Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
-SIBIU2015
Rezumat
Invertaza este o enzim care catalizeaz hidroliza (defalcare) din zaharoz (zahar de masa).
Numele oficial al invertazei este beta-fructofuranozidaz (EC3.2.1.26).Amestecul rezultat
de fructoz i glucoz se numete sirop de zahar invertit . Legate de invertaze sunt
zaharazele. Invertazele i sucrases hidrolizeaz zaharoz pentru a da acelai amestec de glucoz
i fructoz.
Pentru uz industrial, invertaza este de obicei derivat din drojdie . De asemenea, este sintetizat
de albine, care o folosesc pentru a face mierea de nectar. Temperatura optim la care viteza sa de
reacie este cea mai mare se ridic la 60 C i un pH optim de 4,5. n mod tipic, zaharul este
inversat cu acidul sulfuric.
Invertaza este scump, aa c poate fi preferabil s se fac fructoz de glucoz
folosind izomeraza de glucoza in loc.
Abstract
Invertase is
an
enzyme
that catalyzes the hydrolysis (breakdown)
of sucrose (table
sugar). Official name for invertase is beta-fructosidase EC 3.2.1.26, The resulting mixture
offructose and glucose is called inverted sugar syrup. Related to invertases are sucrases.
Invertases and sucrases hydrolyze sucrose to give the same mixture of glucose and fructose.
Invertases cleave the O-C(fructose) bond, whereas the sucrases cleave the O-C(glucose) bond.
For industrial use, invertase is usually derived from yeast. It is also synthesized by bees, who use
it to make honey from nectar. Optimum temperature at which the rate of reaction is at its greatest
is 60 C and an optimum pH of 4.5. Typically, sugar is inverted with sulfuric acid.
Invertase is expensive, so it may be preferable to make fructose from glucose using glucose
isomerase instead.
CUPRINS
Introducere................................................................................................................. 2
Invertaza. Noiuni generale........................................................................................ 2
Imobilizarea invertazei............................................................................................... 8
Monitorizarea activitii invertazei............................................................................. 8
Microorganisme productoare de invertaz...............................................................9
Obinerea invertazei din tulpini de Saccharomyces Cerevisiae................................10
Schema tehnologic de obinere a invertazei...........................................................12
Utilizarea invertazei.................................................................................................. 15
Concluzie.................................................................................................................. 18
Bibliografie............................................................................................................... 19
Introducere
Reacia prin care invertaza rupe molecula de sucroz n glucoz i fructoz este
prezentat mai jos:
productivitate la 16 tone de sirop invertit (greutate uscat) poate fi obinut folosind un litru de
enzim granular.
Invertazaeste o -fructofuranozid ce hidrolizeaz zaharoza la fel ca i ali -fructani,
cum ar fi rafinoza. Este ntlnit in literatur sub diferite denumiri, cum ar fi : sucraz, invertin,
zaharaz. Trebuie menionat c zaharoza poate fi hidrolizat relativ uor i n abesna invertazei,
dar n condiii de reacii acide. Enzima transfrucozilanta care catalizeaza hidroliza zaharozei si
transferul concomitent al gruparii fructozice pe un anumit acceptor. Fermentul numit invertaz,
apare la drojdii, la unele plante (usturoi, pere, frunze de vi de vie), la anumite insecte (albine),
la animale i la om. Aceast enzim este utilizat i n industria alimentar, ca aditiv.
Invertaza, este o enzim care catalizeaz reacia de hidroliz a zaharozei, scindnd molecula
ozidei n componentele ei; glucoza i fructoza. n corpul omului, invertaz se produce la nivelul
intestinului subire. Reacia de invertirea a zaharozei, proces fr de care nu poate avea loc
absorbia zahrului prin monoglucidele componente, se face cu consum de calciu, acesta fiind
motivul pentru care zahrul rafinat este decalcifiant. Omul i poate procura invertaz i din
exterior.
Secreia i activarea invertazei, este stimulat de amilaz, de calciu i de fructoz i este
inhibat de ctre glucoz. Insuficiena invertazei secretate de intestinul uman, conduce la un grad
mai mic sau mai mare de intoleran la zaharoz, dar i la surmenaj sau astenie. De cele mai
multe ori, invertaza intestinal este "epuizat" din cauza consumului mare de produse care conin
zahr rafinat. Deficitul de invertaz se poate asocia cu o insuficien a amilazei. n funcie de
gradul insuficienei, simptomele merg de la o digestie greoaie pn la diaree acid, rebel cu
scaune pufoase.
