Ministerul Educaiei al Republicii Moldova

UNIVERSITATEA DE STAT DIN TIRASPOL

Catedra Chimie

Tez de licen
Determinarea coninutului de acid ursolic i
oleanolic n fructele de pdure prin metoda HPLC
Autor:
Guzun Mariana
studenta facultii:
Biologie i Chimie
specialitatea:
Biologie i Chimie
Coordonator tiinific:
Grigore Filip
Doctor, conf. univ.

Chiinu 2014

Cuprins:
Lista abrevierilor

Introducere

Capitolul I.
1.1.

1.2.

1.3.

Revista literaturii:

Rolul i importana plantelor medicinale i a fructelor de pdure;

1.1.1. Compoziia chimic a plantelor medicinale;

1.1.2. Compoziia chimic a fructelor de pdure;

1.1.3. Valorea terapeutic a plantelor medicinale;

Caracteristica bio-chimic a fructelor de pdure;

1.2.1. Fructele de pdure din familia Cornaceae;

1.2.2. Fructele de pdure din familia Rosaceae;

10

1.2.3. Fructele de pdure din familia Elaeagnaceae;

20

Caracteristica general a acizilor ursolic i oleanolic:

21

1.3.1. Activitatea farmacodinamic a acidului ursolic;

22

1.3.2. Sinteza compuilor derivai din acidul ursolic;

22

1.3.3. Aciunea acidului ursolic asupra organismului omului;

23

1.3.4. Activitatea farmacodinamic a acidului oleanolic;

23

Capitolul II.

Rezultate i discuii:

23

2.1

Esena metodei de analiz Cromatografia de lichide de nalt performan

(HPLC);

23

2.2.

Caracteristicile spectrale ale acidului ursolic. Utilizri sintetice .

25

2.3.

Determinarea coninutului de acid ursolic i oleanolic.

28

Capitolul III.

Partea experimental:

3.1.

Generaliti

3.2.

Extracia fructelor de Corn;

3.3.

Extracia fructelor de Pducel;

3.4.

Extracia fructelor de Mce;

3.5.

Extracia fructelor de Porumbar;

3.6.

Extracia fructelor de Mure;

3.7.

Extracia fructelor de Mslin slbatic;

3.8.
Concluzii
Bibliografie

Lista abrevierilor
HIV-sindromul imunodificienei umane
IR-spectroscopie n infrarou
RMN-rezonana magnetic nuclear
1

H RMN spectrul protonic

13

C RMN spectrul carbonic

CSS-cromatografie n strat subire

CPC-cromatografie pe coloan
AND - acid dezoxiribonucleic
ARN - acid ribonucleic
TPA - 12-O-tetradecanoiltorbol-13-acetat
HPLC-cromatografie cu lichide de presiune nalt
PTLC - cromatografie preparativ n strat subire
THF-tertahidrofuran
DMAP-N,N-dimetilaminopiridin
IUPAC-Uniunea Internaional pentru Chimie Pur i Aplicat
NAD-nicotinamidadimecleotid
PCC-clorocromat de piridiniu

Introducere
nc din cele mai vechi timpuri i pn acum aproximativ un secol, remediile
naturiste, bazate pe valorificarea plantelor medicinale i a fructelor de pdure au
constituit principala form de medicin.
n prezent plantele reprezint o surs de materii prime importante pentru
industria farmaceutic i cosmetologic. Ele ne ofer o gam larg de substane
biologic active ce posed o serie de proprieti terapeutice importante pentru tratarea
unor boli sau deficiene. Utilizarea plantelor, att n farmaceutic, ct i n
cosmetologie, necesit o cercetare profund a compoziiei lor chimice i a
proprietilor lor. n botanic, dar i n farmacologie, plantele medicinale i fructele
de pdure sunt recunoscute pentru c ofer un efect benefic, deseori terapeutic,
asupra organismului uman.
Evoluia extrem de rapid n dezvoltarea metodelor de valorificare a
substanelor biologic active din ultimii ani a contribuit la extinderea i aprofundarea
metodelor de cercetare i analiz a acestora, valorificarea lor i aplicarea lor n scopul
elaborrii unor remedii att n tratarea diferitor boli interne, ct i n rezolvarea unor
probleme legate de aspectul exterior. De asemenea, se fac cercetri n direcia lrgirii
fondului de materii prime vegetale i valorificarea acestora. Regnul vegetal continu
s prezinte principalul furnizor de compui fitochimici utilizai n diferite ramuri
industriale cum sunt cele ale produselor farmaceutice, alimentare, cosmetice,
agrochimice, cu valori comerciale.
Interesul pentru speciile de Corn, Pducel, Mce, Porumbar, Mure i Mslin
slbatic este sporit n Republica Moldova i n Romnia, datorit faptului c aceste
specii conin ulei volatil, flavonoide i acizi terpenici n special acid ursolic i acid
oleanolic. Aceste principii active imprim importante efecte terapeutice: antiseptic,
antiinflamator, antispastic, antioxidant i altele.
5

Scopul lucrrii se refer la cunoaterea compoziiei chimice a speciilor mai

rspndite n flora spontan a Republicii Moldova, mai exact a fructelor de Corn,
Pducel, Mce, Porumbar, Mure i Mslin slbatic, care sunt frecvent utilizate de
ctre populaia local n alimentaie sau pentru tratamente.
Acesta este un studiu de pionerat, care va oferi informaii importante despre
calitatea materialului fitofarmacologic local i va justifica din punct de vedere
tiinific necesitatea valorificrii acestor specii n scopuri terapeutice, datorit
coninutului nalt de principiilor active pe care acestea le conin.
Ne-am propus s determinm coninutul de acid ursolic i acid oleanolic n
specile menionate printr-o metod de analiz modern: cromatografia cu lichide de
nalt performan (HPLC). Aceast metod permite cuantificarea exact a
componentelor n extractele de origine vegetal, care reprezint nite amestecuri
foarte complexe.
Pe durata efecturii lucrrii au fost realizate obiectivele:
Studiul informativ al literaturii de specialitate;
Descrierea sistematic a fructelor de pdure din flora spontan a R. Moldova;
Colectarea i cercetarea fitochimic a fructelor de pdure;
Extragerea fructelor i pregtirea probelor pentru analiz;
Izolarea acidului ursolic din surse locale, obinerea derivailor si de sintez i
analiza confirmarea structurii lor prin metode spectrale IR, 1H RMN i 13C
RMN.
Determinarea coninutului de acid ursolic i acid oleanolic n fructele de pdure
prin metoda HPLC;
Sistematizarea rezultatelor obinute i compararea lor cu cele din literarura de
specialitate.

Capitolul I.
1.1.

Revista literaturii

Rolul i importana plantelor medicinale i a fructelor de pdure.

Plantele medicinale i fructele de pdure sunt produse horticole folosite de oameni

n alimentaie sau n terapeutic. Aceste produse pot fi clasificate dup caractere
generale comune, dar i din punct de vedere botanic, comercial, tehnologic, horticol,
precum i dup modul de ntrebuinare al acestora. Delimitarea ntre plantele
medicinale i fructele de pdure se poate face din punct de vedere tehnologic, dup
posibilitile lor de utilizare ca materie prim n industria alimentar sau
farmaceutic, sau dup componentul chimic cu ponderea cea mai mare. Sub
denumirea de plante medicinale i fructe de pdure se neleg, n aceast lucrare,
organele plantelor i arbutilor fructiferi care conin substane active capabile s
exercite o influen pozitiv asupra organismului uman.
Plantele medicinale au reprezentat din toate timpurile materii prime pentru tratarea
diverselor afeciuni, fiind remedii de baz sau, uneori, aproape singurul remediu n
vremurile de demult. La nceputurile medicinei, tratarea bolilor se fcea, n principal,
cu ajutorul plantelor medicinale i, alturi de materialul vegetal, erau folosite materii
de origine animal sau altele de origine mineral. Folosirea plantelor medicinale
pentru vindecare sau prevenirea unor boli dateaz de circa 7000 de ani, cele mai
vechi date scrise referitoare la utilizarea plantelor medicinale fiind ntlnite la
popoarele din Egiptul antic i China antic. Popoarele din Grecia antic au motenit
bogate cunotine medicale de la cele din India, Mesopotania, China i Egipt.
Rezultatele cercetrilor efectuate de-a lungul timpului n acest domeniu au
demonstrat c valoarea terapeutic a plantelor medicinale se datoreaz relaiei
stabilite ntre structura chimic a substanelor active identificate i extrase din
7

