Sunteți pe pagina 1din 32

UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE GRIGORE T.

POPA FACULTATEA DE FARMACIE

DOCTORAND,
BOGDAN PALADE

TEZA DE DOCTORAT

REZUMAT

COORDONATOR TIINIFIC,
PROF.UNIV.DR. MIHAI IOAN LAZR
Iai, 2010

CUPRINS
STADIUL CUNOATERII
CAPITOLUL 1 DATE PRIVIND STRUCTURA I CLASIFICAREA CEFALOSPORINELOR .......1 1.1. Structura cefalosporinelor ..................................................................................1 Cefalosporine si cefamicine obtinute prin biosinteza ..................................3 1.2. Proprietatile fizico-chimice ale cefalosporinelor ..............................................5 1.2.1. Proprietati fizice...........................................................................................5 1.2.2. Proprietati chimice .......................................................................................5 a. Desfacerea legturii C-N din ciclul beta-lactamic..........................................6 b. Gruparea 7-acilamino......................................................................................6 c. Reaciile legturii duble 3-cefem ....................................................................6 d. Derivai de 3-cefem.........................................................................................7 e. Gruparea 4 - carboxil din cefalosporine..........................................................7 f.Reaciile atomului de sulf .................................................................................8 g. nlocuirea atomului de hidrogen de la C-7 .....................................................8 1.3. Clasificarea cefalosporinelor ..............................................................................9 Cefalosporine din prima generaie.........................................................................9 Cefalosporine din generaia a doua..................................................................... 10 Cefalosporine din generaia a treia ..................................................................... 11 Cefalosporine din generaia a patra .................................................................... 12 Cefalosporine din generaia a cincea .................................................................. 13 CAPITOLUL 2 ACIUNEA FARMACOLOGIC A CEFALOSPORINELOR ................................ 14 2.1. Actiunea antibacteriana ................................................................................ 14 Condiii structurale fundamentale pentru activitatea antibacterian ............... 14 2.2. Relatia structura-activitate........................................................................... 14 Cefalosporine ................................................................................................... 15 Influena substituentului de la C3 asupra activitii antibacteriene a cefalosporinelor................................................................................................ 18 Atomul de sulf i aciunea antibacterian a cefalosporinelor.......................... 24 Structura 7--metoxi-cefalosporinelor (cefamicine) i activitatea lor antibacterian ............................................................................ 25 CAPITOLUL 3 METODE ANALITICE DE STUDIU AL STABILITATII CEFALOSPORINELOR27 3.1. Stabilitatea substantelor medicamentoase .................................................. 28 3.2. Metode analitice de urmrire a stabilitii cefalosporinelor .................... 28 3.2.1. Metode cromatografice de analiz a cefalosporinelor.............................. 29 Cromatografia pe strat subire................................................................ 29 Cromatografia de lichide de nalta performanta .................................... 31 3.2.2. Metode spectrale de analiza a cefalosporinelor........................................ 41 Metode spectrale in UV-VIS.................................................................. 41 Metode fluorimetrice.............................................................................. 43 Metode spectrale in IR ........................................................................... 43

STUDII PRIVIND STABILITATEA UNOR CEFALOSPORINE, MATERII PRIME PENTRU OBINEREA DE FORME FARMACEUTICE

Metode RMN.......................................................................................... 44 3.2.3. Metode electrochimice.............................................................................. 46 Metode electroforetice............................................................................ 46 Aplicatiile electroforezei capilare in analiza stabilitatii......................... 47 Cefalosporinelor .......................................................................................... Metode voltametrice ............................................................................... 49 CONTRIBUTII PROPRII CAPITOLUL 4 .................................................................................................................. 50 DATE ANALITICE PRIVIND CEFTAZIDIMA SI CEFIXIMA 4.1. Justificarea i scopul cercetrii........................................................................... 50 4.2. Structura i proprietile fizico-chimice ale ceftazidimei i cefiximei .............. 52 Prevederi ale farmacopeei europene, editia 6-a privind Cefalosporinele luate in studiu ........................................................................... 52 Ceftazidima ........................................................................................................... 52 Structura .............................................................................................................. 52 Impuritati............................................................................................................. 54 Cefixima ................................................................................................................. 57 Structura .............................................................................................................. 57 Impuriti............................................................................................................. 58 Identificarea ceftazidimei si cefiximei................................................................ 61 1. Identificarea cromatografica pe strat subtire......................................... 61 2. Identificarea spectrala in UV................................................................. 64 3. Identificarea spectrala in IR................................................................... 65 4. Identificarea HPLC ................................................................................ 67 Determinarea HPLC a impuritilor ceftazidimei .............................................. 69 CAPITOLUL 5 IDENTIFICAREA SI VALIDAREA UNEI METODE CUANTIFICARE A CEFTAZIDIMEI PENTAHIDRAT SI A SUBSTANTELOR INRUDITE ................ 75 SCOP................................................................................................................................... 75 PROTOCOL DE VALIDARE ......................................................................................... 75 5.1. Principiul metodei ...................................................................................... 75 5.2. Definirea parametrilor de performan. Criterii de admisibilitate ........................................................................ 76 5.2.1. Identificarea picurilor ......................................................................... 76 5.2.2. Specificitatea/selectivitatea................................................................. 76 5.2.3. Eligibilitatea sistemului ...................................................................... 77 5.2.4. Liniaritatea i domeniul de liniaritate................................................. 78 5.2.5. Acurateea (exactitatea)/regsirea medie............................................ 79 5.2.6. Fidelitatea/precizia sistemului ............................................................ 79 5.2.7. Limita de detecie................................................................................ 80 5.2.8. Limita de cuantificare ......................................................................... 80 5.3. Descrierea metodei ..................................................................................... 80 5.3.1. Aparatura utilizat............................................................................... 80 5.3.2. Reactivi necesari ................................................................................. 80 5.3.3. Prepararea soluiilor............................................................................ 81 5.3.4. Sistemul cromatografic ....................................................................... 81

5.4. Rezultate si discuii .................................................................................... 82 5.4.1. Identificarea picurilor ...................................................................... 82 5.4.2. Eligibilitatea sistemului ................................................................... 84 5.4.3. Specificitatea metodei...................................................................... 85 5.4.4. Liniaritatea i domeniul de liniaritate al metodei pentru Ceftazidim .................................................................................................................... 87 5.4.5. Liniaritatea i domeniul de liniaritate pentru impuritatea F ........... 92 5.4.6. Exactitatea / acurateea metodei ...................................................... 97 5.4.7. Precizia sistemului .................................................................................... 97 5.4.8. Limita de detecie i limita de cuantificare............................................... 98 Concluzii ............................................................................................................. 99 CAPITOLUL 6 IDENTIFICAREA SI VALIDAREA UNEI METODE DE ANALIZA A CEFIXIMEI SI A SUBSTANTELOR INRUDITE .................................................... 100 SCOP................................................................................................................................. 100 PROTOCOL DE VALIDARE ....................................................................................... 100 1. Principiul metodei .......................................................................................... 100 2. Definirea parametrilor de performan. Criterii de admisibilitate .......... 101 2.1. Identificarea picurilor................................................................................. 101 2.2. Specificitatea/selectivitatea........................................................................ 101 2.3. Eligibilitatea sistemului ............................................................................. 101 2.4. Liniaritatea i domeniul de liniaritate ........................................................ 102 2.5. Acurateea (exactitatea)/regsirea medie................................................... 103 2.6. Limita de detecie....................................................................................... 104 2.7. Limita de cuantificare ................................................................................ 105 2.8. Stabilitatea substanei active. Impuriti i produi de degradare ............. 105 3. Descrierea metodei ......................................................................................... 106 3.1. Aparatura utilizat ...................................................................................... 106 3.2. Reactivi necesari ........................................................................................ 106 3.3. Prepararea soluiilor ................................................................................... 106 3.4. Sistemul cromatografic .............................................................................. 107 3.5. Efectuarea determinrii.............................................................................. 107 4. Rezultate si discuii ......................................................................................... 107 4.1. Identificarea picurilor................................................................................. 107 4.2. Eligibilitatea sistemului ............................................................................. 107 4.3. Specificitatea metodei ................................................................................ 109 4.4. Liniaritatea i domeniul de liniaritate al metodei...................................... 112 4.5. Exactitatea/acurateea metodei .................................................................. 119 4.6. Limita de detecie i limita de cuantificare................................................ 120 4.7. Studiu de degradare a cefiximei trihidrat .................................................. 120 Concluzii ........................................................................................................... 131 CAPITOLUL 7 ELABORAREA UNOR METODE DE ANALIZA PENTRU CEFTAZIDIMA SI CEFIXIMA ................................................................................... 132 7.1. Analiza cromatografica pe strat subtire ................................................... 132 7.2. Metode spectrometrice de determinare a ceftazidimei si cefiximei 133 Metode spectrometrice de determinare a ceftazidimei .................................. 134