Invertaza este o glicoprotein alctuit din 532 aminoacizi ce conin dou subuniti
proteice identice, cu o structur oligozaharidic asemntoare cu cea a manozei.
Invertaza este enzima care catalizeaza reactia de hidroliza a zaharozei la glucoza si
fructoza, amestec numit zahar invertit utilizat n industria alimentara si este prezenta n
echipamentul
enzimatic
Saccharomycescerevisiae,
al
numeroaselor
Saccharomyces
tulpini
de
Carlsbergensis),
drojdii
fungi
(Candida
utilis,
(Aspergillus
niger,
Imobilizarea invertazei
Invertaza a fost prima dat imobilizat de Nelson i Griffin n 1916, ei folosind crbune
activat. De atunci i pn n prezent enzima a fost foarte studiat i purificat din diferite surse
prin diferite metode. Numai invertaza extras din drojdii a avut ns importan industrial.
Invertaza poate fi mult mai uor imobilizat folosind alginat de calciu. Pentru aceasta se
sugereaz ca preparatul curat de enzim s fie amestecat cu un volum egal de soluie de alginat
de sodiu 2%, care este adugat apoi n picturi ntr-o soluie de clorur de calciu 1,5%. Se
permite linitirea paturilor cteva minute nainte de folosire.
Sucroza nu este un zahar reductor, ns, glucoza i fructoza, produsele aciunii invertazei
asupra sucrozei, sunt. Apariia zaharurilor reductoare ntr-o reacie poate fi folosit pentru
monitorizarea activitii invertazei.
Pentru aceasta, se prepar un standard pentru determinarea curbei de calibrare cu soluii
de glucoz de concentraii cunoscute ntre 1-10%, nregistrndu-se timpul necesar decolorrii
soluiei acidifiate de manganat de potasiu. Pentru fiecare reacie se folosesc 10 ml dintr-o soluie
de glucoz, 5 ml de acid sulfuric 1 M i 2 ml soluie 0,01 M de manganat de potasiu.
Pentru monitorizarea activitii invertazei, se dizolv 10 g de sucroz n 100 ml ap. Se
adaug 2 ml de preparat de invertaz. Se iau cte 2 ml din acest amestec de reacie la intervale de
timp de 1 11/2 ore.
Pentru fiecare prob se nregistreaz timpul necesar decolorrii soluiei acidifiate de
manganat de potasiu, ca i anterior, dar substituind proba cu soluia de glucoz. Se folosesc
curbele standard pentru estimarea cantitii de zaharuri reductoare prezente.
9
Contrar celor mai multe enzime, invertaza prezint o activitate relativ mare la un pH de
3,5 5,5 cu un optim n apropierea valorii de 4,5. Activitatea enzimei ajunge la un maxim n
jurul valorii de 550C. Valorile Michaelis-Menten pentru diferite enzime variaz mult, dar pentru
cele mai multe dintre ele Km este cuprins ntre 2 mM i 5 mM. Valoarea Michaelis-Menten
pentru enzimele libere este n general aproximativ 30 mM.
10
Inoculul
11
aici ntr-un germinator (fermentator de 3000-5000 l) ce va servi pentru inocularea mai multor
fermentatoare.
Drojdiile pot fi cultivate cu uurin n condiii de aerobioz (prin agitare) pentru
obinerea de biomas n mediu YPG care conine la 1000ml ap distilat: 10g pepton, 10g
extract de drojdii, 20g glucoz. Condiiile optime de cultivare sunt: pH optim =7, temperatura 30
C timp de 48 ore.
Faza de bioproces
Pregtirea cultivrii. Cultivarea drojdiilor presupune existena unei surse de carbon, n
principal glucoz. Industrial se folosete mai ales melasa, care trebuie iniial limpezit i
sterilizat. Apoi va fi diluat cu ap, se ajusteaz aciditatea, nclzit pn aproape de fierbere i
filtrat. Aportul de azot se realizeaz prin fosfat de amoniu i se asigur srurile minerale
eseniale, potasiu i magneziu.
