Curs 9 Genetic REGLAREA ACTIVITII GENICE Necesitatea reglajului activitii genelor, att n celula procariot ct i n cea eucariot , este

e determinat de faptul c la un moment dat funcioneaz numai o mic parte din totalitatea genelor !stfel, n celula "acterian se apro#imeaz c, n condiii determinate de mediu, nu se sintetizeaz dect cca $ % din totalitatea proteinelor structurale i enzimelor pentru care e#ist informaie genetic n genom Ca urmare, cantitatea de proteine i n special de enzime sintetizate n celule nu este constant n timp, ci se afl su" controlul unui mecanism de reglare genetic &n cazul eucariotelor superioare, numai cca ' $( % din secvenele de !)N din genom sunt transcrise n !*N Mecanismele de reglare reprezint deci un sistem de coordonare prin care se ace selec!ia adec"at# $n raport cu mediul# a in orma!iei genetice care urmeaz a i e%primat enotipic& +esajul selectat reprezint doar o parte din totalul informaiei pstrat i transmis ereditar de genom, ceea ce nseamn c e#ist molecule semnal care controleaz rata de transcriere a unor molecule specifice de !*Nm ,control transcripional- )up selecia genelor, urmeaz transcrierea informaiei genetice purtat de acestea, n vederea sintezelor proteice dup un program codificat de gene, apoi realizarea ec.ili"rat cantitativ a acestor sinteze i desfurarea reaciilor ce implic activitatea catalitic a proteinelor sintetizate ,control translaional- *eglarea activitii genelor, intrarea lor n funciune dup un program riguros controlat este evident att la procariote ct i la eucariote /a eucariote, dezvoltarea i diferenierea celular este legat de transcrierea selectiv a informaiei genetice de la nivel celular /a aceste organisme apar diferenieri celulare specifice ce nu pot fi e#plicate dect admind faptul c unele gene funcioneaz permanent, n timp ce altele funcioneaz difereniat, n anumite momente specifice ale ontogenezei &n sinteza proteinelor e#ist, n general, dou tipuri de control0 1 Controlul adaptati" ' este dependent de condiiile de mediu care determin activarea unei anumite pri din mesajul genetic ,nefolosit pn n acel moment-, fcnd s fie sintetizate enzimele necesare celulei n acel moment i s fie "locat sinteza enzimelor ce nu sunt necesare n momentul respectiv2 1 Controlul programat ' este indirect influenat de mediu, conducnd la funcionarea constant a genelor i la sinteza de proteine n cantitate aproape constant n tot timpul vieii organismului respectiv

REGLAREA E()RIMRII GENEL*R LA )R*CARI*TE +ecanismele de reglare a activitii genelor au fost cel mai "ine studiate la "acterii 3eoria reglrii genetice la procariote a fost ela"orat de geneticienii francezi 4 5aco" i 5 +onod, n $96$ 7i au demonstrat e#perimental i teoretic c sinteza proteinelor i respectiv a enzimelor celulare, nu este constant n timp ci variaz n funcie de necesitile celulei &n funcie de mecanismele moleculare i de efectele acestora, procesele de reglare a activitii genice pot fi grupate n dou mari categorii0 reglare poziti" +i reglare negati"& Reglarea poziti" 1 reglarea genetic se realizeaz prin activarea unor gene n prezena unei molecule e ector care poate fi o protein, o molecul activator de mici dimensiuni sau un comple# molecular !cest sistem , n anumite situaii, necesit prezena !+8c i a proteinei C*8 ,proteina de legare, receptor, a !+8c-, care iniiaz transcrierea genetic ,n sistemul de reglare negati" n celul este prezent un in-i.itor care $mpiedic transcrierea& !cest in.i"itor ,represor- interacioneaz cu o anumit regiune plasat n faa genelor reglate 8entru iniierea transcrierii este necesar prezena unui antagonist al in.i"itorului, numit inductor&