1. Determinarea cantitativa a ceftazidimei prin derivatizare cu acidul p-cloranilic ......................................................................................... 134 Validarea metodei ............................................................................................. 135 Determinarea stoechiometriei reactiei chimice de formare a complexului radicalic ionic pentru ceftazidim .............................................. 140 2. Determinarea cantitativ a ceftazidimei prin derivatizare cu .................. 145 3-metilbenzotiazolin-2-on hidrazona (MBTH) Validarea metodei ............................................................................................. 147 3. Determinarea cantitativ a ceftazidimei prin derivatizare cu .................. 156 Clorhidrat de n-(1-NAFTIL)etilendiamin (NEDA) Cinetica formrii complexului CFZM - NEDA ............................................... 157 Validarea metodei ............................................................................................. 158 Metode spectrometrice de determinare a cefiximei ........................................ 165 1. Determinarea cantitativa a cefiximei prin derivatizare cu acidul p-cloranilic................................................................................. 165 Validarea metodei ....................................................................................... 166 Determinarea stoechiometriei reactiei chimice de formare a complexului radicalic ionic pentru cefixim ................................................................... 170 2. Determinarea cantitativ a cefiximei prin derivatizare cu MBTH ............................................................................... 173 Validarea metodei.......................................................................................... 174 3. Determinarea cantitativ a cefiximei prin derivatizare cu n-(1-naftil) etilendiamin (NEDA) .......................................................... 182 Cinetica formrii complexului CFXM - NEDA............................................... 183 Validarea metodei ............................................................................................. 184 7.3. Analiza HPLC a ceftazidimei si cefiximei................................................. 189 7.3.1. Analiza HPLC a ceftazidimei .............................................................. 190 Validarea metodei .......................................................................................... 190 7.3.2. Analiza HPLC a cefiximei .................................................................... 198 Validarea metodei .......................................................................................... 198 CAPITOLUL 8 CERCETAREA STABILITATII CEFTAZIDIMEI SI CEFIXIMEI MATERIE PRIMA PENTRU OBTINEREA DE FORME FARMACEUTICE ............................................................................................. 213 STABILITATEA CEFTAZIDIMEI MATERIE PRIMA ............................. 213 EVALUAREA CANTITATIV A STABILITII CEFTAZIDIMEI ................................................................................................ 214 Cercetarea stabilitii ceftazidimei n condiii normale i de stres ...................... 219 Urmrirea stabilitii ceftazidimei n condiii de temperaturi cuprinse............... 219 ntre 21 i 37 oC Urmrirea stabilitii ceftazidimei n condiii stres.............................................. 220 Degradare n mediu acid....................................................................................... 220 Degradare n mediu alcalin................................................................................... 221 Degradare n mediu oxidant ................................................................................. 222 Stabilitatea cefiximei materie prima ................................................................ 223 Evaluarea cantitativ a stabilitii cefiximei .................................................. 224 Cercetarea stabilitii cefiximei n condiii normale i de stres........................... 227 Urmrirea stabilitii ceftazidimei n condiii de temperaturi cuprinse............... 227

ntre 21 i 37 oC Urmrirea stabilitii cefiximei n condiii stres .................................................. 228 Degradare n mediu acid....................................................................................... 228 Degradare n mediu alcalin................................................................................... 229 Degradare n mediu oxidant ................................................................................. 229 CAPITOLUL 9 STUDIUL STABILITAII CEFTAZIDIMEI SI CEFIXIMEI IN FORME ........... 231 FARMACEUTICE DOZATE Modaliti de studiere a stabilitii substanelor i formelor ..................................... 231 FARMACEUTICE 1. Testarea in timp real...................................................................................... 232 2. Testarea n condiii accelerate....................................................................... 232 3. Testarea n condiii de stres (degradare forat) ........................................... 232 FORME FARMACEUTICE DOZATE........................................................................ 234 1. Suspensii........................................................................................................ 234 2. Emulsii .......................................................................................................... 235 3. Soluii ............................................................................................................ 235 4. Comprimate................................................................................................... 236 5. Capsule gelatinoase....................................................................................... 236 6. Unguentele .................................................................................................... 236 FORMELE FARMACEUTICE OBINUTE CU CEFTAZIDIM I CEFIXIM238 1. CEFTAZIDIM, PULBERE PENTRU SOLUTIE INJECTABILA ............................................................................................... 238 Analiza stabilitii ceftazidimei n fiolele cu 0,25 g ceftazidim .................. 238 Analiza stabilitii ceftazidimei n fiolele cu 0,50g ceftazidim ................... 240 Analiza stabilitii ceftazidimei n fiolele cu 1,0 g ceftazidim .................... 243 Analiza stabilitii ceftazidimei n fiolele cu 2, g ceftazidim ...................... 245 2. CEFTAZIDIM PULBERE PENTRU ADMINISTRARE INTRAVENOAS ....................................................................................... 248 Analiza stabilitii ceftazidimei n fiolele cu 0,200 g ceftazidim .............................................................................. 248 3. CEFIXIM, CAPSULE ................................................................................. 249 Analiza stabilitii cefiximei n capsulele cu 0,200 g cefixima ............. 249 CONCLUZII GENERALE ............................................................................................ 253 BIBLIOGRAFIA CONSULTATA ................................................................................ 258

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

CONTRIBUII PROPRII CAPITOLUL 4


DATE ANALITICE PRIVIND CEFTAZIDIMA SI CEFIXIMA STRUCTURA I PROPRIETILE CEFTAZIDIMEI I CEFIXIMEI CEFTAZIDIMA Structura FIZICO-CHIMICE ALE

STRUCTURA IMPURITILOR A. (2RS,6R,7R)-7-[[(Z)-2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-[(1-carboxy-1methylethoxy)imino]acetyl]amino]-8-oxo-3-[(1-pyridinio)methyl]-5-thia-1azabicyclo[4.2.0]oct-3-ene-2-carboxylate (-2-ceftazidime)


H3C H3C N N O COOH H O H N N * H H S COO
+

CH3 H3C N S H2N N O O O OH S N O OH N


+

H2N S O

i epimerii de la C* B. (6R,7R)-7-[[(E)-2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-[(1-carboxy-1methylethoxy)imino]acetyl]amino]-8-oxo-3-[(1-pyridinio)methyl]-5-thia-1azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylate
HOOC O N N H2N S O CH3 CH3 O H N H N H H S COO
+

HN O

IDENTIFICARE Identificare spectral const n compararea spectrului de absorbie al substanei cercetate cu spectrul de absorbie al substanei de referin (CRS). Referitor la substane A. Examinare pe strat subire utiliznd plci cu Silicagel F254 B. Examinare prin cromatografie de lichide Procedeul cromatografic necesit: - coloan cromatografic 0, 25 m cu diametru interior de 4,6 mm umplut cu octadeciclsilil silicagel pentru cromatografie (5m), - o faz mobil ce curge cu o vitez de 1,3 ml/min format din acetonitril, amoniu dihidrogen fosfat( soluie 22,6 g/l) n proporie de 7:93. Faza mobil se adduce la pH 3,9 cu soluie 10% de acid fosforic. - detecie UV 255 nm - temperatura coloanei 35 oC. IMPURITATI Posibilele impuriti se determin lichid-cromatografic faa de substane de referin. Se cerceteaz prezena impuritilor A, B, C i F. Impuritatea D se determin prin cromatografiere pe strat subire.

