Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
C11 Replicarea ADN
C11 Replicarea ADN
Reprezint procesul de copiere fidel a succesiunii de nucleotide din moleculele de ADN, deci a informaiei genetice, n scopul transmiterii acesteia de-a lungul generaiilor celulare. Procesul se desfoar n faza S a ciclului celular. Este o reacie de polimerizare, are loc cu o rat de 500 nucleotide/secund la bacterii i de 50 nucleotide/secund la celulele de mamifere. Durata fazei S este de aproximativ 8 ore rezultatul fiind 2 cromozomi perfect identici cu cel de origine, unii prin intermediul centromerului pn n metafaza mitozei. Duplicarea cromozomilor implic att replicarea moleculei lungi de ADN a fiecruia, ct i asamblarea la ADN-ul nou format a noi proteine cromozomiale, ceea ce duce la formarea cromatinei. Viteza i acurateea sunt asigurate de o "main replicativ" complex, reprezentat de un complex multienzimatic.
ADN-polimeraza catalizeaz adiia "treapt cu treapt" a dezoxiribonucleotidelor, la captul 3'-OH al unui lan polinucleotidic preexistent (lanul primer) care se afl mperecheat la lanul matri.
n timpul replicaiei, fiecare caten veche de ADN servete ca matri pentru sinteza unei catene noi. Astfel, secvena ADN de o lungime enorm este replicat "semiconservativ" de ctre ADN-polimeraz.
"Furca replicativ"
Denumit astfel deoarece regiunea aflat n replicare ce se mic de-a lungul helixului de ADN parental are o form de Y. La nivelul furcii replicative, helixul ambelor molecule noi de ADN este sintetizat de un complex enzimatic extrem de sofisticat care conine i ADN-polimeraza.
Iniierea replicrii
Shortcut to replication.lnk
Furca replicativ este iniiat la nivelul unor secvene speciale de ADN numite origini de replicare; replicare Viteza de deplasare a furcii replicative este de 50 nucleotide/secund; Pe cromozomii eucarioi exist mai multe origini de replicare care se mic simultan; Furcile replicative funcioneaz grupat fiind activate simultan cte 20-80 de origini ce constituie uniti replicative; replicative n interiorul unei uniti replicative, fiecare origine de replicare este separat de cealalt printr-un spaiu de 30.000-300.000 de nucleotide; La fiecare origine de replicare se formeaz cte dou furci de replicare care se mic n direcii opuse, pn ce se ntlnesc cu furca de replicare a originii de replicare nvecinate care vine din direcie opus;
Proteinele implicate n mecanismul MMR de reparare a erorilor (partea I). Proteine MSH2-MSH6 (MutS) MSH2-MSH3 (MutS) MLH1-PMS2 (MutL) MLH1-MLH3 (MutL) MSH4-MSH5 EXO1 ANKRD17 Funcii
Repararea erorilor de mperechere: eroare singular de tip baz-baz i IDL de 1-2 mperechere: singular baz baz 1baze Repararea unor IDL singulare i unor IDL-uri 2 baze. Aciune parial suprapus IDLbaze. Ac par suprapus heterodimerului Msh2-Msh6 Msh2Mediator al evenimentelor: de la ataarea la locusul mperecherii greite a evenimentelor: ata gre omologilor MutS pn la sinteza de reparare a ADN. pn Are funcii i n recombinarea n meioz; func meioz Repar: erorile singulare de tip baz-baz i IDL de 1-2 baze fiind un sistem de Repar baz baz 1rezerv pentru MutL. rezerv MutL Principala funcie este legat de recombinarea n meioz. func legat meioz Repararea rupturilor ADN-ului dublu-catenar n meioz i mitoz ADNdublumeioz mitoz Excizia ADN dublu-catenar dubluSupraexprimarea ANKRD17 promoveaz intrarea n faza S; promoveaz Depleia sa prin siRNA: Deple siRNA: - blocheaz progresia ciclului celular; blocheaz celular; - conduce la supra-expresia p53 i p21; supra- diminueaz nivelul de ncrcare al proteinelor Cdc6 i PCNA pe molecula ADN diminueaz nc sugernd implicarea sa direct n mecanismul replicrii. direct replic rii.
Proteinele implicate n mecanismul MMR de reparare a erorilor (partea II). II). Proteine MLH1-MLH2 (hPMS1) (MutL) Complexul RFC PCNA Funcii
La om nu se cunoate funcia heterodimerului. cunoa func heterodimerului. ncarc PCNA; ncarc Moduleaz polaritatea exciziei Moduleaz Interacioneaz cu omologii MutS and MutL; Interac ioneaz MutL; Recrutez proteinele MMR la MM; Recrutez Augumenteaz specificitatea de legare la MM a Msh2-Msh6; Augumenteaz Msh2Particip la excizie i probabil la semnalizare; Particip semnalizare; Particip la sinteza de reparare a ADN. Particip Excizia ADN mono-catenar monoMutator sinergic cu Exo1 mutant Sinteza de reparare exact a ADN exact Particip la excizie i la sinteza ADN Particip Sigileaz molecula ADN prin formarea post-sintetic a legturilor fosfoSigileaz post- sintetic leg fosfodiesterice
Principalii heterodimeri implicai n mecanismul MMR. A. Compoziia heterodimerilor MutS i MutS. B. Compoziia heterodimerilor MutL i MutS.
CAP.2. GENETICA SOMATIC A PROCESELOR MALIGNE COLORECTALE 2.7 Genele i mecanismele de reparare a erorilor de replicare
Sistemul MMR uman reconstruit - etapele procesului de reparare.
MutS (sau MutS) legat la locusul unde s-a produs eroarea de tip MM (triunghiul rou) recruteaz MutL. Acest complex sufer o schimbare conformaional indus de ATP, rezultatul fiind deplasarea de la locusul MM. (a) Complexul ce se deplaseaz n direcia 5' ntlnete RFC legat la captul 5' al catenei ntrerupte. Ulterior desprinde RFC de pe ADN i ncarc EXO1. Exonucleaza activat ncepe degradarea catenei n direcia 5'3', monocatena rmas fiind stabilizat de RPA. Dup nlturarea MM, EXO1 nu mai este stimulat de MutS i este inhibat intens de MutL. ADN polimeraza este ncrcat la captul 5' al discontinuitii iniiale unde se afl PCNA. Acest complex particip la sinteza de reparare, fisura rmas ntre fragmente fiind reparat de ADN ligaz. (b) Complexul ce se deplaseaz n direcia 3' ntlnete molecula PCNA legat la captul 3' al catenei ntrerupte. Recrutarea EXO1 conduce la degradarea catenei dintre discontinuitatea original i MM, posibil prin cteva ncrcri repetate ale EXO1. RFC este legat la captul 5' al discontinuitii pervenind degradarea catenei (la distan de MM). Dup nlturarea MM activitatea EXO1 este inhibat prin legarea sa de RPA i MutL, secvena lips fiind sintetizat de ADN polimeraza i sigilat de ADN ligaza care finalizeaz procesul de reparare. Imagine preluat din: The multifaceted mismatch-repair system. Jiricny J. Nat Rev Mol Cell Biol. 2006 May;7(5):335-46.