Reglarea operonului lactozei la Escherichia coli /operonul lac0

Cercetrile privind reglarea genetic la procariote, au dus la concluzia c genele care acioneaz asupra unei ci meta"olice nu au o activitate independent ci fac parte din uniti mai mari denumite operoni ce funcioneaz coordonat&

1n operon este o unitate unc!ional alctuit dintr2o sec"en! de nucleotide ce include0

un promotor# un operator +i una sau mai multe gene structurale care sunt transcrise ntr1un !*Nm policistronic ,o molecul de !*Nm codific pentru mai mult dect o protein1n promotor ' este o secven de !)N, reprezint situsul de recunoa+tere a enzimei ARN polimeraza care are rol $n procesul de ini!iere a transcrierii &n sinteza !*N, promotorul indic care gene ar tre"ui utilizate pentru sinteza !*Nm, i prin alungire ,elongare-, controleaz ce proteine vor fi sintetizate 1n operator ' este un segment de A3N# care regleaz acti"itatea genelor structurale din cadrul operonului# prin interac!iunea cu un represor sau un inductor speci ic )rimul operon# descris de ctre 4 5aco", ) 8errin, C 9anc.ez and 5 +onod n $96(, a ost operonul lac de la Escherichia coli /a E. Coli se consider a fi cca :(( de operoni, dintre care numai activitatea unora este mai "ine cunoscut :

!stfel, la E. Coli, posi"ilitatea utilizrii lactozei din mediu i a meta"olizrii ei, se realizeaz cu ajutorul a ; enzime0 1 4 'galactozid ' permeaza ,localizat n mem"rana celulei "acteriene asigur permea"ilizarea acesteia, facilitnd trecerea lactozei n celula "acterian- si 1 4 ' galactozidaza ,localizat n citoplasma "acterian, cliveaz lactoza la glucoz i galactoz fig $&n cadrul meta"olismului celular mai intervine tiogalactozid transacetilaza ,care n mod normal, are rol de acetilare a lactozei i a altor < galactozide cu ajutorul acetil1 Co!-

5ig& 6& Lactoza si produsii de cli"are 9inteza acestor ; enzime este determinat de ; gene structurale0 lac Z codific <1 galactozidaza , lac Y codific <1 galactozid permeaza i lac A1 codific tiogalactozid transacetilaza ,n a.sen!a lactozei din mediu, genele structurale care determin sinteza celor 7 enzime sunt inacti"e )ac ns se adaug lactoz $n mediu# cele 7 gene sunt rapid acti"ate +i $ncep sinteza celor 7 enzime& !ctivitatea celor ; gene structurale este controlat de o gen reglatoare lac I, care acioneaz asupra lor prin intermediul unui represor &n a"sena lactozei, gena reglatoare sintetizeaz o protein represoare care se cupleaz cu un segment de !)N denumit operator dispus naintea celor ; gene structurale, "locnd astfel activitatea genelor respective

*peronul lac ,fig :- este alctuit din cele 7 gene structurale /lac Z, lac Y, lac A0 +i o serie
de elemente reglatoare reprezentate de8 Represor ' o protein codificat de gena lac I gena reglatoare, situat de regul separat de operonul a crei activitate o regleaz2 are : situsuri de recunoatere0 unul pentru lactoz i compuii si i altul pentru operonul lactozei

)romotorul /p0 ' reprezentat de o secven de nucleotide care are rol de loc de recunoatere pentru enzima !*N polimeraza, determinnd astfel iniierea transcrierii2 *peratorul /o0 ' o secven de nucleotide care servete ca un situs de recunoatere i de legare pentru represorul specific operonului

5ig& 9& *peronul lac 8rin transcrierea operonului lac se formeaz o molecul de !*Nm ce copiaz informaia de pe catena sens !cest !*Nm policistronic conine mai multe semnale start pentru iniierea traducerii 3ranscrierea genetic a operonului lac este controlat att pozitiv ct i negativ