C. (6R,7R)-2-carboxy-8-oxo-3-(pyridiniomethyl)-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-en7-aminium dichloride

COOH O
+

N H H S

H3N

2Cl

D. (6R,7R)-7-[[(Z)-2-[[2-(1,1-dimethylethoxy)-1,1-dimethyl-2-oxoethoxy]imino]-2[2-(triphenylmethyl)amino]thiazol-4-yl]acetyl]amino]-8-oxo-3-(pyridiniomethyl)5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylate 3

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

H3C O H3C H3C N N HN S O O O O H N

CH3 CH3 COO N H H S


-

IDENTIFICAREA CEFTAZIDIMEI SI CEFIXIMEI 1. IDENTIFICAREA CROMATOGRAFICA PE STRAT SUBTIRE Suport: - plci cromatografice cu Silicagel GF254 (Merck) Sistem developare: - butanol - tampon acetat de sodiu, pH 4,5 - acetat de butil - acid acetic glacial (6:26:32:32)

E. (6R,7R)-7-[[(Z)-2-(2-ammoniothiazol-4-yl)-2-[[2-(1,1-dimethylethoxy)-1,1dimethyl-2-oxoethoxy]imino]acetyl]amino]-8-oxo-3-(pyridiniomethyl)-5-thia-1azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylate chloride
H3C O H3C H3C N
+

CH3 CH3 O COO N H H S


+ -

N H3N S O

O H N

Cl

F. Piridina

1 = ceftazidima proba 2 = ceftazidima etalon

3= cefixima prob 4 = cefixima etalon

CEFIXIMA Structura
O OH

Cromatograma pe strat subire a ceftazidimei i cefiximei 2. IDENTIFICAREA SPECTRALA IN UV Aparat: spectrofotometru Jasco V-530 Soluii etalon: 1-10 g/ml ceftazidim i cefixim n alcool metilic Soluii probe: 2-4 g/ml ceftazidim, 4 6 g/ml cefixim n alcool metilic Spectrele obinute sunt redate n figurile urmatoare:

N S H2N N

O HN O O N O OH S CH2

Spectrul de absorbie al ceftazidimei 4 5

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

CAPITOLUL 5
IDENTIFICAREA SI VALIDARE UNEI METODE CUANTIFICARE A CEFTAZIDIMEI PENTAHIDRAT SI A SUBSTANTELOR INRUDITE

CAPITOLUL 6
IDENTIFICAREA SI VALIDAREA UNEI METODE DE ANALIZA A CEFIXIMEI SI A SUBSTANTELOR INRUDITE

CAPITOLUL 7
ELABORAREA UNOR METODE DE ANALIZA PENTRU CEFTAZIDIMA SI CEFIXIMA Spectrul de absorie al cefiximei 3. IDENTIFICAREA SPECTRALA IN IR Analizele IR au fost efectuate n urmtoarele condiii: Spectrofotometru FT-IR Bruker Optics de tip Tensor 27 1. ANALIZA CROMATOGRAFICA PE STRAT SUBTIRE Am apelat la tehnicile cromatografice indicate de Fardous A. Mohamed, pe care le-am modificat pe baza unor indicaii bibliografice (Eric-Jovanovic S, Tuzimski T. i Bhushan Ravi). Adsorbant: Silicagel GF24 Sisteme solveni: 1. acid propionic-2-propanol-ap (6:2:3) 2. 2-propanol-ap-acetat de etil (5:3:3) 3. n-butanol-ap-acid acetic (5:4:2) 4. acetat de etil-aceton-metanol-ap (5:2,5:2,5:1.5) Reactivi de developare: 1. UV 254 nm 2. Reactiv Dragendorff Modul de efectuare al unor asemenea determinri a fost expus n capitolul 4 al acestei lucrri. In tabel sunt nscrise valorile Rf obinute prin analiz pe strat subire de silicagel GF254 n cele 4 sisteme de developare propuse. Valorile Rf determinate pentru cefalosporinele materii prime Valoarea Rf Cefalosporina Ceftazidima Cefixima 1 0,70 0,49 2 0,56 0,44 3 0,49 0,67 4 0,66 0,55

Spectrul IR al ceftazidimei

Spectrul IR al cefiximei Concluzii Prin compararea spectrelor cefalosporinelor materii prime cu cele obinute cu ceftazidina i cefixima etalon putem afirma c ele corespund din acest punct de vedere al identificrii. 6

2. METODE SPECTROMETRICE DE DETERMINARE A CEFTAZIDIMEI SI CEFIXIMEI S-au elaborat trei metode spectrometrice n VIS pentru determinarea cantitativ a celor dou cefalosporine. Metodele au la baz formarea unor complexe colorate cu: - Acid p-cloranilic - MBTH (3-metillbenzotiazolin-2-on hidrazona) - NEDA [N-(1-naftil) etilenediamina] 7

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice
CH3 COOH O CH 3 N H S N NH2 O O N COO
-

Condiiile determinrilor: Spectrofotometru Agilent 8453, monocanal Detecie: Diode Array Detector, detectie de la 630 nm Scanare n domeniul 190 - 360 nm, cu frecvena de 1 Hz Soluii: Soluia stoc: 26,5 g prob echivalente cu 25 mg ceftazidima pentahidrat se disperseaz cu 10 ml soluie ap prin agitare la ultasunete i se aduce cantitativ la 25 ml cu acelai solvent rezultnd o soluie cu o concentraie de 1 mg/ml Soluii etalon(1): 25 mg substana etalon se disperseaz cu 10 ml soluie S prin agitare la ultasunete i se aduce cantitativ la 25 ml cu faza mobil, rezultnd o soluie cu o concentraie de 1 mg/ml. Solutie derivatizare (1) - SD1: 0,48 g clorur feric (III)/ 1L solutie Solutie derivatizare(2) - SD2: 2,00 g 3-metilbenzotiazolin-2-on hidrazon clorhidrat se dizolv n 1000 ml ap. Soluie derivatizare(3) - SD3: soluie 0,01 mol/L acid clorhidric. Soluie de analizat: 0,1ml solutie stoc + 1,5 ml SD1 + 1 ml SD2. Se las n repaus 15 minute. Se adaug 1 ml SD3 si se completeaz la 10 ml cu ap. Soluie de referin: 0,1ml solutie etalon + 1,5 ml SD1 + 1 ml SD2. Se las n repaus 15 minute. Se adaug 1 ml SD3 si se completeaz la 10 ml cu ap. METODE SPECTROMETRICE DE DETERMINARE A CEFTAZIDIMEI A. DETERMINAREA CANTITATIVA A CEFTAZIDIMEI PRIN DERIVATIZARE CU ACIDUL p-CLORANILIC Principiul metodei Metoda se bazeaz pe reacia de cuplare oxidativ prin transfer de sarcin dintre cefalosporin (donor n) i acidul para-cloranilic (p-CA acceptor ), rezultnd un radical anionic. Reacia are loc n solveni polari (acetonitril sau metanol). Transferul complet de electroni de la donor la accepor are loc cu formarea unor radicali ionici intens colorai. n metanol, complexul CFZM-pCA format are culoarea rou-purpuriu i prezint absorban maxim n UV-VIS la 530 nm.Acidul p-cloranilic formeaz cu ceftazidima un complex n raport molar 1:1. Acest lucru a fost demonstrat prin metoda Job (77) de Rahman (116) i Saleh (123). Formarea complecilor are loc dup reaciile:

O S N
+

HO + Cl O

Cl OH

O CH3 COOH N O CH 3 N H S N NH2 O O N COO complex n-


-

HO Cl S O N
+

Cl OH

Mecanismul formrii complexului cu acidul cloranilic Compusul colorat se datoreaz ionului HA- al acidului cloranilic:

D+A

D A complex

D + A ioni radicali
-

H2A

H + HA (purpuriu)
+ + H + HA (incolor)

B + H

Tehnica de lucru: Spectrofotometru Agilent 8453, monofascicul Detecie: Diode Array Detector, detectie de la 530 nm Scanare n domeniul 190 - 850 nm, cu frecvena de 1 Hz. VALIDAREA METODEI Studiul liniaritii i domeniului de liniaritate Studiile de liniaritate au fost determinate pe 9 soluii cu un coninut n ceftazidim cuprins ntre 0,9 i 0,3 mg/ml, ceea ce reprezint domeniul 100% 25% raportat la concentraia int pentru determinarea cantitativ (0,2 mg/ml). In figura sunt prezentate spectrele UV-VIS nregistrate pentru soluiile de referin de concentraii cresctoare de cefixima..

