LP 2 - 3

Decontaminarea microbian
OBIECTIVE: dup aceast lucrare practic studenii vor trebui s fie n msur:
1. S defineasc noiunile: steril, sterilizare, septic/aseptic, dezinfecie, antiseptizare,
prezervare.
2. S aleag corespunztor metodele de sterilizare i dezinfecie n funcie de condiiile de risc
i nivelul de eficiena al acestora
3. S discute despre decontaminarea mecanic
4. S discute despre decontaminarea prin metode fizice
5. S discute despre decontaminarea prin metode chimice
DEFINIII
Contaminare prezena microorganismelor pe o suprafa
Colonizare
prezena i multiplicarea unui microorganism pe suprafaa gazdei, far o reacie
deosebit din partea acesteia
Septic
contaminat cu microbi patogeni sau infectat (n cazul plgilor)
Aseptic
lipsit de microbi patogeni
Asepsie
ansamblul metodelor prin care evitm contaminarea unui substrat sau a unor
elemente de mediu, a cror condiie microbiologic trebuie respectat.
Antisepsie
distrugerea sau ndeprtarea formelor vegetative ale microorganismelor, dar nu n
mod necesar i a sporilor bacterieni, de pe suprafee vii.
Antiseptic
substan antimicrobian pentru aplicri pe suprafee vii (tegumente, mucoase,
plgi).
Dezinfecie
distrugerea sau ndeprtarea formelor vegetative ale microorganismelor, dar nu
obligatoriu a sporilor bacterieni, de pe suprafee inerte
Dezinfectant substan antimicrobian pentru aplicri pe materiale inerte
Steril
lipsit total de microorganisme viabile
Sterilizarea
distrugerea sau ndeprtarea tuturor microorganismelor, de pe o suprafa sau dintrun obiect, inclusiv a sporilor bacterieni
Prezervare
prevenirea multiplicrii unor microorganisme n produse farmaceutice, alimentare.
Alegerea metodelor de sterilizare sau dezinfecie
Selecionarea metodei se realizeaz n funcie de riscul pe care l prezint contaminarea
ntr-o condiie concret (Condiii de risc)
1. Critice (cu risc nalt de contaminare)
o Sterilizarea este obligatorie
o Materiale sau instrumentare ce realizeaz contact direct cu esuturile i cu mediul
intern: intrumentar chirurgical, materiale de sutur, seringi, catetere, soluii
injectabile
o Recipiente, medii de cultur i instrumentar (examene microbiologice)
2. Semicritice (cu risc intermediar de contaminare)
o Dezinfecie de nivel nalt
o Instrumentar care vine n contact cu mucoasele: endoscoape, sonde, termometre,
apstoare de limb
o Sticlrie i materiale care au venit n contact cu snge sau alte produse biologice.

3. Necritice (cu risc minim de contaminare)

o Dezinfecie de nivel mediu sau sczut
o Instrumentar care vine n contact cu tegumentul intact
o Vesel, lenjerie
o Minile personalului medical
Niveluri de eficien a decontaminrii
nalt = sterilizare; indicat n condiii critice
Mediu = dezinfecie eficient; indicat n condiii semicritice
Jos = dezinfecie, antiseptizare, decontaminare mecanic; indicat n condiii necritice

1.
2.
3.
4.

Factori ce influeneaz eficiena decontaminrii

Intensitatea i timpul de aciune al agentului decontaminant timpul de omorre variaz
invers proporional cu intensitatea agenilor antimicribieni
Mediul n care acioneaz (substanele organice, turbiditatea mediului, duritatea apei, pH-ul
pot diminua aciunea decontaminantului)
Concentraia microorganismelor (pentru aceeai intensitate a unui agent antimicrobian,
timpul de omorre crete proporional cu concentraia acestora = efect populaional)
Rezistena microorganismelor (unele specii de BGN prezint rezisten fa de multe
antiseptice i dezinfectante)
Rezistena la ageni antibacterieni a diferitelor tipuri de microorganisme

Cele mai rezistente - Spori bacterieni

Micobacterii
Virusuri nude
Bacterii gram-negative
Fungi
Bacterii gram pozitive
Cele mai puin rezistente - Virusuri nvelite

AGENI DE DECONTAMINARE
Mecanici: splare cu ap i spun
Fizici:
o cldura uscat/umed;
o temperatura scazuta;
o radiaii (neionizante / ionizante);
o ultrasunete;
o filtrare.
Chimici: substane antimicrobiene

