CITOLOGIE
Lucrarea
prac)c
1
Microscopia
op)c
Exclusiv
pentru
uz
didac2c
CITOLOGIE
Semestrul
1
16
sptmni
(!
max.
3
absene,
refcute)
LP
1-6
Studiul
celulei
LP
7
Lucrare
de
control
15%
din
nota
nal
- 2
subiecte
curs
- 1
subiect
LP
Exclusiv
pentru
uz
didac2c
LP
8-14
Studiul
esuturilor
LP
15
Recapitulare
LP
16
Examen
prac)c
25%
din
nota
nal
Examenul
nal
60%
din
nota
nal
CITOLOGIE
Obiect
de
studiu
Prin microscopie se examineaz obiectele mici,
cu instrumente care s depeasc,
prin sensibilitate, posibilitile ochiului.
Microscopia
op)c
se
bazeaz
pe
interaciunea
luminii
cu
componentele
obiectului
de
examinat
Exclusiv
pentru
uz
didac2c
Microscopul cu cmp luminos
- Denumit
uzual
microscop
op2c
(M.O.)
- Lumina
trece
prin
preparat
- Include:
-
un
sistem
opGc
i
-
sisteme
pentru
-
a
mica
i
-
a
focaliza
preparatul
Exclusiv
pentru
uz
didac2c
Exclusiv
pentru
uz
didac2c
Microscopul optic (cu cmp luminos)
Ocular
Revolver
Obiectiv
Dispozitiv de deplasare a lamei
Masa microscopului
Condensor
Macroviza i microviza
Sursa de lumin
Exclusiv
pentru
uz
didac2c
Sistemul optic al microscopului
3
sisteme
de
len)le:
- Condensorul
focalizeaz
razele
de
lumin
- Obiec)vul
ofer
imagine
mrit,
real
i
rsturnat
a
obiectului
- Ocularul
-
imagine
nal
mult
mrit,
rsturnat
i
virtual,
la
innit
(nu
necesit
efort
de
acomodare)
condensor
Exclusiv
pentru
uz
didac2c
Caracteristicile microscopului optic
Puterea
de
mrire
Puterea
de
rezoluie
Exclusiv
pentru
uz
didac2c
McGraw-Hill
Companies
/
Junqueira
Histology
Exclusiv
pentru
uz
didac2c
Puterea de mrire
Cine
mrete
imaginea
obiectului
?
Puterea de mrire = produsul dintre puterea
de mrire a obiectivului
i puterea de mrire a ocularului
condensor
Puterea de mrire maxim - 1500
Puterea de mrire i denumirea obiectivelor:
- 4 lup
- 10 ob. de orientare
- 20, 40 ob. de diagnostic histologic
- 60, 100 ob. de diagnostic citologic
La
obiec)vele
cu
imersie,
ntre
obiec)v
i
preparat
se
interpune
o
pictur
de
ulei
de
imersie,
de
obicei
ulei
de
cedru.
Puterea de rezoluie
Ct
de
clar
este
imaginea
?
=
cea
mai
mic
distan
dintre
dou
par)cule
la
care
acestea
pot
vzute
ca
elemente
separate
- depinde doar de lentila obiectivului.
Puterea maxim de rezoluie a MO este de 0,2 m
FORMULA LUI ABB:
d=/ n sin
condensor
= lungimea de und a radiaiei electromagnetice
n= indicele de refracie al mediului dintre preparat i
obiectiv
= din apertura unghiular a obiectivului
La
obiec)vele
cu
imersie
-
uleiul
de
cedru
are
n=1,51
spre
deosebire
de
aer,
care
are
n=1.
Exclusiv
pentru
uz
didac2c
Principiul de funcionare al MO
Preparatul
colorat
este
strbatut
de
lumin
alb
lsnd
s
treac
doar
o
anumit
lungime
de
und.
n
funcie
de
legarea
colorantului
de
diferite
structuri
sau
organite
celulare
se
obine
o
imagine
policrom.