Cultivarea propriu-zis. Cultivarea se realizeaz n vase de volum mare, care nu
necesit sterilizare, ci doar curire cu abur fierbinte. Drojdia va fi hrnit cu melasa pregtit n
prealabil i cu mari cantiti de aer (se evit fermentaia alcoolic), aciditatea fiind mereu
controlat i ajustat la pH = 4,5-5,5. Se prefer cultivarea la temperatur mai ridicat
(40 C)
Melasa
12
Unul dintre cei mai folositi indulcitori este melasa. Fie ca este provenita din sfecla sau
din trestie de zahar melasa are un gust deosebit, dulce si aromat. Melasa are un continut ridicat
de zahar, vitamine, minerale si aminoacizi, melasa de sfecla este foarte bogat in betaina
naturala.
Melasa poate fi folosita "cruda" sau fermentata. Pentru fermentare se adaug putin apa
si se lasa melasa intr-un loc mai caldut timp de 48 de ore.
Se va observa la suprafata o spuma alba si se va simti un miros specific fermentarii.
Melasa este un lichid negru vscos,cu miros ptrunztor i gust dulceag.
d Materii auxiliare
Toluenul
n chimiaorganic toluenul este o hidrocarbur aromatic lichid, incolor,
inflamabil, insolubil in ap, din seria benzenului.
Toluenul se extrage din gazele de cocserie i din gudroanele crbunilor de
pmnt. Se ntrebuineaz la prepararea unor colorani, a unor medicamente etc.
n combinaie cu alte elemente poate deveni extrem de periculos, de exemplu
prin nitrarea toluenului se obine trinitrotoluenul (trotilul), un exploziv puternic.
Papaina
Papaina este cea mai importanta enzima aflata in frunzele si fructele
plantei tropicale papaya. Aceasta enzima este asemanatoare cu pepsina
produsa de organismul uman si intervine in descompunerea alimentelor.
Principalul efect consta in predigestia carnii (adica pregateste carnea
inca inainte de a ajunge in stomac si de a incepe digerarea ei).
AVANTAJE:
14
melas
Inocul drojdii
Minerale +ap+azot
aer
nclzire
compresare
limpezire
filtrare
sterilizare
Ap de splare
Centrifugare 1
Efluent lichid 1
Centrifugare 2
Efluent lichid 2
Crem de drojdii
toluen
papain
Autoliz
Soluie enzim C
EnzimA
Uscare
Filtrare 3
EnzimB
Filtrare 1
Filtrat enz.B
Condiionare solid
Extract invertaz
Soluie rezidual
+ solvent
Filtrare 2
ENZIM-INVERTAZA
15
efluent
Utilizarea invertazei
Invertaza este utilizata n primul rnd n industria alimentara, unde fructoza este
preferata a se folosi n locul zaharozei, datorita gradului de ndulcire mai mare si faptului ca nu
cristalizeaza att de usor ca zaharoza, precum si a faptului ca zaharul invertit are o solubilitate
mult mai mare dect zaharoza si nu cristalizeaza dect foarte greu. Preparatele de invertaza se
folosesc la fabricarea mierei artificiale si la prepararea zaharului invertit destinat fabricarii
nghetatei, a bauturilor nealcoolice si a dulciurilor (bomboane fondante, bomboane de ciocolata
cu miez lichid sau moale si dulciuri din martipan), precum si a lichiorurilor .
Invertaz este utilizat n principal n industria alimentar (produse de patiserie),
industria de fructoz n cazul n care este preferat de peste zaharoz, pentru c este mai dulce i
nu cristalizeaz la fel de uor. Cu toate acestea, utilizarea de invertaz sunt destul de limitate,
deoarece un alt enzime, isomeraze de glucoz, pot fi folosite pentru a converti glucoza pentru a
obine fructoza mai ieftin. Pentru motive de sntate i de gust, utilizarea sa n industria
alimentar impune ca invertaz s fi foarte purificat.
Invertaza este folosit n principal n fabricarea produselor de cofetrie, unde fructoza
este preferat naintea sucrozei deoarece este mult mai dulce i nu cristalizeaz aa uor. Totui,
folosirea invertazei este relativ limitat datorit unei alte enzime, glucozo-izomeraza, care poate
i ea s converteasc glucoza la fructoz, mult mai ieftin. Din motive de sntate i gust,
invertaza utilizat n industria alimentar necesit s fie nalt purificat.
