezenei nucleului a crui form permite
diferenierea "ntre polimorfonucleare i mononucleare.
eterminarea volumului sanguin
2olumul sanguin #volemia* este format din volumul sanguin circulant i
volumul sanguin : de depozit;. 9n practica medical se msoar numai volumul
sanguin circulant constituit din volumul celular i din cel plasmatic.
<surarea volumului sanguin circulant #2.* se bazeaz pe principiul diluiei,
determinndu-se fie volumul plasmatic fie cel celular, pentru ca apoi, cu autorul
valorii hematocritului, s se calculeze volumul sanguin.
9n torentul circulator se introduce o cantitate cunoscut i uor detectabil
dintr-o substan care se va dilua uniform "n torentul circulator. .ubstanele folosite
"n determinarea volemiei trebuie s "ndeplineasc urmtoarele condiii!
-s se fixeaz selectiv i uniform fie "n compartimentul plasmatic fie "n cel
celular sanguin.
-s nu se metabolizeze prea rapid.
-s nu fie captat "n sistemul reticulo- histiocitar.
-s nu "i schimbe culoarea8
-s nu se fixeze pe endoteliul capilar8
-s nu difuzeze "n esuturi8
-s nu aib efect nociv asupra organismului8
-s rmn un timp suficient "n torentul sanguin pentru a putea fi
determinat8
-s fie uor de detectat i msurat.
eterminarea volumului plasmatic !olosin" cur#a "e etalonare
/up introducerea substanei "n torentul circulator se recolteaz un eantion
de snge i se determin concentraia substanei "n proba recoltat, .e compar
cantitatea iniial a substanei inectate cu cea obinut "n proba de snge, stabilindu-
se proporia diluiei care desemneaz volumul diluantului.
/ac notm cu 2
=
'
=
cantitatea de substan inectat i respectiv concentraia
acesteia i cu '
(
concentraia substanei dup diluare, volumul 2
(
"n care s-a diluat
substana va fi egal cu! 2
(
>2
=
'
=
?'
(
.
<etoda cu albastru Evans.
1rincipiul metodei. .e inecteaz intravenos o soluie de ),@6 albastru Evans.
'unoscnd cantitatea de colorant inectat i determinnd cantitatea lui "n plasm
"nainte de a fi eliminat se poate afla volumul plasmei i apoi cu autorul valorii
hematocritului se poate calcula volemia.
Reactivi necesari! anticoagulan t- amestec Aintrobe8
- albastru Evans ),@6 "n ap distilat steril8
dup dizolvare complet se filtreaz steril si poate fi conservat la
"ntuneric i la $%B '.
-ehnic! se determin curba de etalonare folosind o scar de diluii a
colorantului ),@6 "n plasma uman proaspt recoltat pe anticoagulant. ),@
ml din soluia de albastru Evans se completeaz pn la @) ml cu plasm
obnndu-se diluia =?=)) din care se vor face alte diluii conform tabelului!
1repararea soluiilor de colorant pentru etalonarea fotometrului!
'olorant #"n ml* 2olumul plasmei pentru
diluii #ml*
2olumul plasmatic pentru
inecia
de 4ml de @ml
),@ ml de soluie ),@?=)) %C,@ 4)) @))
% ml din diluia =?=)) % D)) =)))
( ml din diluia =?=)) D =()) ()))
= ml din diluia =?=)) E (%)) %)))
= ml din diluia =?=)) C 4))) @)))
= ml din diluia =?=)) == 4D)) D)))
.e construiete o curb a volumelor plasmatice "n funcie de extinciile citite la
fotometru, folosind pentru cuva de compensaie plasm normal recoltat de la
pacient, "nainte de inectarea colorantului.
-estul se efectueaz dup respectarea urmtoarelor condiii!
- diet fr grsimi timp de (% de ore "naintea efecturii probei,.
- =( ore de repaus, pe nemncate si fr aport de ap.
.e recolteaz pacientului =) ml snge pe anticoagulant i prin acelai ac , imediat i
se administreaz foarte repede 4 ml colorant ),@6. 7a sfritul inectrii se aspir
snge "n sering i se inecteaz "napoi pentru a spla seringa. .e noteaz momentul
cnd s-a inectat tot colorantul i dup 4 minute se recolteaz =) ml snge pe
anticoagulant de la cellalt bra. 'ele doua probe se centrifugheaz. .e citete
densitatea optic a celor dou probe de plasm, folosind pentru cuva de comparaie
plasma obinut "naintea inectrii colorantului. 'itirea densitii optice se face
imediat dup centrifugare. /in extincia citit se calculeaz volumul plasmatic pe
curba de etalonare.
eterminarea volumului plasmatic !r cur# "e etalonare. .e recolteaz
=) ml snge fr anticoagulant. .e inecteaz apoi rapid =) ml soluie rou de 'ongo
=68 dup 4 minute se recolteaz @ ml de snge. /up ce au lsat ser probele de
snge se centrifugheaz i se separ serul. .e msoar extincia serului colorat
folosind "n cuva de compensaie serul sngelui recoltat "naintea inectrii
colorantului. .e folosete o cuv de ),@ mmF cu filtru .@).+olosind acelai filtru i
aceeai cuv se citete extincia unei soluii standard obinut astfel! 9n =,5 ml ser
normal se adaug ),( ml soluie de rou de 'ongo ),=6. 'uva de compensaie este
umplut cu =,5 ml ser normal i ),( ml ap distilat. 2olumul plasmatic, exprimat "n
litri, este dat de raportul dintre extincia standardului i extincia probei.
1entru calcularea volemiei este necesar cunoaterea valorii hematocritului
somatic #hematocritul venos x ),5D%*.
2olemia >volum plasmatic x =))? =))- hematocrit somatic.
1entru determinarea volumului plasmatic se mai pot folosi i alte substane
eterminarea volumul eritrocitar circulant$ 9n prezent cel mai frecvent utilizate
sunt metodele de diluie izotopic care msoar precis volumul eritrocitar circulant i
prin derivaie, volumul sanguin total.
/eterminarea masei eritrocitare prin aceste metode utilizeaz cromul radioactiv
#'r
@=
* sub form de cromat de sodiu. ,ceast substan prezint!
- toxicitate redus pentru celulele pe care le marcheaz,
- emisiune de radiaii suficient de puternic pentru a permite msurtori exacte
pe volume mici de snge,
- msurtori externe fiabile i
- timp de "numtire suficient de scurt #(E,5 zile*.
-ehnic. () ml de snge recoltat pe anticoagulant se marcheaz cu o cantitate
suficient de trasor # ),4-),@ micro'urie? Gg greutate corporal*. 1roba marcat se
incubeaz timp de 4) de minute la 4EB '. 7a sfritul acestei perioade eritrocitele se
spal cu soluie fiziologic i se inecteaz o cantitate precis msurat din acestea. .e
pstreaz seringa utilizat pentru inectare i = ml din eritrocitele marcate. 7a
intervale de timp de =), () i 4) de minute dup inectare se recolteaz cte o prob
de snge msurnd valoarea hematocrit pentru fiecare. Hn ml de snge din fiecare
prob este hemolizat folosind o cantitate mic de saponin. 2olumul eritrocitar se
calculeaz dup formula!
2olum eritrocitar #ml* >
P
xHct r R * #
, unde
R> radioactivitatea inectat,
r > radioactivitatea din apa de splare a seringii cu autorul creia s-a efectuat
inectarea,
1 > radioactivitatea dintr-un ml de snge total i
3ct > hematocritul venos.
2olumul sanguin total se calculeaz dup formula!
2olum sanguin total >
Hctsomatic
ocitar Volumeritr
x =)),
2alorile volumului sanguin se exprim "n ml snge? Gg de greutate corporal i au
valori deferite "n raport cu sexul i vrsta!
la femei, (4-(C ml?Gg,
la brbai, (D-4( ml?Gg,
la copii, (4-(C ml?Gg.
,lte variaii fiziologice!
- poziia corpului i tipul de activitate! volumul globular nu se modific cu poziia
corpului, spre deosebire de volumul plasmatic si volemie. Irtostatismul se insoete
de o scdere a volumului plasmatic de aproximativ 4)) ml la adult. 9n schimb
repausul la pat de c"teva ore produce o cretere a volumului plasmatic "n aa fel, "nc"t
hematocritul poate s varieze cu @6. Hn repaus prelungit la pat, timp de (-4
sptm"ni, porduce o scdere a volumului plasmatic p"n la @))ml la aduli.
- graviditatea influeneaz volemia, "ndeosebi fraciunea plasmatic crescnd
"ncep"nd din luna a JJJ-a i atingnd un maximum "n luna a JK-a, care este de %)6
mai mult dec"t valoarea normal a volemiei #de @)6 pentru fraciunea plasmatic i
de numai ((6 pentru fraciunea globular*. ,ceste variaii explic scderea
simultan a hematocritului venos "n urul cifrei de 4D6 "n luna a JK-a, fa de
%(6
2ariaiile patologice prezint urmatoarele variante!
2ariaii simultane ale hematocritului i volemiei!
- hipervolemie cu hematocrit ridicat! poliglobulii primitive sau
secundare8
- hipovolemie cu hematocrit sczut! anemii cronice.
2ariaii disociate ale hematocritului i volemiei!
- hipervolemie cu hematocrit normal sau sczut8 creterea
intereseaz mai mult volumul plasmatic. .e observ "n retenii de
ap, mai ales la cardiaci i la nefritici8
- hipovelemii cu hematocrit normal8 se observ scderea fraciunii
plasmatice si globulare. ,pare "n hemoragii acute "nainte de
perioada de hemodiluie i "n stri de denutriie cronic8
- hipovolemie cu hematocrit ridicat8 scderea volumului plasmatic.
.e "nt"lnete "n plasmoragii acute #oc prin arsur* i "n stri
cronice de dezhidratare prin pierderea de clorur de sodiu
eterminarea vsco%it&ii sanguine
'sco%itatea este proprietatea unui fluid "n curgere datorit creia iau
natere "n interiorul acestuia tensiuni tangeniale de suprafa "ntre fronturile
moleculare de curgere de "ndat ce acestea au o micare de alunecare , unele peste
altele.
'sco%itatea a#solut este lucrul mecanic efectuat de fora tangenial egal
cu unitatea, pentru a deplasa paralel dou straturi de lichid de = cm
(
fiecare, la o
distan de = cm unul de altul, "ntr-o secund. Hnitatea ei de msur este :poise;
'sco%itatea relativ este raportul dintre vscozitatea fluidului studiat i
vscozitatea unui fluid de referin, ambele exprimate "n aceleai uniti absolute.
9n biologie se folosesc nimai determinri de vscozitate relativ, utilizand ca
fluid de referin apa distilat #la $()L '*8 unitatea de vscozitate este "n acest caz
centipois #a suta parte dintr-un poise, aceste din urm fiind prea mare pentru gama de
msurtori ale acestui domeniu.
'asco%itatea sangelui exprima i influeneaz rezistenta acestuia la curgere
in interiorul sistemului avnd effect indirect asupra aportulului de oxigen la
nivel tisular
Este determinata de!
factori plasmatici #concentratia proteinelor, mai ales a fractiunilor cu
molecula mare M globuline si fibrinogen
factori celulari cantitativi si calitativi #nr. de hematii #3t*, modificari ale
formei si deformabilitatii acestora*
-Este influentata de!
-emperatura #hipotermia determina cresterea vascozitatii*
diametrul vasului
viteza de curgere #viteza redusa creste vascozitatea prin favorizarea aderarii
celulelor
Comitetul Internaional pentru Standardizare nHematologie recomand
metoda standard de msurarea vscozitii cu vscozimetrul capilar
manual.Exist o variant semiautomat, precum i oalt variant
automat. !scozitatea plasmatic
poate " ast#el msurat n cteva minute.
$odi"crile reologice a#ectez de%itulsanguin la nivelul arterelor
Creterea vscozitii plasmatice,vscozitii sngelui total i agregarea
eritrocitelorre&ect creterea concentraiei plasmatice a"%rinogenului i
a glo%ulinelor de #az acut.
!scozitatea plasmatic 'valori de re#erin( )
*,+,-.,., uniti relative m/a.s
!scozitatea seric 'valori de re#erin( )
*,01-.,., uniti relative m/a.s
2eterminarea vscozitii plasmatice este superioar
vitezei de sedimentare a eritrocitelor.
Se impune reintroducerea cercetrii reologiei
sanguine care
Msurarea vsco%it&ii poate fi efectuat cu autorul vascozimetrului.
2scozimetrului 3ess-<artinet prezint dou tuburi capilare identice, paralele.
1rogresiunea lichidelor "n acestea se face datorit uoarei decompresiuni exercitat
prin manipularea unei pare de cauciuc branat la locul de ramificaie a celor dou
capilare. 9ntr-unul dintre capilare circul apa iar "n cellalt serul sau plasma de
studiat. 1ornirea ambelor lichide se face simultan iar oprirease face "n momentul "n
care apa a atins diviziunea = #= ceentipoise*. 1e diviziunile celuilalt capilar se citete
rezultatul probei investigate "n paralel.
Referent de normalitate!
-pentru ser > =,@@-=,E@ cp8
-pentru plasm > =,E@-=,C@cp, fr a exista diferne legate de sex.
2alorile patologice se refer la creteri uoare #=,5@-(,=* cum se "ntmpl "n
boli mielo i limfoproliferative, crioglobulinemii, purpure vasculare i unele forme
de neoplasme8 creteri moderate #(,4-4,@* se "ntlnesac "n mieloame i creteri
semnificative #N4,@* "n boala AaldenstrOm.
eterminarea concentra&iei hemoglo#inei
/ozarea hemoglobinei, pigmentul respirator coninut in eritrocite, constituie
cel mai valoros test de evaluare a compartimentului eritrocitar, strns legat de
implicarea funcional a acestuia. Eritrocitele, coninnd un amestec de hemoglobine
#oxihemoglobin, carboxihemoglobin, hemoglobin redus i cantiti minbime de
alte forme* este necesar obinerea unui derivat stabil "n care s fie convertite toate
formele de hemoglobine coninute "n eritrocite. /eterminrile cantitative, din cauza
dificultilor de a obine hemoglobin "n stare pur, folosesc in general metode
indirecte, cele colorimetrice fiind actualmente cele mai frecvent utilizate metode de
estimare a concentraiei hemoglobinei "n snge, fie c sunt metode clasice sau
automate.
1entru a face posibil compararea pe plan internaional a rezultatelor
diverselor examene hematologice, 'omitetul Jnternaional de .tandardizare in
3ematologie #J'.3*, recomand ca metod standard de hemoglobinometrie
determinarea fotometric sub form de cianmethemoglobin, iar pentru etalonarea
fotometrelor folosirea de soluii standard de cianmethemoglobin preparate din
hemoglobin uman.
o%area hemoglo#inei ca cianmethemoglo#in (meto"a ra#)in*
1rincipiul metodei! +ericianura de potasiu oxideaz fierul feros din hemoglobin i
toate formele de hemoglobin din snge, cu excepia sulfhemoglobinei, sunt
transformate imediat in methemoglobin. ,ceasta se combin cu cianura de potasiu
i formeaz cianmethemoglobina sau cianhemiglobina, cel mai stabil derivat al
hemoglobinei, a crei absorbie se citete la spectrofotometru fa de un standard de
cianmethemoglobin, pentru o anumit lungime de und.
Reactivi!- soluie /rabPin! +osfat monopotasic..........),=%g
'ianur de potasiu............),)@g
+ericianur de potasiu.......),()g
,p distilat ad. ................=)))ml
# p3 > E,(-E,@*
.oluia se filtraz i se poate pstra "n flacoane de sticl brun, la frigider, timp de
dou luni, controlndu-se periodic puritatea respectiv transparena soluiei.
-standard de cianmethemoglobin.
<ateriale necesare!
- materiale necesare pentru recoltarea sngelui capilar sau venos8
- proba de snge recoltat pe anticoagulant uscat sau direct din pulpa
degetului8
- pipet capilar de hemoglobin ),)(ml #() mmc*, sau pipete
automate adaptate.
- pipet gradat de @ml8
- eprubete de hemoliz8
- spectrofotometru8
-ehnic! "ntr-o eprubet se pipeteaz @ ml reactiv /rabPin. .e adaug lent
),)( ml snge # msurat exact cu pipeta special pentru hemoglobin sau pipeta
automat*, avnd gri s se stearg cu hrtie de filtru urmele de snge ce rmn
dup recdoltare la exteriorul pipetei8 pipeta se spal "n interior de (-4 ori cu reactiv
fr barbotare. .e agit uor eprubeta, pentru a se omogeniza coninutul. .e ateapt
4) de minute, timp in care are loc hemoliza i transformarea derivailor de
hemoglobin "n cianhemiglobin, soluia rmnnd stabil cel puin % ore. 7a un
spectrofotometru se citete extincia la o lungime de und de @%) nm, "n cuva de =
cm, folosind ca martor apa distilat.
'alcul! Extincia x coeficientul de etalonare > 3b g?=)) ml snge.
Etalonarea fotometrului se face cu standardul de hemoglobin.
2alorile normale variaz "n funcie de sex, vrst i altitudine. ,cestea sunt la
aduli! brbai > =@ Q ( g ?dl i femei > =4 Q ( g ? dl iar la copiii "ntre ( ani i
pubertate se observ o cretere de la aproximativ == la =4 g ? dl8 dup pubertate,
concentraia hemoglobinei continu s creasc la biei pn la maturitate, iar la fete
creterea este imperceptibil sau lipsete #tab. nr.*
Meto"a Sahli (colorimetrie vi%ual*
1rincipiul metodei! hemoglobina, "n prezena acidului clorhidric R?=) se
transform "n clorhidrat de hematin a crui culoare brun, dup decolorarea cu apa
distilat, este comparat cu cea a unui etalon.
<ateriale necesare!
-materiale necesare pentru recoltarea sngelui, capilar sau venos.
-hemoglobinometru .ahli,
-pipet capilar de hemoglobin de capacitate ()mmc # ),)(ml*,
-pipet 1asteur,
-baghet de sticl pentru omogenizare,
-ap distilat,
-soluie acid clorhidric R?=).
3emoglobinometrul .ahli are un corp format din ebonit "n interiorul cruia
se afl dou coloane de sticl laterale, colorate "n brun deschis # culoarea
clorhidratului de hematin*. ,ceste baghete sunt fixe i reprezint etaloanele cu
autorul crora se compar soluia de hemoglobin de cercetat. 9n milocul aparatului
"ntre cele dou etaloane se afl o eprubet gradat care poate fi scoas din aparat8 pe
aceasta sunt "nscrise dou tipuri de gradaii, una "n grame, de la ( la (@g i una "n
procente, de la =) pn la =))68 =Dg hemoglobin corespund la =))6, 5g la @)6
etc. .e recomand ca "nainte de a fi folosit, orice hemoglobinometru nou s fie
etalonat prin determinarea fotometric a hemoglobinei, pentru a se face corecia
necesar.
-ehnica de lucru. .e pipeteaz "n eprubeta hemoglobinometrului, cu autorul
unei pipete simple, soluie de acid clorhidric R?=), pn la diviziunea corespunznd
la =)6. /in sngele recoltat se aspir "n pipeta de hemoglobin ),)(ml snge. .e
terge exteriorul pipetei i se introduce vrful pipetei pn la fundul tubului gradat,
"n soluia de acid clorhidric. .e sufl sngele din pipet "n soluia de acid cltind
pipeta de (-4 ori cu acidul clorhidric din tub. .e scoate pipeta din tub, se agit tubul
pentru a omogeniza coninutul .i se asteapt @ minute pentru a se produce hemoliza
i a se permite formarea clorhidratului de hematin care imprim soluiei o culoare
brun-"nchis. .e adaug apoi ap distilat pictur cu pictur, amestecnd cu
bagheta subire de sticl pentru a uura omogenizarea coninutului. .e compar
permanent culoarea din tubul de msurat cu cea a etalonului. 1entru compararea
culorilor, hemoglobinometrul se ridic la "nlimea ochilor8 cnd s-a auns la aceeai
nuan se citete rezultatul la marginea inferioar a meniscului lighidului. 'itirea se
face la lumina zilei.
Rezultatele se pot exprima "n grame de hemoglobin la =))ml snge sau "n
procente fa de normal. /ac tubul are o singur indicaie, se poate transforma
rezultatul printr-o regul de trei simpl, tiind c =Dg reprezint =))6 .
Erori "n dozare! metoda nu prezint sensibilitate mare aprecierea fcndu-se
cu ochiul liber. ,lte erori se pot datora materialelor folosite # aparat neprecis
etalonat, pipete tirbite* sau execuiei # snge rmas pe partea extern a pipetei,
amestec neomogen "ntre snge i acidul clorhidric, adaus de ap distilat "nainte de
cele @ minute necesare de contact al sngelui cu acidul clorhidric, adaos de ap peste
nuana etalonului etc.
1e lng determinrile cantitative hemoglobina poate fi evideniat i
calitativ utiliznd metoda cristalografic sau cea chimic cu benzidin
Meto"a cristalogra!ic
1rincipiul metodei! hemoglobina tratat la cald, cu acid clorhidric in stare
nscnd, #format in reacia dintre Ra'l i '34'II3* formeaz clorhidratul de
hematin, care prin rcire precipit sub forma unor cristale, cristalele lui -eichmann.
<ateriale necesare!
-snge,
-acid acetic glacial =6,
-clorur de sodiu =6,
-lam, lamele de sticl,
-microscop optic,
-bec Sunsen,
-clem
-ehnica de lucru! pe o lam se pune o pictur de snge i se face un frotiu
care se usuc "ncet, deasupra becului de gaz, la o temperatur de %)-%@L ', pentru a
evita coagularea proteinelor. .e aeaz pe frotiu cte o pictur de acid acetic glacial
i de clorur de sodiu i se acoper cu o lamel inndu-se apoi deasupra flcrii,
pn la fierbere cnd precipitatul ia culoare brun "nchis prin formarea clorhidratului
de hematin. /up rcire se examineaz la microscop unde se observ cristale mari,
rombice de culoare brun.
<etoda este folosit "n medicina legal pentru identificarea petelor de sange
fr a putea preciza "ns specia de la care provine, hemul fiind acelasi pentru toate
vertebratele #numai globina difer de la o specie la alta*.
Meto"a chimic cu #en%i"in
1rincipiul metodei! peroxidaza sanguin elibereaz din apa oxigenat oxigen
atomic activ care oxideaz benzidina formndu-se un compus de culoare albastr.
<ateriale necesare!
-snge,
-ap oxigenat 46,
-ap distilat,
-soluie acetic de benzidin (6,
-eprubete.
-ehnica de lucru! intr-o eprubet se pipeteaz @ml de ap distilat i @
picturi de snge. .e adaug cteva picturi din soluia de benzidin i cteva
picturi de ap oxigenat. /up (-4 secunde amestecul se coloreaz "n albastru.
+umrarea eritrocitelor
/eterminarea numrului de eritrocite, leucocite i trombocite din snge "n
hemocitometru se bazeaz pe numrtori efectuate pe un eantion considerat omogen
i pe generalizarea rezultatelor la "ntreaga mas sanguin din organism. Executarea
unor numrtori "n condiii optime oblig la efectuarea unor diluii mari din cauza
concentraiilor mari "n care se gsesc celulele "n snge.
1rincipiul metodei. .ngele, diluat "n pipete speciale cu autorul unor lichide
de diluie, este introdus apoi "n hemocitometru "ntr-un volum bine determinat, unde
celulele sunt distribuite uniform i numrate pe o reea anumit.
<ateriale necesare!
-<ateriale necesare pentru recoltarea sngelui capilar sau venos.
-1ipeta 1otain pentru eritrocite format dintr-un tub capilar gradat care
prezint dou notaii, ),@ i = i se continu cu o poriune dilatat , bula de diluie, "n
care se afl o mic perl, mobil , roie. /easupra bulei de diluie se afl notaia =)=.
/ac sngele este aspirat "n tubul capilar pn la diviziunea ),@ sau = i apoi
completat cu lichidul de diluie pn la notaia =)=, se obine o diluie a sngelui de
=?()) sau respectiv =?=)).. 'apacitatea total a pipetei este de =)= volume iar diluia
este de =?=)) i =?()), datorit faptului c un volum de diluant rmne "n tubul
capilar i nu dilueaz sngele 1artea de sus a pipetei se adapteaz unui tub de
cauciuc, care permite o aspiraie uniform../up utilizare pipetele se spal cu ap,
apoi cu alcool i eter, se usuc i se sterilizeaz la cldur uscat. 1ipeta pentru
numrarea eritrocitelor poate determina erori "n rezultatele metodei din cauza
cantitii mici de snge folosit pentru diluie.
,igura
microscope an" special pipettes !or "iluting #loo"$
-7ichidul de diluie trebuie!
- s menin integritatea, conservnd celulele care urmeaz a fi numrate i s lizeze
celelalte tipuri de celule8
-s dilueze sngele, "mpiedicnd "n acelai timp coagularea i simpexa hematiilor8
- s fie izotonic, pentru a nu determina hemoliza sau ratatinarea eritreocitelor i
7ichidul de diluie folosit pentru numrarea hematiilor este soluia 3aTem constituit
din!
'lorur de sodiu..............=g
.ulfat de sodiu................@g
.ublimat.........................),@g
,p distilat.....................())ml.
/up preparare soluia se filtreaz i se pstreaz la frigider nu mai mult de trei zile.
-'amera de numrat sau hemocitometrul este constituit dintr-o lam groas
de sticl pe care a fost gravat o reea cu dimensiuni cunoscute. Irice camer de
numrat are gravate pe ea urmtoarele date! "nlimea camerei de numrat care este
de ),=)) mm# =?=) mm* i respectiv dou cifre, =?%)) i =?(@ sau =?%)) i =?=D, cifra
care variaz dup tipul camerei i indic a cta parte dintr-un mmU sunt ptrelele
mici care nu au subdiviziuni. Exist mai multe tipuri de camere de numrat!
Camera Thoma, cu suprafaa total de =mmU divizat prin linii duble "n %))
de ptrele cu suprafat de =?%)) mmU. 7inii triple grupeaz cte =D ptrele de
suprafa =?%)) mmU.
Camera Burker are suprafaa total de CmmU "mprit prin linii triple "n nou
ptrate cu suprafaa de =mmU iar acestea sunt "mpite prin linii duble "n =D ptrate
cu suprafaa de =?(@ mmU folosite pentru numrarea lecocitelor. 7a "ntretierea
liniilor duble se delimiteaz ptrate cu suprafaa de =?%)) mmU.
Camera Burker-Turk are suprafaa reelei de C mmU "mprit prin linii triple
"n nou ptrate cu suprafaa de = mmU 1tratul din miloc este de tip -homa, fiind
"mprit "n %)) de ptrele mici cu suprafaa =?%)) mmU, grupate cte =D, "n ptrate
delimitate prin linii triple.1tratul din miloc folosete numrrii hematiilor.1tratele
din colurile reelei sunt de tip SurPer fiind "mprite prin linii duble "n =D ptrate cu
suprafaa de =?(@ mmU.,ceste suprafee se folosesc pentru numrarea leucocitelor.
Camera Goreaev are un cadrila "n care alterneaz ptrtelele mici de =?%))
dintr-un mmU, "n grupuri de cte =D, cu ptrate de cte =?(@ mmU pentru numrarea
hematiilor.
/elimitarea camerei de numrat se realizeaz cu autorul unei lamele perfect plan i
lefuit ,cu o grosime de aproximativ ),4-),@mm. 1rin aplicarea lamelei, "ntre
suprafaa pe care se afl gravat reeaua i suprafaa lamelei se delimiteaz un spaiu
cu "nlimea de =?=) mm.