Imaginea
nal
este
aadar
colorat.
Se
pot
observa
att
preparate
xate
i
colorate,
ct
i
nexate
i
necolorate
(ex:
culturi
de
celule).
Exclusiv
pentru
uz
didac2c
Exclusiv
pentru
uz
didac2c
McGraw-Hill
Companies
/
Junqueira
Histology
Utilizarea microscopului optic
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Pornirea
aparatului.
Aducerea
n
poziie
iniial
(obiec)ve,
msu,
condensor).
Poziionarea
lamei
histologice.
Reglarea
distanei
interpupilare
a
ocularelor.
Observarea
cu
obiec)vul
de
4x
(reglarea
cu
macroviza).
Observarea
cu
obiec)vele
de
10x,
40x
(reglarea
cu
microviza).
Aducerea
n
poziia
iniial
Scoaterea
lamei.
nchiderea
microscopului.
Exclusiv
pentru
uz
didac2c
Alte tipuri de microscoape optice
1.
2.
3.
4.
Microscopul
cu
uorescen
Microscopul
cu
contrast
de
faz
Microscopul
confocal
Microscopul
cu
lumin
polarizat
Exclusiv
pentru
uz
didac2c
Microscopul cu fluorescen
LUMINISCENA = proprietatea unor substane de a emite
lumin atunci cand sunt stimulate
Dac stimularea este luminoas -- FOTOLUMINISCEN
FLUORESCENA proprietatea unei substane de a emite
radiaii luminoase doar n timpul stimulrii
FOSFORESCENA proprietatea unei substane de a emite
radiaii luminoase i dup ncetarea stimulrii
Exclusiv
pentru
uz
didac2c
Microscopul cu fluorescen
Imunofluorescena indirect
=Ag + Ac specific (primar) + Ac marcat (secundar)
Imunofluorescena direct
=Ag+ Ac specific marcat
Izolarea antigenului de cercetat
Exclusiv
pentru
uz
didac2c
Microscopul cu fluorescen
ADN
(nucleu)
ARN
(citoplasm)
(acridin-orange)
Exclusiv
pentru
uz
didac2c
McGraw-Hill
Companies
/
Junqueira
Histology
Exclusiv
pentru
uz
didac2c
Microscopul cu fluorescen
Filamente
de
acGn
(uorescein-faloidin)
Nucleu
(DAPI)
McGraw-Hill
Companies
/
Junqueira
Histology
Exclusiv
pentru
uz
didac2c
Microscopul cu contrast de faz
PRINCIPIU
- lumina care trece prin medii cu indici de refracie
diferii i modific direcia i viteza
-microscopul transform aceste diferene n diferene
de intensitate luminoas
U)l
n
studiul
celulelor
vii,
necolorate
a) M.
cu
cmp
luminos
Celule
pigmentare
b)
M.
cu
contrast
de
faz
McGraw-Hill
Companies
/
Junqueira
Histology
Microscopul confocal
Preparatul
este
scanat
n
planuri
focale
succesive
cu
un
fascicul
luminos
focalizat,
apoi
se
reconstruiete
3D
structura
pornindu-se
de
la
imaginile
obinute.
Exclusiv
pentru
uz
didac2c
McGraw-Hill
Companies
/
Junqueira
Histology
Microscopul cu lumin polarizat
Microscopia
cu
lumin
polarizat
permite
recunoaterea
elementelor
colorate
sau
necolorate
alctuite
din
subuniti
foarte
bine
organizate.
(a)
M.
cu
cmp
luminos
bre
de
colagen
(rou),
bre
elas)ce
subiri
i
nuclei
(40)
(b)
M.
cu
lumin
polarizat
sunt
vizibile
doar
bre
de
colagen
(100).
Exclusiv
pentru
uz
didac2c
McGraw-Hill
Companies
/
Junqueira
Histology
[Link]