Invertaza este utilizat pentru prepararea siropurilor de zahr invertit, care este un
ingredient al multor produse alimentare. Este folosit de asemenea pentru prevenirea cristalizrii
zahrului n maripan i bomboane fondante umplute. Mult mai interesant este folosirea n
crearea umpluturilor cremoase ale ciocolatei cu lichior i a ciocolatei mentolate desert.
Invertaza poate fi folosit, de asemenea, pentru reducerea coninutului de sucroz al unor
sortimente de sucuri de fructe.
Invertaz este frecvent utilizat n industria alimentar i a fost recomandat pentru
producia de sirop, n prima parte a anilor 1900.
Utilizarea eficient a invertazei, sau a orice alte enzime, necesit anumite cunotine n
special despre proprietile sale.
Dezavantajul major
umpluturilor fondante.
Invertaza prelungete pstrarea stabilizat a produselor de cofetrie, prentmpinnd
prima substan dulce folosit de om, fiind preuit n special de preoi n cadrul
diverselor ritualuri. Exist suficiente mrturii c n civilizaiile antice mierea era folosit,
printre altele, la prepararea unei buturi alcoolice la care se aduga polen i levuri din
faguri, ns, cele mai vechi documente referitoare la miere sunt dou fragmente scrise n
limba sumerian. Musulmanii foloseau mierea ca un leac bun pentru orice boal. Care
prin calitile sale nutritive este considerat un aliment de mare valoare n hrana
oamenilor de toate vrstele, avnd utilizri largi n dietetic i terapeutic.
18
Concluzie
Microorganismele incluznd bacteriile, drojdiile, fungii filamentoi i algele unicelulare
au fost folosite n culturi submerse pentru obinerea diferitelor produse printre care i biomasa
proteic. De la nceputurile produciei pe scar larg de penicilin, streptomicin i de alte
antibiotice i pn la conversia steroizilor de ctre o varietate de microorganisme, s-au dezvoltat
i o serie de echipamente pentru culturile submerse. Factorii limitativi ai dezvoltrii celulare n
astfel de echipamente de fermentaie sunt transferul de cldur i transferul de mas, ultimul
influennd folosirea nutrienilor, n special a oxigenului de ctre celule precum i cantitatea
produilor de metabolism.
Drojdiile sunt benefice pentru omenire, deoarece n cea mai mare msur sunt utilizate
pentru producerea de alimente, vin, bere, substane bioterapeutice i produse farmaceutice. n
prezent au fost recunoscute aproximativ apte sute de specii de drojdie. Deoarece drojdiile sunt
adesea utilizate n biotehnologia tradiional i modern, descoperirea de noi specii este legat i
de noile tehnologii.
Enzimele sunt catalizatori biochimici propriu-zisi, asadar sunt compusi care maresc
viteza reactiilor chimice ce se desfasoara in sistemele biologice, fara sa se consume in cursul lor.
Aceste microorganisme au capacitate de a produce in general un complex enzimatic
hidrolitic ofera mai multe avantaje fata de sursele de enzima de origine animala sau vegetala,
datorita posibilitatilor de a se dezvolta si produce enzime pe medii de cultura ieftine, in instalatii
speciale. Folosirea microorganismelor ca principala sursa de enzime se datoreaza faptului ca se
pot obtine cantitati mari de biomasa in timp relativ scurt si in conditii bine controlate, cat si
faptului ca se pot realiza nivele enzimatice crescute prin interventii asupra mediului de cultura si
a parametrilor de bioproces sau asupra materialului genetic al microorganismului in procesele
fermentative fie in sistem submers, fie pe substraturi solide.
19
Bibliografie
1. http://www.membrane.itcnet.ro/PaginaInvertaza.htm
2. http://www.bioterapi.ro/dictionar/index_substante/index_substanteI.htm
l#invertaza
3. http://www.lsbu.ac.uk/biology/enztech/iminvertase.html
4. http://www.ncbe.reading.ac.uk/NCBE/MATERIALS/ENZYMES/invertase.ht
ml
5. http://www3.interscience.wiley.com/
6. http://www.invertase.net/
7. http://facultate.regielive.ro/
8. https://en.wikipedia.org/wiki/Invertase
20