materialul vegetal i aciunea farmacodinamic pe care acestea o exercit asupra

elementelor reactive ale organismului.
1.1.1. Compoziia chimic a plantelor medicinale.
Plantele medicinale i datoreaz aciunea terapeutic uneia sau mai multor
substane chimice produse n celulele acestor i denumite principii active.
Principalele clase de substane organice din organismele vii, respectiv glucidele,
lipidele i protidele, formeaz aa numitul metabolism principal, din care deriv apoi
toi compuii metabolismului secundar care, includ terpenele, steroizii, antocianii,
fenolii i polifenolii ntre care se gsesc i principiile active.
1.1.2. Compoziia chimic a fructelor de pdure.
Printre produsele pdurii un loc important l ocup fructele de pdure. Recoltarea
lor i-a preocupat pe oameni nc din timpuri strvechi, ele constituind o nsemnat
resurs de hran. Multe din speciile de arbori i arbuti fructiferi au fost adaptate cu
timpul n culturi, fcnd obiectul pomiculturii. Datorit coninutului ridicat n
vitamine (A, B1, B2, B6, C, D, E, K, PP) i substane nutritive (protide, lipide,
glucide, sruri minerale), fructele de pdure completeaz i diversific alimentaia
omului. Astfel, necesarul zilnic de vitamine reclamat de buna funcionare i
dezvoltare a organismului poate fi satisfcut n cea mai mare parte prin consumul de
fructe.
1.1.3. Valorea terapeutic a plantelor medicinale.
Are la baz relaia dintre structura chimic a substanelor active, numite i
principii active i aciunea lor farmacodinamic pe care o exercit asupra
elementelor reactive ale organismului. Faptul c majoritatea plantelor medicinale au o
compoziie chimic complex ncepnd de la 2-3 compui pn la 30-40 substane
chimice identificate n unele plante, cum ar fi speciile genurilor: Rosa, Crataegus,
8

Rubus, Cornus etc., explic i proprietile farmacodinamice multiple ale uneia i

aceeiai plante.
1.2.

Caracteristica

chimica

fructelor

biode

pdure.
1.2.1. Fructele de pdure din
familia Cornaceae.

Cornus mas - Cornul

Clasa: Mangnoliopsida
Ordin: Cornales
Familie: Cornaceae
Gen: Cornus

Aceasta este o plant lemnoas sub form de arbust sau arbore de 4-8 m.
Frunzele sunt ntregi peiolate, ovat sau oval eliptice, acuminate i rotungite la baza,
pe fa verzi iar pe dos verde deschis la subioar cu socuri de pieri albi cenuii.
Florile sunt scurte pedicelate, galbene dispuse n umbelule cte 6-10. Floarea prezint
un caliciul format din 4 diniori scuri i otuzi, corola din 4 petale ovate lanceolate,
acuminate i rsfrnte, 4 stamine mai scurte dect petalele.
Fructul este o drup elipsoidal roie, lucioas, acrioar i astrinigen, cu 2
semine. nflorete nainte de nfrunzire, crete prin pduri, tufariuri, fiind un
9

element constitutiv al tufariurilor de la cmpi i din regiunea deluroas. Crete mai

ales pe solurile calcaroase.
Compoziia chimic: fructele conin zaharuri 9%, acizi organici, substane tanante,
diverse substane minerale, vitamina C, scoara conine tanoizi.
Proprieti: Toate parile plantei de corn au proprietai astringente, pentru c toate
conin tanin. Sunt din aceast cauz i antidiareice, cicatrizante, dezinfectante.
Frunzele se pot folosi cu succes la tratarea ascarizilor.
Importana farmaceutic - prezint scoara ce este n principiul amar i bogat n
tanin. Fructele sunt comestibile din ele fabricndu-se dulcea. Preparatele obinute
din fructele de corn au proprieti febrifuge, astrigente, i antidizenterice cu siropul
de

coarne

se

trateaz

dizenteria la copii. Cornul

este o buna plant melifer.
1.2.2. Fructele de pdure
din familia Rosaceae.

Crataegus monogyna Pducelul

Familia: Rosaceae
Subfamilia: Spiraeoideae
Gen: Crataegus

10

Este un arbust (2-6 m), spinos, cu tulpina neregulat i cu o coroana rar.

Pducelul are florile albe i fructele roii ce au un miros caracteristic i un gust
amrui. Din ele se obin extracte care sunt folosite n primul rnd, la ameliorarea
tulburrilor legate de problemele cardiace cu substrat nervos.

Compoziia chimic:
Florile i fructele de pducel conin 13% procianidine oligomerice, 1.2-2.2%
flavonoide, incluznd n acestea flavonoli i derivai ai flavonelor, ca de exemplu
hiperozidul, vitexinehamnozidul, rutina i vitexina. Mai conine amine, catechine,
fenoli, acizi carboxilici, purine, steroli, acizi triterpenici, n special acid oleanolic i
acid ursolic, ulei esenial, taninuri de natura catehica, pectine, sruri minerale i multe
alte substane active. Fructele conin taninuri de natur caltehic, vitaminele B1 i C,
antociani, flavonoizi, acizii: tartric, citric, oxalic, nicotinic, clorogenic, sorbitol,
colin, acetilcolina, glucoz, fructoz, pectine, cear, ulei gras, substane minerale. n
semine nu se gsesc substane active.
Prin compoziia sa format din flavonoide i procianidine pducelul are o
aciune inotropic care se manifest prin efectul su pozitiv asupra contractibilitii
musculare. Preparatele standardizate din flori i frunze au rolul de a crete
contractibilitatea celulelor miocardului cu aprox. 150% la o concentraie de
120g/ml. n extractele apoase pducelul are rolul de a dilata vasele coronariene.

11

Pducelul administrat sub form de macerate sau extracte fluide din plant, are
o aciune cronotropic (regularitatea i frecvena ritmului), inhibnd astfel aritmiile
cardiace.
Mai multe studii de specialitate au demonstrat c extractele mbogaite n
flavonoide cresc fluxul sangvin.

urma administrrii preparatelor

pe baz de pducel, n cazurile
de

insuficien

cardiac

de

stadiul II s-a constatat c n

acelai timp crete activitatea
cardiac

descrete

rata

presiunii cardiace. Fraciunile

fenolice mpreun cu flavonoizii
au

aciune

antioxidant

remarcabil. De asemenea, au
fost demonstrate efectele sedative i diuretice a acestora.
Interesant este c nici din fructele i nici din florile pducelului, care au
proprieti aproape identice, nu s-a putut determina prin izolare un principiu activ
care sa-i poat explica aciunea terapeutic. Substanele sale sunt eficiente numai n
complexul natural reprezentat de planta ca atare.

Rosa canina Mceul

Clasa: Magnoliatae
Ordin: Rosales
Familie: Rosaceae
12

Subfamilie: Rosoideae
Gen: Rosa

Este o specie de plant nativ n Europa, nord-vestul Africii i n vestul Asiei.