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

Studiul specificitii metodei Pentru verificarea acestui parametru, s-au nregistrat i comparat spectrele UV-VIS nregistrate pentru urmtoarele soluii: Soluie prob reconstituit, cu coninut diferit de ceftazidim, i posibil, carbonat de sodiu, diferit ca i structur sau proprieti Soluia placebo Soluie de referin Solutii corespunztoare a dou produse cu ceftazidim: Ceftamil i Fortum Mai jos sunt prezentate spectrele UV VIS obinute: Spectrele UV-VIS nregistrate pentru soluiile de CFZM pCA incluse n curba de calibrare. n tabelul de mai jos sunt reprezentate absorbanele medii pentru ceftazidima determinate, la concentraiile propuse. Absorbanele soluiilor de referin
CCFTZD (mg/ml) ABS Seria 1 Seria 2 Seria 3 Media 0.16523 0.16525 0.16535 0.165276667 0.2551 0.2523 0.2542 0.253866667 0.3361 0.3385 0.3342 0.3362667 0.42007 0.4202 0.41967 0.41998 0.50333 0.50626 0.50333 0.5043067 0.57607 0.57676 0.57725 0.576693333 0.66695 0.66683 0.66658 0.6667867 0.05025 0.075375 0.1005 0.125625 0.15075 0.175875 0.201

0.6 lungime de unda (mAu) 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 -0.1 400 600 800 1000 cocentratie (mg/ml)

blanc crs-0.150 ceftamil-0.110 fortum-0.075

1200

Acurateea metodei de dozare a cefiximei prin derivatizare cu acid p-AC Corelograma (dreapta de calibrare), prezentat n figura urmatoare, evideniaz o legtur liniar dup o ecuaie de gradul 2 ntre concentraia probei i absorbana soluiei la 520 nm. Prin urmare estimarea absorbanei complexului se va face cu ajutorul ecuaiei de regresie liniar: Y = 3.2953X + 0.0036 Spectrul soluiei de prob reconstituit evideniaz un maxim de absorbie spectral bine definit la 530 nm, spectru cu o puritate ridicat n raport cu spectrul soluiei de referin (crs). Soluia placebo prezint maxime de absorbie la alte lungimi de und, dar nu se semnaleaz nici un interferent la valoarea de 530 nm. Concluzie: Metoda propus este selectiv n raport cu excipienii de condiionare. Studiul exactitii Pentru determinarea acestui parametru s-au calculat randamentele de regsire a substanei active din probe reale Reprezentnd limita teoretic a intervalului de admisibilitate, s-au considerat: - Soluie cu 0.1745, 0.1232, 0,077 mg/ml ceftazidim din produsul Fortum i respectiv 0.1531, 0,11231, 0,09189 i 0,0612 mg/ml ceftazidim -produs comercial - CEFTAMIL pulbere pentru soluii injectabile 11

Curba de calibrare pentru dozarea cefiximei folosind acid p-CA 10

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

Rezultatele verificrii exactitii pentru cefixim pentahidrat sunt prezentate n cele ce urmeaza: Rezultatele experimentale testul de evaluare a exactitii metodei de analiz
FORTUM
Cteoretic Cregsit Seria 1 Seria 2 Seria 3 0.1797 0.1805 0.1803 0,17459 mg/ml R% 102.92765 103.43693 103.29266 Xd % 2.927655 3.436931 3.292665 Cregsit 0.126483173 0.126422481 0.126295026 0,12324 mg/ml R% 102.631591 102.582343 102.478924 Xd % 2.63159120 2.58234380 2.47892425 Cregsit 0.07826905 0.07811428 0.07809000 0,077025 mg/ml R% 101.6151 101.41419 101.382677 Xd % 1.6151247 1.4141953 1.3826770

Precizia metodei de dozare


PROBA 1 Cocentratie_proba abs-1 abs-2 abs-3 abs-4 abs-5 abs_medie STDEV RSD 0,05 0.16523 0.16525 0.16523 0.16524 0.16535 0.16526 5.09902E-05 0.030854529 PROBA 2 0,15 0.50333 0.50626 0.50875 0.50684 0.50333 0.505702 0.0023532 0.4653258 PROBA 3 0,2 0.66695 0.66683 0.66852 0.66854 0.66658 0.667484 0.0009642 0.1444489

CEFTAMIL
Cteoretic Cregsit Seria 1 Seria 2 Seria 3 0.15489 0.15528 0.15537 0,15315 mg/ml R% 101.134 101.387 101.451 Xd % 1.13435 1.38798 1.45139 Cregsit 0.11559 0.11561 0.11577 0,11231 mg/ml R% 102.919 102.938 103.078 Xd % 2.91948 2.93839 3.07890 Cregsit 0.09444 0.09447 0.09415 0,09189 mg/ml R% 102.772 102.805 102.461 Xd % 2.77237 2.80540 2.46194 Cregsit 0.06308 0.06305 0.06351 0,06126 mg/ml R% 102.97712 102.92263 103.68055 Xd % 2.97712 2.92263 3.68055

Concluzii: Valoarea maxim a abaterilor procentuale este 3,4 pentru determinarea ceftazidimei din produsul farmaceutic Fortum i respectiv 3,68 din Ceftamil, deci se respect condiia impus ca abaterile procentuale ale regsirii s fie mai mici dect 5. n plus, regsirea procentual medie este de 102,54 % pentru Ceftamil i respectiv 102,41 pentru Fortum. Aceste diferente pot fi asociate cu variabilitatea continutului de carbonat de sodiu din cele dou probe si respectiv cu natura diferita a altor excipienti prezeni care influeneaz formarea complexului. Deci metoda dezvoltat este exact. n figura de mai jos sunt prezentate spectrele de absorbie pentru probele preparate din produsul farmaceutic Ceftamil, Fortum, pentru blanc i respectiv prentru standardul de lucru. Studiul preciziei Pentru verificarea preciziei s-au preparat 3 soluii probe dintr-o proba omogena cu un coninut de aproximativ 2, 1,5 i respectiv 0,5mg Cefixim conform metodologiei prezentate anterior. Solutiile de concentraii rezultate: 0,2, 0,15 i respectiv 0,05 mg/ml ceftazidima au fost determinate pe o serie de 5 determinri, considerndu-se variaia fa de media fiecrei serii (deviaia standard absolut ct si deviaia standard relativ) S-au calculat valoarea medie a coninutului n cefixima trihidrat, abaterea standard(s) i deviaia relativ (RSD) pentru substana activ .

Concluzie: Determinrile efectuate relev, pentru fiecare soluie o deviaie standard relativ de maxim 0,46%, ceea ce echivaleaz cu o precizie foarte bun a metodei. Se observ o corelare foarte bun cu datele obinute pentru liniaritate, ceea ce confer metodei o precizie intermediar foarte bun. Stabilirea limitei de cuantificare i de detecie pentru ceftazidima Pentru determinarea acestor limite se iau n calcul parametrii pentru analiza statistic a seriilor de date a cror concentraie este corelat cu variaia absorbanelor. Aceti parametrii sunt prezentai n tabelul urmator. Analiza statistic Regression Statistics Media R multiplu 0.999755 coeficient de corelatie 0.999509 coeficient de corelatie ajustat -1.5 Eroare standard 0.00379 Panta 3.2953 Serii 1 Considernd eroarea standard a curbei de calibrare i implicit a pantei medii a acesteia s-au calculat pentru metoda actual urmtoarele limite: Limita de cuantificare LOQ = 0,011 mg/ml Limita de detecie LOD = 0,0034 mg/ml Determinarea stoechiometriei reaciei chimice de formare a complexului radicalic ionic pentru ceftazidim Principiul metodei Metoda variaiei continue a fost aplicat n acest studiu pentru a determina stoechiometria reaciei chimice. n aceste condiii o serie de soluii, fiecare coninnd acelai numr de moli de compui A i B, dar ntr-un raport R, a 13