Induc!ia# represia +i retroin-i.i!ia enzimatic

Cercetrile privind sinteza celular a enzimelor au dus la descoperirea fenomenelor de inducie i represie enzimatic, fenomene opuse ca aciune ,antagoniste- i care controleaz cantitatea de su"stane sintetizate

Induc!ia enzimatic este declanat de prezena n mediu a su"stanei ce tre"uie

meta"olizat ,7# lactoza- denumit n acest caz inductor& &n mod o"inuit, operonul lac este nefuncional 7l este indus s funcioneze de ndat ce "acteria este pus pe un mediu cu lactoz Represorul se com"in cu inductorul /su.stan!a ce tre.uie meta.olizat0# de"ine inacti" +i pierde a initatea pentru regiunea *peratorului& :tarea de.locat a operatorului permite accesul ARN polimerazei la genele structurale care $ncep s ie transcrise sintetiz;ndu2se ast el enzimele corespunztoare ,enzime cata"olice1 ce catalizeaz meta"olizarea sau degradarea1 su"stratului nutritiv- ,4ig ;a-

Represia enzimatic este declanat de a"sena su"stratului din mediu , intervine n

momentul n care concentraia su"stratului din mediu scade- *epresorul trece din stare inactiv n starea acti"# se cupleaz cu regiunea operatorului .loc;nd2o# in-i.;nd ast el acti"itatea genelor structurale care asigur sinteza enzimelor corespunztoare& &n mod normal, represorul este inactiv i genele care asigur sinteza enzimelor implicate n sinteza unor meta"olii eseniali funcioneaz !tunci cnd ns concentraia unui meta"olit esenial depete =

necesitile celulei, meta"olitul ,su"stana sintetizat- formeaz cu represorul un comple# activ numit corepresor# care "loc.eaz operatorul i genele corespunztoare ,4ig ;"-

a0 :istem inducti.il

.0 :istem represi.il 5ig& 7& Reglarea operonului lactozei la Escherichia coli )e e#emplu, la Salmonella typhimurium, genele din operonul his care specific enzimele ce intervin n sinteza .istidinei, sunt funcionale atunci cnd n celul se afl o concentraie mic de .istidin Cnd n celul s1a acumulat o cantitate mare de .istidin, e#presia acestor gene este represat i sinteza .istidinei nceteaz Corepresorul /-istidina $n cazul operonului his0 se cupleaz cu represorul ,o protein reglatoare- inactiv, care devine activ, "locnd transcrierea operonului his.