DECONTAMINAREA MECANIC Splarea minilor

n funcie de nivelul de asepsie cerut de manevra ce urmeaz a fi efectuat, exist 3
proceduri de splare a minilor, cu meniunea c orice manevr (umezire, spunire, cltire, frecare)
ncepe din zone curate i se termin cu cele murdare, degetele fiind orientate n sus, dup ce au fost
ndeprtate toate inelele i brrile de la mn.
1. Splarea igienic (simpl) include:
Umezire cu ap a minilor, pumnilor i antebraelor care vor fi inute vertical cu degetele
orientate n sus, astfel ca apa s curg spre coate.
Spunire n aceei ordine i poziie:
o Frecare de cte 5 ori a:
Palmelor ntre ele
Palma dreapt peste mna stng
Palma stng peste mna dreapt
Palmele ntre ele cu degetele flectate i ncruciate
Deget mare drept prin rotaie cu mna stng
Deget mare stng prin rotaie cu mna dreapt
Palma stng prin rotaie cu mna dreapt cu degetele flectate
Palma dreapt prin rotaie cu mna stng cu degetele flectate
o Se spunesc cu atenie prin frecare extremitile degetelor, spaiile periunghiale,
spaiile interdigitale, articulaia pumnului i antebraul pentru fiecare parte, innd
degetele orientate n sus.
Cltirea cu ap dinspre zone splate spre cele nespalate, degetele fiind orientate n sus astfel
ca ap s se scurg spre coate.
Durata etapelor descrise este n medie de 30 secunde.
Uscare prin tergere cu prosop de unic folosin steril sau nesteril (din hrtie)
nchiderea robinetului cu mna n care se pstreaz prosopul deja folosit
Aruncarea prosopului n recipieni speciali
n situaii de urgen ca nlocuitor al splatului se practic aplicarea de soluie antiseptic pe
tegumentele minilor i frecarea acestora timp de 15-30 secunde. Dup mai multe utilizri minile
trebuie splate conform procedurii standard.
2. Splarea aseptic
Pe lng procedura standard, include dup umezire, spunire i cltire de aproximativ 1
minut, uscare n aer prin inerea minilor cu degetele n sus i n plus dezinfecie cu soluie
antiseptic (betadine, clorexidin i soluie hidroalcoolic) prin aplicare pe tegumentul uscat i
frecare pn la ptrunderea integral a acesteia n tegument (aproximativ 30 secunde). Procedura se
ncheie prin ateptarea (1-2 minute) pn la uscarea tegumentelor.
Cnd cele 230 -330, necesare acestei procedurii nu sunt disponibile, n urgen, se poate
folosi metoda rapid prin aplicarea numai a antisepticului pe tegument, ceea ce necesit aprox. 30
secunde.
3. Splarea chirurgical
Pe lng procedura standard, include dup umezire cu ap steril, spunire i cltire, o
frecare cu perie steril i spun lichid antiseptic, a unghiilor timp de 30 secunde pentru fiecare
mn urmat din nou de cltire. Se continu cu o nou spunire, cltire i antiseptizare prin

aplicare i frecare pn la ptrunderea complet n tegument. Uscarea final a minilor se face prin
tergere cu prosop steril ncepnd cu degetele i terminnd cu coatele sau prin expunerea la aer cu
inerea minilor n sus. Abia apoi se pot pune mnuile necesare procedurilor sterile.
n situaii de urgen (procedura fiind de lung durat - aproximativ 5-10 minute, greoaie)
s-a propus o variant scurt care include spunire, cltire, uscare i antiseptizare cu 2 tipuri de
soluie, urmat de punerea mnuilor sterile.
DECONTAMINAREA FIZIC
A. CLDURA

Sterilizarea prin cldur este cea mai folosit n practica medical

Avantaje: nu este costisitoare, este uor de realizat i controloat
Dezavantaje: nu toate produsele supuse sterilizrii prin cldur rezist la temperature nalte
Cldura umed este mai nociv dect caldura uscat
Cldura uscat deshidrateaz celulele, iar desicaia face ca unele cellule s intre ntr-o stare
inactive necesar utilizarea unor temperature mai nalte pentru a obine efectul cid;
CLDURA USCAT