-<icroscopul optic se folosete utiliznd obiectiv uscat, ()x sau %)x , ocular
=) sau Ei iluminare slab.
-ehnica de lucru implic urmtoarele etape!
=. 1regtirea camerei de numrat const "n degresarea camerei i "n aplicarea
lamelei dup umezirea uoar a marginilor acesteia astfel "nct s se realizeze
un contact intim "ntre lama groas i lamel, demonstrat prin apariia inelelor
ReVton. I bun aderen a lamei i a lamelei este foarte important pentru
realizarea unui volum constant al camerei de numrat.
(. /in sngele recoltat se aspir "n pipeta 1otain pn la diviziunea ),@ sau =
citirea fcndu-se cu pipeta "n poziie vertical. /ac sngele depete uor
diviziunea, prin atingerea vrfului pipetei cu o hrtie de filtru coloana de
snge se poate potrivi exact pn la diviziunea dorit.
4. .e terge sngele de pe pereii exteriori ai pipetei i se introduce pipeta "n
flaconul cu lichid de diluie. .e aspir lichidul pn la diviziunea =)=. 1ipeta
se aeaz "n poziie orizontal i se cuprinde "ntre degetul mare i cel
milociu, apoi se agit viguros pentru omogenizare. 1n la numrtoare
pipeta rmne "n poziie orizontal.
%. Hmplerea camerei de numrat se face dup agitarea pipetei timp de (-4
minute i "ndeprtarea primelor picturi din pipet.2rful pipetei se apropie
de marginea lamelei aplicat pe camera de numrat i se las s intre prin
capilaritate o cantitate de lichid asfel "nct reeaua s fie acoperit "n "ntrgime
fr s intre bule de aer sub lamel i fr ca lichidul s trec "n anurile
laterale sau lamela s se deplaseze. /ac toate aceste condiii nu sunt
respectate operaia se repet dup tergerea camerei.
@. Rumrarea hematiilor se realizeaz dup cteva minute pentru sedimentarea
elementelor pe cadrila. .e examineaz camera la microscop i se numr
elementele ce se gsesc pe cadrila "n ptrelele cu suprafaa de =?%)) mmU.
.e numr de exemplu hematiile de pe @ grupri de =D ptrele mici cu
suprafaa de =?%)) mmU, cele din interiorul ptrelelor i cele de pe dou
margini, mereu aceleai, de exemplu stnga i sus. pentru a evita dubla
numrare a elementelor.
D. 'alcul! pentru a stabili numrul elementelor de pe = mmU se "nmulete
numrul elementelor de pe 5) de ptrate mici de suprafa =?%)) mmU cu @# @
x 5) > %)) * Rumrul de hematii dintr-un mmFse calculeaz "nmulind cifra
obinut cu =) pentru a corecta "nlimea camerei #=?=)mm* i cu ()) pentru
a corecta diluia #=?())* dac sngele a fost aspirat "n pipet pn la
diviziunea ),@. /ac diluia a fost =?=)) se "nmulete cu =)).
2alori normale ale numrului de hematii la diverse vrste!
vrsta <ilioane? mmF
Rou nscut @,% $?- =,)
D luni %,D
= an %,@
% ani %,D $?- ),D
D ani %,D
=) ani %,5
=D ani %,5
,duli S %,C $?- ).E
,duli + %,4 $?- ),D
Erori "n numrarea eritrocitelor pot fi erori de recoltare, de pipetare i diluare,
datorate examinatorului, aparaturii i erori inerente metodei.