Este un arbust, cu o nlime care variaz ntre 1 i 5 metri. Tulpina este acoperit de
epi mici, ascuii, sub form de crlig. Frunzele sunt penate, cu 5-7 frunzulie.
Florile sunt de obicei roz pal, dar exist i plante cu flori albe sau roz nchis. Au un
diametru de 4-6 cm i sunt formate din cinci petale. Fructul, numit mcea, are o
form elipsoid i este rou sau portocaliu nchis.
Compoziia chimic.
Coninutul ridicat de acid ascorbic (vitamina C) imprim mceelor o puternic
aciune antiinfecioas, motiv pentru care mceele sunt recomandate n variate
afeciuni. Mceele conin: ap 49%, zaharuri 21.0%, proteine 3.6%, acizi 3.5% (n
acid malic), celuloz 23.0%, substane minerale 2.8%, provitamina A, (500-5000 mg
la 100 g pulp n funcie de specie), vitaminele B1, B2, E, K i P (sub form de
flavonoglucozide), precum i urme de vitamin PP. Uleiul seminelor de mcee
conine vitamina F (acizi eseniali: linolic, linoleic i arahidonic). Acizii din mcee
(ndeosebi, malic i citric), contribuie la stabilizarea vitaminei C. n mcee se mai
gsesc compui terpenici, ca betulina, precum licopen (izomer al carotenului),
pigment care le imprim culoarea roie-portocalie.
Tratamente cosmetice sau recomandri medicale.
n scopuri terapeutice, se folosesc fructele de mce (din care se prepar
infuzie, decoct, vin medicinal, buturi rcoritoare), seminele i florile. Mceele
amestecate cu miere (dou pri pulp de mcee curate de perioare i o parte de
13

miere) se utilizeaz contra ascaridelor (ascaridoza), consumndu-se zilnic cte 2-3

lingurie din acest amestec. Mcieul este un rezervor de vitamine pentru organismul
uman. Ceaiul de mcee trateaz intoxicaiile, diarea, afeciunile hepatice, febra,
viermii intestinali i palpitaiile. Afeciunile rinichilor i ale vezicii urinare pot fi
tratate cu ajutorul ceaiului de semine de mce. Elixirul de mce este recomandat
n tratarea bronitei cronice i a tusei de btrnee. Mceul face parte din categoria
plantelor-panaceu. Poate fi folosit cu succes i n combaterea alcoolismului i
tabacismului. Este un bun remediu n diferite boli avitaminoze, enterocolite,
calculoz renal, viroze respiratorii, tulburri de circulaie periferic. n anotimpul
friguros, ceaiul de mcee calmeaz tusea i revigoreaz orice organism vlguit de
febr.
Indicaii terapeutice.
Stimularea proceselor metabolice. Datorit coninutului ridicat de acid ascorbic
i dehidroascorbic, de vitamina C, joaca un rol deosebit de important n procesele de
oxidoreducere i n respiraia celular. Mceele reuesc astfel s stimuleze
funcionarea tuturor celulelor organismului, jucnd un rol important n procesele
metabolice fundamentale.
Alergii. O cura de 45 de zile, cu o jumatate de litru de infuzie combinata de mcee
pe zi, face minuni n prevenirea alergiilor de primavar. Cel mai bun moment pentru
nceperea unei astfel de cure este la sfritul iernii - nceputul primaverii, aa nct
efectul s fie maxim n luna aprilie, cnd ncepe polenizarea i cei cu sensibilitate
alergic sunt cel mai greu ncercai.
Vitaminizant. Nu numai ca au un coninut extrem de ridicat din majoritatea
vitaminelor, dar, n plus, ajut i la asimilarea vitaminelor i mineralelor din alte
surse. Curele de vitaminizare cu produse pe baz de mcee sunt importante n
14

special n sezonul rece, la efort fizic sau intelectual, n caz de anemii, rceli, febr, n
cazul gravidelor sau dup natere sau n cazul altor afeciuni care slbesc organismul.
Sistemul nervos. Studii realizate n Germania arat ca o cura cu mcee ajut
organismul s se adapteze mai bine la condiiile de stres, la suprasolicitare, s reziste
mai bine n faa emoiilor negative, s fac fa furiei, frustrrilor, enervrilor. De
asemenea, mceele combat insomniile, dar i somnolena, migrenele, asteniile,
amneziile, nevrozele, anxietatea, oboseala, starea de confuzie mentala i se pare c
sunt de folos chiar i n cazul sclerozei multiple n placi (leuconevraxita).
Diabet. Datorit conintului crescut de antociane, mceele sunt recomandate i n
diabetul de tip 2. Ele au un efect antidiabetic, hipoglicemiant, de stabilizare a
glicemiei.
Obezitate. Medicii japonezi de la Universitatea de Medicin din Osaka au evideniat
n urma mai multor studii c mceele reprezint o arm eficace mpotriva obezitaii.
Deja dupa o cur de dou sptmni s-a constatat o reducere a colesterolului i a
zahrului din snge, precum i o inhibare a procesului de depunere a esutului adipos.
S-a observat, de asemenea, i eliminarea unor substane toxice, precum acidul uric.
Pentru aceasta se recomanda o cur de 45 de zile cu un litru de infuzie combinat de
mcee pe zi.
Boli cardiovasculare. Vitamina C, bioflavonoidele i vitaminele din complexul B
previn ateroscleroza, ajut la adaptarea aparatului cardiovascular la condiiile de
stres. Datorit coninutului de acizi organici pectici regleaz nivelul colesterolului, iar
datorit coninutului de bioflavonoide i de vitamina C i P, mceele sunt eficiente n
combaterea fragilitaii capilare, ntrind pereii vaselor de snge, mbuntind
permeabilitatea, elasticitatea acestora i circulaia periferic deficitar. Astfel, dispar
i efectele de mini i picioare reci.
15

Boli gastrointestinale. n cazul afeciunilor gastrointestinale mceele reprezint, de

asemenea, un adjuvant de excepie. n primul rnd, stimuleaz pofta de mncare i
digestia. Apoi prezint proprieti astringente, antidiaretice, diuretice, dar i uor
laxative, fiind un excelent regulator al digestiei. Att florile i frunzele, ct i fructele
reprezint inclusiv un adjuvant n caz de dizenterie.
Articulatii. Cele mai spectaculoase rezultate ale marilor centre de cercetare privesc
aciunea mceelor asupra articulaiilor. Astfel, n tri precum Germania, Marea
Britanie, Danemarca, Frana, mceele devin treptat o opiune de tratament,
ajungndu-se chiar la nlocuirea antiinflamatoarelor de sintez.
Bolile respiratorii. Mceele sunt folosite cu succes i n cazul bolilor respiratorii. n
primul rnd, trebuie subliniat efectul pulberii de mcee n cazul febrei, pe care nu o
scade, dar ajut sistemul cardiovascular i pe cel nervos s reziste mai bine i
accelereaza vindecarea, asigurnd totodat i eliminarea unor toxine din corp.
Infuziile, decocturile i tincturile i-au demonstrat eficacitatea n cazul gripelor,
al racelilor, faringitei, astmului bronic, pneumoniei i chiar a tuberculozei.
Este de remarcat creterea rezistenei la infeciile pulmonare n general. Este
cunoscut de mult timp efectul ceaiului de mcee, care calmeaz tusea i revigoreaz
orice organism vlguit de febr. Consumate sub forma de ceai, sirop sau dulcea,
mceele cresc imunitatea i ne pzesc de microbi i de rceal. Cura de mcee este
recomandat mai ales n sezonul rece cnd este binevenit i asocierea mceelor cu
catin, propolis, polen i miere.
Precauii i contraindicaii.
Pulpa de mcee nu are nici un fel de contraindicaie, fiind printre cele mai
bine tolerate remedii cunoscute. Seminele de mcee, n schimb, mai ales periorii de
pe aceste semine, au un efect iritant foarte puternic asupra aparatului respirator i
16

asupra celui digestiv. De asemenea, aceti periori pot declana reacii alergice
severe, ca prurit sau disconfort gastro-intestinal. De aceeea, n cazul persoanelor
alergice se recomand evitarea contactului cu aceti periori.

Prunus spinosa - Porumbarul

Subclasa: Rosidae
Ordin: Rosales
Familia: Rosaceae
Subfamilia: Amygdaloideae
Gen: Prunus