Sterilizarea prin ardere n flacr

o nclzirea la rou firul drept, ansa i spatula de nsmnare
o Flambarea gura eprubetelor i flacoanelor, tija ansei de nsmnare
o Incinerarea materiale dispozabile contaminate, reziduuri organice
Sterilizarea prin aer cald (etuv)
Etuva = cutie metalic cu perei dubli termoizolai, prevzut cu rezistene electrice pentru
nclzirea aerului, un termostat ce permite meninerea constant a temperaturii la valoarea
programat i un ventilator ce asigur uniformizarea temperaturii aerului n incint
o Principiu: cldura uscat omoar microorganismele printr-un proces de oxidare
o Indicaii:
obiecte din sticl (eprubete, pipete, baloane);
obiecte din porelan (mojar);
instrumentar chirurgical metalic (pense, bisturie, foarfece);
pulberi inerte higroscopice (talc);
uleiuri minerale.
o Contraindicaii:
soluii apoase;
obiecte din cauciuc sau cu garnituri din cauciuc;
seringi din sticl cu metal;
esturi i vat din bumbac sau fibr sintetic;
materiale contaminate din laborator.
o Parametri:
temperatura = 170 - 180 C;
timpul = 60 minute.
timpul de sterilizare = t

egalizare a temperaturii

+ t omorre a microbilor.

 natura, forma,
volumul materialelor

= constant

o Etape de lucru:
constituirea lotului de sterilizare
aezarea obiectelor ambalate i a martorilor n etuv
programarea temperaturii de sterilizare i conectarea la sursa de curent
sterilizarea (timpul de sterilizare se msoar din momentul atingerii
temperaturii de sterilizare)
rcirea materialelor
controlul martorilor
o Controlul de calitate/martori:
martori fizici: temperatura
martori chimici: benzi adezive a cror culoare vireaz corespunztor numai
cnd sunt respectai cei doi parametri ai sterilizrii.
martori biologici: benzi de hrtie de filtru impregnate cu 10 6 spori de
Bacillus subtilis; dup sterilizare sunt aseptic transferate n eprubete cu
mediu de cultur (10ml), meninute la 37oC, 48 h; cultura negativ =
steriliare eficient.
Martorii fizici i chimici trebuie verificai la fiecare ciclu al sterilizrii, iar
martorii biologici trebuie verificai sptmnal
CLDURA UMED
Temperaturi mai mici de 100oC
Pasteurizarea
Folosete aciunea combinat a caldurii umede i a frigului
nclzirea lichidelor alimentare la temperaturi ntre 63oC i 135oC distruge formele
vegetative, dar nu si sporii bacterieni.
Refrigerarea imediat la 4oC completeaz, prin oc termic, efectul micrbiocid al cldurii i
mpiedic multiplicarea microorganismelor
Tip de pasteurizare
Temperatur
Timp
o
Joas
63 C
30 minute
Medie
72 oC
15 secunde
nalt (UHT)
135 oC
1 secund
Tyndallizarea (sterilizarea fracionat)
Indicaii: substane termolabile (medii de cultur, alimente).
Parametri: 30-60 min., 3-8 zile consecutiv, la 56-100C
Principiu: n intervalul dintre expuneri, produsele sunt meninute la temperatura camerei,
ceea ce permite germinarea sporilor, formele vegetative care rezult fiind distruse la al
doilea sau urmatoarele tratamente termice.
Temperatura de 100oC