eterminarea hematocritului
3ematocritul msoar raportul dintre volumul ocupat de eritrocite i volumul
sanguin total #volum eritrocitar procentual*.
9n practic pentru determinarea hematocritului se folosesc dou metode,
macrometoda Aintrobe i micrometoda 0uest. /eterminarea sa poate utiliza i
instrumente electronice automate unde valoarea sa este calculat din cea a volumului
mediu eritrocitar i din numrul de hematii sau tehnicile clasice ale macro respectiv
microhematocritului.
1rincipiu. .ngele este fcut incoagulabil i centrifugat pentru a separa eritrocitele
de plasm i a evalua ct la sut reprezint masa eritrocitar fa de volumul de
snge integral.
,nticoagulantul folosit trebuie s fie izoton i uscat pentru a nu modifica
volumul plasmatic i cel eritrocitar iar tasarea optim a eritrocitelor se obine printr-o
centrifugare cu un anumit numr de turaii desfurat "ntr-un interval de timp
standard.
Macrometo"a -intro#e #macrohematocritul* are la baz o centrifugare cu vitez
mai redus, "n tuburi cu diametrul de 4 mm.
<ateriale necesare!
-materiale necesare recoltrii sngelui venos.
-s"nge venos recoltat pe anticoagulant # Ra
(
E/-,, amestec anticoagulant Aintrobe,
heparin*.
-tuburi de hematocrit Aintrobe din sticl groas, de =)) mm lungime, cu diametrul
de (,@-4 mm, fund plat, prezentnd diviiunini egale de la ) la =)).
-centrifug.
-pipete 1asteur.
-ehnica de lucru!
.ngele venos recoltat pe anticoagulant este introdus cu autorul unei pipete 1asteur
"n tubul Aintrobe, "n coloan continu, pn la nivelul diviziunii =)). -ubul este
apoi centrifugat timp de 4) de minute la 4))) de turaii?minut. /up centrifugare se
observ dispunerea coninutului tubului "n trei straturi datorat diferenelor de
densitate! superior coloana de plasm de culoare galben-citrin #dansitatea plasmei>
=)(E *, inferior coloana de eritrocite de culoare roie #densitatea eritrocitelor> =)C)*,
iar la limita de separare dintre cele dou se formeaz un strat subire, cenuiu-roietic
format din leucocite i trombocite care "n mod normal nu depete =6 din total.
Rezultatul este dat de "nlimea coloanei de eritrocite care se exprim direct
"n procente dac tubul de hematocrit prezint cele =)) de diviziuni sau dac tubul nu
este gradat se msoar "nlimea h a coloanei de eritrocite i "nlimea 3 a coloanei
totale a sngelui care reprezint =))6.
3ematocritul venos #3tv* va fi dat de raportul h ? 3 x=)). 2aloarea obinut
trebuie corectat "n funcie de trei factori!
-factorul f
=
care exprim cantitatea de plasm ce mai rmne sechestrat printre
hematii i dup centrifugare #4-56*8 'orecia plasmei interstiiale nu este necesar
la determinrile de rutin "ntruct valorile normale, din diverse pri ale globului, au
fost stabilite fr aceast corecie.
-factorul f
(
utilizat cnd un alt anticoagulant dect heparina a fost folosit la recoltare,
tipul de antioagulant, modificnd "ntr-o anumit msur presiunea osmotic i
consecutiv volumul eritrocitar8
-factorul f4 luat "n calcul atunci cnd stratul format din leucocite i trombocite
reprezint mai mult de =6 din "nlimea tubului. 9n leucocitoze importante acest strat
crete considerabil i trebuie msurat pentru a aprecia corect att stratul eritrocitar
ct i cel plasmatic.
3ematocritul arterial i mai ales cel capilar au valori mai sczute # sngele
complet oxigenat d un hematocrit cu aproximativ (6 mai redus dect sngele
neoxigenat*.
,tunci cnd se determin volumul sngelui total se corecteaz cifra
hematocritului venos msurat, obinndu-se valoarea hematocritului somatic,
hematocritul somatic > ),C= x hematocrit venos msurat.
Micrometo"a Guest # microhematocritul* se bazeaz pe o centrifugare cu vitez
mai mare "n tuburi capilare.
<ateriale necesare
- materiale necesare punciei venoase ? capilare8
- tuburi capilare din sticl, heparinizate8
- anticoagulant # heparin*8
- capsul de plastic8
- baghete de sticl8
- bec de gaz8
- microcentrifug8
- nomogram pentru citirea hematocritului.
-ehnic de lucru
-se aplic o pictur de heparin #@))) de uniti* "ntr-o capsul de plastic8
-capsula este meninut la termostat la 4EL ' "n vederea uscrii heparinei8
-se adaug peste heparina uscat @-D picturi de snge capilar omogenizndu-se cu
bagheta de sticl8
-se "ncarc tubul capilar pn la W din "nlimea sa, aeznd tubul "n pictura de
snge din capsula de plastic, sngele urcand "n tub prin capilaritate8
-captul opus celui prin care s-a fcut "ncrcarea tubului se "nchide prin "nclzire la
flacra unui bec de gaz8
-se adapteaz tubul capilar la centrifug i se centrifugheaz timp de ( minute la
(%))) de turaii? minut8
-dup centrifugare tubul capilar pentru hematocrit se suprapune unei nomograme pe
care se citete "nlimea coloanei de hematii, exprimndu-se valoarea hematocritului.
9n cazul microhematocritului cantitatea de plasm reinut printer hematii
dup centrifugare este cuprins "ntre =.@ i 46. <icrohematocritul sngelui care
conine eritrocite deformate # siclemie, talasemie, sferocitoz , megalocitoz, anemie
feripriv* este mai mare datorit reinerii crescute de plasm printer eritrocitele cu
plasticitate redus.
<icrohematocrit centrifuge and non-heparanized capillarT tubes
,paratele electronice determin hematocritul prin "nsumarea volumelor
eritrocitare individuale msurate direct. Ele necesit calibrarea volumului eritrocitar
mediu #2E<* i a numrului de eritrocite pentru estimarea hematocritului.
3ematocritul este cea mai precis metod de evaluare a strii de anemie sau
poliglobulie, avnd cea mai mic eroare # de =,=46 pentru metodele manuale i sub
=6 la metodele electronice*.2aloarea sa clinic este completat prin faptul c
reprezint un parametru "n formulele de calcul al indicilor eritrocitari #2E<,
'3E<* ca i prin informaiile pe care le sugereaz aspectul plasmei #palid "n
anemii feriprive, tulbure "n hiperlipemie, icteric "n anemii hemolitice sau "n alte
ictere etc.* sau eventuala prezen a unui strat leuco-trombocitar mai mare de =6 ce
poate atrage atenia asupra unei leucemii.
3ematocritul indic doar volumul eritrocitar procentual, nu masa total de
eritrocite, de aceea pot exista situaii cu hematocrit sczut fr scderea volumului
eritrocitar total prin creterea volumului plasmatic # hemodiluie* sau hematocritul
poate fi normal sau sczut chiar dac s-a pierdut o cantitate mare de eritrocite # oc
posthemoragic*, datorit hemoconcentraiei.
-abelul nr. 2alorile normale ale hematocritului "n funcie de vrst
vrst hematocrit 6
7a natere @% $?- =
D luni 4@,@ $?- @
= an 4@
% ani 4E
D ani 4E
=) ani 4E,@
=D ani 4C
,duli S %@ $?- E
,duli + %( $?- @
In"icii eritrocitari
Evaluarea eritrocitelor din punct de vedere al volumului i coninutului "n
hemoglobin se realizeaz prin msurarea sau calcularea urmtorilor parametrii!
volum eritrocitar mediu #2E<*, hemoglobin eritrocitar medie #3E<*,
concentraia eritrocitar medie de hemoglobin #'3E<*, lrgimea distribuiei
eritrocitare #R/A*.
'olumul eritrocitar me"iu ('EM* este msurat direct "n analizoarele automate dar
poate fi i calculat atunci cnd se cunosc valorile hematocritului i cele ale
numrului de hemati,i utiliznd formula!
'EM . Hct (/* x 01 2 +r$ Er$ ( x 01324l*
Rezultatul se exprim "n micrometri cubi sau "n femtolitri #fl*.
2alorile normale sunt cuprinse la adult "ntre 5)-=)) fl fiind ceva mai mari la nou
nscui i la vrstnici i ceva mai mici la copiii pn la =5 ani #vezi tab nr. *.
2alori normale ale 2E< caracterizeaz normocitele, valori mai mici dect normalul,
microcitele iar valori mai mari, macrocitele
2E< este un indice util "n clasificarea anemiilor.
- 2E< normal asociat cu R/A X =@ caracterizeaz o anemie
normocitar8
- 2E< sczut cu R/A N =@ indic anemia microcitar iar
- 2E< crescut arat o anemie macrocitar.
1rezena unei duble populaii eritrocitare "n proba analizat poate determina "n cazul
msurtorilor automate un 2E< normal dar prezena R/A N=@ i examinarea la
microscop a frotiului de snge corecteaz interpretarea.
2E< fals crescut este determinat de reticulocitoza marcat #N@)6*, leucocitoz
marcat #N@)))))?Yl*, hiperglicemie #ND)) mg?dl*, prezena de aglutinine la rece ,
intoxicaia cu metanol.
2E< fals sczut este determinat prin hemoliz "n vitro, prezena de eritrocite
fragmentate sau exces de E/-,.
2aloare sa depinde de osmolaritatea plasmatic i numrul diviziunilor eritrocitare.
9n cazul analizoarelor automate devine important stabilirea pragului inferior
respectiv superior al msurtirilor pentru c fixarea prea sus a acestora va duce la
nemsurarea eritrocitelor mai mici respectiv la msurarea i a leucocitelor, ceea ce
determin un rezultat eronat.
Hemoglo#ina eritrocitar me"ie (HEM* msoar coninutul mediu de
hemoglobin pe eritrocit. 2aloarea sa este calculat automat de analizoatoarele de
hematologie sau manual cnd se cunosc valorile concentraiei hemoglobinei i ale
numrului de hematii conform formulei!
HEM . H# (g2"l* x 01 2 +r$ Er$ ( x 01324l*
Rezultatul se exprim "n picograme #pg > =)
-=(
g*.
2alorile normale la adult sunt cuprinse "ntre (D-4% pg # tab nr. * i se exprim ca
normocromie, "n timp ce valori sub normal caracterizeaz hipocromia. 3ipercromia
apare din cauza volumului eritrocitar crescut ca "n anemia megaloblastic. /ei
3E< depinde att de mrimea eritrocitului ct i de coninutul su "n hemoglobin
practic valorile acestui indice se coreleaz cu cele ale 2E<.
5oncentra&ia eritrocitar me"ie "e hemoglo#in (5HEM* msoar concentraia
medie de hemoglobin dintr-un volum dat de eritrocite. 1oate fi calculat de
analizorul automat sau manual dup formula!
5HEM . H# (g2"l* x 0112 Hct (/*
'3E< se exprim "n g?dl.
2alorile normale la adult sunt cuprinse "ntre 4(-4D g?dl #tab. Rr. *
'3E< sczut caracterizeaz anemiile hipocrome.
'reterea '3E< peste 4D g?dl nu este posibil deoarece "ncrcarea cu hemoglobin
a eritrocitelor normale este maxim. /ar "n sferocitoza ereditar '3E< poate s
ating valoarea de 4E-4C g?dl. I cantitate mare de 3b "n eritrocit poate s apar
numai prin creterea volumului su ceea ce va influena valoarea hematocritului.
Lrgimea "istri#u&iei eritrocitare (R-* este indicele eritrocitar care cuantific
heterogenitatea volumului celular #gradul de anizocitoz*
R/A este calculat de analizorul automat!
R/A #'26* > /eviaia standard a mrimii eritrocitelor x =)) ? 2E<
2alorile de referina sunt! ==,D-=%,5 coeficient de variaie a volumului eritrocitar.
R/A este util "n diferenierea beta-talasemiei minore necomplicate, "n care 2E<
este sczut iar R/A normal, de anemia feripriv "n care 2E< este sczut iar R/A
crescut, R/A fiind un semn precoce al deficitului de fier. Jndicele permite
deasemenea diferenierea "ntre anemia din bolile cronice #2E< normal?sczut, R/A
normal* i anemia feripriv incipient #2E< normal?sczut, R/A crescut*
Re%isten&a osmotic
1rincipiu.Rezistena osmotic este rezistena eritrocitelor "n soluii hipotone. ,ceasta
se determin urmrind comportarea eritrocitelor "n soluii de Ra'l de diferite
concentraii hipotonice, indicnd concentraiile unde "ncepe hemoliza i unde
hemoliza este total.
<ateriale necesare!
-clorur de sodiu soluie ),E 6
-ap distilat
-eprubete de hemoliz
-snge integral imediat dup recoltare sau snge recoltat pe anticoagulant uscat.
Tehnica diluiilor cu pictura
9ntr-un stativ se pregtesc (( de eprubete de hemoliz "n care se distribuie cu
autorul unei pipete 1asteur picturile de ap distilat i de soluie d clorur de sodiu
conform tabelului de mai os.
-abelul nr. -ehnica diluiilor cu pictura
Epru#eta 0 6 7 8 9 3 : ; < 01 00
,p distilat
#picturi*
= ( 4 % @ D E 5 C =) ==
Ra'l ),E6
#picturi*
4% 44 4( 4= 4) (C (5 (E (D (@ (%
'oncentraie
#6*
),D5 ),DD ),D% ),D( ),D) ),@5 ),@D ),@% ),@( ),@) ),%5
Epru#eta 06 07 08 09 03 0: 0; 0< 61 60 66
,p distilat
#picturi*
=( =4 =% =@ =D =E =5 =C () (= ((
Ra'l ),E6
#picturi*
(4 (( (= () =C =5 =E =D =@ =% =4
'oncentraie
#6*
),%D ),%% ),%( ),%) ),45 ),4D ),4% ),4( ),4) ),(5 ),(D
'u o pipet 1asteur uscat se distribuie cte o pictur de snge "n fiecare eprubet i
se agit uor pentru a omogeniza sngele. Eprubetele se las la temperatura camerei
4) de minute dup care se pot centrifuga i se fac citirile sau se las s sedimenteze 4
ore. 'itirea se poate face i la (% de ore dac stativul este pstrat la $%B '
3emoliza iniial exprim rezistena osmotic minim i este indicat de
concentraia primei eprubete care prezint un supernatant hemolizat roz.
Tehnica diluiilor cu pipeta gradat
9n (= de eprubete se repartizeaz cte =ml din diferite concentraii de Ra'l,
concentraii care descresc de la ),E la ),4 6, pornind de la o soluie de =6 Ra'l.,
conform tabelului nr. .e aspir de fiecare dat "ntr-o pipet gradat o cantitate de =
ml din soluia de =6 de Ra'l i se adaug ),E ml "n primul tub i restul de ),4 ml "n
al (=-lea tub. 7a a doua pipetare se adaug ),D5 ml "n al doilea tub i restul de ),4(
ml "n al ()-lea tub i aa mai departe. 7a pipetarea apei distilate se procedeaz
invers.
-abelul nr. -ehnica diluiilor cu pipeta gradat
Eprubeta nr. = ( 4 % @ D E 5 C =) == =( =4 =% =@ =D =E =5 =C () (=
.oluie Ra'l =! #ml*
)
,
E
)
)
,
D
5
)
,
D
D
)
,
D
%
)
,
D
(
)
,
D
)
)
,
@
5
)
,
@
D
)
,
@
%
)
,
@
(
)
,
@
)
)
,
%
5
)
,
%
D
)
,
%
%
)
,
%
(
)
,
%
)
)
,
4
5
)
,
4
D
)
,
4
%
)
,
4
(
)
,
4
)
,p distilat #ml*
)
,
4
)
)
,
4
(
)
,
4
%
)
,
4
D
)
,
4
5
)
,
%
)
)
,
%
(
)
,
%
%
)
,
%
D
)
,
%
5
)
,
@
)
)
,
@
(
)
,
@
%
)
,
@
D
)
,
@
5
)
,
D
)
)
,
D
(
)
,
D
%
)
,
D
D
)
,
D
5
)
,
E
)
'oncentratia Ra'J Z6*
)
,
E
)
)
,
D
5
)
,
D
D
)
,
D
%
)
,
D
(
)
,
D
)
)
,
@
5
)
,
@
D
)
,
@
%
)
,
@
(
)
,
@
)
)
,
%
5
)
,
%
D
)
,
%
%
)
,
%
(
)
,
%
)
)
,
4
5
)
,
4
D
)
,
4
%
)
,
4
(
)
,
4
)
'u o pipet 1asteur uscat se distribuie cte o pictur de snge "n fiecare eprubet i
se agit uor pentru a omogeniza sngele. Eprubetele se las la temperatura camerei
4) de minute dup care se pot centrifuga i se fac citirile sau se las s sedimenteze 4
ore. 'itirea se poate face i la (% de ore dac stativul este pstrat la $%B '
3emoliza iniial exprim rezistena osmotic minim i este indicat de
concentraia primei eprubete care prezint un supernatant hemolizat roz.
3emoliza total exprim rezistena osmotic maxim i este indicat de concentraia
primei eprubete care nu prezint sediment de eritrocite, toate fiind hemolizate.
2alori normale!
Re%isten&a osmotic minim= 1>83?1>86 /
Re%isten&a osmotic maxim 1>7;?1>78 /
/ac hemoliza iniial apare la concentraii mai mari rezistena osmotic este sczut
cum se "ntmpl "n icter hemolitic congenital, intoxicaii cu benzen, uneori "n
hepatita epidemic.
/ac hemoliza iniial apare la concentraii mai mici, rezistena este crescut cum se
"ntmpl "n talasemie, dup hemoragii acute #hematiile tinere au rezistena osmotic
crescut splenectomie, "n anemii feriprive, "n icterul mecanic, uneori "n anemia
Siermer.
,ROTI@L E SA+GE
Executarea unui frotiu de snge constituie o tehnic de baz a microscopiei
clinice. Hn preparat hematologic este inutilizabil dac este realizat cu o tehnic
necorespunztoare, care distruge morfologia elementelor celulare. Rumai un frotiu
corect executat permite o interpretare microscopic de calitate, util diagnosticului.
7amele pe care se execut frotiul trebuie s fie perfect curate i degresate,
altfel nu se obin preparate bune.
-ehnica executrii frotiului! .e pune o pictur de s"nge #capilar sau venos pe
anticoagulant* pe captul din dreapta al unei lame aflat pe masa de lucru. 7ama de
"ntins #o lam lefuit la un capt* se aplic mai la stnga, "ntr-un unghi de %@[. .e
aduce lama de "ntins spre dreapta, pn ce atinge pictura de snge. ,ceasta, datorit
fenomenului de tensiune superficial, umple rapid unghiul format de lama "ntins cu
lama suport. 'u un gest uniform se "mpinge acum lama de "ntins de la dreapta spre
stnga. Jmediat dup "ntindere, lama se agit puternic, pentru a obine o uscare
rapid. Hscarea lent duce la ratatinarea celulelor.
.e noteaz cu creionul pe frotiu identitatea preparatului.
+rotiul este bine executat dac!
- Ru acoper toat lama fiind mai "n gust dect aceasta8
- ,re margini drepte i franuri la extremitatea terminal8
- ,re grosimea potrivit elementele fiind distribuite uniform, fr a fi
deformate sau distruse.
'oloraia cele mai frecvent utilizate sunt coloraiiile <aT 0r\nVald-0iemsa #<00*
i Aright, care permit o bun analiz cromatic i evidenierea tuturor detaliilor
morfologice ale componentelor celulare, necesare identificrii lor.
Coloraia "a#-Gr$n%ald Giemsa. Este o coloraie panoptic care ofer
numeroase detalii morfologice. 'olorarea unui frotiu poate fi executat imediat dup
"ntinderea lui sau "n primele (% de ore de la preparare. lamele cu frotiurile se aeaz
pe baia de colorare, apoi
- .e acoper cu soluie <aT-0r]nVald i se las 4 minute, pentru
fixare.
- .e adaug o cantitate egal de ap distilat neutr i se las =
minut i umtate #diluat cu ap, soluia <aT-0r]nVald devine
colorant*.
- .e scurge colorantul.
- .e acoper lamele cu soluie 0iemsa diluat, preparat
extemporaneu #= pictur colorant la = ml de ap distilat8 dup
calitatea colorantului, proporia poate varia de la = la % picturi
soluie 0iemsa concentrat la = ml de ap*. 1entru a realiza o
coloraie cu cele mai frumoase nuane, trebuie folosit ap
distilat neutr la pregtirea soluiei 0iemsa .
- .e las =@-() de minute, timp care poate crete la 4)-4@ de minute
"n cazul unor preparate foarte bogate "n elemente nucleate.
- .e spal lamele sub et de ap
- .e usuc la aer.
Examinarea frotiului este mai "nti macroscopic, urmrind aspectul frotiului #subire
i omogen, cu margini drepte, paralele i terminat cu franuri* culoarea acestuia #roz-
violacee i omogen* i apoi microscopic, cu obiectiv uscat i cu obiectivul cu
imersie.
&xaminarea cu o'iectiv uscat se realizeaz pentru orientarea diagnosticului,
urmrind!
- coloraia corect #eritrocite roz-portocalii, nucleii leucocitelor
albatrii-purpurii, granulaiile din citoplasma neutrofilelor roz-
cafeniu, granulaiile eozinofilelor roii portocalii strlucitoare*8
- dispoziia eritrocitelor normal, "n rulouri sau aglutinate8
- densitatea celulelor nucleate i compararea cu cifra numrtorii
directe8
- distribuia celulelor pe frotiu #dac pe marginea frotiului sunt de 4
ori mai multe celule dect "n centrul acestuia, frotiul este
inadecvat interpretrii*8
- prezena de celule anormale sau imature, mai ales pe marginile i
"n franurile frotiului8
- prezena de artefacte de uscare sau colorare8
- alegerea zonei adecvate pentru examinarea cu imersia,
aproximativ "ntre =?4 medie i =?4 terminal, aproximativ (@6 din
lungimea frotiului.
Hn frotiu impropriu pentru examinare prezint eritrocite suprapuse sau deformate,
eritrocite, avnd contur dublu #lam nedegresat*, zone "ntinse cu eritrocitele mari,
prea etalate, poligonale sau sferoidale, cu pierderea palorii centrale, leucocite
dstruse, zone rotunde necolorate etc.
Examinarea cu obiectivul cu imersie permite cercetarea "n amnunt a detaliilor
morfologice ale elementelor figurate sanguine, eritrocite, leucocite i trombocite.
Stu"iul eritrocitelor urmrete!
- talia celular,
- concentraia i distribuia hemoglobinei,
- proprietile tinctoriale,
- forma,
- prezena de incluzii,
- distribuia pe frotiu.
Talia! eritrocitele normale au dimensiuni aproape uniforme corespunznd unui
diametru "ntre E,(-E,C Ym #normocite*, aproximativ aceeai mrime cu nucleul unui
limfocit mic, normal.. Existena pe acelai frotiu a unor eritrocite cu dimemsiuni
diferite se exprim ca anizocitoz care poate fi ca form uoar #$*, moderat #$$*
sau marcat #$$$*. Hn diametru mai mare de C Ym caracterizeaz macrocitele.
Eritrocitele cu diametrul mai mic de D Ym se numesc microcite.
Fig. nr. Anizocitoza eritrocitara
Concentraia (i distri'uia hemoglo'inei alturi de forma de disc biconcav determin
culoarea caracteristic, roz-portocaliu, cu o arie central mai clar care nu trebuie sa
reprezinte mai mult de =?4 din suprafat celulei. I paloare central crescut
sugereaz scderea concentraiei de hemoglobin #hipocromie*, indicnd reducerea
sintezei hemoglobinei. 'reterea extrem a zonei palide poate determina aspectul de
anulocit, eritrocitul rmnnd numai cu o ram subire de hemoglobin. 3ematiile
care apar intens colorate pierzndu-si aria central palid au grosime crescut prin
modificarea formei sau mrimii lor #sferocite, megalocite*. Hnele eritrocite pot
prezenta o distribuie anormal a hemoglobinei cu un disc central "nconurat de dou
cercuri concentrice, unul clar intermediar i altul marginal format din hemoglobin
dnd acestora aspectul de :semn de tras la int; #acestea se "ntlnesc mai frecvent "n
talasemie, postsplenectomie, hemoglobinopatia '*.
+ig.nr. anizocromie eritrocitar
Proprietile tinctoriale determin "n cazul eritrocitelor normale culoarea specific
crmizie. Eritrocitele care prezint o tent violet se numesc policromatofile i dac
au dimensiuni puin mai mari dec eritrocitele obinuite sunt reticulocite. -ot
reticulocitele, dar foarte tinere, au culoarea gri-albastr.
Fig. nr eritrocite policromatofile
)orma eritrocitelor normale este de disc biconcav. <odificrile de form sunt foarte
variate i numeroase. 1rezena acestora este indicat prin termenul general de
poichilocitoz fiind necesar precizarea tipului de modificare.
-abelul nr. <odificrile de form ale eitrocitelor i strile de boal "n care apar
-erminologie ,spect .tri i boli asociate
Eliptocit #ovalocit* 'elul elipsoidal sau ovalar Eliptocitoz ereditar
-alasemie
,nemie megaloblastic
,nemie mieloftizic
<egalocit #macrocit
ovalar*
Eritrocit mare cu form de ou,
fr paloare central
,nemii megaloblastice
/iseritropoez
.ferocit #microsferocit* Eritrocit rotund cu paloare
central absent sau mic
.ferocitoza ereditar
,3,J
1osttransfuzional
,3 cu corpi 3einz
3emoliza cu fragmentare cu
form de sfer
.tomatocit #celul cu
gur, disc uniconcav,
celul ciuperc*
Eritrocit cu form sferic cu o
singur concavitate, cu o gropi
mic, cu zona paloare central, ca
o fisur.
.ferocitoz ereitar
.tomatocitoza ereditar
,lcoolism, ciroz
Soli obstructive hepatice
/efecte ale pompei de sodiu.
'odocit #clopot* Eritrocit cu aspect de semn de
tras la int
3emoglobinoza', .
-alasemie
Soli hepatice obstructive
,nemie feripriv
1ostsplenectomie
,cantocit #:spur cell;* Eritrocit cu spini neregulai ,lcoolism
Soli hepatice
1ostsplenectomie
<alabsorbie
,betalipoproteinemie
Echinocit #:burr cell;
celul crenelat*
Eritrocit cu spiculi mici, egali,
distribuii uniform.
Hremie
/eficit de piruvatPinaz
3ipopotasemie
'arcinom gastric i ulcer
gastric sngernd
1osttransfuzie imediat
.chizocit #celul
fragmentat, celul "n
coif*
Eritrocit rupt cu form de
umtate de disc cu (-4
extremiti ascuite sau un mic
fragment neregulat
,3 microangiopatic #1--,
'J/, vasculit,
glomerulonefrit, 7E/,
reecie de gref renal*
3emoliz, valv cardiac
#proteze sau valve
patologice*
,rsuri severe
3emoglobinurie de mar
/repanocit #celul "n
secer, :sicPle cell;*
+orm de semilun cu centru
dens
/repanocitoz
3emoglobinoz '-3arlem
3emoglobinoz <emphis?.
/acriocit #celul "n
lacrim, rachet de
tenis*
'elul cu o singur prelungire
sau extremitate ascuit
<<<
-alasemie
,nemie mieloftizic
7eptocit #celul "n
picot, celul subire*
Eritrocit subtire plat cu
hemoglobin la periferie
-alasemie
Soli hepatice obstructive
#$?- deficit de fier*
Geratocit #celul cu
corn*
.piculi rezultai din vacuol rupt
'elula apare semilunar sau cu
form de fus
'J/
1rotez valvular

