BIOFIZICA LUCRRI PRACTICE

DETERMINAREA CONCENTRAIEI UNEI SOLUII OPTIC ACTIVE PRIN METODA POLARIMETRIC 1. Scopul lucrrii Se va determina concentraia unei soluii optic active, cu ajutorul unui polarimetru, prin msurarea unghiului cu care substana rotete planul luminii polarizate, unghi direct proporional cu concentraia acesteia n soluie. 2. Principiul lucrrii Prin und nelegem o perturbaie a unei stri de echilibru, care se deplaseaz sau se propag n timp dintr-o regiune a spaiului n alta. n funcie de direcia de oscilaie a particulelor fa de direcia de propagare a undei, distingem unde transversale (direcii perpendiculare) i unde longitudinale (direcii paralele). Unda luminoas este o und transversal, n timp ce unda sonor este o und longitudinal. Fenomenele de interferen i de difracie se pot produce cu orice fel de unde, cum ar fi undele sonore sau undele formate la suprafaa unui lichid. Efectele de polarizare depind direct de caracterul transversal al undelor luminoase. Aceste efecte pot fi observate numai la undele transversale i nu pot fi reproduse de undele longitudinale. Moleculele din care sunt compuse sursele de lumin radiaz unde luminoase. Particulele ncrcate electric din molecule ctig energie prin diferite procese, energie pe care o radiaz sub forma de unda electromagnetic, cu lungimi de und mici. Aceste molecule au orientri aleatoare, iar unda luminoas este rezultatul suprapunerii acestor unde emise de ele. Unda luminoas transversal are o component magnetic i una electric (Fig. 5.1), oscilaiile acestor vectori fcndu-se perpendicular pe direcia de naintare a undei.

Fig. 5.1 Reprezentarea undei electromagnetice transversale

DETERMINAREA CONCENTRAIEI UNEI SOLUII OPTIC ACTIVE PRIN METODA POLARIMETRIC

n lumina natural, aceste oscilaii se efectueaz n toate direciile perpendiculare pe raz (n orice azimut). Dac, prin anumite metode, oscilaiile sunt mpiedicate de a se efectua pe orice direcie, spunem c lumina este parial polarizat. n cazul n care oscilaiile se efectueaz pe o singur direcie, ntr-un singur plan care conine i vectorul vitez al undei luminoase, spunem c lumina este polarizat liniar (oscilaii ntr-un singur azimut). Exist mai multe metode prin care vibraiile ntr-o direcie particular pot fi selecionate n ntregime sau n parte, dintr-un fascicul de lumin natural:

reflexia - cnd lumina natural cade pe o suprafa dielectric reflecttoare, s-a constatat
c exist o direcie preferenial a acelor unde n care vectorul electric este perpendicular pe planul de inciden (planul care conine raza incident i normala la suprafa); n cazul incidenei normale toate direciile de polarizare sunt reflectate n mod egal; la un anumit unghi de inciden cunoscut sub numele de unghi de polarizare total sau unghiul Brewster, nu se reflect dect lumina al crei vector electric este perpendicular pe planul de inciden; pentru acest unghi raza reflectat i cea refractat sunt perpendiculare. Pentru unghiul Brewster este valabil relaia:
tg
polarizare

n2 n1

(5.1)

unde n2 este indicele de refacie al mediului n care ptrunde raza, iar n 1 este indicele de refracie al mediului din care provine raza. refracia

birefringena - este proprietatea unor cristale de a mpri lumina nepolarizat care

ptrunde n interiorul lor n dou componente total polarizate n plane reciproc perpendiculare; aceast proprietate este specific substanelor cristaline transparente care, dei sunt omogene, sunt anizotrope, adic viteza undei luminoase n interiorul lor nu este aceeai n toate direciile); una din cele dou unde total polarizate poate fi ndeprtat, prin reflexie total, de exemplu, obinndu-se astfel lumin polarizat liniar.

dicroismul de rotaie este proprietatea unor cristale birefringente de a absorbi una din
cele dou unde polarizate din interiorul lor, rezultatul absorbiei diferite pe cele dou direcii fiind lumin total polarizat. Dac un cristal este tiat la limea potrivit, una dintre componente este practic stins prin absorbie (turmalina este un cristal dicroic, de exemplu).