Fierberea
Omoar formele vegetative ale bacteriilor, aproape toate virusurile i fungii n cca. 10
minute, virusul hepatitei B n cca. 30 minute, iar unii endospori bacterieni n peste 20 de
ore.
Indicaii: decontaminarea apei de but, lenjeriei, instrumentarului de mic chirurgie n
urgene (n absena celui steril); fierul de clcat cu aburi distruge formele vegetative
bacetriene n 5-10 secunde.
Parametri: 30 min., 100C
Instrumentele se aeaz pe un grtar ce se ridic aseptic la sfritul fierberii; instrumentele
fierbini se usuc pe fierbtorul fierbinte.
Temperaturi peste 100oC
Sterilizarea prin vapori de ap sub presiune (autoclav)
Autoclavul = incint cu axul vertical sau orizontal, cu perei metalici rezisteni i un sistem de
nchidere ermetic, n care vaporii de ap se comprim la presiunea necesar sterilizrii.
o
Principiu: cldura umed omoar microorganismele prin coagularea
proteinelor; cldura umed este mai nociv dect cea uscat.
o Indicaii:
soluii (medii de cultur);
sticlrie de laborator cu destinaii speciale (pentru culturi de celule);
bioreziduuri (culturi microbiene, produse biologice);
material chirurgical din bumbac;
obiecte i instrumente din cauciuc;
instrumentar metalic
o Parametri:
presiune
0,5 atm
1 atm
2 atm
temperatur
115C
121C
134C
timp (formul de calcul)
timpul de sterilizare = t egalizare a temperaturii + t omorre a microbilor.
natura, forma,
= constant
volumul materialelor
o Etape de lucru:
constituirea lotului de sterilizare,
verificarea nivelului apei din interiorul autoclavului,
introducerea materialelor ambalate i a martorilor,
nchiderea autoclavului,
evacuarea aerului (se cufund ntr-un vas cu ap un tub de cauciuc adaptat la
robinetul de vapori; aerul este complet evacuat din incinta de sterilizare,
cnd nceteaz a mai barbota n ap)
nchiderea robinetului de evacuare a aerului
ridicarea presiunii,
sterilizarea (se urmrete realizarea temperaturii de sterilizare i a timpului
corespunztor de meninere a acesteia),
coborrea presiunii,

deschiderea aparatului (imediat ce presiunea a ajuns la 0; lichidele fierbini

vor fierbe exploziv i pot sparge flacoanele dac presiunea este mai mare de
0)
uscarea materialelor (n autoclav, cu capacul deschis vaporii de ap vor
mpiedica depunerea pulberilor),
verificarea martorilor,
marcarea i sigilarea materialelor.
o Controlul de calitate/martori:
martori fizici: temperatur, presiune
martori chimici: benzi adezive a cror culoare vireaz corespunztor numai
cnd sunt respectai parametrii sterilizrii (temperatur i timp).
martori biologici: 106 spori de Bacillus geostearothermophilus n fiole cu
medii de cultur. dup sterilizare, distrugerea sporilor este atestat prin
absena cultivrii, la 57oC, 48 h;
martorii fizici i chimici trebuie verificai la fiecare ciclu al sterilizrii, iar
martorii biologici trebuie verificai sptmnal

B. FRIGUL
Refrigerarea (0oC 7oC)
efect bacteriostatic
modalitate de conservare a culturilor microbiene, produse biologice, alimente
Congelarea
peste -20 oC are efect microbiocid
rapid la peste -80 ntr-un mediu protector (bulion glicerinat) poate asigura indefinit
meninerea viabil a microorganismelor
C. DESICAREA
Este folosit n microbiologie pentru conservarea ndelungat a tulpinilor unor
bacterii sporulate
D. PRESIUNEA OSMOTIC
Mediul hipertonic determin plasmoliza celulelor, blocnd multiplicarea lor; n final
determin moartea acestora
Prezervare alimente (saramurare sau concentraii crescute de zaharoz)
E. RADIAIILE
Radiaiile neionizante (UV)
Afecteaz replicarea ADN-ului celular
Efect intens microbiocid la o lungime de und de 260 nm
Slab penetrabilitate (dezavantaj)
Lmpi UV- sli de operaie, boxe pentru lucru aseptic, suprafee de lucru n
laborator
Radiaiile ionizante (razele X i gamma)
Determin ionizarea apei cu formare de radicali toxici hidroxil ce acioneaz asupra
componentelor celulare.
Efect microbiocid la lungimi de unde mai mici de 1 nm

 Important penetrabilitate
Radiaiile gamma sterilizarea n condiii industriale a seringilor de unic folosin,
mnuilor chirurgicale, materialelor de sutur
Control sterilizare benzi impregnate cu 106 spori de Bacillus pumilus
F. FILTRAREA
Filtrarea este o metod de decontaminare a aerului sau a unor soluii degradabile
prin cldur
Filtrele cu pori de 0,01m pot reine inclusiv virusurile mici, avnd efect sterilizant
Filtrele HEPA (High Efficiency Particulate Air Filters) folosite pentru sterilizarea
aerului n boxele de siguran antiepidemic, slile de operaie, n saloanele
pacienilor cu boli cu transmitere aerian, pacieni imunocompromii, ari.
AGENI CHIMICI
Clasificare:
Ageni de denaturare a strii coloidale a proteinelor (acizi, alcooli)
Ageni blocani ai gruprilor chimice libere a enzimelor (peroxizi, metale grele,
formaldehid, oxid de etilen)
Ageni care lezeaz membranele celulare (fenoli, detergeni)
Ageni care altereaz acizii nucleici (derivai de anilin, acridin)
Exist diferene n ce privete eficiena antimicrobian, activitatea n prezena substanelor
organice, toxicitate; curat/murdar; necesitatea penetrrii agentului dezinfectant.