12

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

moleculelor B fa de A, cantitatea maxim de produs este obinut n condiiile n care R = k (raport stoechiometric). Experimetal, pentru implementarea metodei Jobs, se prepar o serie de soluii care conin un numr exact de moli din compusul A i respectiv un numr de moli din compusul B, dar pentru care raportul stoechiometric variaz de la valori mari la valori mici, iar n acest fel se determin cantitatea de produs obinut pentru fiecare soluiei. n acest context cantitatea maxim de produs de reacie ar trebui s se formeze n anumite condiii; dac R > k, atunci apare un exces de reactant B, iar n aceste condiii A este reactivul de limitare. n condiiile n care R descrete sistematic spre k, cantitatea de produs de reacie crete cu cantitatea de agent de limitare, pn cnd R devine egal cu k, n contrast, atunci cnd R este mai mic dect k, apare un exces de reactiv A, iar B este considerat agent de limitare. n concluzie, atunci cnd R este variat peste un domeniu cuprins ntre 0 i valoarea maxim investigat, cantitea de produs crete pn pn cnd R=k, i apoi scade n condiiile n care R devine mai mare dect k. Metoda experimental S-au preparat urmtoarele soluii stoc (SS): SS: 24.5 mg substan echivalent la 18.74 mg ceftazidima anhidr s-au dispersat n 10 ml metanol prin ultrasonare. Amestecul s-a centrifugat la 3000 rpm timp de 5 minute. SR: 25 mg acid para-Cloranilic s-a dizolvat n 5 ml metanol i s-a diluat la 10 ml cu acelai solvent Pentru studiul stoechiometriei reaciei de formare a complexului pCaceftazimdim s-au constituit soluii, pentru fiecare sistem studiat conform tabelului: Raportul dintre volumele de acid p-cloranilic si ceftazidim
Proba Volum (ml) SS SR P1 100 900 P2 200 800 P3 300 700 P4 400 600 P5 500 500 P6 600 400 P7 700 300 P8 800 200 P9 900 100

Spectrele de adsorbie obinute pentru soluiile de CFZM pCA preparate conform metodei JOB Absorbanele obinute prin determinarea solutiilor de lucru
Proba Volum (ml) 450 nm 530 nm P1 0.0283 0.029 0.0289 0.0645 0.0662 0.0659 P2 0.1089 0.10915 0.10893 0.2553 0.2554 0.2543 P3 0.1688 0.16908 0.16879 0.39284 0.39242 0.39233 P4 0.20751 0.20852 0.20701 0.4412 0.44312 0.44197 P5 0.23635 0.23617 0.23646 0.43760 0.43779 0.43751 P6 0.2643 0.26505 0.26289 0.40988 0.41109 0.41146 P7 0.26686 0.26654 0.26671 0.34692 0.34958 0.34658 P8 0.28176 0.28173 0.28208 0.28686 0.28624 0.28643 P9 0.30113 0.30282 0.30254 0.22914 0.23127 0.23090

n figura urmatoare sunt prezentate spectrele de absorbie UV-VIS obinute la msurarea celor 9 soluii preparate conform tabelului de mai sus. Studiind aceast figur de la proba P9 (ce conine cantitati ridicate de prob) pn la P1 (ce conine un exces major de agent de derivatizare) se observ o variaie a maximelor de absorbie de la 450 pn la 530 nm, ceea ce indic dependena maximelor de absorbie de cantitatea din cele dou componente folosite n cadrul reaciei. n tabel se vor introduce valorile maximelor de absorbie de la lungimile de und la care au fost determinate: 14

Maximele de absorbie cele mai importante s-au obinut n cazul probelor 4 si respectiv 5, ceea ce demonstreaz c, concentraia maxim se obine n momentul n care raportul dintre cantitatea de substan de analizat i cantitatea de agent de derivatizare (acid p-cloranilic) este de aproximativ 40% prob i 60 % acid p-cloranilic, rezultat din raportul celor 2 reactani. Considernd, de asemenea, c, concentraia de ceftazidim anhidr este de 1,874 mg/ml n soluia stoc, i raportnd la stoechiometria corelat cu concentraia de acid p-cloranilic din soluia stoc (SS), rezult c de fapt raportul optim ntre cei doi componeni, ceftazidima (anhidru) i acid p-cloranilic este de 1:2. Totodat se observ c tot n aceast situaie se obine maximul de absorbie caracteristic metodei, adic situat la 530 nm. Pentru confirmarea acestei situaii s-au considerat dou situaii n care raportul dintre ceftazidima si respectiv acid p-cloranilic a fost de 1:1,5 i respectiv 1:2 . Concentraia maxim n ceftazidim fost de 0,2 mg/ml raportat la substana 15

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

anhidr, iar punctele din curbele de calibrare monitorizate au fost corespunztoare urmtoarelor concentraii: Concentraiile soluiilor de referin utilizeate in metoda Job
Proba V(pCa) ml Raport 1:1,5 V (proba)ml V(MeOH) ml V(pCa) ml V (proba)ml V(MeOH) ml P1 300 200 9500 400 200 9600 P2 300 175 9525 400 175 9425 P3 300 150 9550 400 150 9450 P4 300 125 9575 400 125 9475 P5 300 100 9600 400 100 9500 P6 300 50 9650 400 50 9550 blanc 300 0 9700 400 0 9600

n plus, excesul de agent p-cloranilic determin o inhibare a maximelor de absorbie, fapt care deduce faptul c metoda respect principiile metodei Job. Variaia maximelor de absorbie odat cu creterea cantitii de prob este prezentat n diagrama urmtoare:

Raport 1:2

Corespunztor celor dou sisteme s-au obinut absorbanele fiecrei soluii n raport cu soluia blanc corespunztoare. Datele obinute pentru absorbane sunt prezentate n tabel. Liniaritatea absorbanelor este redat n figura urmatoare Absorbanele soluiilor de referin utilizate in metoda Job
Proba Raport 1:1,5 Raport 1:2 Raport 1:1 Concentraii mg/ml Absorbanta (mAu) Absorbanta (mAu) Absorbanta (mAu) 0.05025 0.16523 0.16 0.244 0.1005 0.3361 0.34311 0.4703 0.125625 0.42007 0.4123 0.5612 0.15075 0.50333 0.50359 0.6463 0.175875 0.57607 0.5836 0.70421 0.201 0.66695 0.64822 0.75611 0.05025 0.16523 0.16 0.244 Coefficient de corelatie 0,9973 0,9995 0,9758

Variaia absorbanei maximelor de absorbie a complexului format la 450 nm i respectiv 530 nm Din diagram se constat c la 450 nm, se produce o descretere a maximelor de asborbie ca urmare a formrii produsului de reacie, n timp ce la 530 nm se observ un palier cresctor a crui maxim corespunde probei nr. 4, dup care conform princpiului metodei Job se observ o descretere a maximului de asborbie n condiiile existenei unui exces de prob. B. DETERMINAREA CANTITATIV A CEFTAZIDIMEI PRIN DERIVATIZARE CU 3-METILBENZOTIAZOLIN-2-ON HIDRAZONA (MBTH) MBTH. 3-metilbenzotiazolin-2-on hidrazona (3-methylbenzothiazolin-2-one hydrazone-MBTH) Metoda se bazeaz pe reacia de cuplare oxidativ a cefalosporinei cu 3metilbenzotiazolin-2-on hidrazona (MBTH) n prezena clorurii ferice i a acidului clorhidric. Raciile care au loc sunt redate mai jos :

Variatia liniaritatii metodei in functie de raportul concentratiilor ceftazidima acid p-cloranilic Concluzie: Studiind evoluia coeficienilor de variatie n functie de raportul dintre acidul p-cloranilic si concentraia de ceftazidima, este c raportul optim de 2:1 este corepunztor, considernd variaia rpunsului n funcie concentraie (R2=0,9995).

16

17

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice
S S N N N NH2 + FeCl3
-2e, -H+

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

N N H

CH3

CH3 MBTH N S N + N NH

CH3 sare de diazoniu

S H2N N N HOOC

O HN O CH3 O CH3

H H N

S N COO
+

ceftazidima

Mecanismul de formare al complexului cu MBTH Modul de lucru Pentru obinerea maximelor de absorbie a soluiilor colorate se vor lua n lucru: - ceftazidim soluie standard: 100 g ml-1 - MBTH: 8,6 x 10-4 mol l-1 - FeCl3: 4,5 x 10-3 mol l-1 - HCl: 1 x 10-3 mol l-1 Parametri de lucru: Spectrofotometru Agilent 8453, monocanal Detecie: Diode Array Detector, detectie de la 628 nm. Scanare: 190 - 360 nm, cu frecvena de 1 Hz. 18