1rezena de incluzii "n eritrocite este intotdeauna patologic
-abelul nr. Jncluzii "n eritrocite i reticulocite
incluzii 'ompoziia
lor
-ipul de
celul
,spectul
"n
coloraia
panoptic
.emnificaia 1rezente "n!
1unctaii
bazofile
1recipitate
patologice de
ribozomi
#,RR
residual*
reticulocit 0ranule
albastre
dispersate
cu numr
i talie
variabil
,nomalii ale
ribozomilor
Jntoxicaii cu 1b
-alasemie
,nemii
megaloblastice
/iseritropoieze
'orpi
3aVell-
^ollT
Resturi
nucleare
'romozomi
aberani
Reticulocit
i eritrocit
Hnice sau
numeroase
granule
mici,
sferice,
dense,
violacee
.plin
absent sau
ineficient
3ipersplenism
1ostsplenectomie
,nemii
hemolitice
,nemii
megaloblastice
/iseritropoeze
Jnele
'abot
Rest din
fusul mitotic
reticulocit +ilament
subire
inelar sau
ca
numrul 5
<itoze
anormale
,nemii
hemolitice
,nemii
megaloblastice
/iseritropoeze
'orpi
3einz
3emoglobin
denaturat
Eritrocit
rar
reticulocit
Rar
vizibili
/enaturarea
hemoglobinei
prin
substane
oxidantesau
,nemii
hemolitice
3emoglobine
instebile
-alasemie
defecte
ereditare
.iclemie
1arazitul
malariei
plasmodium eritrocit Jnel cu
pecete,
rozet sau
gamei
<alarie <alarie

/istribuia pe frotiu "n mod normal este uniform pe toat "ntinderea frotiului.
,pariia unor agregate "n rulouri, asemntoare fiicurilor din monezi, separate de
zone libere, indic o paraproteinemie, fie din mielom multiplu fie din
macroglobulinemia AaldenstrOm. 'nd rulourile sunt reale ele sunt distribuite pe
toat suprafaa frotiului. /ac se "ntlnesc doar"n partea iniial groas a acestuia ele
reprezint un artefact. +ormarea de aglutinate pe frotiu poate semnifica o ,3,J cu
anticorpi la rece.
+ig.nr. hematii dispuse "n rulouri
Fig. nr. hipocromie
+ig. nr. microcitoz
Fig. nr. macrocitoz
Fig.nr. schistocite
Fig.nr.acantocite
+ig.nr. hematii crenellate
+ig.nr. hematii mucate
Fig.nr. sferocite
Fig.nr. drepanocite i hematii in form de semn de tras la int
Fig.nr. dacriocite
+ig.nr. ovalocite
Fig.nr. corpi Howell-Jolly
Fig.nr. punctaii azofile
Fig.nr. corpi Heintz
Stu"iul leucocitelor
7eucoccitele sunt reprezentate prin elemente granulocitare nesegmentate i
segmentate #neutrofile, eozinofile i bazofile* i elemente mononucleate #monocite,
limfocite i plasmocite*. Exaninarea acestora pe frotiul de snge arat o distribuie
neuniform, celulele mari, monocitele i polinuclearele avnd tendina s se
concentreze pe marginea frotiului i "n franuri. /up o examinare cu obiectiv uscat,
pentru compararea rezultatelor obinute la numrtorile "n hemocitometru sau la
analizorul automat cu prezena lor pe frotiu, se trece la identificarea diverselor tipuri
de leucocite innd cont de! mrimea celulei, caracteristici ale nucleului #poziia,
forma, culoarea, structura cromatinian, membrana nuclear, prezena i aspectul
nucleolilor*, citoplasma #raportul nucleocitoplasmatic, culoarea, prezena haloului
perinuclear, granulaiile M numr, culoare, mrime, distribuie*.
1olinuclearul neutrofil!
- diametru =(-=@Y8
- nucleu format din mai multe segmente unite prin puni de
cromatin8 structur cromatinian grosolan8
- citoplasma roz-palid cu granulaii numeroase, punctiforme,
violacei.
9n sngele periferic normal apar i cteva neutrofile nesgmentate, cu nucleu "n form
de potcoav.
1olinuclearul eozinofil!
- diametru =(-=@ Y8
- nucleu de obicei bilobat #"n desag*8
- citoplasma plin de granulaii mari, egale "ntre ele, de culoare
portocalie, refringente.
1olinuclearul bazofil!
- diametrul =)-=4Y8
- nucleu polilobat, cu lobi nucleari incomplet separai, mai palid
colorat8
- citoplasma cu granulaii grosolane, inegale ca form i mrime,
albstrui-negre, care acoper "n parte i nucleul.
<onocitul!
- cel mai mare dintre leucocite, cu diametrul "ntre =@-(@Y8
- nucleu mare central de form variabil- rotund, ovalar, reniform,
"n potcoav M structur cromatinian fin caracteristic,
:pieptnat; sau :"n tabl de ah;8
- citoplasm abundent albastr- cenuie, cu granulaii foarte fine
azurofile, ca un praf.
7imfocitul!
- diametrul "ntre =)-=DY # cu ct limfocitul este mai tnr diametrul
este mai mare*8
- nucleu rotund, de obicei excentric, intens colorat "n violet, cu
agregate dense de cromatin8
- citoplasma palid albastr #uneori conine cteva granulaii
azurofile.
1lasmocitul!
- celul rotund sau elipsoidal8
- nucleu excentric, rotund, "n grmezi dense de cromatin8
- citoplasm intens bazofil, uor grunoas uneori cu vacuole8
halou perinuclear.
,ormula leucocitar sau numrtoarea difereniat a leucocitelor const "n
diferenierea i clasificarea procentual a diferitelor tipuri de leucocite prezente pe
frotiul de snge.
-ehnic! se parcurge frotiul cu obiectivul cu imersie, deplasnd preparatul "ntr-un
singur sens i "n zig-zag, surprinznd att elemente marginale ct i cele din milocul
lamei. 1e msur ce se "ntlnesc leucocite, ele se noteaz dup diversele tipuri
celulare. .e examineaz "n total =)) de elemente i se stabilete procentul fiecrui tip
de leucocit. Exactitatea rezultatelor crete cu ct numrul elementelor examinate este
mai mare. /ac "n marginile frotiului sau "n franuri exist de 4 ori mai multe celule
mari comparativ cu restul frotiului se renun la examinarea acestui frotiu pentru ca
numrtoarea difereniat nu ar fi reprezentativ. Resegmentatele i segmentatele pot
fi raportate separat sau "mpreun. 'lasicele formule de clasificare a neutrofilelor,
,rneth #dup numrul de lobi nucleari -=-@* i .chilling #"mparte neutrofilele "n
nesegmentate -mielocite, metamielocite, nesegmentate- i segmentate*prezint mai
mult interes istoric dect valoare practic "n prezent utilizndu-se numai expresia de
:deviere la stnga; pentru a exprima modificarea raportului "ntre neutrofilele "n
favoarea elementelor tinere. Este valoroas separarea limfocitelor mici de
limfocitele reactive sau atipice fr s fie necesar "mprirea lor "n limfocite mari,
milocii i mici. 9n suta de celule numrate trebuie incluse toate leucocitele
identificabile, normale sau anormale. 'elulele ruptVe sau degenerate nu trebuie
incluse "n numrtoare. 'elulele din alte serii #eritroblati, megacarioblati,
fragmente de megacariocite* se noteaz separat i se exprim la =)) de leucocite
identificabile. Irice cretere procentual a unui tip celular impune aflarea valorii
sale absolute calculat din numrul total de leucocite i procentul tipului celular
respectiv obinut la efectuarea formulei leucocitare. /e exemplu! nr. leucocite >
C)))?mm
4
i limfocitele > @@6, nr. absolut de limfocite > @@ x C))) ! =)) >
%C@)?mm
4
.
-abelul nr. 2alori normale relative i absolute ale leucocitelor
vrsta 7eucocite
K =)
4
?Yl
nesegmentate segmentate eozinofile bazofile limfocite monocite
6 Rr.?Yl 6 Rr.?Yl 6 Rr.?Yl 6 Rr.?Yl 6 Rr.?Yl 6 Rr.?Yl
7a
natere
C - 4) C,= =D@) @( C%)) (,( %)) ),D =)) 4= @@)) @,5 =)@)
D luni D -=E,@ 4,5 %@) (5 44)) (,D 4)) ),% @) @C D5)) @,( D))
= an D-=E,@ 4,= 4@) (5 4()) (,@ 4)) ),% @) D4 E@)) %,D @@)
% ani @,@-=@,@ 4 4E) 4C 4@)) (,D (5) ),@ @) @C D4)) @ @4)
D ani @-=%,@ 4 (@) %5 %))) (,5 (@) ),D @) @) %@)) @ %@)
=) ani %,@-=4,@ 4 (%) @= %()) (,% ()) ),D @) 4C 44)) %,( 4@)
=% ani %,@-=4 4 (%) @4 %()) (,@ ()) ),@ %) 45 4))) %,% 4@)
=D ani %,@-=4 4 (4) @% %()) (,@ ()) ),@ %) 4E (C)) %,E 45)
() ani %,@-==,@ 4 (4) @E %()) (,E ()) ),@ %) 44 (@)) @,) 45)
adult %,@-== 4 (4) @E %()) (,E ()) ),@ %) 44 (@)) @,) 45)
9n primele cteva zile dup natere predomin granulocitele neutrofile dar apoi scad
i de la ( sptmni pn la % M @ ani limfocitele reprezint maoritatea leucocitelor.
/up @ ani limfocitele scad treptat i la () de ani numrul lor este aproximativ
umtate din numrul de granulocite care devin i rmn tipul celular predominant
pentru tot restul vieii adulte. 9n perioada neonatal exist o uoar monocitoza care
dureaz primele ( sptmni, dup care numrul absolut de mooncite scade
meninndu-se relativ constant toat copilria. +a de normal se pot "nregistra
modificri variate! neutrofilie sau neutropenie, limfocitoz sau limfopenie,
monocitoz sau monocitopenie, bazofilie.
0ranulocitele neutrofile din snge reflect fidel starea funcional a mduvei osoase
"n strile reactive sau "n cele maligne. Rumrul limfocitelor i monocitelor nu
reflect corect formarea acestora, informaia corect obinndu-se doar "n urma
punciei i biopsiei de mduv osoas, ganglioni sau splin.
7a pacienii cu leucopenie este necesar prepararea frotiurilor din concentrat
leucocitar.
,nomalii morfologice leucocitare!
- anomalii de talie! granulocite gigante sau poliploide
#mielodisplazii, postterapie citostatic*
- anomalii nucleare! hipersegmentarea granulocitelor #deficit de
catalizatori*, absena segmentrii sau hiposegmentarea $
condensare cromatinian M anomalie 1elger-3uet #mielodisplazii,
mieloproliferri acute sau cronice*, celule limfoide cu nuclei
convolui sau cerebriformi #limfoproliferri de tip -*, nuclei
picnotici, degenerai etc.
- ,nomalii citoplasmatice! neutrofile hipo sau agranulare #infecii
severe, mielodisplazii, mieloproliferri cronice*granulaii mari,
intens colorate, numite granulaii toxice #septicemii, infecii
severe* granulaii uriae "n neutrofile, limfocite i monocite
#anomalia 'hediaP- 3igashi*, prezena de incluzii albastre deschis
"n neutrofile- corpii /ohle #infecii, arsuri, sarcin, mielodisplazii*
etc
.tudiul trombocitelor presupune!
- examinarea morfologiei i a eventualelor anomalii ale acesteia
#anizocitoz trombocitar, modificri ale glomerulului,
vacuolizri etc.
- evaluarea numeric
- aglutinabilitatea
1e frotiul colorat <00 trombocitele sunt cele mai mici elemente, cu diametrul de (-
% microni, forma sferic sau ovoidal i prezint central granulaii azurofile care sunt
"nconurate de o zon de citoplasm albastr. <odificri morfologice intereseaz
talia i?sau aspectul trombocitelor, modificri structurale ale hialomerului sau
granulomerului. -rombocitele tinere sunt mai mari dact cele adulte i prezena lor "n
numr mare indic eliberarea acestora din rezerve precum i o regenerare medular
activ. <egatrombocitele sunt trombocite eliberate prematur din mduv .,cestea
sunt de obicei rotunde i conin granule multiple "ntens colorate.
Examinarea frotiului asigur i controlul numrtorii directe realizndu-se o estimare
semicantitativ. +rotiurile de snge fr anticoagulant permit estimarea numrului de
trombocite dup numrul i mai ales mrimea grupelor de trombocite. 0sirea pe
margini i "n franuri a unor grupe de =@-4) de trombocite indic un numr normal.
1rezena de trombocite izolate sau "n grupe mici de (-@-5 trombocite arat
trombocitopenie, iar existena unor grupe mari de 5)-=)) trombocite arat un numr
crescut. Estimrile numrului de trombocite se pot efectua i din sngele recoltat pe
E/-,, cnd trombocitele nu agreg. 9n acest caz, dac "n toate cmpurile
microscopice ale examenului cu imersie se gsesc 5-=@ trombocite, izolate sau "n
grupuri mici #un trombocit la fiecare =)-4) eritrocite* se consider un numr normal
de trombocite. Hn numr de =-( trombocite la cteva cmpuri arat un numr sczut.
/ac pe fiecare cmp microscopic se afl (@-4) de trombocite, izolate sau aglutinate
numrul lor este crescut.
1rezena pe frotiul obinut din snge recoltat pe anticoagulant a trombocitelor
agregate arat o tehnic incorect a venopunciei cu activarea trombocitelor "naintea
amestecului cu anticoagulantul. ,celai aspect se "ntlnete "ns i in cazul existenei
de aglutinine plachetare "n sngele examinat.
+umrarea reticulocitelor (Rt*
Reticulocitele sunt eritrocite anucleate, imature care conin acizi nucleici
reziduali. .Rumrul de reticulocite apreciaz specific funcia medular de a sintetiza
celule roii ca rspuns la o solicitare cum este anemia precum i mecanismul de
producere, ca i urmrirea rspunsului la tratament "n diverse tipuri de anemie.
1rincipiu. Ribonucleotidele reziduale din eritrocitele imature sunt precipitate i
colorate printr-o cloraie supravital #neprecedat de fixare* cu :brillant cresTl blau;
ceea ce permite recunoaterea lor pe frotiul de snge i numrarea lor raportndu-le
la =))) de hematii.
Reactiv! ,lbastru de briliant crezil.......=g
Ra citric..................................),%g
.er fiziologic.......................ad =))ml
-ehnic. 1e o lam se pun "n contact o pictur de colorant i una de snge. .e
amestec cu un col de lam. .e atreapt @ minute. .e "ntind frotiuri care se usuc la
aer. .e examineaz la microscop cu obiectivul cu imersie. .e numr reticulocitele
corespunznd la =))) de hematii.
I alt modalitate de obinere a amestecului dintre snge i colorant este amestecarea
"ntr-o eprubet a 4 picturi de soluie de albastru de briliant crezil =6 "n ser
fiziologic cu =( picturi de soluie de oxalat de sodiu =6 "n ser fiziologic i (-4
picturi de snge. ,mestecul se las "n contact 4) de minute i se centrifugheaz apoi
uor 4 minute. .e omogenizeaz sedimentul i din acesta se "ntind frotiuri subiri pe
lam /ac amestecul este meninut "n contact =-( ore, centrifugarea nu mai ste
necesar eritrocitele sedimentnd spontan. ,cest ultim procedeu permite obinerea
unr frotiuri mai uniforme i subiri.
1e frotiurile colorate supravital eritrocitele apar colorate palid-verzui, iar
reticulocitele conin precipitate de culoare albastr "nchis sub form de reticul
granulofilamentos dens sau granule mici, izolate, rare. Rumrarea reticulocitelor se
face prin examinarea a =))) de eritrocite i rezultatele se exprim procentual sau "n
cifre absolute? Yl.
2alorile normale sunt "ntre ),@ i =,@ 6 sau (@)))-E@)))? Yl. 7a nou nscut exist
un numr crescut de reticulocite, (,@-D,@ 6. 7a vrsta de ( sptmni numrul lor
devine foarte apropiat de cel al adultului.
Jndicele reticulocitar calculat dup formula!
JR > Rt #6* x
Htnormal
Htpacient
x
(
=
, d o aproximare mai bun a activitii eritropoetice, nu
mai bun "ns dect numrul absolut de reticulocite "mprit la (.
+ig. nr. Reticulocite pe frotiu colorat cu soluie de albastru de
briliant crezil
eterminare vite%ei "e se"imentare a hematiilor ('SH*
1rincipiu. /in sngele recoltat pe anticoagulant #citrat de sodiu 4,5 6* aspirat "ntr-o
pipet gradat #Aestergreen* i lsat "n repaus, hematiile sedimenteaz cu vitez
variabil.
Tehnica -estergreen
<ateriale necesare!
-materiale necesare recoltrii sngelui venos8
- anticoagulant! soluie de citrat de sodiu 4,568
-pipete Aestergreen cu diviziuni milimetrice de la ) la ())8
-stativ8
-cronometru.
-ehnic. .ngele venos se recolteaz pe anticoagulant #=,D ml snge i ),% ml soluie
citrat de sodiu 4,56*fiind diluat ()6 , fiind apoi aspirat "n tubul Aestergreen pn la
diviziunea ). -ubul se plaseaz "n stativ, "n poziie vertical i dup exact o or se
citete "nlimea coloanei de plasm rezultat "n urma sedimentrii hematiilor ca
urmare a diferenelor "ntre densitatea plasmei, =)(E i cea a eritrocitelor, =)4C.
Rata sedimentrii este influenat de abilitatea eritrocitelor de a se dispune "n rulouri
care la rndul su depinde de atracia de suprafa #potenialul zeta*. +ormarea
rulourilor va fi influenat astfel de factori plasmatici i de factori eritrocitari.
+actorii plasmatici sunt reprezentai de raportul dintre proteinele plasmatice
respectiv de raportul dintre albumine i globuline i de concentraia plasmatic a
fibrinogenului din prob. 'reterea concentraiei moleculelor asimetrice din plasm
reduce mult forele de respingere dintre hematii. ,stfel creterea concentraiei
globulinelor sau cea a fibrinogenului va favoriza dispunerea hematiilor "n rulouri
accelernd sedimentarea acestora.
+actorii eritrocitari sunt reprezentai de numrul de hematii, respectiv de
raportul dintre hematii i plasm #hematocritul* dar i de modificri ale suprafeei
sau formei eritrocitare. Reducerea numrului de hematii va determina accelerarea
2.3 "n timp ce creterea numrului acestora, cum se "ntmpl "n poliglobulii, reduce
valoarea 2.3. <icrocitele vor sedimenta mai "ncet dect macrocitele iar hematiile
"n form de secer din siclemie formeaz greu rulouri i vor determina un 2.3
redus.
2alorile normale ale 2.3 sunt pn la =@mm?or la brbai i () mm?or la
femei.
2.3 este considerat un indice nespecific al strii de inflamaie aceasta
"nsoindu-se "ntotdeauna de modificarea raportului "ntre albumine i globuline i?sau
de creteri ale concentraiei fibrinogenului plasmatic. -rebuie precizat c valori
normale ale 2.3 nu exclud inflamaia totui maoritatea condiiilor inflamatorii
acute sau cronice ca i condiiile neoplazice se "nsoesc de valori ridicate ale acestui
parametru. 2alori foarte ridicate, "n ur de =))mm?or sugereaz diagnosticul de
mielom multiplu dar i boli de colagen, tuberculoz sau cancer.
AUTOMATIC MEASURING
-he automatic erTthrocTte sedimentation rate analTser #.R* .E/JGI <-=) 4.)4.C.=
Vill facilitate the VorP of the laboratorT personnel, and the test results Vill be even
more precise.
_ou onlT need to insert the readT-made pipettes into the analTser, the subse`uent
process Vill taPe place automaticallT. -he compatibilitT Vith the Aestergreen
procedure is ensured! after a period of = hour the device Vill checP the height of the
column, and Tou can read the results thus obtained even later.
=) measuring places #slots* of the analTser alloV
+umrarea leucocitelor