Este un arbust slbatic, nalt de 1-3 m, cu ramuri spinoase, cu flori albe i cu

fructe sferice de culoare neagr-vineie i mrimea unei viine mici. Crete de la
cmpie pn sus, n zona
montan, la peste 1400 de
metri nalime i, ca mare
iubitoare

de

lumini

cldur poate fi vzut la

marginea

pdurilor,

pe

marginea drumurilor i a
terenurilor

cultivate,

zonele calcaroase, trind la

un loc cu alunul i mceul. n scop medicinal, de la porumbar se folosesc florile,
frunzele i fructele etc. Florile de porumbar conin flavone, acizi organici, glicozide,
sruri de magneziu i potasiu sunt recomandate ca sedativ i diuretic n tratamentul
17

nefritelor, cistitelor i enteritelor. Florile se culeg imediat dup nflorire. Frunzele se

culeg prin luna iulie i se recomand n erupii tegumentare, boli de rinichi, vezic,
pentru eliminarea toxinelor din corp. Fructele numite porumbe se culeg toamna
trziu, dupa ce cade toat frunza arbustului, i se folosesc n alimentaie dar i ca
remedii n diferite afeciuni. Fructele au aciune astringent i diuretica i efect
antidiareic i antidizenteric se recomand n dureri de stomac, diaree, dizenterie,
afeciuni renale, tuse convulsive i mpotriva constipaiei, ca sedativ i diuretic.
Pentru tratamentul erupiilor cutanate, n boli de rinichi i vezica. mpotriva tusei,
pentru stimularea digestiei. Porumbarul este primul arbust pe care primvara l
mbrac n flori albe. Se spune ca, dac porumbarul are flori multe, anul va fi bogat.
n Oltenia, fetele prind mrtioare din crengile porumbarului pentru ca tot anul s fie
albe la fa cum sunt florile lui. n unele zone din ar, porumbul se seamn cnd
nflorete porumbarul.
Compoziia chimic: Sruri de magneziu i potasiu, flavone, acizi organic,
antociane, polifenoli, acizi triterpenici, quercetin, kemferol, glicozizi cianhidrogeni i
glicocamferozide, flavonozizi, zaharuri, antocianini, prunicianina, sruri de calciu,
gumirezine. Calitile porumbarului sunt: diuretic-depurativ, sedativ, laxativ slab,
tonic general, antidiabetic, antiasmatic, astringent i antidiareic. n scopuri
fitoterapeutice sunt utilizate: radcinile, florile i fructele.

Rubus fruticosus Murele

18

Clasa: Magnoliatae
Ordin: Rosales
Familia: Rosaceae
Subfamilie: Rosoideae
Gen: Rubus

Este un arbust, cu
tulpina spinoas, cu frunze
palmat-compuse i cu flori albe sau roz dispuse n umbele, ce apar la sfritul
primverii sau nceputul veri. Fructul este comestibil i are un aspect negru-lucios.
Murul este un arbust viguros, nalt pn la 3 metri, constituit din numeroase
tulpini drepte sau curbate, acoperite de ghimpi ncovoiai n form de ghear.
Frunzele sunt plisate, verzi pe faa superioara i mai palide pe cea inferioar i
prevzute cu ghimpi curbai pe nervuri i peiol. Florile au culoare alb, apar pe
tulpinile de cel puin 2 ani i sunt grupate n struguri. Fructele sunt la nceput roii, iar
la deplin maturitate devin negre-brumate, cu miros i gust dulce acrior. Murul
crete prin pduri i tufiuri i nflorete n lunile iunie i iulie. Ca tratament naturist
se utilizeaz frunzele tinere recoltate nainte i n timpul nfloririi i uscate la umbr
n strat subire. Produsul are miros plcut i gust astringent. De asemenea, ca remediu
se mai folosesc i fructele.

Compoziia chimic.
19

Frunzele uscate conin o cantitate apreciabil de materii tanate, derivai

flavonici, vitamina C, acizi organici (malic, oxalic, tartric, lactic) i inozitol. Fructele
sunt bogate n vitaminele A i C. Acestea mai conin acid citric, salicilic, pectin,
mucilagii. Murele conin84% ap. n plus n compoziia murelor se mai ntalnesc
vitaminele B1, B2, B5, B6 i E. Murele sunt bogate n tanini, zahr, proteine, flavone,
sruri minerale, calciu, magneziu, fosfor i potasiu. Frunzele i mugurii ramurilor
tinere conin tanin, flavone, acizi organici, vitamina C i multe substane minerale.
Aciune farmaceutic.
Frunzele de mur au calitai dezinfectante, fac imposibil nmulirea microbilor,
modereaz secreiile, provoac strngerea esuturilor i ajut la vindecarea lor,
combat diareea, favorizeaz digestia la nivelul stomacului i calmeaz spasmele. De
asemenea, frunzele de mur sunt utile la afeciunile gtului, gurii i la vindecarea
leucoreei (scurgerea vaginal de lichid albicios).
Murele (fructele) sunt tonice, laxative, depurative i nutritive pentru organism.
Murele regleaz aciunea melaninei (pigmentul care d culoarea pielii), fiind utile
celor cu dereglri ale acestei substane (de exemplu n vitiligo). Murele au i caliti
de mbuntaire a acuitii vizuale, refac integritatea cavitaii bucale i refac celulele
lezate ale tubului digestiv. Ele sunt de asemenea utile i n diabet i, n plus, sunt
indicate persoanelor astenice crora le sngereaz des gingiile. Murele ajuta la
combaterea obezitaii, fiind foarte snatoase pentru organismul nostru, avnd
numeroase

beneficii

precum:

reducerea

riscului

hipertensiunii,

vindecarea

inflamaiilor intestinale, vindecarea problemelor de memorie, problemelor de inim i

a problemelor de stomac, combate hemoroizii, ajut la vedere i reduc riscul de
diabet. Despre mure se spune c previne inclusiv cancerul de esofag, cervical sau de
sn.

20

1.2.3. Fructele de pdure din familia Elaeagnaceae.

Elaeagnus angustifolia - Mslin slbatic (Slcioara)

Clas: Magnoliopsida
Subclas: Rosidae
Ordin: Rhamnales
Familie: Elaeagnaceae
Gen: Elaeagnus

Elaeagnus angustifolia este un arbust peren cu frunze cztoare, ce poate

ajunge pn la cca.7 m nlime, la maturitate. Frunzele sale sunt ovale, lanceolate,
de culoare verde i sunt acoperite cu periori muli de culoare alb, ceea ce creeaz
aspectul argintiu al acestora. Elaeagnus angustifolia este un arbust spinos, care are
flori mici frumos mirositoare, de culoare galben, nflorirea producndu-se la
sfaritul primverii. n urma florilor apar fructele verzi, de forma unor msline, dar
de dimensiuni mai mici. Mslinul slbatic este o plant rezistent atat la temperaturi
ridicate ct i la temperaturi sczute i tolereaz orice tip de sol bine drenat, chiar i
pe cele srace n substane nutritive. Rezist bine chiar i n soluri pietroase sau
srate. Se planteaz n general n locuri nsorite dar se poate amplasa i in zone
semiumbrite. Este un arbust ce mpiedic mburuienarea terenurilor. Fructele sale au
proprieti benefice n tratarea poliatritelor. Denumirea popular: Slcioara, salcie
mirositoare. n scop terapeutic se utilizeaz ramurile tinere, mugurii, florile i
fructele.
21

Compoziia chimic.
Ramurile tinere conin: mucilagii, acid benzoic, acid cinamic, compui polifenolici,
tanin, flavone. Florile conin: mucilagii, rezine, acid benzoic, acid cinamic, acid
hidroxi-benzoic, compui polifenolici, acid p-cumaric i flavone.
Aciune terapeutic. Slcioara are aciune antimicrobiana (Stapyiloccocus aureus,
Streptoccocus pyogenes, Klebsiella pneumoniae), antitumoral i cicatrizant. Uleiul
din semine este utilizat pentru tratarea afeciunilor bronhiale.Sucul obinut din flori
este folosit pentru tratarea febrei. Fructele bogate n vitamine, flavone i substane
minerale, se apreciaz c pot reduce apariia cancerului sau s stagneze evoluia
acestuia. Fructele pot fi utilizate pentru prepararea de gem i erbet.
1.3.

Caracteristica general a acizilor ursolic i oleanolic.

Acidul (3)-hidroxi-urs-12-en-28-oic (1) sau acidul ursolic, (C30H48O3), (Fig.

1.), este o triterpen hidroxi-pentaciclic care manifest o bun activitate

chemoprotectiv pentru organismul uman, este larg rspndit n natur i se izoleaz
din diferite extracte din plante, singur sau mpreuna cu zharuri. Alturi de izomerul
su, acidul (3)-hidroxi-olean-12-en-28-oic (2) sau acidul oleanolic, (Fig. 1.), acesta
se gsete n numeroase plante, inclusiv cele care au fost folosite timp ndelungat n
medicina tradiional[1].

Figura.1.

Acidul ursolic (1) i acidul oleanolic (2).