VALIDAREA METODEI Liniaritate Studiul liniaritii funciei aria semnalului pentru ceftazidim n funcie de concentraia ceftazidimei 628 nm Liniaritatea metodei de dozare const n determinarea capacitii metodei de a conduce n intervalul propus, la rezultate direct proporionale cu concentraia substanei analizate. Liniaritatea exprimat, n acest caz ca o variaie n jurul pantei dreptei de regresie calculate din rezultatele probelor de ceftazidima analizate la diverse concentraii. Pentru a evidenia dependena parametrilor studiai, absorban spectral i respectiv concentraie se va reprezenta grafic aria medie (y) n funcie de concentraia soluiilor de lucru. Graficul de dependen ntre variabile este dat de coeficientul de corelare R. Pentru caracterizarea variaiei se vor lua n calcul urmtorii parametri i domeniile lor de variaie: o Panta dreptei de regresie liniar, b o Ordonata la origine a dreptei de regresie, a: o Coeficientul de corelaie, R Studiul de liniaritate se verific n acest caz pe tot domeniul de liniaritate, ce poate fi stabilit cu prezenta metod. Specificitatea Specificitatea metodei de analiz msoar gradul de interferen a altor substane prezente alturi de substana activ care se dozeaz din matricea complex a produsului. Metoda propus este selectiv dac permite dozarea substanei active de analizat, fr ca matricea n care aceasta se gsete s interacioneze ntr-o msur n care s afecteze exactitatea i precizia metodei. Pentru verificarea specificitii se vor compara cromatogramele unei probe reconstituite cu cea a unei soluii de referin i a unei soluii placebo. Pentru admisibilitatea testului este necesar ca pe cromatograma soluiei placebo s nu apar nici un maxim de asborbie care s interfere. Exactitatea sau acurateea Exactitatea metodei de dozare spectrofotometric reprezint concordana dintre valoarea real i rezultatul analitic obinut n urma msurtorii. Exactitatea ofer informaii asupra erorilor sistematice. Pentru determinarea acestui parametru se va determina randamentul de regsire a ceftazidimei pentahidrat din trei probe reconstituite cu valorile concentraiilor la limita inferioar, teoretic i superioar a intervalului de admisibilitate (reprezentnd xx%, 100% i xxx% fa de coninutul teoretic de ceftazidim pentahidrat. Condiiile de admisibilitate sunt ndeplinite n condiiile n care gradul de regsire mediu este cuprins ntre 95% i 105%. Precizia (fidelitatea) Precizia metodei de dozare prin derivatizare cu MBTH este o msur a repetabilitii i a reproductibilitii rezultatelor analitice furnizate de o metod de analiz. 19

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

Pentru controlul preciziei metodei de dozare a ceftazidimei pentanidrat se vor efectua 5 determinri pe 5 soluii de aceeai concnetraie n ceftazidim. Se va calcula deviaia standard (s) pentru setul de 5 determinri i abaterea relativ standard (RSD) pentru substana activ. Limita de cuantificare i limita de detecie Limita de detecie, n condiiile metodei existente, reprezint cantitatea minim de ceftazidim pentahidrat ce poate fi detectat. Limita de cuantificare este reprezentat de cea mai mic cantitate de substan dintr-o prob care poate fi determinat cu precizie i exactitate acceptabil n condiiile experimentale propuse. Rezultate experimentale Liniaritatea Studiile de liniaritate au fost determinate pe 8 soluii cu un coninut n ceftazidim cuprins ntre 0,0146 i 0,0016 mg/ml, ceea ce reprezint domeniul 180% - 20% raportat la concentraia la care se realizeaz determinarea cantitativ. n tabelul urmator sunt reprezentate absorbanele medii pentru ceftazidim determinate, la concentraiile propuse. Absorbanele soluiilor de referin
Conc mg/ml 0,0146 ABS 1 2 3 Media 1.277 1.277 1.2779 1.2773 0.0048 0.462 0.464 0.46311 0.463036 1.116 1.1156 1.1159 1.115833 0.0032 0.3016 0.30161 0.30258 0.30193 1.043 1.044 1.0462 1.0444 0.0016 0.1469 0.14769 0.1501 0.14823 0.8708 0.8699 0.8697 0.870133 0.0130 1.116 1.1156 1.1159 1.115833 0.754 0.753 0.751 0.752666 0.6059 0.60461 0.6051 0.605203 0.0130 0.0114 0.0097 0.0081 0.0065

Aproximarea formei legturii regresie liniar Ecuaia de regresie: Y=+X+e unde: e reprezint variabila aleatoare eroare. reprezint ordonata la origine reprezint panta dreptei Prezentm absorbantele a 6 dintre soluiile a cror concentraii sunt incluse in curba de calibrare.

1 2 3 Media

Reprezentare grafic (corelogram) Corelograma (dreapta de calibrare) de mai sus evideniaz o legtur liniar dup o ecuaie de gradul 2 ntre concentraia probei i aria picului . Prin urmare estimarea ariei picurilor se va face cu ajutorul ecuaiei de regresie liniar: Y=87,29098 X + 0,02475

Absorbantele soluiilor incluse in curba de calibrare Concluzie: Coeficientul de corelaie R obinut este de 0,998 i se ncadreaz n limitele prevzute, in conditiile impuse de modalitatea de tratare a probelor luate n lucru pentru studiul acestui parametru. Specificitatea Pentru verificarea acestui parametru, s-au nregistrat i comparat cromatogramele urmtoarelor soluii: - Soluie prob reconstituit, cu coninut diferit de ceftazidima, si posibil, carbonat de sodiu, diferit ca i structura sau proprieti - Soluia placebo - Soluie de referin Mai jos sunt prezentate spectrele UV VIS obinute:

Curba de calibrare pentru dozarea ceftazidimei folosind 3-metilbenzotiazolin-2-on hidrazon

20

21

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

Rezultatele verificrii exactitii pentru ceftazidim pentahidrat sunt prezentate n tabel. Exactitatea metodei de dozare
Exactitatea metodei de dozare cantitate_proba (mg) absorbanta-1 absorbanta-2 absorbanta-3 abs_medie STDEV RSD cantitate_regasita regasire procentuala 1 cantitate_teoretica regasire procentuala 2 CEFTAMIL 12.8 0.80286 0.80433 0.80459 0.803926667 0.000932863 0.116038317 0.00892677 109.4906151 0.010368 103.3190954 FORTUM 12.5 0.7938 0.7942 0.79479 0.794263333 0.000498029 0.062703316 0.008762224 107.4723959 0.010125 103.8485859 PROBA-X 13 0.79869 0.79899 0.79872 0.7988 0.000165227 0.020684416 0.008814196 108.1098515 0.01053 100.4466803

Concluzie: Determinarile efectuate relev, pentru fiecare soluie o deviaie standard relativ de maxim 2%. Limita de detecie i de cuantificare Se iau n calcul parametrii pentru analiza statistica a seriilor de date a cror concentraie este corelat cu variaia absorbanelor. Analiza statistic
Regression Statistics R multiplu Coeficient de corelatie Coeficient de corelatie ajustat Eroare standard Panta Serii 0.999825 0.99965 -1.14286 0.014941 87.2909 1

Observaie: Regsirea procentual 1 reprezint gradul de regsire determinat din corelarea valorilor pentru absorbana medie si respectiv a pantei si a interceptului dreptei de calibrare. Regsirea procentual 2 deriv din parametrul anterior si este corelat cu cantitatea teoretic, calculat prin raportare la substana anhidr. Concluzie: Valorile randamentului de regsire se ncadreaz n intervalul 95 % i 105 % Precizia Pentru verificarea preciziei s-au preparat 3 soluii probe dintr-o proba omogena cu un coninut de aproximativ 10 mg ceftazidim conform metodologiei prezentate anterior. S-au calculat: valoarea medie a coninutului n ceftazidima pentahidrat, abaterea standard(s) i deviaia relativ (RSD) pentru substana activ. Precizia metodei de dozare
cantitate_proba abs-1 abs-2 abs-3 abs-4 abs-5 abs_medie STDEV RSD Proba 1 10.1 0.7548 0.75549 0.75714 0.7652 0.76542 0.762586667 0.004718234 0.61871448 Proba 2 10.5 0.8048 0.7952 0.79479 0.7946 0.79479 0.796836 0.004457402 0.559387592 Proba 3 11 0.80617 0.81501 0.81321 0.79899 0.79872 0.80364 0.007655874 0.952649639