1rincipiul metodei. .ngele diluat "n pipete speciale cu autorul unui lighid de diluie
specific, este introdus apoi "n hemocitometru "ntr-un volum bine determinat, unde
celulele sunt distribuite uniform i numrate pe o anumit reea.
<ateriale necesare!
-<ateriale necesare pentru recoltarea sngelui capilar sau venos.
-1ipeta 1otain pentru leucocite format dintr-un tub capilar gradat care
prezint dou notaii, ),@ i = i se continu cu o poriune dilatat , bula de diluie, "n
care se afl o mic perl, mobil , alb. /easupra bulei de diluie se afl notaia ==.
/ac sngele este aspirat "n tubul capilar pn la diviziunea ),@ sau = i apoi
completat cu lichidul de diluie pn la notaia ==, se obine o diluie a sngelui de
=?(), respectiv =?=). 'apacitatea total a pipetei este de == volume iar diluia este de
=?=) i =?(), datorit faptului c un volum de diluant rmne "n tubul capilar i nu
dilueaz sngele 1artea de sus a pipetei se adapteaz unui tub de cauciuc, care
permite o aspiraie uniform. /up utilizare pipetele se spal cu ap, apoi cu alcool
i eter, se usuc i se sterilizeaz la cldur uscat.
-7ichidul de diluie trebuie s menin integritatea i s conserve celulele care
urmeaz a fi numrate i s lizeze celelalte tipuri de celule8 acesta dilueaz sngele,
distruge hematiile i trombocitele, "mpiedic coagularea8 trebuie s fie izotonic,
pentru a nu determina hemoliza sau ratatinarea leucocitelor i conine un fixator care
s mentin formacelulelor, s le "mpiedice autoliza i aglutinarea. 7ichidul de diluie
folosit pentru numrarea leucociteloreste soluia -\rP constituit din!
,cid acetic..............=ml
,p distilat.....................=))ml.
,lbastru de metilen = 6...........cteva picturi

-'amera de numrat sau hemocitometrul este constituit dintr-o lam groas
de sticl pe care a fost gravat o reea cu dimensiuni cunoscute. Irice camer de
numrat are gravate pe ea urmtoarele date! "nlimea camerei de numrat care este
de ),=)) mm# =?=) mm* i respectiv dou cifre, =?%)) i =?(@ sau =?%)) i =?=D, cifra
care variaz dup tipul camerei i indic a cta parte dintr-un mmU este ptrelul mic
i ptrelul mare care nu au subdiviziuni.Exist mai multe tipuri de camere de
numrat!
'amera -homa, cu suprafaa total de =mmU divizat prin linii duble "n %))
de ptrele cu suprafat de =?%)) mmU. 7inii triple grupeaz cte =D ptrele de
suprafa =?%)) mmU.
'amera SurPer are suprafaa total de CmmU "mprit prin linii triple "n nou
ptrate cu suprafaa de =mmU iar acestea sunt "mpite prin linii duble "n =D ptrate
cu suprafaa de =?(@ mmU folosite pentru numrarea lecocitelor. 7a "ntretierea
liniilor duble se delimiteaz ptrate cu suprafaa de =?%)) mmU.
'amera SurPer--urP are suprafaa reelei de C mmU "mprit prin linii triple
"n nou ptrate cu suprafaa de = mmU 1tratul din miloc este de tip -homa, fiind
"mprit "n %)) de ptrele mici cu suprafaa =?%)) mmU, grupate cte =D, "n ptrate
delimitate prin linii triple.1tratul din miloc folosete numrrii hematiilor.1tratele
din colurile reelei sunt de tip SurPer fiind "mprite prin linii duble "n =D ptrate cu
suprafaa de =?(@ mmU.,ceste suprafee se folosesc pentru numrarea leucocitelor.
'amera 0oreaev are un cadrila "n care alterneaz ptrtelele mici de =?%))
dintr-un mmU, "n grupuri de cte =D, cu ptrate de cte =?(@ mmU pentru numrarea
hematiilor.
/elimitarea camerei de numrat se realizeaz cu autorul unei lamele perfect plan i
lefuit ,cu o grosime de aproximativ ),4-),@mm. 1rin aplicarea lamelei, "ntre
suprafaa pe care se afl gravat reeaua i suprafaa lamelei se delimiteaz un spaiu
cu "nlimea de =?=) mm.
- <icroscopul optic se folosete utiliznd obiectiv uscat, ()x sau %)x , ocular
=) sau Ei iluminare slab.
-ehnica de lucru
.e pregtete camera de numrat prin degresarea acesteia i aplicarea unei lamele
dup umezirea uoar a marginilor acesteia astfel "nct s se realizeze un contact
intim "ntre lama groas i lamel, demonstrat prin apariia inelelor ReVton. I
bun aderen a lamei i a lamelei este foarte important pentru realizarea unui
volum constant al camerei de numrat.
/in sngele recoltat se aspir "n pipeta 1otain pn la diviziunea ),@ sau =
# citirea fcndu-se cu pipeta "n poziie vertical*. /ac sngele depete uor
diviziunea, prin atingerea vrfului pipetei cu o hrtie de filtru coloana de snge
se poate potrivi exact pn la diviziunea dorit.
.e terge sngele de pe pereii exteriori ai pipetei i se introduce pipeta "n
flaconul cu lichid de diluie. .e aspir lichidul pn la diviziunea ==. 1ipeta se
aeaz "n poziie orizontal i se cuprinde "ntre degetul mare i cel milociu, apoi
se agit viguros pentru omogenizare. 1n la numrtoare pipeta rmne "n
poziie orizontal.
Hmplerea camerei de numrat se face dup agitarea pipetei timp de (-4 minute i
"ndeprtarea primelor picturi din pipet. 2rful pipetei se apropie de marginea
lamelei aplicat pe camera de numrat i se las s intre prin capilaritate o
cantitate de lichid asfel "nct reeaua s fie acoperit "n "ntrgime fr bule de aer
sub lamel i fr ca lichidul s trec "n anurile laterale sau lamela s se
deplaseze. /ac toate aceste condiii nu sunt respectate operaia se repet dup
tergerea camerei.
Rumrarea leucocitelor se realizeaz dup cteva minute, pentru sedimentarea
elementelor pe cadrila. .e examineaz camera la microscop i se numr patru
sau cinci cmpuri de = mm
(,
delimitate prin linii triple. 9n interiorul acestora se
numr elementele din interiorul ptratelor cu suprafaa de =?(@ mmU, cele din
interiorul ptrelelor i cele de pe dou margini, mereu aceleai, de exemplu
stnga i sus. pentru a evita dubla numrare a elementelor.
'alcul! pentru a stabili numrul elementelor de pe = mmU se "mparte numrul
total obinut la % sau la @. Rumrul de leucocite dintr-un mmFse calculeaz
"nmulind cifra obinut cu =) pentru a corecta "nlimea camerei #=?=)mm* i cu
() pentru a corecta diluia #=?()* dac sngele a fost aspirat "n pipet pn la
diviziunea ),@. /ac diluia a fost =?=) se "nmulete cu =).
Erori "n numrarea leucocitelor pot fi erori de recoltare, de pipetare i diluare,
datorate examinatorului, aparaturii i erori inerente metodei.
2ariaii fiziologice!
-efortul digestiei poate induce o hiperleucocitoz cuprins "ntre =)))) i ())))
leucocite ? mm
4
. Hneori persoane sensibilizate fa de anumite alimente prezint ca
urmare a ingerrii acestora o leucopenie sub 4))) leucocite ? mm
4
.
-efortul muscular intens i susinut produce hiperleucocitoz pn la ())))
leucocite ? mm
4
.
-nou nscutul are un numr de leucocite cuprins "ntre =())) i ()))) leucocite ?
mm
4
.
-la femei "n timpul sarcinii se constat o leucocitoz pn la =())) leucocite ? mm
4
.
9n timpul travaliului numrul acestora poate crete pn la 4)))) leucocite ? mm
4
- exist i leucopenii fiziologice, unele congenitale cu valori "ntre ()))-4)))
leucocite ? mm
4,
unele permanente altele temporare.
5orec&ia re%ultatelor

9n cazul numrtorilor automate numrul de leucocite poate fi uneori fals
crescut datorit prezenei de eritroblati, agregate de trombocite sau fibrin
crioglobuline sau criofibrinogen, eritrocite nelizate etc. Erorile pot fi corectate prin
examinarea frotiului de snge.
9n camera de numrat nu se poate face deosebirea "ntre

leucocite i
eritroblati, numrul gsit reprezentnd suma elementelor nucleate. Eritroblatii se
evideniaz cu ocazia examinrii frotiului de snge, determinndu-se numrul lor la
=)) de leucocite. Rumrul real de leucocite se calculeaz din formula!
Rr real de leucocite>
=)) ? =))
=)) ?
asti *reritro'l
llx cleate *rcelulenu
+