22

1.3.1. Activitatea farmacodinamic a acidului ursolic.

Acidul ursolic (1) prezint proprieti farmacologice remarcabile, cele mai
importante constnd n efecte antihiperlipidemice, [2], antiinflamatoare, [3],
hepatoprotective, [4], inhibitorii ale proceselor de iniiere i proliferare a tumorilor,
[5], analgezice, [6], cardiotonice, [7], sedative i anxiolitice, [8], antiulceroase, [9],
antimicrobiene, [10], hipoglicemiante, [11], antiaterosclerotice, [12], protective
mpotriva toxicitii induse de ciclofosfamide, [13] i anticariogenice, [14], dar i
efecte tonice i modulatoare a sintezei de colagen, [15]. Ca agent natural
antiinflamator i antitumoral, acidul acioneaz prin inhibarea promotorilor tumorali
i a proceselor inflamatoare datorate prezenelor tumorilor.
1.3.2. Sinteza compuilor derivai din acidul ursolic.
La fel ca i acidului betulinic (3) i acidul ursolic (1) prezint cele trei poziii:
C3, C20 i C28 care n urma unor modificri chimice au furnizat o serie de derivai noi
cu proprieti biologice semnificative (Fig. 2). n urma investigrii unui numr de
peste 70 de compui i derivai sintetici ai acidului ursolic (1)s-a remarcat frecvena
aciunii lor biologice, de inhibare a proliferrii i dezvoltrii celulelor tumorale, fiind
considerai poteniali ageni chemo-preventivi n diverse tipuri de cancer [16].

Figura. 2. Acidul betulinic (3).

23

1.3.3. Aciunea acidului ursolic asupra organismului omului.

Acidul ursolic (1), aa cum se gsete n organele vegetale al unor plante
medicinale, exercit efecte asupra organismului uman. Aceast substan natural,
ajut la regenerarea i restructurarea fibrelor de colagen, prezentnd pe lng aciunea
antireumatic i antigutoas, i efecte diuretice, coleretice i sudorifice. Prin faptul c
acioneaz trofic asupra fibrelor de colagen, acidul ursolic (1) prezint i efect
regenerativ asupra pieli. Cercetrile din ultimii ani, au demonstrat proprietile
antitumorale exercitate de ctre acest compus. Cel mai probabil, n cazul acidului
ursolic (1), mecanismul de aciune se datoreaz capacitii de blocare a receptorilor
sensibili la hormonii corticosuprarenali, de la nivelul esuturilor conjunctive.
1.3.4. Activitatea farmacodinamic a acidului oleanolic.
n literatra de specialitate se menioneaz c acidul oleanolic(2) este un compus
cu activitate anti-bacterian [17-18], antifungal [19-20], insecticid [21], anti-HIV
[22-24], diuretic [25], antidiabetogenic [26], gastro-intestinal [27]. n plus acidul
oleanolic are aciuni de protecie a ficatului [28], efecte anti-inflamatorii [29],
activitate antitumoral [30-32], i aciuni imunomodulare [33].

24

Capitolul II.
2.1

Rezultate i discuii

Esena metodei de analiz Cromatografia de lichide de nalt performan

(HPLC).
Aceast metoda acoper azi, n proporie aproximativ 80%, analiza

substanelor moleculare: organice, organo-metalice i anorganice inclusiv compuii

foarte polari sau labili termic precum i compuii cu mas molecular ridicat
(naturali sau sintetici). De aceea, mpreun cu cromatografia de gaze constituie un
punct de sprijin important n analizele chimice moderne. Dei eficacitatea coloanelor
nu o egaleaz nc pe cea din GC, prin faptul c se poate modifica, pe lng faza
staionar, i faza mobil, cromatografia de lichide (LC) face posibile separri i
analize uneori imposibil de realizat prin alte tehnici. Cuplajul cu spectrometria de
mas a transformat, n ultimul timp, aceast metod n principalul mijloc de analiz a
compuilor moleculari naturali sau sintetici, constituind unul din pilonii pe care se
sprijin chimia sintetic actual i pe care s-a dezvoltat biochimia i biotehnologia
modern.
Metoda constituie o evoluie a unei metode mai vechi, cromatografia pe
coloan clasic, care servea n primul rnd la izolarea preparativ a compuilor
naturali.Prin introducerea pompelor i n consecin, lucrndu-se la presiuni tot mai
ridicate (200 atm), dezvoltarea unor faze staionare performante, de dimensiuni tot
mai mici (recent constituite din granule de faze staionare sferice, cu diametre 2-5
m), n coloane tot mai scurte (3-10 cm) s-a ajuns, ncepnd cu anul 1969, la
configuraia actual (Fig.3).

25

Figura 3.

Prezentarea schematic a unui chromatograf de lichide (HPLC) modern.

Se poate observa c din rezervoarele coninnd unul sau mai muli solveni
pompa (sau pompele), alimenteaz coloana cu eluent (de regul un amestec de doi
sau mai muli solveni). n imediata vecintate a coloanei se introduce proba,
automat, prin intermediul unui ventil cu by pass. n coloana aflat ntr-o etuv
termostat, are loc separarea propriu-zis. Efluentul coloanei intr ntr-un detector de
unde componentul, dac este separat complet, poate fi colectat i izolat, cu ajutorul
unui colector de fraciuni. Semnalul este nregistrat fie cu un nregistrator, fie direct
n memoria unui calculator. n esen, un cromatograf analitic HPLC are structura din
(Fig.4), unde nu s-a mai prezentat colectorul de fraciuni, interesant doar din punct de
vedere preparativ. Se poate observa asemnarea cu GC singura deosebire major
constituind-o sursa de eluent - pompa. n cele ce urmeaz se vor prezenta cele mai
importante aspecte deoarece volumul de informaii publicate este deosebit de amplu,
un mare numr de date existnd chiar pe reeaua Internet.
26

Solven

Pomp

Injecto

Coloan

Dedecto

Figura 4.
2.2.

nregistrator

Schema bloc a unui cromatograf HPLC.

Caracteristicile spectrale ale acidului ursolic. Utilizri sintetice.

n laboratorul Chimia terpenoidelor al Institutului de Chimie a Academiei de

tiine a Republicii Moldova au fost efectuate tentative de izolare a acidului ursolic

(1) din materii prime locale. Dintre acestea se evideniaz deeurile de levnic
(Lavandula angustifolia) provenite din hidrodistilarea uleiului volatil i tescovina de
mr ramas de la producerea sucului, ambele la moment nu sunt utilizate, fiind
aruncate. Coninutul de acid ursolic (1) n aceste surse poate ajunge pn la 1%.
Sursele menionate au fost extrase cu alcool, extractele obinute au fost
degresate cu eter de petrol, apoi supuse unei purificri cromatografice pe coloan cu
silicagel. S-a reuit izolarea acidului ursolic (1) n form destul de pur. Structura lui
a fost confirmat prin metode de analiz moderne, spectroscopia n infrarou (IR), i
rezonan magnetic nuclear (RMN).
Spectrul IR al acidului ursolic (1) confirm structura acestui compus prin
prezena benzilor de absorbie caracteristice pentru grupa hidroxil (-OH la 3675 i
1045 cm-1), gruparea carboxil (CO2H- la 3441 i 1722 cm-1) i legtur dubl
trisubstituit (la 1513i 873 cm-1) (Fig. 5).

27

Figura 5.

Spectrul n infrarou al acidului ursolic (1).

Spectrul 1H RMN al acidului ursolic (1) conine 7 semnale singlet ale grupelor
metil de la 0.66, 0.70, 0.78, 0.79, 0.82, 1.05 i 1.10 ppm (C 23, C24, C25, C26,C27, C29 i
C30), semnalul triplet al protonului de la atomul de carbon teriar C3la 3.03 ppm,
semnalul singlet larg al protonului din grupa hidroxil (OH) ataat la atomul de
carbon C3 la 3.92 ppm i singletul provenit de la protonul de la legtura dubl din
poziia C12 la 5.08 ppm (Fig.6).

Figura 6.

Spectrul 1H RMN al acidului ursolic (1).

28

Datele spectrului 13C RMN al acidului ursolic (1) confirm prezena a 7 grupe
metil din poziiile C23, C24, C25, C26, C27, C29 i C30 de la 15.13, 15.34, 16.63, 18.13,
23.07, 24.03 i 30.48 ppm, unui atom de carbon teriar hidroxilat din poziia C3 la
78.57 ppm i a celui teriar din poziia C12 localizat la dubla legtur la 125.34 ppm
ia atomului de carbon carbonilic din poziia C28crui i aparine semnalul de la
180.51 ppm(Fig. 7).

Figura 7.
2.4.

Spectrul 13C RMN al acidului ursolic (1).