BIOFIZICA LUCRRI PRACTICE

Un material sau un ansamblu de materiale grupate ntr-un anumit mod care au proprietatea de a polariza lumina se numete polarizor.
Polarizorii se folosesc, de exemplu, la ochelarii de soare, pe post de analizor a strii de polarizare a luminii. Cnd lumina nepolarizat este reflectat, exist o reflexie preferenial a luminii polarizate perpendicular pe planul de inciden. Cnd lumina soarelui se reflect pe o suprafa orizontal, planul de inciden este vertical. Prin urmare, n lumina reflectat predomin lumina polarizat n direcie orizontal, proporia fiind cu att mai mare cu ct unghiul de inciden este mai apropiat de unghiul de polarizare. Cnd o asemenea reflexie se produce pe suprafaa unui lac, pe asfaltul neted al drumului sau ntr-o situaie asemntoare, ea produce o strlucire neplacut i vederea se mbuntete prin eliminarea ei. Direcia de transmisie a polarizorului din ochelarii de soare este vertical, n aa fel nct nimic din lumina polarizat liniar nu este transmis ochilor. Aceti ochelari polarizani, n afara proprietilor specifice, au acelai rol ca niste ochelari colorai, absorbind 50% din lumina incident, deoarece i ntr-un fascicul nepolarizat, jumtate din lumin poate fi polarizat orizontal i restul vertical. Numai lumina polarizat vertical este transmis, dar sensibilitatea ochiului este independent de starea de polarizare a luminii.

Numim determinri polarimetrice acele analize care folosesc lumin polarizat. n determinrile polarimetrice se folosesc doar soluii ce conin substane optic active. Soluiile optic active au proprietatea de a roti planul luminii polarizate la interacia cu un front de lumin polarizat. Activitatea optic se poate datora unei asimetrii a moleculelor materialului sau poate fi o proprietate a unui cristal ca ntreg.
De exemplu, soluiile de zahar sunt dextrogire, indicnd faptul c proprietatea optic este o caracteristic a moleculei de zahar. Moleculele de dextroz (glucoz) i levuloz (fructoz) sunt una imaginea n oglind a celeilalte, iar activitile lor optice sunt opuse.

Fig. 5.2. Exemplu de substane optic active: glucoza i fructoza rotesc planul luminii polarizate Cuarul cristalin este optic activ, unele cristale naturale fiind dextrogire, iar altele levogire. n acest caz, activitatea optic este consecina structurii cristaline, deoarece dispare cnd cuarul este topit i apoi solidificat ntr-o stare vitroas, necristalin.

Unghiul cu care o substan optic activ rotete planul de polarizare a luminii este direct proporional cu concentraia c a substanei precum i cu grosimea l a stratului de substan strbtut.

= [] l c

(5.2)