+umrtoarea Bn camer a eo%ino!ilelor

1rincipiu. .ngele recoltat este amestecat "n pipete speciale cu o soluie de aceton-
eozin care distruge celelalte celule pstnd eozinofilele pe care le coloreaz slabi
este apoi introdus "n camera de numrat unde elementele se numr pe o anumit
suprafa i "ntr-un anumit volum.
<ateriale necesare!
-materiale necesare recoltrii sngelui venos sau capilar
-pipet 1otain pentru leucocite
-camer de numrat #S\rPer, S\rPer--\rP, 0oreaev, Rageotte*
-lichid de diluie! soluie aceton-eozin! eozin soluie apoas ( 6........@ ml
aceton.....................................@ ml
ap distilat..............................C) ml
#soluia se conserv la frigider la $%B ', se filtreaz "nainte de folosire. .e
"ntrebuineaz =@ zile de la preparare.*
-microscop optic.
-ehnic.
=. 1regtirea camerei de numrat const "n degresarea camerei i "n aplicarea
lamelei dup umezirea uoar a marginilor acesteia astfel "nct s se realizeze
un contact intim "ntre lama groas i lamel demonstrat prin apariia inelelor
ReVton. I bun aderen a lamei i a lamelei este foarte important pentru
realizarea unui volum constant al camerei de numrat.
(. /in sngele recoltat se aspir "n pipeta 1otain pentru leucocite pn la
diviziunea = citirea fcndu-se cu pipeta "n poziie vertical. /ac sngele
depete uor diviziunea, prin atingerea vrfului pipetei cu o hrtie de filtru
coloana de snge se poate potrivi exact pn la diviziunea dorit.
4. .e terge sngele de pe pereii exteriori ai pipetei i se introduce pipeta "n
flaconul cu lichid de diluie. .e aspir lichidul pn la diviziunea ==. 1ipeta
se aeaz "n poziie orizontal i se cuprinde "ntre degetul mare i cel
milociu, apoi se agit viguros de 4) de ori pentru omogenizare. 1n la
numrtoare pipeta rmne "n poziie orizontal.
%. Hmplerea camerei de numrat se face dup 4 minute i "ndeprtarea primelor
picturi din pipet. 2rful pipetei se apropie de marginea lamelei aplicat pe
camera de numrat i se las s intre prin capilaritate o cantitate de lichid
asfel "nct reeaua s fie acoperit "n "ntrgime fr s intre bule de aer sub
lamel i fr ca lichidul s trec "n anurile laterale sau lamela s se
deplaseze. /ac toate aceste condiii nu sunt respectate operaia se repet
dup tergerea camerei.
@. Eozinofilele cu granulaiile lor strlucitoare se disting net de fondul colorat "n
roz "n timp ce toate celelalte leucocite se vd ca nite unbre. Rumrarea
eozinofilelor se realizeaz ct mai repede dup recoltare pentru a evita
distrugerea granulaiilor care permit recunoaterea acestora. .e examineaz
camera la microscop i se numr patru sau cinci cmpuri de = mm
(,
delimitate prin linii triple. 9n interiorul acestora se numr elementele din
interiorul ptratelor cu suprafaa de =?(@ mmU, cele din interiorul ptrelelor
i cele de pe dou margini, mereu aceleai, de exemplu stnga i sus. pentru a
evita dubla numrare a elementelor.
D. 'alcul! pentru a stabili numrul elementelor de pe = mmU se "mparte numrul
total obinut la % sau la @. Rumrul de eozinofile dintr-un mmFse calculeaz
"nmulind cifra obinut cu =) pentru a corecta "nlimea camerei #=?=)mm* i
cu () pentru a corecta diluia #=?()* dac sngele a fost aspirat "n pipet pn
la diviziunea ),@. /ac diluia a fost =?=) se "nmulete cu =).
2alorile normale sunt cuprinse "ntre ())-%)) elemente ? mm
4
.
'reterea numrului de eozinofile, eozinofilia, se "ntlnete "n stri alergice, "n
hipervagotonie
Reducerea numrului lor, eozinopenia, se "ntnete "n boli infecioase, arsuri, oc
post operator, dup administrare de clorhidrat de colin, adrenalin, ,'-3,
cortizon etc.
Explorarea hemosta%ei
3emostaza fiziologic este generat de o serie complex de mecanisme care implic
factori biochimici, celulari i umorali reprezentai de celulele endoteliale vasculare,
de matricea subendotelial, de trombocite precum i de factorii coagulrii i
fibrinolizei.
Explorarea hemostazei cuprinde o serie de teste care sunt destinate explorrii
hemostazei primare ce implic "n principal factori vasculari i trombocitari,
hemostazei secundare respectiv factorilor plasmatici ai coagulrii precum i
mecanismelor fibrinolizei.
Explorarea hemosta%ei primare se poate realiza prin efectuarea urmtoarelor teste!
-<surarea timpului de sngerare
-/eterminarea fragilitii capilare
-.tudiul trombocitelor constnd "n!
numrarea trombocitelor
studiul morfologiei i distribuiei trombocitelor pe frotiul sanguin
studiul funciilor trombocitate! adezivitate, agtregabilitate, produceri de factori
trombocitari
Timpul "e sngerare (TS*
1rincipiu! -. reprezint timpul scurs de la practicarea unei inurii capilare pn la
formarea, "n locul respectiv, a trombusului plachetar care oprete scurgerea sngelui
marcnd momentul final al instalrii hemostazei primare.
-. ofer indicii preioase asupra a dou din mecanismele hemostazei,
vascular i plachetar, prin colaborarea crora se formeaz trombusul plachetar.
Rezultatele sale depind de calitatea peretelui vascular, de numrul i funcia
plcuelor sanguine, de factorul von Aillebrand i de fibrinogen.
<etodele cele mai larg utilizate pentru realizarea acestui test sunt! /uPe, JvT, JvT-
SorchgrevinP.
"etoda +uke permite msurarea duratei sngerrii provocat prin incizia unei zone
mediane a lobului urechii.
<ateriale necesare!
- port-ac tip +rancPe "n trus, cu lanete interanabile, sterilizabile,
- vat, eter,
- hrtie de filtru,
- cronometru.
-ehnic. /up dezinfecia pielii cu eter i nu cu alcool, se spriin lobul urechii pe un
dop de penicilina i se incizeaz ferm pielea cu laneta #lime de =,@ mm, reglat la
o adncime de 4 mm*, declannd concomitent cronometrul. /in 4) "n 4) de secunde
se culeg picturile de snge pe o hrtie de filtru, prin absorbie i prin apsare pe
incizie. 'nd hrtia de filtru nu se mai coloreaz se oprete cronometrul, notndu-se
timpul parcurs. .e practic testul i la cealalt ureche i se face media rezultatelor
obinute.
2alorile normale sunt cuprinse "ntre ( M % minute. 2alori peste @ minute sunt
patologice indicnd o tulburare determinat fie de trombocitopenii fie de
trombocitopatii, boala von Aillebrand sau diateze vasculare pure dar i dup ingestia
de aspirin.
-. nu se practic pacienilor care se afl sub tratament cu aspirin, derivai salicilai,
sau au trombopenii severe.
"etoda ,v# const "n practicarea unei uoare staze venoase la nivelul antebraului
care determin mrirea presiunii sanguine "n capilare "n vederea eliminrii aa
numitului tonus capilar, dup care, se realizeaz dou incizii i se apreciaz durata i
abundena hemoragiei provocate.
<ateriale necesare!
- lame 0illette, chirurgicale nr. 4.
-tensiometru
-hrtie de filtru
-cronometru
-ehnic. .e aplic pe bra maneta aparatului de tensiune fixat la o presiune de %)
mm3g. 1e faa anterioar a antebratului aseptizat i uscat se practic dou incizii
paralele, pe o lungime de =)mm, cu o adncime de ( mm i la o distan de ( cm una
fa de alta. /e la aplicarea presiunii pn la efectuarea inciziilor nu trebuie s treac
mai mult de D) de secunde. .e pot utiliza ( lame sterile montate pe un suport special
sau scarificatoare pentru practicarea automat a timpului JvT care uureaz mult
efectuarea inciziilor. /in 4) "n 4) de secunde se culeg picturile de snge care se
scurg prin polul inferior al fiecrei incizii, pe o hrtie de filtru.'ronometrul declanat
"n momentul practicrii inciziilor se oprete "n momentul "ncetrii sngerrii de la
fiecare incizie. Rezultatul este dat de media timpilor obinui i poart denumirea de
-. primar.
2alorile normale sunt cuprinse "ntre 4 M C minute. Jnterpretarea abaterilor de la
normal sunt acelai ca la metoda /uPe. <etoda JvT este mai sensibil dar mai puin
acceptat de pacieni
"etoda ,v# - Borchgrevink. .e efectueaz dup (% de ore de la aplicarea metodei JvT
i const din "ndeprtarea crustelor formate la nivelul inciziilor cu autorul unui
vaccinostil urmat de pornirea cronometrului la reapariia sngerrii msurndu-se
timpul pn la oprirea acesteia. 2aloarea msurat se numete -. secundar i are
valori normale "ntre ( M D minute.
Testul !ragilit&ii capilare$
"etoda prin compresiune .semnul garoului/0
1rincipiu! .e msoar rezistena respectiv fragilitatea capilarelor la nivelul plicii
cotului, apreciind numrul de peteii formate dup o compresiune standard produs
de brasarda unui tensiometru sau o depresiune standard realizat prin aplicarea unei
ventuze. -estul apreciaz funcionalitatea i implicit integritatea peretelui capilar.
"etoda prin depresiune0 .e aplic ventuza aparatului 7avollaT la nivelul plicii
cotului provocnd o presiune negativ de 4) mm3g la copii i %) mm3g la aduli
pentru o durat de ( minute. .e numr apoi peteiile formate "n aria delimiat de
circumferina ventuzei #diametrul > () mm* .e efectueaz dou determinri, una
deasupra i una dedesuptul plicei, lundu-se "n considerare cea mai net.
"etoda prin compresiune. 1e braul pacientului, la o distan de 4 cm de plica
cotului, se aplic mneta unui tensiometru realizndu-se o compresiune egalcu
media dintre valoarea tensiunii arteriale maxime i minime pe o durat de @ minute.
.e decomprim, se scoate maneta i dup un minut se numr peteiile cuprinse pe
o arie de () mm
(
.
Rezultate!
2alori normale! negativ > "ntre ) M =) peteii.
2alori patologice! slab pozitiv #$* "ntre =) i () peteii
pozitiv #$$* "ntre () i %) peteii
pozitiv #$$$* "ntre %) i D) peteii, unele putnd deveni confluente
intens pozitiv #$$$$* N D) peteii, "n maoritate confluente
Rezistena capilar sufer variaii fiziologice fiind mai sczut la copii i femei fa
de cea la brbatul adult. Rou nscuii au rezistena capilar mai crescut ea
msurndu-se "n acest caz "n fosa subclavicular sau pe omoplat. Rezistena capilar
este mai crescut seara iar la femei prezint i variaii lunare fiind mai redus "n
timpul menstrelor i "n sarcin.
Rezultate pozitive se "ntlnesc "n trombocitopenii, "n maoritatea trombocitopatiilor,
"n unele trombocitoze, "n hepatite, "n hipertensiune arterial, "n unele intoxicaii
medicamentoase, "n diabet, "n avitaminoza ', "n purpurele vasculare imuno-alergice,
"n benzenism etc.
Stu"iul trom#ocitelor
-rombocitele pot fi analizate pe criterii cantitative, calitative #funcionale* i
morfologice, referitoare la dimensiunea i structura acestora.
*umrarea trom'ocitelor0
Rumrarea trombocitelor se realizeaz prin microscopie direct, "ntr-o prob de
snge integral sau plasm bogat "n plachete diluat cu o soluie care produce
eritroliz impiedicnd "n acelai timp agregarea sau dezintegrarea trombocitelor
1rincipiu!
.ngele amestecat cu lichid de diluie "n pipete speciale, este introdus "n
hemocitometru "ntr-un volum bine determinat, unde elementele sunt distribuite
uniform i numrate pe o reea anumit.
<ateriale necesare!
-<ateriale necesare pentru recoltarea sngelui capilar sau venos.
-1ipeta 1otain pentru eritrocite
-7ichidul de diluie trebuie s menin integritatea elementelor care urmeaz
a fi numrate i s lizeze celelalte tipuri de celule8. 7ichidul de diluie folosit pentru
numrarea trombocitelor este soluia +eissleT sau soluia de oxalat de amoniu
constituit din!
Ixalat de amoniu..............=g
Ra
(
E/-,................),)=g
,p distilat.....................=))ml.
.
-'amera de numrat sau hemocitometrul
- <icroscopul optic se folosete utiliznd obiectiv uscat, ()x sau %)x , ocular
=) sau Ei iluminare slab.
-ehnic. .e folosete snge capilar prelevat din vrful degetului printr-o
"neptur franc sau snge venos. /iluia se face "n pipete 1otain pentru eritrocite,
aspirnd snge pn la diviziunea = i apoi diluent pn la diviziunea =)= #diluie de
=?=))*. .e agit pipeta ( minute, se las "n repaus 4) de minute #pentru a obine o
liz perfect a eritrocitelor* se agit din nou ( minute, se las s cad 4-% picturi i
se "ncarc hemocitometrul. ,cesta se las "n repaus @ minute pe platina
microscopului # Jn atmosfer umed, sub o plac 1etri, cptuit cu hrtie de filtru
umed. Rumrtoarea se face pe camera S\rPer--\rP #ptratul pentru eritrocite*.
Efectuarea numrrii se face micnd constant viza micrometric astfel "nct
plachetele apar ca nite mici corpusculi refringeni, izolai. .e numr plachetele de
pe ()) de ptrele #= ptrat mic > =?%)) mm
(
*. 'ifra obinut se "nmulete cu (
#pentru aducerea la = mm
(
*, cu =) #pentru "nlimea camerei* i cu =)) #pentru a
corecta diluia*.
9n cazurile de trombocitemii se aspir snge "n pipeta 1otain pentru hematii numai
pn la diviziunea ),@, diluentul pn la =)= #diluie =?())* inndu-se cont la
calculul final al numrului de trombocite #nr. plachete de pe ()) ptrele x ( x =) x
())*.
9n cazurile de trombopenii diluia se va face "n pipeta 1otain pentru leucocite
aspirndu-se snge pn la diviziunea ),@ i diluent pn la diviziunea ==8 se numr
@ grupe de cte =D ptrele i se "nmulete rezultatul cu =))) #nr. plachete de pe 5)
ptrele x @ #pentru aducerea la =mm
(
* x =) #"nlimea camerei* x () #diluia*.
2alori normale! =@) ))) M %))))) ?mm
4
.
Rezultatele obinute se coroboreaz "ntotdeuna cu cele obinute prin
examinarea frotiului sanguin care permite o apreciereaproximativ a numrului
acestora pe lng studiul morfologiei i modalitii de dispunere a trombocitelor pe
frotiu.
Rumrarea trombocitelor reprezint o metod delicat, cu multiple posibile
cauze de eroare, materialul utilizat trebuind s fie perfect splat, degresat i uscat,
puncionarea venei sau a pulpei degetului trebuind efectuat franc, pentru a evita
orice iniiere a procesului coagulii. /easemenea, umplerea pipetei trebuie realizat "n
coloan continu, exact pn la diviziunea corect, iar lichidul de diluie trebuie s
fie perfect limpede. 'hiar i numrarea propriu-zis se poate constitui "n cauze de
eroare dac nu se face disticia "ntre trombocite i praful cu strlucire intens, strome
eritrocitare sau de limfocite mici, bacterii i levuri.
Rumrtoarea electronica se realizeaz "n analizoarele automate de hematologie
"mpreun cu numrarea leucocitelor i a hematiilor, de cele mai multe ori pe probe
de snge recoltate pe E/-, ca anticoagulant. 'ele mai multe analizoare numr
impreun trombocitele i hematiile difereniindu-le apoi dup mrimea lor, cele mai
mici fiind considerate trombocite. ,ceast tehnioc este supus erorii dac numrul
leucocitelor este mai mare de =)) )))?Yl, "n cazul unei fragmentri eritrocitare
severe, dac lichidul de diluie conine particule externe, dac trombocitele agreg
sau dac procesarea probei este prea "ndelungat.
2ariaii fiziologice!
- valori sczute "n prima zi de via a noului nscut
- valori sczute premenstrual
- valori crescute dup efort fizic intens sau dup expunerea la
altitudine.
2ariaii patologice!
2alori sczute #trombocitopenii* prin!
defecte de producere! - trombocitoz diminuat #iradiere medular, toice
medulare, infecii, invadare medular*.
- trombocitoz ineficient #deficit de vitamin S=(, acid folic,
mielodisplazii*.
anomalii de repartiie M hipersplenism
distrucie exagerat! - consum excesiv #proteze vasculare i valvulare,
purpur trombotic trombocitopenic, 'J/*
- distrucii prin mecanism imun M alloanticorpi #sarcin, transfuzii*,
autoanticorpi, reacii imunoalergice.
- Jdiopatic #1-J*
Rumrul trombocitelor poate fi sczut i "n timpul chimioterapiei sau al
tratamentelor cu! penicilin, cloramfenicol, strptomicin, carbamazepin, metildopa,
fenilbutazon, indometacin, salicilai, diuratice tiazidice, sulfonamide, heparin,
antidepresive triciclice
2alori crescute "n!
trombocitoze reactive! - postsplenectomie.
- dup intervenii chirurgicale
- boli infectioase
- dup hemoragii acute
- anemie feripriv
- cancere
- dup tratament cu vitamina S=( sau acid folic "n anemia Siermer.
trombocitemii! - sindrom mieloproliferativ cronic #trombocitemia esenial,
policitemia vera, leucemia granulocitar cronic, metaplazia mieloid cu
mielofibroz*
&xplorarea 1unciilor trom'ocitare
+unciile "ndeplinite de trombocite pot fi clasificate "n funcii dinamice i funcii
tromboplastice.
)unciile dinamice ale trombocitelor se evideniaz prin urmtoarele
teste!adezivitate, agregabilitate i retracia cheagului.
A"e%ivitatea plachetar
1rincipiu! msurarea descreterii numrului de plachete dintr-un eantion de snge
care vine "n contact cu o suprafa strin #:in vivo;- stratul subendotalial, :in
vitro;- sticl sau metal* la temperatura de 4EB ', pentru un timp standardizat.
,dezivitatea plachetelor oac un rol fundamental "n formarea trombusului plachetar,
fiind unul dintre stadiile precoce ale hemostazei.
,dezivitatea :in vivo;.
<etoda SorchgrevinP msoar adezivitatea :in vivo;, folosind tehnica JvT pentru
timpul de sngerare.
-ehnic! se face o numrtoare de trombocite din snge venos sau capilar prelevat
din pulpa degetului #proba )*. , doua numrtoare de trombocite se efectueaz din
sngele prelevat cu o pipet 1otain, de la nivelul inciziei cutanate, "n primul, "n al 4-
lea i al @-lea minut dup incizie #probele =, (, 4*. Rumrul de plachete sanguine
reinute la nivelul leziunii vasculare este dat de diferena dintre numrul de plachete
al probei ) i media determinrilor efectuate pe probele =, ( i 4. Rezultatul se
exprim sub form de procenta, baza de calcul fiind numrul de plachete al probei
).
2alorile normale sunt cuprinse "ntre 4)6 i D)6
,dezivitatea :in vitro;
1oate fi studiat prin mai multe metode! Sreddin, SobeP-'epelaP, 3ellem,
.alzmann, Aright.
<etoda Sreddin modificat are ca principiu realizarea unui contact amplu "ntre
plachete i suprafaa de sticl prin rotirea sngelui citratat "ntr-un flacon de sticl la
4EB ', un timp standard. .e numr plachetele "nainte i dup rotire, stabilindu-se
procentul de plachete adezive.
<ateriale necesare!
- balon de sticl cotat de (@ ml, nesiliconat, #nehidrofugat*,
- dispozitiv pentru rotire lent, constant #=@ rotaii?min.*,
- baie termostatic reglat pentru 4EB '.
-ehnic. .e recolteaz 4 ml de snge cu seringa siliconat i ac ar`uadizat! proba de
snge se toarn peste citratul trisosic din eprubeta gradat siliconat #o parte citrat i
C pri snge*. .e omogenizeaz prin basculare lent. .e pune o pictr de snge pe o
lam parafinat din care se recolteaz proba J pentru numrarea plachetelor.
/in proba de snge bine omogenizat, se iau ( ml care se pun "n balonul cotat de (@
ml, nesiliconat. ,ceste se aeaz oblic "n baia termostatic la 4EB ', ancorat de
dispozitivul de rotire, prin intermediul unui dop de cauciuc, fixat de axul rotitor i
introdus "n orificiul gtului balonului. Rotirea # =@ ture ? min* se face timp de ()
minute. .e oprete aparatul i din balonul aflat "n poziie "nclinat prelevm o
pictur de snge pe lama parafinat din care executm o nou nimrtoare de
plachete. /iferena dintre rezultatele celor dou numrori arat numrul de plachete
care au aderat.
Rezultatul se exprim "n procente i se calculeaz raprtnd la numrul de plachete
din proba J diferena dintre numrul de plachete din proba J i numrul de plachete
din proba JJ totul "nmulindu-se cu =)).
2alorile normale sunt cuprinse "ntre(@6 i @)6.
2ariaii patologice sunt reprezentate de!
'reteri ale adezivitii din strile de trombofilie cum se "ntmpl "n ateroscleroz,
obezitate, diabet zaharat al adultului.
.cderea adezivitii din uremii, trombastenii, boala von Aillebrand, boala Sernard-
.oulier.
Agrega#ilitatea plachetar
Exist diferite modaliti de studiu al agregrii plachetelor care permit s
explice dac alungirea -. este datorat unui defect de reactivitate al membranei
plachetare la agentul agregant extrinsec sau se datoreaz unei anomalii a eliberrii de
,/1 intraplachetar, diminurii coninutului plachetar "n ,/1 sau unei eliberri
deficitare a acestuia prin membrana plachetar "n mediul exterior.
:Jn vivo; agregarea este indus de ,/1, prosteglandine i tromboxan.
:Jn vitro; , agregarea placetelor poate fi indus direct, prin adugarea unei
soluii de ,/1 sau adrenalin "n concentraii mari, sau indirect, prin utilizarea unui
agent inductor al eliberrii din plachete a ,/1 #epinefrin, colagen, ristocetin*.
,gregarea trombocitar indus direct sau indirect poate fi ulteror studiat la
microscop, cu autorul fotometrului sau utiliznd agregametrul.
.tudiul la microscop se poate face fie prin numrarea plachetelor dintr-o
prob de plasm, "nainte i dup contactul cu diferii ageni inductori ai agregrii
#,/1, colagen etc.* fie prin observarea momentului apariiei agregatelor i taliei lor
"ntr-un preperat "ntre lam i lamel, la microscopul "n contrst de faz.
+otometrul msoar variaia transmisiei optice a unei probe de plasm bogat
"n plachete, "n prezena diferiilor ageni agregani, "n condiii standard.,gregarea
este cuantificat determinnd msura "n care aceata se clarific pe msura formrii
agregatelor trombocitare care vor sedimenta la captul tubului.
,gregametrul "nregistraz grafic, "n dinamic, curba modificrii transmisiei
optice a unei plasme bogat "n plachete, constant agitat la 4EB ', "n prezena
diferiilor ageni inductori agregani, existnd o relaie direct proporional "ntre
creterea transmisiei optice i agregarea plachetar. 'urbele de agregare sunt
interpretate "n funcie de tipul i de concentraia stimulilor folosii.
,gregarea trombocitar este un proces "n doi timpi determinnd undele
primar i respectiv secundar ale agregrii. Hnda primar este determinat de
aderarea plachetelor una de alta "n prezena unui agonist ca ,/1, epinefrin sau
ristocetin iar cea ecumdar se produce ca urmare a stimulrii plachetelor de a
secreta substane coninute "n organitele lor. Exist agoniti care stimuleaz numai
agregarea primar sau cea secundar i unii care le stimuleaz pe ambele
determinnd o curb de agregare bifazic. 9n plus, concentraii diferite ale aceluiai
agonist produce efecte diferite asupra tipului de agregare primar sau secundar,
exemplu!
- concentraii sczute de ,/1 induc o agregare bifazic,
concentraii foarte mici de ,/1 induc o und primar urmat de
dezagregare iar concentraiile ridicate de ,/1 induc o singur
und larg de agregare. 1acienii cu tulburri ale eliberrii de
trombocite nu vor prezenta rspunsul bifazic la ,/1.
- ,gregarea indus de colagen produce dup o perioad de laten o
singur und de agregare.
- ,gregarea cu epinefrin ca i cea cu trombin este bifazic
- ,gregarea indus de ristocetin este monofazic.
Retrac&ia chiagului
9ntr-un tub de coagulare se introduc @ ml de snge recoltat prin puncie venoas,
tubul introducndu-se imediat "n baie de ap la 4EB '. Retracia cheagului se citete
dup % ore, cnd "n mod normal, cantitatea de ser rezultat trebuie s reprezinte 4)6
pn la %@6 din volumul total al sngelui. 9n cazul "n care cheagul nu se dezlipete
spontan dup 4) sau D) de minute de la coagulare trebuie dezlipit de peretele
eprubetei fr a seciona cheagul. Retracia cheagului este influenat de numrul
hematiilor i de concentraia fibrinogenului.
Retracia cheagului plasmatic
1rincipiu! activitatea plachetelor din ultima faz a coagulrii este apreciat prin
msurarea aciunii trombodinamice a factorului E plachetar , trombostenina, asupra
cheagului de fibrin din plasm, eliminndu-se factorul de eroare legat de prezena
hematiilor dac testul ar fi executat din snge integral.
-ehnic. /up maxim o or de la recoltarea sngelui,
"ntr-o eprubet #diametru =D?=D)* se introduc!
4,% ml .+ $ =,@ ml plasm de la pacient # cu =))))) plachete?mmc* $ ),= ml
trombin sol de @) H?ml
9n a doua eprubet #diametru =D?=D)* se introduc!
4,C ml .+ $ = ml plasm srac "n plachete de la martor $ ),= ml trombin sol de @)
H?ml.
/up ce ambele eprubete se dau peste cap, sunt lsate 4) de secunde "ntr-un stativ i
apoi sunt lsate o or "n baie de ap la 4EB ', practicnd dou decolri ale cheagului,
una la ( minute i a doua la =) minute da la introducerea "n baia de ap.
/up ora de incubaie se examineaz eprubeta martor, "n care cheagul trebuie s
rmn neretractat #lipsa de plachete din prob* i eprubeta test cu cheagul retractat.
/in ambele eprubete cheagurile se apuc folosind o pens , fiind lsate s se preling
uor pe pereii eprubelelor, fr stoarcere. .erul rmas se decanteaz "ntr-un cilindru
gradat, de @ sau =) ml msurndu-se vlumul obinut.
Rezultatul se obine prin "nmulirea volumului msurat cu () i se exprim "n
procente.
2alori normale N 5@6.
)unciile trom'oplastice ale trom'ocitelor pot fi puse "n eviden prin teste ca!
timpul de cefalin, disponibilitatea factorului 4 trombocitar, consumul de
protrombin corectat cu cefalin, testul trombocitar Siggs i /ouglas.
Explorarea hemosta%ei secun"are implic un mare numr de teste care se
adreseaz factorilor plasmatici ai coagulrii, respectiv celor dou mecanisme,
intrinsec i extrinsec, "n care acetia sunt implicai.
Timpul "e coagulare (T5* este un test de explorare global a
coagulabilitii.
"etoda Ba2arov "ilian utilizat frecvent "n practic, are o sensibilitate redus,
obinerea unui rezultat normal neexcluznd existena unui deficit al coagulrii.
Htiliznd snge capilar este util "n cazurile "n care recoltarea venoas este
imposibil #nou nscut, copii, colaps venos*.
-ehnic! pe o lam de sticl se pune o pictur de ser fiziologic. /up puncionarea
pulpei degetului se "ndeprteaz prima pictur iar a doua pictur, mare, este lsat
s cad liber peste pictura de ser fiziologic moment "n care se declaneaz si
cronometrul. 7ama se pstreaz "ntr-o camer umed #cutie 1etrii cu perei tapetai
cu hrtie de filtru umezit*. .e urmrete momentul instalrii coagulrii "nclinnd
uor lama din minut "n minut.
2alorile normale sunt cuprinse "ntre D M =) minute. ,lungirea timpului de coagulare
indic o hipocoagulabilitate sanguin global.
"etoda 3ee4 5hite #-impul de coagulare venoas* are i el o sensibilitate limitat.
-ehnic! .e recolteaz snge venos care se repartizeaz "n dou eprubete, cte = ml,
plasndu-le imediat "n baie de ap la 4EB ', moment "n care se pornete i
cronometrul. Eprubeta numrul = este examinat din minut "n minut "nclinnd-o la
%@B. /ac eprubeta poate fi complet rsturnat, cu cheagul format, se citete valoarea
timpului de coagulare venoas. .ngele din a doua eprubet, rmas nemicat,
coaguleaz mai trziu i se consider momentul "n care "n aceast eprubet apare
cheagul difuz.
2alori normale!
D-=) minute "n prima eprubet
5-=( minute "n a doua eprubet
Timpul HoCell (T$H$* reprezint timpul de coagulare dup recalcifierea unei
plasme citratate bogat "n plachete fr adugarea unui reactiv biologic. ,cest test
studiaz factorii plasmatici ai coagulrii, cu excepia factorului 2JJ, i factorii
trombocitari, reprezentnd i testul de elecie utilizat "n monitorizarea
heparinoterapiei.
-estul poate fi efectuat manual dar "n mod uzual se folosesc analizoare automate
-ehnic. ."ngele recoltat pe anticoagulant #soluie de citrat de sodiu 4,56* "n
raport de C!= este centrifugat la =))) de turaii timp de @ minute pentru obinerea
plasmei bogat "n plachete. 9n eprubete de hemoliz se pipeteaz ).( ml plasm de
cercetat i se incubeaz la 4EB ' #"n baie de ap* ( minute. .e adaug ),( ml 'a'l
soluie ),)(@ molar, moment "n care se pornete i cronometrul. /up D) de secunde
"n care eprubeta rmne nemicat ea se examineaz prin "nclinare uoar din =) "n
=) secunde pn la 5) de secunde i apoi din @ "n @ secunde pn la apariia
coagulrii #filamente dense de fibrin sau un cheag opalescent*. .e lucreaz pe dou
eprubete i se face media
2alorile normale sunt cuprinse "ntre D) i =() de secunde. I alungire a
acestui timp este semnificativ dac depete () de secunde i poate fi de natur
plasmatic sau trombocitar. /iferenierea se poate face prin efectuarea timpului de
tromboplastin parial activat #,1--*. Hn -3 alungit cu ,1-- normal indic o
deficien plachetar. /ac ambele teste sunt alungite deficiena este de natur
plasmatic.
Timpul "e trom#oplastin par&ial activat (ADTT* studiaz
coagulabilitatea plasmatic intrinsec cu excepia factorilor 2JJ i KJJJ, fr a fi
influenat de factorii trombocitari. Reprezint timpul de coagulare al plasmei
citratate, srac "n plachete, la adausul unei soluii de 'a'l ),)(@ molar i a unui
reactiv coninnd o cantitate standardizat de cefalin #fosfolipid extras din placent,
esut cerebral, plante menit s substituie factorul 4 plachetar* i un activator de
suprafa #caolinul, acidul elagic sau silica*. 'aolinul mrete viteza activrii de
contact, fosfolipidul furnizeaz suprafaa pe care pot avea loc reaciile "ntre enzimele
coagulrii i substrat, iar calciul "nlocuiete calciul chelat de anticoagulant. -impul
de coagulare exprimat "n secunde se msoar din momentul adugrii ionilor de
calciu pn "n momentul formrii cheagului.
-ehnic. .e recolteaz snge pe anticoagulant #citrat de sodiu "n raport C!=* din care
se separ plasma srac "n plachete #prin centrifugarea probei de snge timp de =@
minute la (@))g* 9ntr-o eprubet de hemoliz aflat "n baie de ap la 4EB ' se
pipeteaz ),= ml plasm de investigat, ),= ml reactiv ,1-- i ),= ml soluie de 'a'l
),)(@ molar moment "n care se pornete i cronometrul. ae agit uor, se ine "n baie
de ap i se exanimeaz prin "nclinarea uoar a eprubetei pentru a observa
momentul formrii cheagului.
2aloarile normale sunt cuprinse "ntre (5 i %) de secunde.
Timpul "e protrom#in #D$T.* sau timpul buicP #-.b.* exploreaz factorii
plasmatici ai coagulrii implicai "n mecanismul extrinsec #factorii 2JJ, K, 2, JJ care
alctuiesc complexul protrombinic*. Reprezint timpul de coagulare al plasmei
oxalatate sau citratate la adaos de soluie de clorur de calciu i de tromboplastin
tisular..e lucreaz pe plasm srac "n plachete obinut prin centrifugarea probei
de snge recoltat pe soluie de citrat ca anticoagulant "n raport C!= sau a plasmei
bogate "n plachete la @))) de turaii timp de @ minute. -estul poate fi efectuat
manual dar "n mod uzual se folosesc analizoare automate care pipoeteaz reactivii,
incubeaz i citesc momentul apariiei cheagului.
-ehnic. Recoltarea sngelui "n vederea efecturii testelor de hemostaz nu
trebuie precedat de o alt recoltare deoarece poate induce o hipercoagulare reactiv.
,plicarea garoului trebuie s produc o staz venoas moderat i s lase liber fluxul
arterial. .taza venoas excesiv, prelungit, d natere la o activitate fibrinolitic
local care poate interfera cu celelalte determinri.
2enopuncia practicat "n vena antecubital trebuie s fie "ndemnatic i
ferm pentru a evita cea mai mic contaminare cu tromboplastina tisular. .ngele se
recolteaz pe anticoagulant #o parte anticoagulant i nou pri snge* i este
centrifugat "n vederea obinerii plasmei. -1 necesitnd plasm srac "n plachete i
de aceea sngele se centrifugheaz =) minute la @))) turaii?minut.
9ntr-o eprubet de hemoliz =)?=)) aflat "n baie de ap la 4EB ' se pipeteaz
),= ml plasm de cercetat, se adug ),= ml tromboplastin tisular i apoi ),= ml
soluie 'a'l
(
),)(@< #toate pre"nclzite @ minute la 4EB '* moment "n care se
declaneaz cronometrul. /up agitarea coninutului, eprubeta se las linitit =)
secunde. apoi se scoate din baia de ap i "nclinnd-o uor, din secund "n secund,
se urmarete momentul formrii cheagului cnd se va opri cronometrul. 1roba se
lucreaz "n dublu i rezultatul este dat de media valorilor obinute.
2alorile normale sunt cuprinse "ntre ==-=4 secunde.
1rin raportarea valorilor obinute #-b bolnav* la o plasm de martor normal
#-b martor normal*, se obine exprimarea procentual a rezultatului cu valori
normale "ntre E)-=))6, aa numita activitate de protrombin.
Exprimarea "n secunde a -b a fost completat cu cea dat de rezultatul
raportului dintre -b bolnav ? -b martor normal care nu mai este afectat de
variaiile tehnice ale testului. ,ceast modalitate de exprimare a rezultatului menine
"ns variaii sistematice determinate de folosirea de tromboplastine cu sensibiliti
diferite pentru defectele de hemostaz ceea ce a fcut necesar calibrarea
tromboplastinei prin determinarea -b a mai multor martori normali i calcularea
mediei lor geomatrice. .e exprim "ntr-un sistem de coordonate relaia dintre -b
pacieni i media log -b a normalului rezultnd o linie dreapt a crei pant este
denumit Jndex internaional de sensibilitate #J.J*. ,ceasta reflect sensibilitatea
tromboplastinei folosite i poate varia "ntre = i 4. 'unoscnd J.J poate fi calculat
Rata Jnternaional Rormalizat #JRR* care furnizeaz o scal internaional comun
i eficient pentru evaluarea gradului de anticoagulare.
JRR> #Ratio -.b.*
J.J
> antilog #log Ratio -.b. x J.J* 8 Ratio -b >
* #
* ln #
normal T6
av 'o T6
2aloarea J.J se obine prin folosirea rezultatelor unui numr mare de laboratoare
care aplic aceleai recomandri metodologice de calibrare. -romboplastinele cu
sensibilitate mare au J.J mic iar cele insensibile au J.J mare.
TimpuEl "e trom#in (T$T$* reprezint timpul de coagulare al plasmei
citratate dup adugarea de calciu i a unei cantiti cunoscute de trombin. -estul
evalueaz interacia dintre trombin i fibrinogen, apreciind momentele terminale ale
cii comune celor dou mecanisme ale coagulrii, intrinsec i respectiv extrinsec. 9n
urma aciunii trombinei asupra fibrinogenului sunt eliberate fibrinopeptidele , i S.
9n urma clivrii acestora rezult monomerii de fibrin ce formeaz aggregate
solubile. .ub aciunea factorului KJJJ activat de trombin i a ionilor de calciu, are
loc o polimerizare transversal a monomerilor de fibrin, cu formare de fibrin
insolubil.
-impul de trombin poate fi prelungit "n cazul deficienei fibrinogenului
#calitativ i? sau cantitativ* sau a prezenei "n circulaie a anticoagulanilor
circulani activi care interfer cu aciunea trombinei, cum ar fi heparina.
-ehnic. 9ntr-o eprubet de hemoliz, la 4EB ' se pipeteaz ),( ml plasm citratat
aplachetar i ),( ml soluie de trombin i se declaneaz cronometrul. /uZ =)
secunde se urmrete din secund "n secund formarea cheagului. 1robele se
lucreaz "n dublu considerndu-se media valorilor obinute.
2alorile normale sunt de =E s $?- 4 s.
Explorarea !i#rinoli%ei poate fi efectuat prin metode directe cum sunt
determinarea -impului de liz al cheagului euglobulinic #-7'E*, metoda ,strup, sau
determinarea plasminogenului i metode indirecte reprezentate prin evidenierea
produilor de degradare a fibrinei i fibrinogenului #+/1*, etc.