Determinarea coninutului de acid ursolic i acid oleanolic.

Extractele obinute din fructele de pdure cercetate au fost analizate la Institutul

Naional de Cercetare-Dezvoltare prin Tehnologii Criogenice i Izotopice or.
Rmnicul Vlcea, Romnia, pe un cromatograf de lichide de nalt performan,
HPLC de tip Surveyor Plus, echipat cu pompa cuaternar, cu doua pistoane tandem n
serie i spalare continu a pistoanelor; sistem automat de injecie a probelor, bucla de
injecie de 25 L; detector PDA, tip diode array; cuptor pentru controlul
temperaturii; sistem de degazare pentru solveni; coloana cromatograficBDS
Hypersil C18, lungime 250x4,0 mm, dimensiunea porilor de 3 m;software pentru
controlul sistemului HPLC i achizitia/prelucrarea datelor.
Pentru construirea curbei de calibrare s-au folosit etaloane de puritate HPLC: acid
ursolic i acid oleanolic, procurate de la Sigma-Aldrich.
29

Probele pentru analiz au fost pregtite prin dizolvarea extractelor n metanol,

filtrarea lornainte de introducerea directn sistemul cromatografic, folosind filtre de
membran de 0.45 m.
Analiza HPLC a fost efectuat n urmtoarecondiii cromatografice: debitul fazei
mobile: 0,7 mL/min; eluia izocratic a fazei mobile format din MeOH:H 3PO4:H2O
luai n raport de 88:0,05:11,95 (v/v/v); detective la lungimea de und 210 nm;
volumulprobelor injectate: 10 L; temperatura pe coloana: 20C; domeniul de
linearitate al metodei: 0 400 mg/L, iar coeficientul de corelare: 0,9775 pentru AO i
0, 9757 pentru AU.
Timpii de retenie pentru compuii analizai auvariant de la 14 la 15 minute n
cazul acidului oleanolic (2) i de la 15 la 16 minute n cazul acidului ursolic (1).
n rezultat au fost analizate toate cele 6 probe, cromatogramele lor fiind
reprezentate n Fig. ?-?,iar coninutul de acid oleanolic i ursolic determinat (n
mg/L) pentru fiicare prob este indicat n Tabel.

Figura 8.

Cromatograma extractului de corn.

30

Figura 9.

Cromatograma extractului de pducel.

Figura 10. Cromatograma extractului de mcese.

Figura 11. Cromatograma extractului de porumbar.

31

Figura 12. Cromatograma extractului de mure.

Figura 13. Cromatograma extractului de mslin.

Print-un coninut nalt de acid ursolic i acid oleanolic se evedeniaz specile
de Corn (189/460 mg/L) dup care urmeaz Mceul, Murul, Pducelul i Porumbar.
n toate specile s-a determinat un coninut mai mare de acid ursolic, cel oleanolic find
n cantiti mai reduse, excepie se observ la specia de Mslin slbatic unde acidul
oleanolic este intr-o cantitate mai mare fa de acidul ursolic.

32

Tabelul 1

Proba

Concentratie solutie (mg/L)

Acid oleanolic

Acid ursolic

Corn
331,7

1045,6

48,50

305,6

321,5

1035,4

30,1

176,6

278,9

464,5

32,1

10,6

Pducel

Mce

Porumbar

Mure

Mslin slbatic

33

Capitolul III.
3.1.

Partea experimental:

Generaliti
Spectrele n infrarou (IR) au fost determinate cu ajutorul spectrofotometrului

Perkin-Elmer IR 397 spectrometer n soluie de tetraclorur de carbon. Spectrele de

rezonan magnetic nuclear (RMN) au fost nregistrate cu ajutorul spectrometrelor
Bruker AC-400.
Punctul de topire (p.t) al substanelor a fost determinat cu ajutorul aparatului
Boetius. Unghiul de rotaie a fost msurat la polarimetrele Polamat S i PerkinElmer 141 n soluie de CHCl3. Pentru cromatografia de eluare pe coloane
cromatografice s-a utilizat, silicagel L 40/100, L 100/60 sau "Across". Eluarea
coloanelor s-a efectuat cu eter de petrol sau amestec de eter de petrol acetat de etil
n gradient crescnd al acetatului de etil. Cromatogramele n strat subire (CSS) au
fost efectuate pe plci de silicagel Fluka.Solvenii pentru cromatografie au fost
distilai i uscai cu CaCl2i Na2SO4 anhidru.
3.2.

Date spectrale ale acidului ursolic (1).

Spectrul IR (, cm-1,ulei de vazelin): 874, 1046, 1199, 1379, 1456, 1723, 2850, 2918,
3441, 3676, Spectrul1H RMN (200.13 MHz, , ppm, J/Hz): 0.66 (s, 3H,C(5)H), 0.68
(s, 3H, C(24)H3), 0.69 (s, 3H, (C(26)H), 0.82 (d, 3H, C(29)H 3), 0.87 (s, 3H, C(25)H),
0.90 (s, 3H, C(23)H3), 0.92 (s, 3H, C(30)H3), 1.01 (m, 2H, C(15)H3), 1.05 (s, 3H,
C(27)H3), 1.27 (m, 2H, C(7)H2), 1.29 (m, 2H, C(21)H2), 1.29 (m, 1H, C(6)H), 1.31
(m, 1H, C(19)H3), 1.43 (m, 2H, C(2)H2), 1.47 (m, 1H, C(6)H2), 1.52 (m, 1H,
C(20)H), 1.54 (m, 2H, (C(22)H2), 1.56 (m, 2H, C(1)H2), 1.58 (s, 1H, C(9)H), 1.53
(m, 2H, C(16)H2), 1.92 (d, 2H, C(11)H2), 2.12 (d, 1H, C(18)H), 3.01 (d, 1H, C(3)H 3),
5.14 (d,1H, C(12)H). Spectrul 13C RMN (100.61 MHz, , ppm): 15.13 (C(26)), 15.34
(C(25)), 16.63 (C(24), 17.57 (C(6)), 18.13 (C(29)), 22.86 (C(16)), 23.07 (C(30)),
34

23.80 (C(11)), 24.03 (C(27)), 26.79 (C(2)), 27.52 (C(21)), 30.48 (C(23)), 30.77
(C(7)), 32.69 (C(15)), 36.29 (C(22)), 36.51 (C(10)), 38.22 (C(1)), 38.35 (C(4)), 38.42
(C(19)), 38.48 (C(20)), 39.09 (C(8)), 41.62 (C(14)), 46.81 (C(17)), 47.00 (C(9)),
52.38 (C(18)), 54.77 (C(5)), 78.57 (C(3)), 125.54 (C(12)), 138.18 (C(13)), 180.51
(C(28)).
3.3.

Extracia fructelor de Corn:

Probele de fructe de corn cu m=10g fiecare, colectate n mprejurimile oraului Orhei

n luna septembrie 2013 au fost extrase iniial cu eter de petrol (EP, 3x5 ml), timp de
5 minute, extractele eterice au fost unite, filtrate i concentrate n vid pn la uscat sa
obinut fracii (1-3) ce conin ceruri vegetale i grsimi cu masele: m 1 =?, m2 =? , m3
=?.
n continuarie probele (1-3) au fost extrase cu cloroform (CHCl 3 ), fierbinte 2x15ml
timp de 5 minute, extractele cloroformice au fost unite, filtrare i concentrate pn la
uscat. Sa obinut extractele (1-3), cu m1 = ?, m2 = ?, m3 =?, cu nuan alb-roiatic ce
conine acizii oleanolic (AO) i ursolic (AU). Aceste probe n continuare au fost
supuse analizei HPLC la Institutul Naional de Cercetare-Dezvoltare prin Tehnologii
Criogenice i Izotopice (Rmnicul Vlcea, Romnia). Rezultatele sunt reprezentate n
Tabelul 1.
3.4.

Extracia fructelor de Pducel:

Probele de fructe de pducel cu m=10g fiecare, colectate n mprejurimile raionului

Ialoveni satul Sociteni n luna octombrie 2013 au fost extrase iniial cu eter de petrol
(EP, 1x10ml), timp de 24h, la temperatura cameri extractele eterice au fost unite,
filtrate i concentrate n vid pn la uscat sa obinut fracii (1-3) ce conin ceruri
vegetale i grsimi cu masele: m1 =11 mg, m2 =8 mg, m3 =7 mg.