Considernd eroarea standard a curbei de calibrare si implicit a pantei medii a acesteia se vor considera pentru metoda actual urmtoarele limite: Limita de cuantificare LOQ = 0,0017 mg/ml Limita de detecie LOD=0,00051 mg/ml Robusteea metodei Robusteea metodei msoar capacitatea acesteia de a rmne neafectat de variaii mici dar intenionate a parametrilor metodei. S-a efectuat determinarea timpului necesar pentru ca reacia s se produc cu randament maxim, astfel nct complexul format s prezinte un maxim de absorbie la 628 nm cu amplitudine constant. S-au constituit 2 probe de aceeasi concentraie-0,01 mg-ml ceftazidima pentahidrat /10% carbonat de sodiu i s-au preparat conform procedurii prezentate la capitolul de preparare a probei. Probele s-au determinat succesiv la diveri timpi, conform datelor din tabelul urmatoare. Stabilitatea soluiilor determinate n timp
Proba Conc. probei, mg/ml 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 Interval de timp (min) 2 2 3 4 5 5 6 10 13 13 15 15 15 15 15 20 Absorbanta 0,31163 0,324 0,348 0,413 0,456 0,471 0,5014 0,535 0,561 0,563 0,749 0,750 0,751 0,754 0,754 0,758

P1

P2

22

23

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

In figura de mai jos se observ c maximul de intensitate nu este influenat la concentraii mai mari de 0,0086 M MBTH

Evoluia maximelor de absorbie a soluiilor determinate Figura urmatoare prezint modul de evoluie a maximelor de absorbie n cazul determinrilor efectuate anterior Dependena maximelor de absorbie n funcie de concentraia de MBTH Tabelul de mai jos certifica faptul c la valori mai mari de 0,00086M MBTH, maximul de absorbie nu este puternic influenat, deci n condiiile metodei actuale se consider ca fiind o concentraia optim pentru determinare. Valorile pentru maximele de absorbie la 628 nm determinate pentru soluiile de referin SA1 SA2 SA3 SA4 abs-1 0.66544 0.8082 0.84437 0.83502 abs-2 0.66598 0.8078 0.84444 0.83776 abs-3 0.66645 0.8074 0.84467 0.83502 Concluzii: 1. Metoda de derivatizare cu 3-metilbenzotiazolin-2-on hidrazon (MBTH) prezint un domeniu de liniaritate extins cuprins ntre 0,001 i 0,018 mg/ml 2. Timpul necesar pentru tratarea probei este de 15 minute. 3. Limita de detecie este de aproximativ 0,0008 mg/ml, iar limita de cuantificare este de 0,002 mg/ml. 4. Concentraia de MBTH maxim este de 0,00086M pentru domeniul de concentraii analizat. C. DETERMINAREA CANTITATIV A CEFTAZIDIMEI PRIN DERIVATIZARE CU CLORHIDRAT DE N-(1-NAFTIL)ETILENDIAMIN (NEDA) NEDA: N-(1-naftil) etilendiamina (N-(1-naphthyl)ethylenediamine - NEDA) - ceftazidim soluie standard: 100 g ml-1 - NEDA: 8 x 10-3 mol l-1 - HCl: 11 mol l-1 - NaNO2: 0,145 mol l-1 - Sulfamat de amoniu (NH4+ -OSO2NH2): 8,8 x 10-2 mol l-1 25

Evoluia maximelor de absorbie a soluiilor determinate Concluzie: Timpul necesar pentru ca reacia de derivatizare a ceftazidimei s fie complet este de minim 15 minute, n condiiile metodei propuse. Un alt context, n care se poate considera un studiu al robusteei metode este determinat de variaia concetraiei de MBTH folosit n procesul de derivatizare astfel s-au considerat 4 soluii conform schemei de mai jos. SA1: 0,1ml solutie stoc + 1,5 ml SD1 + 0,5 ml SD2. repaus 15 minute + 1 ml SD3 completare la 10 ml cu ap. SA2: 0,1ml solutie stoc + 1,5 ml SD1 + 0,75 ml SD2. repaus 15 minut e+ 1 ml SD3 completare la 10 ml cu ap. SA3: 0,1ml solutie stoc + 1,5 ml SD1 + 1,0 ml SD2. repaus 15 minute + 1 ml SD3 completare la 10 ml cu ap. SA4: 0,1ml solutie stoc + 1,5 ml SD1 + 1,25 ml SD2. repaus 15 minute + 1 ml SD3 completare la 10 ml cu ap. 24

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice
S H2N N NH N O HOOC O N C00
-

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

H H

S N
+

In figura este reprezentat grafic formarea complexului de CFZM NEDA n timp.


0.4 0.35

CH3 CH3

Absorbanta (u.a.)

- NaNO2 - HCl
+

0.3 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05

S O N NH N O HOOC CH3 O CH3 N C00


-

Cl N N

H H

S N
+

NH CH2 NEDA

CH2 NH2

S H2N H2C H2C HN N N N NH N O HOOC O N C00


-

H H

S N
+

0 0 10 20 30 40 50 60

Timp (min)

CH3 CH3

Cinetica formrii complexului CFZM NEDA, de culoare rou-purpuriu nainte de prezentarea validrii metodei de dozare, trebuie menionat faptul c, pe parcursul desfurrii procesului de validare s-au fcut ajustrile necesare privind coninutul n ap i n carbonat de sodiu al probelor de ceftazidim n form pur sau de produs farmaceutic. n tabel sunt prezentate rezultatele obinute n urma efecturii analizelor necesare pentru determinarea cantitii de ap din fiecare prob utilizat pe parcursul acestei validri. Rezultate experimentale obinute dup uscarea probelor
Proba % pierderi prin uscare CFZM substan 17,30% FORTUM 15,5% CEFTAMIL 15,2%

compus colorat in purpuriu

Mecanismul formrii complexului cu NEDA Principiul metodei: Metoda NEDA implic diazotizarea ceftazidimei cu formarea srii de diazoniu, care n momentul cuplrii cu N-(1-naftil)etilendiamin (NEDA) formeaz un azo-colorant de culoare rou purpuriu, ce prezint maxim de absorbie UV-VIS la 510 nm. S-a studiat: - cinetica formrii complexului colorat. - stabilitatea complexului a fost studiat timp de 24 h la temperatura camerei. Tehnica de lucru: Instrument: Spectrofotometru CINTRA, dublu fascicol Detecie:Diode Array Detector, detectie de la 510 nm. Scanare n domeniul 190 - 850 nm, cu frecvena de 0,25s. Cinetica formrii complexului CFZM - NEDA Pentru a determina timpul de repaus necesar formrii complexului roupurpuriu CFZM NEDA s-a msurat absorbana soluiei de analizat (SA: CCFZM = 0,3 mg/ml) n mod automat, folosind un program special de scanare n timp. Absorbana soluiei de analizat a fost msurat la intervale de 5 minute, constatndu-se c timpul necesar ca derivatizarea CFZM s fie complet este de minimum 30 minute. 26

VALIDAREA METODEI Studiul liniaritii i domeniului de liniaritate Studiile de liniaritate au fost determinate pe 7 soluii cu un coninut n ceftazidim cuprins ntre 0,1385 i 0,55407mg/ml, ceea ce reprezint domeniul 40% - 160%, raportat la concentraia int pentru determinarea cantitativ (0,35 mg/ml), raportat la substana uscat. Prezentam spectrele UV-VIS nregistrate pentru soluiile de referin de concentraii cresctoare de ceftazidim.