DETERMINAREA CONCENTRAIEI UNEI SOLUII OPTIC ACTIVE PRIN METODA POLARIMETRIC

Constanta de proporionalitate [] se numete putere rotatorie specific i este o constant de material, reprezentnd valoarea absolut cu care este rotit (la dreapta direciei de observare la substanele dextrogire, sau spre stnga la cele levogire) planul luminii polarizate de ctre un strat de soluie ales convenional de 1 dm grosime i avnd concentraia de 1g/cm3, pentru o lungime de und corespunztoare radiaiei sodiului de 589,3 nm. Folosind aceast dependen se poate determina concentraia soluiei optic active. 3. Mod de lucru Pentru efectuarea msurtorilor este nevoie de urmtoarele aparate i substane: - Polarimetru - Soluii de glucoz de concentraii diferite - Ap distilat Polarimetrul (Fig. 5. 3) este instrumentul care permite msurarea unghiului cu care o substan optic activ rotete planul luminii polarizate; este format dintr-un sistem de polarizare a luminii numit polarizor i un sistem de analiz a strii de vibraie a luminii numit analizor, ntre care se plaseaz cuva cu soluia de studiat (S). Polarizorul (P) i analizorul (A) sunt nite nicoli (prisme numite astfel dup numele fizicianului scoian care a imaginat dispozitivul n 1828, William Nicol). Nicolii sunt formai dintr-un cristal birefringent (spat de Islanda) ale crui capete au fost tiate ca n Fig. 3. Unul din cele dou plane de polarizare coincide cu planul de inciden (raza emergent), iar cellalt este perpendicular pe acesta (raza ordinar trasat cu linia punctat din Fig. 5. 4). n vederea ndeprtrii uneia dintre cele dou direcii de polarizare, cristalul se taie pe direcia diagonalei mici a seciunii i se lipete n aceeai poziie cu balsam de Canada. Una din undele polarizate va ajunge pe faa cristalbalsam sub unghiul limit, reflectndu-se total n primul cristal.

Fig. 5. 3. Polarimetrul

BIOFIZICA LUCRRI PRACTICE

Fig. 5. 4. Prisma Nicol

Dac polarizorul i analizorul sunt orientai paralel, lumina polarizat n polarizor trece prin analizor avnd aceeai amplitudine. Dac analizorul se rotete cu un unghi oarecare fa de polarizor n jurul axei sale care coincide cu direcia de propagare a luminii, prin el nu va trece dect componenta vectorului electric E care coincide cu planul de inciden a luminii, luminozitatea cmpului observat prin analizor fiind redus. Pe msur ce unghiul dintre polarizor i analizor crete, ajungnd ctre 900, luminozitatea se reduce tot mai mult, pentru 900 extincia fiind maxim (componenta vectorului electric pe planul de inciden a luminii este 0). n aceast situaie, dac n cuva cu soluia de studiat se introduce o soluie optic activ, aceasta rotind planul luminii polarizate ce vine de la polarizor, n analizor va ptrunde o und ce are componenta n planul de inciden a luminii diferit de zero. Prin rotirea analizorului pn la extincie se poate citi unghiul cu care soluia a rotit planul luminii polarizate. Ochiul nu poate aprecia obiectiv un maxim sau un minim de luminozitate, ntr-un cmp variabil. Poate ns aprecia corect iluminarea egal a dou suprafee alturate. De aceea, pentru precizia msurtorilor polarimetrice, n spatele polarizorului se monteaz o lama dicroic (Q din Fig. 5. 3), astfel nct s ocupe o parte din suprafaa de emergen a luminii din polarizor. S presupunem c lama dicroic rotete planul luminii polarizate cu un unghi i este aezat n semicercul inferior al polarizorului. n Fig. 5. 5 i Fig. 5. 6 este prezentat orientarea planului luminii polarizate n funcie de tipul soluiei din cuv. Se observ c atunci cnd n cuv se afl ap distilat, la ieirea din polarizor plajele nu mai sunt egal iluminate deoarece lama dicroic a rotit planul luminii polarizate cu un unghi , n concluzie semicercul

DETERMINAREA CONCENTRAIEI UNEI SOLUII OPTIC ACTIVE PRIN METODA POLARIMETRIC

inferior al cmpului optic este mai slab iluminat (prin analizor trece doar componenta vectorului cmpului electric pe direcia planului luminii incidente, avnd valoarea Ecos). Pentru a avea o iluminare uniform, analizorul trebuie rotit cu un unghi /2, astfel nct proieciile vectorului cmp electric pe direcia analizorului s fie egale. Cum apare cmpul vizual dac analizorul continu s fie rotit peste unghiuri mai mari dect /2? Cum trebuie s fie orientat analizorul astfel nct cmpul s fie uniform ntunecat?
orientarea vectorului electric nainte ca unda s intre n polarizor orientarea vectorului cmpului electric la iesirea din polarizor orientarea analizorului pentru o iluminare uniform a cmpului optic