>

Retroin-i.i!ia enzimatic denumit i in-i.i!ia prin eed.ac< sau e ectul No"ic<2

:zilard, este un alt sistem de control al sintezei proteice prin cantitatea de produs final !stfel, n cazul unui anumit lan meta"olic n care intervin mai multe enzime, produsul final n cantitate mare in.i" moleculele e#istente ale enzimei care controleaz prima etap a lanului meta"olic !ceasta spre deose"ire de represia enzimatic care "loc.eaz sinteza tuturor enzimelor care intervin n lanul meta"olic respectiv 3e e#emplu, n calea meta"olic a .istidinei, prima enzim este pirofosforilaza Cnd concentraia .istidinei n celul devine prea mare, molecula de .istidin se leag la o regiune specific acestei enzime, sc.im"ndu1i conformaia sa tridimensional, astfel c enzima devine nefuncional Cnd concentraia de .istidin scade, aceasta prsete enzima, care refcndu1i conformaia spaial original, redevine activ /a E coli s1a o"servat c prin cultivarea pe un mediu ce conine att glucoz ct i lactoz, "acteriile utilizeaz preferenial mai nti glucoza, lactoza rmne nemeta"olizat pn cnd n mediu nu mai e#ist glucoza, fenomen numit diau#ie !ceasta nseamn c atta timp ct e#ist glucoz n mediu, genele lac sunt inactivate !cest mecanism reglator a fost denumit represie prin cata.olit& 8rin urmare, pentru iniierea transcrierii !*Nm policistronic, pe lng prezena inductorului mai este necesar nc un element !ctivitatea acestui element este legat de concentraia glucozei, efectul in.i"itor al glucozei asupra e#primrii genelor lac fiind indirect Natura elementului suplimentar necesar iniierii transcrierii operonului lac, a fost sta"ilit recent, acesta fiind reprezentat de proteine implicate n reglarea poziti" a genelor& )e e#emplu, n cazul operonului lac, cnd glucoza este a"sent, n celul e#ist o cantitate mare din molecula de reglare !+8c ,adenozin1monofosfat ciclic- !cest element e#ist i n cazul celulelor eucariote, mai ales la animale, unde regleaz aciunea mai multor .ormoni Cnd glucoza este prezent n mediu, nivelul !+8c este sczut )easemenea, dac n mediu se afl glicerol sau un alt compus care nu poate intra n calea meta"olic a glucozei, nivelul !+8c este ridicat 3ulpinile de E.coli ,i multe alte specii de "acterii- sunt capa"ile s sintetizeze o protein specific ce are rolul de receptor pentru !+8c ,proteina C*8- codificat de gena crp 8roteina C*8, mpreun cu !+8c, formeaz un comple# !+8c1C*8 care se leag la promotorul operonului lac, la nivelul unui situs specific i activeaz transcrierea ,fig =9inteza !*Nm are loc doar n a"sena represorului i n prezena comple#ului !+8c1C*8 legat la o secven din regiunea promotor ?n celulele ce conin mutaii n genele crp sau cya nu se poate iniia sinteza !*Nm c.iar dac respectivele celule conin i mutaii lac I- ,deci nu se sintetizeaz represor- sau mutaii la nivelul regiunii operator care determin sinteza constitutiv a 1galactozidazei 6

Cu toate acestea, s1a dovedit c transcrierea genelor operonului lac se realizeaz i n condiii "azale, cu o rat foarte sczut dar activitatea ma#im a acestuia necesit ndeplinirea condiiilor menionate anterior

Controlul procesului de traducere al mesa=ului genetic

@ Cercetrile efectuate asupra operonului lac au evideniat faptul c e#ist unele diferene n ceea ce privete traducerea informaiei purtate de !*Nm policistronic, ceea ce sugereaz e#istena i la procariote a unei reglri la nivelul procesului de tranducere @ !stfel, s1a remarcat faptul c "iosinteza celor trei enzime , 1galactozidaz, permeaz i acetilaz- se face n raport molar de $0$A:0$A>, diferenele datorndu1se reglrii la nivelul traducerii 4enomenul se poate realiza pe dou ci in care gena lac Z este tradus prima 9e pare c, n cazul moleculelor de !*Nm policistronic, imediat dup sinteza polipeptidului codificat de prima gen are loc separarea de ri"osomi, urmnd s se formeze un nou comple# de iniiere la nivelul codonului !BG al celei de1a doua gene '

4recvena cu care se realizeaz acest proces este corelat cu pro"a"ilitatea reiniierii la fiecare codon !BG urmtor !stfel, se formeaz un gradient n cantitatea de polipeptide sintetizate de la captul >C spre cel ;C al !*Nm !ceste efect, numit polaritate, se realizeaz n cazul majoritii moleculelor de !*Nm policistronic 3oate moleculele de !*Nm sunt degradate la nucleotide dup cteva runde de traducere @ @ @ )egradarea este nceat dar uneori ncepe imediat dup primul eveniment de traducere )egradarea !*Nm policistronic ncepe, cel mai frecvent, la nivelul genei lac A, apoi continu cu gena lac Y i, a"ia la sfrit, cu gena lac Z Consecina acestui fenomen este c, la un moment dat, sunt mai multe copii ale genei lac Z dect lac Y i, evident, cu mult mai multe dect lac A