35

n continuarie probele (1-3) au fost extrase cu alcool, fierbinte 1x10 ml timp de 24h,
extractele alcoolice au fost unite, filtrare i concentrate pn la uscat.Sa obinut
extractele (1-3), cu m1 =627mg, m2 =717mg, m3 =652mg, cu nuan alb-roiatic ce
conine acizii oleanolic (AO) i ursolic (AU). Aceste probe n continuare au fost
supuse analizei HPLC la Institutul Naional de Cercetare-Dezvoltare prin Tehnologii
Criogenice i Izotopice (Rmnicul Vlcea, Romnia). Rezultatele sunt reprezentate n
Tabelul 1.
3.5.

Extracia fructelor de Mce:

Probele de fructe de mce cu m=10 g fiecare, colectate n mprejurimile raionului

Briceni satul Tecani n luna octombrie 2013 au fost extrase iniial cu cloroform
fierbinte (CHCl3, 2x15 ml), timp de 5 minute, extractele cloroformice au fost unite,
filtrate i concentrate n vid pn la uscat sa obinut fracia ce conine ceruri vegetale
i grsimi cu masele: m1 =22 mg.
n continuarie proba a fost extrase cu eter de petrol fierbinte (EP, 2x15 ml) timp de 5
minute, extractele eterice au fost unite, filtrare i concentrate pn la uscat. Sa obinut
extractul cu m1 =5 mg, cu nuan alb-roiatic ce conine acizii oleanolic (AO) i
ursolic (AU). Aceste probe n continuare au fost supuse analizei HPLC la Institutul
Naional de Cercetare-Dezvoltare prin Tehnologii Criogenice i Izotopice (Rmnicul
Vlcea, Romnia). Rezultatele sunt reprezentate n Tabelul 1.
3.6.

Extracia fructelor de Porumbar:

Probele de fructe de porumbar cu m=10g fiecare, colectate n mprejurimile raionul

tefan-Vod n luna noiembrie 2013 au fost extrase iniial cu eter de petrol (EP, 3x10
ml), timp de 5 minute, extractele eterice au fost unite, filtrate i concentrate n vid
pn la uscat sa obinut fracii (1-3) ce conin ceruri vegetale i grsimi cu masele: m 1
= ? , m2 =? , m3 =?.
36

n continuarie probele (1-3) au fost extrase cu cloroform fierbinte (CHCl 3 ,2x15 ml),
timp de 5 minute, extractele cloroformice au fost unite, filtrare i concentrate pn la
uscat. Sa obinut extractele (1-3), cu m1 = ?, m2 = ?, m3 =?, cu nuan alb-roiatic ce
conine acizii oleanolic (AO) i ursolic (AU). Aceste probe n continuare au fost
supuse analizei HPLC la Institutul Naional de Cercetare-Dezvoltare prin Tehnologii
Criogenice i Izotopice (Rmnicul Vlcea, Romnia). Rezultatele sunt reprezentate n
Tabelul 1.
3.7.

Extracia fructelor de Mure:

Probele de fructe de mure cu m=10 g fiecare, colectate n mprejurimile oraului

Orhei n luna septembrie 2013 au fost extrase iniial cu cloroform (CHCl 3, 2x20 ml),
timp de 5 minute, extractele cloroformice au fost unite, filtrate i concentrate n vid
pn la uscat sa obinut fracia ce conin ceruri vegetale i grsimi cu masa: m 1 =131
mg.
n continuarie proba a fost extrase cu eter de petrol fierbinte (EP, 3x5 ml), timp de 5
minute, extracia eteric a fost unit, filtrar i concentrat pn la uscat. Sa obinut
extracia, cu m1 =3 mg, cu nuan alb-roiatic ce conine acizii oleanolic (AO) i
ursolic (AU). Acest prob n continuare au fost supus analizei HPLC la Institutul
Naional de Cercetare-Dezvoltare prin Tehnologii Criogenice i Izotopice (Rmnicul
Vlcea, Romnia).Rezultatele sunt reprezentate n Tabelul 1.
3.7.

Extracia fructelor de Mslin:

Probele de fructe de mslin cu m=10 g fiecare, colectate n mprejurimile raionului

Ialoveni satul Sociteni n luna octombrie 2013 au fost extrase iniial cu eter de petrol
(EP, 1x10 ml), timp de 24h, la temperatura camerei extractele eterice au fost unite,
filtrate i concentrate n vid pn la uscat sa obinut fracii (1-3), ce conin ceruri
vegetale i grsimi cu masele: m1 =5 mg, m2 =6 mg, m3 =8 mg.
37

n continuarie probele (1-3) au fost extrase cu alcool, fierbinte 1x10 ml timp de 24h,
extractele alcoolice au fost unite, filtrare i concentrate pn la uscat.Sa obinut
extractele (1-3), cu m1 =195 mg, m2=194 mg, m3 =198 mg, cu nuan alb-roiatic ce
conine acizii oleanolic (AO) i ursolic (AU). Aceste probe n continuare au fost
supuse analizei HPLC la Institutul Naional de Cercetare-Dezvoltare prin Tehnologii
Criogenice i Izotopice (Rmnicul Vlcea, Romnia). Rezultatele sunt reprezentate n
Tabelul 1.
3.8.

Analiza HPLC a extractelor din fructe de pdure.

Materiale i metoda

Echipament - Cromatograful de lichide de nalt performan, HPLC Surveyor Plus

echipat cu:
Pompa cuaternar, cu doua pistoane tandem n serie i spalare continu a
pistoanelor;
Sistem automat de injecie a probelor, bucla de injecie de 25 L;
Detector PDA, tip diode array;
Cuptor pentru controlul temperaturii;
Sistem de degazare pentru solveni;
Coloana cromatografic BDS Hypersil C18, lungime 250x4,0 mm,
dimensiunea porilor de 3 m;
Software pentru controlul sistemului HPLC i achizitia/prelucrarea datelor.
Materiale i reactivi
Etaloane de puritate HPLC: acid ursolic i acid oleanolic, Sigma Aldrich;
Acid fosforic, metanol de puritate analitic, ap ultrapura MiliQ

38

Prepararea probelor extractele se dizolvn metanol i se filtreaznainte de

introducerea directn sistemul cromatografic, folosind filtre de membran de 0.45
m.
Analiza HPLCcondiii cromatografice:
Debitul fazei mobile: 0,7 mL/min;
Eluia izocratic a fazei mobile MeOH:acid fosforic:apa = 88:0,05:11,95
(v/v/v)
Detecie: 210 nm
Volum injectat: 10 L;
Temperatura pe coloana: 20C
Domeniul de linearitate al metodei:
Compus
Acid
oleanolic
Acid ursolic

Timpul de
retenie
(min)
14.33

Domeniu de
linearitate
(mg/L)
0 - 400

Coeficientul
de corelare
(r2)
0,9775

15.20

0- 400

0,9757

39

Concluzii:
Rolul plantelor medicinale i a fructelor de pdure n viaa noastr ramne
incontestabil. Ele sunt capabile s trateze att afeciuni simple, ct i boli
severe, sunt folosite n alimentaie, pot fii valorificate n terapeutic pentru
efectele

antiseptic,

antiinflamator

datorit

coninutului

flavonidelor,

compuilor volativi, compuilor terpenici n special acizii ursolic i oleanolic

sau altor principii activii.
Au fost colectate 6 specii de fructe de pdure autohtone: Corn, Pducel,
Porumbar, Mslin Slbatic, Mure, Mcie;
n condiii de laborator au fost extrase probele colectate dup mai multe
metode care constau din mai multe etape: una prin extracia cu cloroform
fierbinte timp de 5 minute (Corn, Porumbar, Mure, Macies), a doua metod
prin extracia cu alcool timp de 24 ore (Maslin si Paducel), a treia cu eter de
petrol care sa efectuat pentru toate probele;
Extractele obinute au fost analizate prin metoda cromatografic HPLC
(Cromatografie de lichide de nalt performan);