Fig. 5. 5 Orientarea planului luminii polarizate la trecerea prin polarimetrul cu apa distilat n cuva cu soluia de studiat (linia punctat reprezint orientarea planului analizorului)

Se observ c n cazul n care n cuv se afl soluie de studiat, pentru o iluminare uniform a cmpului optic, analizorul trebuie rotit cu un unghi suplimentar egal cu unghiul cu care soluia optic activ rotete planul luminii polarizate (). Astfel se poate citi direct unghiul . Lama dicroic ce se monteaz la polarizor nu mparte la toate tipurile de polarimetre cmpul n dou, ea putnd avea diferite forme: fie central n cmp, triunghi plasat n cmpul polarimetric, etc.

BIOFIZICA LUCRRI PRACTICE

Orientarea vectorului electric nainte ca unda s intre n polarizor

orientarea vectorului cmpului electric la ieirea din polarizor

orientarea analizorului pentru o iluminare uniforma a cmpului optic

Fig. 5. 6. Orientarea planului luminii polarizate la trecerea prin polarimetrul cu soluie optic activ (care rotete planul luminii polarizate cu unghiul ) n cuva cu soluia de studiat

Ca mod de lucru efectiv, se urmresc paii:

1. Se umple tubul polarimetrului cu ap distilat, avnd grij s nu rmn nici o bul de aer;
feele strbtute de lumin se usuc bine i apoi tubul se introduce n polarimetru. Se pune la punct imaginea cmpului vizorului i citete unghiul de rotaie al planului de polarizare al luminii prin rotirea analizorului pn la egalizarea luminozitii plajelor din imagine. Polarimetrele sunt astfel construite nct n aceast configuraie unghiul citit s fie 00. n cazul n care indicatorul nu indic 00, se va nota unghiul de corecie.

2. Odat aparatul pus la punct, se scoate tubul i se nlocuiete apa distilat cu soluia optic
activ de concentraie cunoscut. Se introduce tubul n aparat i privind prin ocular se observa c n cmpul vizual plajele nu mai sunt egal luminate. Acest fenomen este datorat soluiei optic active din interiorul tubului care a rotit planul luminii polarizate.

3. Pentru a afla valoarea unghiului cu care substana optic activ a rotit planul luminii
polarizate se rotete analizorul spre dreapta sau spre stnga pn la uniformizarea iluminrii cmpului optic. n acest moment se citete valoarea unghiului din care se scade unghiul de corecie.

4. Se procedeaz ca la punctele 2-4 pentru celelalte dou soluii optic active de concentraii
cunoscute i respectiv pentru soluia de concentraie necunoscut cx. Pentru fiecare soluie se fac cte zece msurtori.

DETERMINAREA CONCENTRAIEI UNEI SOLUII OPTIC ACTIVE PRIN METODA POLARIMETRIC

5. Se traseaz grafic dependena unghiului de concentraia c, folosind metoda celor mai

mici ptrate.

6. Prin interpolare grafic se determin concentraia necunoscut cx.

Lumina polarizat se folosete i n microscoapele cu polarizare care au un polarizor sub condensorul de lumin aflat dedesubtul platinei i un analizor deasupra obiectivului. n Fig. 5. 7 se observ imaginile unor sustane optic active obinute cu ajutorul microscopului cu polarizare.

a)

b)

c)

Fig. 5. 7. Imaginile a) ATP b) colesterolului i c) glucozei obinute cu ajutorul microscopului cu polarizare

n clinic, polarimetrele sunt folosite pentru determinarea concentraiilor de glucoz i de albumin din urin, precum i pentru constatarea i dozarea glucozei din lichidul cefalorahidian i din serul sanguin.