FENOLUL I DERIVATII FENOLICI

Aciune: denatureaz proteinele i lezeaz membrana celular

Nivel de eficien: intermediar spre sczut
Spectru: bacterii Gram pozitive;
Utilizare: dezinfectant i antiseptic
Exemple: fenolul, compuii fenolici

ALCOOLII
Aciune: denatureaz proteinele i lezeaz membrana celular
Nivel de eficien: intermediar
Spectru: bactericid (inclusiv pe Mycobacterium), fungicid, virucid (virusuri cu anvelopa);
cu toate acestea, ele NU sunt eficiente mpotriva endosporilor bacterieni
Utilizare: dezinfectant, antiseptic i dizolvant n tincturi
Exemple: soluii de alcool 70% - 90%
o Etanolul
o Izopropanolul - are o activitate bactericid mult mai bun
HALOGENI
Aciune: denaturarea proteinelor, inclusiv a enzimelor.
Nivel de eficien Intermediar

 Spectru: forme bacteriene vegetative, fungi, unii endospori bacterieni i numeroase virusuri
Utilizare: antiseptic, dezinfectant
Exemple: iod, clor, brom, fluor.
AGENII OXIDANI
Aciune: denaturarea proteinelor prin oxidare
Nivel de eficien nalt
Spectru: deosebit de eficieni mpotriva microorganismelor anaerobe
Utilizat: dezinfectant, antiseptic pentru leziuni profunde, sterilizarea echipamentului
medical
Exemple: Peroxizii, ozonul i acidul peracetic
AGENI TENSIOACTIVI
Aciune: reduc tensiunea superficial a apei i lezeaz membrana celular
Nivel de eficien: sczut
Spectru: bactericide, n special mpotriva bacteriilor Gram-pozitive, fungi, virusuri cu
anvelopa
Utilizat: dezinfectant, antiseptic pentru leziuni profunde, sterilizarea echipamentului
medical
Reprezentani: spunurile i detergenii.
METALE GRELE
Aciune: denatureaz proteinele
Nivel de eficien: sczut
Reprezentani: argintul, mercurul, cromul
ALDEHIDELE
Aciune: denatureaz proteinele i inactiveaz acidul nucleic
Nivel de eficien: nalt
Spectru: bactericid, fungicid i virulicid
Reprezentani: glutaraldehida 2% i formaldehida (soluie de 37%)
AGENII GAZOI
Aciune: denatureaz proteinele
Nivel de eficien: nalt
Reprezentani: oxidul de etilena, oxid de propilen i beta-propiolactona
ENZIMELE
Aciune: denatureaz proteinele
Nivel de eficien: nalt mpotriva substratului int (prioni)
Reprezentant: Prionzyme
Reguli privind utilizarea corect a dezinfectantelor:
1. Soluiile se prepar n momentul folosirii
2. n alegerea concentraiilor se va ine seama de condiia curat/murdar a obiectelor supuse
aciunii dezinfectantelor
3. Pentru decontaminarea minilor, ntotdeauna soluia antiseptic se toarn pe mini
(introducerea acestora n soluie conduce la inactivarea rapid a efectului antimicrobian)
4. Nu suprancrca, pentru a evita scurgeri contaminante la mobilizarea borcanului

5. Nu introduce obiecte care plutesc dect dac pot fi umplute i imersate complet sau dac
borcanul are capac i poate fi nclinat repetat.
6. Nu introduce materiale cu coninut proteic mare, ci colecteaz-le separat pentru autoclavare
direct.
7. Nu dilua dezinfectantul prin scurgeri de lichide. Pentru supernatantul din tuburile de
centrifug folosete un container separat cu soluie mai concentrat de dezinfectare i
prevzut cu plnie pentru reinerea aerosolilor contaminani.
8. Nu lsa mai mult de 24 de ore materialele n soluia dezinfectant i nu refolosi soluia
pentru c se pot selecta i nmuli bacterii de contaminare rezistente
9. Soluiile dezinfectante nefolosite 24 de ore se arunc.
Bibliografie : Cap 7.2. pag 120-129