"etodele directe msoar activitatea plasminei i a activatorilor plasmatici
circulani. Timpul "e li% al cheagului euglo#ulinic (TL5E*. -7'E msoar
aciunea fibrinolitic global asupra unui substrat de fibrin endogen. +racia
euglobulinic a plasmei conine fibrinogen, plasminogen, activatorii plasmatici ai
coagulrii i urme de antiplasmin. ,daugarea trombinei "ntr-o soluie de
euglobuline transform fibrinogenul "n fibrin i activeaz plasminogenul. <otivul
principal pentru care plasminogenul #sau produii si activi, "n special plasmina*,
dizolv fibrinogenul, este "ndeprtarea acestuia de inhibitorul su natural din fracia
antiglobulinic #"n principal antiplasmina* 9n euglobulinele preparate din snge
normal , cheagul iniial se dizolv "n (-D ore.
-7'E X D) de minute semnific apariia fibrinolizei patologice 7iza
cheagului este marcat i rapid "n fibrinoliza primar, dar poate fi minim "n
fibrinoliza secundar.. 'hiar "n condiii de fibrinoliz excesiv, de obicei este
suficient fibrinogen pentru a forma un cheag la adugarea trombinei, dar aspectul
acestuia este anormal "nc de la "nceput i liza acestuia se poate produce "n cteva
minute. Hn proces mai puin sever determin o disoluie complet a cheagului "n D)-
C) minute. -7'E este scurtat i "n sngele cu activitate fibrinolitic normal dar cu o
concentraie redus de fibrinogen, cnd o cantitate mai mic de fibrin urmeaz a fi
lizat. 9n acest caz va fi necesar efectuarea unui alt test, li%a plcilor "e !i#rin sau
meto"a Astrup care msoar aciunea fibrinolitic asupra unui substrat de fibrin
exogen, aplicnd euglobulina de la pacient pe o plac standard de fibrin pe care se
va determina gradul de disoluie al cheagului.
-ehnic. Jmediat dup recoltarea sngelui venos pe soluie de citrate de sodiu # o
parte anticoagulant i C pri snge* proba se las la frigider la $ %B ' timp de @
minute, dup care se centrifugheaz =) minute la @))) de ture pentru a obine
plasm fr plachete. /in aceast plasm se transfer ),@ ml "ntr-o eprubet
coninnd C ml ap distilat, se adaug ),)5 ml soluie acid acetic =6 #pentru a
precipita euglobulinele* i se pstreaz la frigider "nc =@ minute, pentru precipitarea
complat a euglobulinelor. 1roba se centrifugheaz din nou @ minute la @))) de
turaii, dup care se "ndeprteaz supernatantul complet #conine factorii antilitici*
prin rsturnarea eprubetei pe o hrtie de filtru, chiar uscnd pereii eprubetei cu fii
de hrtie de filtru. 1recipitatul euglobulinic obinut este dizolvat prin adugarea "n
eprubet a ),@ ml tampon borat, innd eprubeta "n baie de ap la 4EB ' i
amestecnd foarte uor cu o baghet fin. /up dizolvarea complet a precipitatului
se adaug ),@ ml soluie 'a'l
(
),)(@ < i "n aproximativ @ minute se formeaza un
cheag care umple fundul eprubetei, moment "n care se pornete cronometrul.
Eprubeta se las linitit "n baia de ap i se examineaz din =@ "n =@ minute evoluia
cheagului, far a agita eprubeta. .e oprete cronometrul "n momentul disoluiei
complete a cheagului.
2alori normale !
1entru femei > =5) minute $?- 4) minute
1entru brbai > =@) minute $?- 4) minute
Meto"a plcilor "e !i#rin (Astrup*
1rincipiu. /epunerea pe suprafaa unui gel de fibrin bovin a unui volum prccis
msurat de soluie de euglobuline, determin dup un anumit timp de incubare,
apariia "n urul picturii a unui halou de liz al crui diametru permite exprimarea
cantitativ a activitii fibrinolitice. 0elul de fibrin insensibil la aciunea
lizoxchinazelor este sensibil numai la prezena activatorilor sau a plasminei.
/istrugerea prealabil a plasminogenului prin "nclzire face plcile sensibile numai
la aciunea plasminei.
-abelul nr. ,ciunea fibrinolitic pe plcile ,strup
-ipul de plac +ibrin bovin
ne"nclzit
+ibrin bovin
9nclzit la 5)B ?%@ min.
+actori prolitici coninui plasminogen -
Reacia plcii de evideniere
a existenei "n soluia de cercetat
a activatorului indirect #lizoPinaze*
- -
Reacia plcii de evideniere
a existenei "n soluia de cercetat
a activatorului direct #Ginaze*
$ -
Reacia plcii de evideniere
a existenei "n soluia de cercetat
a plasminei
$ $
eterminarea plasminogenului
1rincipiu. .ub aciunea plasminei, format "n urma activrii cu streptoPinaz a
plasminogenului, se produce hidroliza cazeinei cu eliberarea tirozinei care se
msoar prin metode spectro sau fotocolorimetrice. /up un timp de incubaie a
cazeinei cu proba de testat, diferena dintre concentraia "nainte de incubaie i cea
dup incubaie a cazeinei msoar activitatea proteolitic a plasminei din prob, care
va fi convertit prin calcul "n uniti de plasminogen
"etodele indirecte msoar consecinele fibrinolizei asupra fibrinei, fibrinogenului
sau asupra altor factori plasmatici ai coagulrii i cuprind decelarea +/1-urilor, a
nivelului de fibrinogen, a nivelelor factorilor 2JJJ i 2.
eterminarea ,D
Testul aglutinrii complexului latex?anticorpi anti!i#rinogen (calitativ*
1rincipiu. ,nticorpi "mpotriva fragmentelor K, _, / i E din serul antifibrinogenului
uman foarte pur sunt adsorbii de particulele de latex ale reactivului ceea ce va
permite vizualizarea aglutinrii ce se produce "n prezena produilor de degradare ai
fibrinei sau fibrinogenului. 9n serul normal nivelul de +/1 este egal sau mai mic de
=)Yg?ml. ,pariia aglutinrii indic depirea acestui prag i poate fi exprimat
cantitativ utiliznd scara de diluii a lui 7. 1echet conform tabelului de mai os!
Rr.eprubetei = ( 4 % @ D E 5
-ampon #ml* ),5) ),@) ),@) ),@ ),(@ ),(@ ),(@ ),(@
.er pacient #ml* ),() ),@) ),@) ),@) ),@) ),@) ),@) ),@)
/iluie realizat =?@ =?=) =?() =?%) =?D) =?C) =?=4@ =?()(
Echivalentul concentraiei
"n antigen9n serul nediluat
al pacientului #Yg?ml*
=) () %) 5) =() =5) (E) %)%
Echivalentul concentraiei
"n antigen9n serul diluat al
pacientului #Yg?ml*
( = ),@ ),(@ ),=E ),== ),)E% ),)%C@
Trom#elastogra!ia (TEG*
'onstantele trombelastografice
Testul monomerilor "e !i#rin (TM,* -<+ reflect prezena anormal a
monomerilor de fibrin "n plasm. ,pariia trombinei libere "n snge determin prin
aciunea sa asupra fibrinogenului producerea de monomeri de fibrin care "n condiii
normale polimerizeaz "n totalitate i formeaz fibrin insolubil. 9n condiii
patologice o parte din monomerii de fibrin se pot combina cu molecule de
fibrinogen sau cu produii de degradare ai fibrinei rezultai "n timpul fibrinolizei
reacionale din coagularea intravascular, ceea ce "mpiedic polimerizarea lor "n
totalitate.
1rincipiu. ,dugarea "ntr-o prob de plasm srac "n plachete a unei anumite
concentraii de etanol determin desfacerea complexelor monomer-fibrinogen i
monomer-+/1 iar monomerii de fibrin eliberai polimerizeaz sub form de gel.
-ehnic. .ngele venos recoltat pe anticoagulant # o parte soluie de citrat de sodiu i
C pri snge* este centrifugat @ minute la @))) de turaii pentru a obine plasm
srac "n plachete. .e pipeteaz %@) ml de plasm "ntr-o eprubet care se pstreaz
() de minute la $ %B '. .e adaug apoi =@) ml soluie etanol @) 6 agitnd imediat
dup care se las eprubeta nemicat timp de =) minute. 7a sfritul intervalului de
timp se "nclin eprubeta la orizontal i se urmrete aspectul coninutului.
Jnterpretare. Rezultatul este considerat pozitiv "n prezena unui gel. /ac gelul
cuprinde tot volumul din eprubet, fr s lase ser, se noteaz cu $$$$, dac gelul
ocup W din volum i d reprezint ser rezultatul se noteaz cu $$$, dac gelul
reprezint e din volum rezultatul se noteaz cu $$ iar la d cu $
eterminarea grupei sanguine in sistem AFO
I.Principiul metodei
<etoda de determinare a grupelor sanguine in sistem I,S se bazeaza pe
capacitatea anticorpilor regulari#apar la toti indivizii apartinand aceluiasi grup
sanguin* anti-, si anti-S de a recunoaste antigenul de grup sanguin cu care formeaza
complexe, reactie evidentiata macroscopic prin aglutinare$
Hematiile umane normale ,care prezinta antigene de grup , si ?sau S
#aglutinogene eritrocitare*, vor aglutina in prezenta aglutininelor# anticorpilor
specifici * din serurile test ,diriate impotriva acestora#omologe*.
Anticorpii serici pot fi pusi in evidenta utilizand hematii cunoscute # I,,,S * ce
prezinta sau nu antigenele specifice.
/eterminarea grupelor in sistemul ,SI trebuie realizata prin ambele metode!
- determinarea antigenelor ,,S eritrocitare- metoda Feth G'incent #proba globulara*
- cercetarea aglutininelor f,g din ser- metoda Simonin #proba serica*