40

BIBLIOGRAFIE:
1. Novotny, L.; Abdel-Hamid, M.E.; Hamza, H.; Masterova, I.; Grancai, D.
Development of LC-MS method for determination of ursolic acid. Application
to the analysis of ursolic acid in Staphylea holocarpa hemsl. J. Pharm.
Biomed. Anal. 31, 2003, 961-968.
2. Li, Y.; Kang, Z.; Li, S.; Kong, T.; Liu, X.; Sun, C. Ursolic acid stimulates
lipolysis in primary-cultured rat adipocytes. Mol. Nutr. Food Res. 54, 2010,
16091617.
3. Miceli, N.; Taviano, M.F,; Giuffrida, D.; Trovato, D.; Tzakou, O.; Galati, E.M.
Anti-inflamatory activity of extract and fractions from Nepeta sibthorpii
Bentham, J. of Ethnopharmacol. 97, 2005, 261-266.
4. Saravanan, R.; Viswanathan, P.; Viswanathan, K.; Pugalendi, K. Protective
effect of ursolic acid on ethanol-mediated experimental liver damage in rats,
Life Sciences.78,2006, 713-718.
5. De Angel, R.; Smith, S.; Glickman, R.; Perkins, S.; Hursting, S. Antitumor
effects of ursolic acid in a mouse model of postmenopausal breast cancer, Nutr.
Cancer. 62,2010,10741086.
6. Munoz ,O.; Christen, P., Cretton ,S.; Backhouse, N.; Torres, V.; Correa, O.;
Costa, E.; Miranda, H.; Delporte, C. Chemical study and anti-inflammatory,
analgesic and antioxidant activities of the leaves of Aristotelia chilensis (Mol.)
Stuntz, Elaeocarpaceae, J. of Pharma. and Pharmacol.63 (6),2011, 849859.
7. Somova, L.; Shode, F.; Mipando, M. Cardiotonic and antidysrhythmic effects
of oleanolic and ursolic acids, methyl maslinate and uvaol, Phytomedicine.
11,2004,121-129.
8. Pemminati, S.; Gopalakrishna, H.; Venkatesh,V.; Rai, A.; Shetty, S.; Vinod, A.;
Pai, P.; Shenoy, A. Anxiolytic effect of chronic administration of ursolic acid in
rats, J. Appl. Pharm. Sci.1 (03),2011, 68-71.
9. Ramos, A.; Lima C.; Pereira, M.; Fernandes, F.; Pereira, W. Antigenotoxic
effects of quercetin, rutin and ursolic acid on HepG2 cells. Evaluation by the
comet assay, Toxicology Lett. 177 (1),2008, 66-73.
41

10.Azevedo, M.; Camsari, C.; S1, C.; Lima, C.; Ferreira, M.; Wilson, C. Ursolic
acid and luteolin-7-glucoside improve lipid profiles and increase liver
glycogen content through glycogen synthase kinase-3, Phytother. Res. 24
(S2),2010, 220S.224.
11. Aragon, M.; Heras, B.; Reus, M.; Benedi, J. Pharmacological modification of
endogenous antioxidant enzymes by ursolic acid on tetrachloride-induced liver
damage in rats and primary cultures of rat hepatocytes, Exp. Toxic Pathol.
53,2001,199-206.
12. Somova, L.; Nadar, A.; Rammanan, P.; Shode, F. Cardiovascular
antihyperlipidemic and antioxidant effects of oleanolic and ursolic acids in
experimental hypertension, Phytomedicine. 10,2003, 115-121.
13. Assimopoulou, A.; Zlatanos ,S.; Papageorgiou, V. Antioxidant activity of
resins and bioactive triterpenes in oil substrates, Food Chemistr. 92,2005, 721727.
14. Ramos, A.; Pereira, C.W.; Collins, A.R. Protective effects of ursolic acid and
luteolin against oxidative DNA damage include enhancement of DNA repair in
Caco-2 cells, Mutat. Res. 692 (12),2010, 611.
15. Kanjoormana, M.; Kuttan, G. Antiangiogenic activity of ursolic acid, Integr.
Cancer Ther. 9 (2), 2010, 224235.
16. Simon, A.; Delage, C.; Saux, A.; Chulia, A.J.; Najid, A.; Rigaud, M. Antiherpes virus activities of bioactive fraction and isolated pure constituent of
Mallotus peltatus. An ethnomedicine from Andaman Islands, Virol J. 9, 2012,
98-102.
17. Kowalewski, Z.; Kortus, M.; Ediza, W.; Koniar, H. Antibioticaction of betaursolic acid. Arch. Immunol. Ther. Exp.24, 1976, 115-119.
18. Sattar, A.; Bankova, V.; Kujumgiev, A.; Galabov, A.; Ignatova,A.; Todorova,
C.; Popov, S. Chemical composition and biologicalactivity of leaf exudates
from some Lamiaceae plants. Pharmazie. 50,1995, 62-65.

42

19.Jeong, T. S.; Hwang, E. I.; Lee, H. B.; Le, E. S.; Kim, Y. K.;Min, B. S.; Bae, K.
H.; Bok, S. H.; Kim, S. U. ChitinsynthaseIIinhibitoryactivityofursolicacid,
isolatedfromCrataeguspinnatifida. Planta Med. 65, 1999, 261-263.
20.Tang, H. Q.; Hu, J.; Yang, L.; Tan, R. X. Terpenoids and flavonoids from
Artemisia species. Planta Med., 66, 2000, 391-393.
21.Marquina, S.; Maldonado, N.; Garduno-Ramirez, M. L.; Aranda,E.; Villarreal,
M.

L.;

Navarro,

V.;

Bye,

R.;

Delgado,

G.;

Alvarez,L.

BioactiveoleanolicacidsaponinsandotherconstituentsfromtherootsofViguieradec
urrens. Phytochemistry. 56, 2001, 93-97.
22.Kashiwada, Y.; Nagao, T.; Hashimoto, A.; Ikeshiro, Y.; Okabe, H.; Cosentino,
L. M.; Lee, K. H. Anti-AIDSagents 38. Anti-HIV activity of 3-O-acyl ursolic
acid derivatives. J. Nat. 63, Prod.2000, 1619-1622.
23. Ma, C.; Nakamura, N.; Hattori, M.; Kakuda, H.; Qiao, J.; Yu,H. Inhibitory
effects on HIV-1 protease of constituents from the wood of Xanthoceras
sorbifolia. J. Nat. Prod., 63,2000, 238-242.
24. Assefa, H.; Nimrod, A.; Walker, L.; Sindelar, R. Enantioselectivesynthesis and
complement inhibitory assay of A/B-ring partialanalogues of oleanolic acid.
Bioorg. Med. Chem. Lett. 11, 2001, 1619-1623.
25. Alvares, M. E.; Maria, A. O.; Saad, J. R. Diuretic activity ofFabiana
patagonica in rats. Phytother. Res. 16,2002, 71-73
26.Yoshikawa,
M.;
Matsuda,

H.

Antidiabetogenicactivityofoleanolicacidglycosidesfrommedicinalfoodstuffs.
Biofactors. 13,2000, 231-234.
27. Li, Y.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M. Effects of oleanolic acidglycosides on
gastrointestinal transit and ileus in mice. Bioorg. Med. Chem. 7,1999, 12011205.
28. Liu, J. Pharmacology of oleanolic acid and ursolic acid. J.Ethnopharmacol.
49, 1995, 57-68.
29.Najid, A.; Simon, A.; Cook, J.; Chable-Rabinovitch, H.; Delage,C.; Chulia, A.;
Riguad,

M.

Characterizationofursolicacidasalipoxygenaseandcyclooxygenaseinhibitorusing
43

macrophages, plteletsanddifferentiatedHL60 leukemiccells. FEBS. 229,1992,

213-217.
30. Hsu, H. Y.; Tsai, L. H. The investigation of oleanolic acid andursolic acid
combined with high dose ionizing radiation on theapoptosis of HL-60 cells.
Cancer Detect. PreV. 24 (Suppl.1),2000, 89-92
31. Liu, J. Oleanolic acid and ursolic acid: Research perspectives. J.
Ethnopharmacol. 100, 2005, 92-94.
32. Li, J.; Guo, W. J.; Yang, Q. Y. Effects of ursolic acid and oleanolic acid on
human colon carcinoma cell line HCT15. World J. Gastroenterol. 8,2002, 493495.
33.Raphael,

T.

J.;

Effectofnaturallyoccuringtriterpenoidsglycyrrhizicacid,

Kuttan,

G.
ursolicacid,

oleanolicacidandnomilinontheimmunesystem. Phytomedicine. 10,2003, 483489.

44