II.Materiale necesare7
'entrifuga de laborator
.uspensie eritrocitara de cercetat
.er sau plasma de cercetat
.tative
7ame?placa de opalina
1ipete 1asteur
suspensie de hematii-test cunoscute I,,,S
seruri test anti-,S, anti-S si anti-,
ser fiziologic
hartie de filtru
III.Tehnica de lucru:

Reactia de aglutinare poate fi pusa in evidenta prin!
a* macrometode- tehnica pe lama sau in tub
b* micrometode- suportul de reactie este o cartela cu sase microtuburi, din
material plastic transparent, ce prezinta o camera de reactie si o coloana cu
gel prin care , in urma unei centrifugari standardizate, trec si se depun la
fundul microtubului numai hematiile neaglutinate. ,glutinatele sunt oprite
deasupra sau sunt dispersate in coloana de gel ,dand reactii pozitive de
diferite intensitati.
0$Meto"a Feth G'incent (pro#a glo#ulara*
?Tehnica pe lama?
=.= 1lacile de opalina sau sticla trebuie sa fie curate si uscate.
=.( 1e o placa opalina sau de sticla la temperatura camerei #=@-(@['* se
pipeteaza in zone separate# de la stanga la dreapta si respectand ordinea
intotdeauna* o picatura de ser anti-,S , o picatura de ser anti MS si o
picatura de ser anti-, .
=.4 .e adauga o picatura egala cu cea de ser din suspensia @)6 de hematii de
cercetat #in solutie salina sau chiar in plasma sau propriul ser* sau o
picatura ,de =) ori mai mica decat cea de ser ,din butonul de hematii, in
apropierea fiecarei picaturi de ser-test de pe placa.
=.% .e omogenizeaza serul cu hematiile folosind o bagheta de sticla foarte curata
sau un colt de lama ,astfel incat sa se formeze o arie circulara cu diametrul de
aproximativ ( cm..e schimba bagheta pentru fiecare reactie in parte.
=.@..e agita usor placa sau lama si se citeste reactia de aglutinare dupa 4 minute.

Seruri hemotest antiAF antiF antiA H eritrocite "e cercetat
?Tehnica in tu#?
=.= .e repartizeaza in 4 tuburi clar notate#,S,,,S* cate o picatura de suspensie
de hematii de testat.
=.( .e adauga o picatura din fiecare ser-test.
=.4 .e agita usor pentru omogenizare.
=.% .e centrifugheaza un minut la =))) turatii?min.
=.@ 'itirea se face urmarind reactia de aglutinare,prin agitare usoara pe un fond
alb.
6$Meto"a Simonin( pro#a serica*
?Tehnica pe lama?
(.=.1e o placa opalina, la temp. camerei # =@-(@['* se pipeteaza cate o picatura
ser de cercetat, apoi cate o picatura de hematii test #suspensie %@-@)6 in ser
fiziologic*.
(.(..e omogenizeaza serul cu hematiile folosind o bagheta de sticla astfel incat
sa se formeze o arie circulara cu diametrul de aproximativ ( cm. 1entru fiecare
reactie in parte se foloseste o bagheta ? un colt de lama curate.
(.4..e agita usor placa sau lama si se citeste reactia de aglutinare dupa trei
minute.

Hematii O A F H serul "e cercetat

?Tehnica in tu#?
(.=..e repartizeaza in 4 tuburi marcate ,, S si I, cate ( picaturi de ser sau
plasma de testat.
(.(..e adauga o picatura de eritrocite-test ,, S si I.
(.4..e centrifugheaza = minut la =))) turatii?minut.
(.%..e citeste prin agitare usoara pe un fond alb.
IV.Rezultate si interpretarea lor
Pre2enta aglutinarii > reactie pozitiva - anticorpul a reactionat in mod specific cu
antigenul omolog. /enumirea grupei este data de antigenul prezent pe suprafata
hematiei.
3ematiile de grup I nu vor prezenta, in mod normal, reactie pozitiva.
8'senta aglutinarii > reactie negativa
Meto"a Feth? 'incent Meto"a Simonin
Grupa
sang
uina
Ser test
anti?
AF
Ser test
anti?
F
Ser test
anti?
A
Hematii
test
O
Hematii
test
A
Hematii
test F
O(I>J* ? ? ? ? H H
A(J* H ? H ? ? H
F(I* H H ? ? H ?
AF H H H ? ? ?
/e retinut !
- Hn grup sanguin apartinand sistemului ,SI se defineste prin !antigenul de
grup # aglutinogenul * prezent sau absent pe suprafata hematiei !A si?sau F si
anticorpul seric # aglutinina *! I si?sau J prezent la indivizii la care antigenul
omolog lipseste.,stfel, grupa , prezinta antigenul , si anticorpul g, grupa S
prezinta antigenul S si anticorpul f, grupa I nu prezinta nici un antigen dar
prezinta ambii anticorpi f,g iar grupa ,S prezinta ambele antigene si nici un
anticorp.
- ,ntigenele de grup ,SI sunt foarte raspandite, gasindu-se sub forma de
substante comune la multe bacterii, in tesuturi de animale , plante.
- 7a om,antigenele de grup I,S se gasesc si pe celelalte celule sanguine,in
tesuturi si umori.
- Jn mod natural, la acelasi individ nu se vor gasi niciodata aglutinogenul
#antigenul* si aglutinina #anticorpul* omologe.
- /efinirea unei grupe sanguine presupune atat determinarea prezentei
antigenului # metoda Seth- 2incent*, cat si a anticorpilor #metoda .imonin*
eterminarea grupei sanguine in sistem RH
Este un sistem complex ,important datorita imunogenitatii sale# al JJ-lea dupa
sistemul ,SI*, format din %@ antigene, dintre care @ sunt cele mai importante!
/,',E,c,e.
-ermenul de Rh pozitiv sau negativ se refera la prezenta sau absenta la un
individ a antigenului /# cel mai imunogen*, de aceea notarea corecta este Rh#/*
pozitiv si Rh#/* negativ.
,nticorpii nu sunt prezenti in mod natural, ci apar intotdeauna ca urmare a
unei stimulari antigenice.
eterminarea grupei Rh(*
I.Principiul metodei
,ntigenul de grup este pus in evidenta printr-o reactie "e aglutinare la
punerea in contact cu serul anti-/# reactie specifica antigen Manticorp cu fomare de
aglutinate vizibile macroscopic*
.erurile anti-/ pot fi de origine umana #policlonale* sau pot fi produse in
vitro #monoclonale*.

II.Materiale necesare7
'entrifuga de laborator
.uspensie eritrocitara de cercetat
.tative
7ame?placa de sticla?opalina
1ipete 1asteur
Reactivi! seruri anti-/
hartie de filtru
III.Tehnica de lucru:
=.1e o placa? lama de sticla ? opalina sau sticla curata si uscata, la temperatura
camerei #=@-(@['*,se pipeteaza o picatura de ser anti-Rh .
(...e adauga o picatura egala din suspensia de hematii @)6 #in solutie salina sau
chiar in plasma sau propriul ser* sau o picatura de =) ori mai mica din butonul de
hematii si se omogenizeaza serul cu hematiile folosind o bagheta de sticla foarte
curata,un colt de lama sau astfel incat sa se formeze o arie circulara cu diametrul de
aproximativ ( cm.
4. .e agita usor placa sau lama si se citeste reactia de aglutinare dupa 4 minute.
h.e poate determina antigenul / atat cu autorul tehnicii in tub cat si prin
micrometode# descrise la determinarea grupei sanguine in sistem ,SI*.
h Jn mod similar determinarii factorului / se pot determina si ceilalti factori
apartinand sistemului R3.
IV.Rezultate si interpretarea lor
1rezenta aglutinarii > reactie pozitiva, antigenul / prezent.
,bsenta aglutinarii > reactie negativa, antigenul / absent
/e retinut !
,ntigenul / cuprinde mai multi epitopi. 7ipsa unuia sau mai multor epitopi
corespunde fenotipurilor denumite i / partial j Jn aceasta situatie, o
persoana Rh#/* pozitiva se poate imuniza in sarcina sau in urma unei
transfuzii.
I alta situatie particulara este aceea in care Rh / contine toti epitopii dar are
un numar mai mic de situsuri antigenice pe suprafata hematiei ! Rh#/* slab.
Jn aceasta situatie reactia de aglutinare este mai putin intensa sau apare
tardiv.,sfel, un Rh#/* pozitiv poate fi interpretat in mod eronat ca negativ.