27

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

Spectrele de absorbie ale soluiilor de CFZM-NEDA de diferite concentraii Rezultate experimentale obinute la determinarea liniaritii metodei
ABS CCFZM (mg/ml) 40% 0.1385 0.14023 0.1401 0.14011 0.140146667 7.23418E-05 0.051618624 60% 0.20777 0.32212 0.32215 0.32125 0.32184 0.000511175 0.158828957 80% 0.27703 0.5288 0.52883 0.52878 0.528803333 2.51661E-05 0.004759069 100% 0.3467 0.72115 0.72121 0.72356 0.721973333 0.001374421 0.190370063 120% 0.41555 0.92788 0.9288 0.92889 0.928523333 0.000558957 0.060198526 140% 0.48481 1.1631 1.16811 1.16625 1.16582 0.002532528 0.217231509 160% 0.55407 1.39404 1.39415 1.39421 1.394133333 8.62168E-05 0.006184256

Domeniul de ncredere al pantei dreptei: 2,83768 3,19487 Ordonata la origine: a = - 0,30165 Domeniul de ncredere pentru a: - 0,303158 - 0,3001487 Studiul specificitii metodei Pentru verificarea acestui parametru, s-au nregistrat i comparat spectrele UV-VIS nregistrate pentru urmtoarele soluii: Soluie prob reconstituit, cu coninut diferit de ceftazidim, i posibil, carbonat de sodiu, diferit ca i structura sau proprieti Soluia placebo Soluie de referin In figura sunt prezentate spectrele UV VIS obinute:

Seria 1 Seria 2 Seria 3 Media SD RSD

Corelograma (dreapta de calibrare) din figura de mai jos evideniaz o variaie liniar a absorbanei funcie de concentraia probei. Prin urmare, estimarea absorbanei se va face cu ajutorul ecuaiei de regresie liniar: Absorbanta = 3,01628 Concentraia 0,30165
1.5 y = 3.01628x - 0.30165 R = 0.99814 1

Specificitatea metodei de dozare a CFZM prin derivatizare cu NEDA Spectrul soluiei de prob reconstituit evideniaz un maxim de absorbie spectral bine definit la 510 nm, spectru cu o puritate ridicat n raport cu spectrul soluiei de referin. Soluia placebo nu maxime de absorbie aceeai lungime de und Concluzie: Metoda propus este selectiv n raport cu excipienii de condiionare. Studiul exactitii Concentraiile teoretice i cele regsite dup aplicarea ecuaiei dreptei de regresie, precum i regsirea procentual i abaterea procentual sunt prezentate n tabelul urmator. Regsirea procentual exprim oblicitatea experimental maxim la concentraiile studiate i se calculeaz cu formula:

Absorbanta (u.a.)

0.5
Concentratia CFZM (mg/ml)

0 0.1 0.2

Seria 1 Seria 2 Seria 3 Media

0.3

0.4

0.5

0.6

Liniaritatea metodei de dozare a CFZM prin derivatizare cu NEDA Concluzii: Coeficientul de corelaie R = 0,99814 > 0,99, deci metoda are o liniaritate foarte bun Panta dreptei de regresie: b = 3,01628

R%

Xr 100 Xa
29

28

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

unde: R% = regsirea procentual; Xr = concentraia regsit (g/ml); Xa = concentraia teoretic (g/ml) Rezultatele experimentale pentru testul de evaluare a exactitii
FORTUM Cteoretic 0,1655 mg/ml 0,2069 mg/ml Cregsit R% Xd % Cregsit R% Seria 1 0.1628 98,37 1,633 0.208 100,48 Seria 2 0.1631 98,55 1,455 0.206 99,47 Seria 3 0.1637 98,95 1,050 0.205 98,82 0,1696 mg/ml Cregsit R% Xd % Seria 1 0,175 103,13 3,13 Seria 2 0,174 102,67 2,67 Seria 3 0,174 102,55 2,55 Cteoretic 0,2717 mg/ml 0,3764 mg/ml 0,4612 mg/ml Xd % Cregsit R% Xd % Cregsit R% Xd % Cregsit R% Xd % 0,483 0,269 99,15 0,846 0,382 101,53 1,53 0,455 98,62 1,38 0,526 0,269 99,04 0,958 0,381 101,46 1,46 0,458 99,32 0,68 1,178 0,273 100,63 0,627 0,381 101,44 1,44 0,457 99,08 0,92 CEFTAMIL 0,2144 mg/ml 0,2892 mg/ml 0,3840 mg/ml 0,5188 mg/ml Cregsit R% Xd % Cregsit R% Xd % Cregsit R% Xd % Cregsit R% Xd % 0,214 99,69 0,30 0,283 98,00 1,99 0,382 99,51 0,48 0,533 102,80 2,80 0,216 100,64 0,64 0,282 97,59 2,41 0,382 99,50 0,50 0,532 102,62 2,62 0,215 100,58 0,58 0,282 97,50 2,50 0,385 100,32 0,32 0,532 102,58 2,58

Acurateea metodei de dozare a CFZM prin derivatizare cu NEDA din produse farmaceutice FORTUM, respectiv CEFTAMIL Studiul preciziei Pentru verificarea preciziei s-au preparat 3 soluii probe dintr-o prob omogene cu un coninut de aproximativ 200 mg Ceftazidim conform metodologiei prezentate anterior. S-au calculat valoarea medie a coninutului n ceftazidim, abaterea standard (s) i deviaia relativ (RSD) pentru substana activ. n tabel sunt prezentate rezultatele experimentale obinute. Precizia metodei de dozare
Proba 1 cantitate_proba abs-1 abs-2 abs-3 abs-4 abs-5 abs_medie STDEV RSD 200.2 0.71619 0.72033 0.72121 0.712298 0.72356 0.7187176 0.004468242 0.621696512 Proba 2 200.3 0.71556 0.71229 0.72115 0.72005 0.726681 0.7191462 0.0055108 0.766291 Proba 3 199.9 0.7222 0.715524 0.73225 0.72268 0.73 0.7245308 0.0066985 0.9245271

Concluzii: Valoarea maxim a abaterilor procentuale este 1,633 pentru determinarea CFZM din produsul farmaceutic FORTUM i 3,133 pentru determinarea CFZM din produsul farmaceutic CEFTAMIL, deci se respect condiia impus ca abaterile procentuale ale regsirii sa fie mai mici dect 5. n plus, regsirea procentual medie este de 99,6606 % pentru FORTUM i de 100,646 % pentru CEFTAMIL. Deci metoda dezvoltat este exact. n figura sunt prezentate spectrele de absorbie pentru probele preparate din produsul farmaceutic FORTUM, respectiv CEFTAMIL.

Concluzie: Determinrile efectuate relev, pentru fiecare soluie o deviaie standard relativ de maxim 0,95%, ceea ce echivaleaz cu o precizie foarte bun a metodei .Stabilirea limitei de cuantificare i de detecie pentru CFZM Pentru determinarea acestor limite se iau n calcul parametrii pentru analiza statistic a seriilor de date a cror concentraie este corelat cu variaia 30 31

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

absorbanelor. Aceti parametri, obinui n cazul dozrii CFZM dup derivatizare cu NEDA sunt prezentai n tabel: Analiza statistic CFZM NEDA Regression Statistics R multiplu 0.994128 coeficient de corelatie 0.988291 coeficient de corelatie ajustat -1.2 Eroare standard 0.047288 Panta 3.01628 Serii 1 Considernd eroarea standard a curbei de calibrare i implicit a pantei medii a acesteia s-au calculat pentru metoda actual urmtoarele limite: Concluzii: Limita de cuantificare LOQ = 0,0460 mg/ml Limita de detecie LOD = 0,1620 mg/ml Stabilitatea complexului CFZM NEDA Pentru determinarea acestui parametru absorbana aceleiai soluii de concentraie cunoscut n CFZM (0,3467 mg/ml, raportat la substana uscat) a fost msurat la intervale de 60 minute timp de 4 h i apoi dup 24h, din momentul formrii complete a complexului. Soluiile au fost pstrate n mediul ambiant.

CAPITOLUL 8
CERCETAREA STABILITATII CEFTAZIDIMEI SI CEFIXIMEI MATERIE PRIMA PENTRU OBTINEREA DE FORME FARMACEUTICE Stabilitatea celor dou cefalosporine materii prime, pstrate n condiii normale, pentru nglobarea n forme farmaceutice s-a urmrit timp de un an determinnd aspectul, pH-ul i coninutul. Determinarea cantitativ efectuat dealungul celor 12 luni s-a efectuat cu ajutorul celor 4 metode elaborate de noi: spectrofotometric cu: - acid p-cloranilic (p-AC) - MBTH - NEDA cromatografic: - HPLC STABILITATEA CEFTAZIDIMEI MATERIE PRIMA Stabilitatea pulberii de ceftazidim Ceftazidima , materie prim introdus n flacoane incolore a fost urmrit din punct de vedere fizic (aspect, culoare) i al pH-ului, timp de un an. Din datele obinute rezult c materia prim constituit din ceftazidim corespunde din punct de vedere al aspectului i al pH-ului cu cele nscrise n documentele companiei productoare.

Stabilitatea complexului CFZM - NEDA n timp Concluzie Complexul CFZM NEDA este stabil maxim 3 h de la formare. De aceea se recomand efectuarea analizelor de rutin pentru determinarea ceftazidimei din produse farmaceutice sau din probe de materie prim, la scurt timp dup prepararea soluiilor. 32 Variaia pH-lui ceftazidimei n timpul unui an de conservare EVALUAREA CANTITATIVA A STABILITATII CEFTAZIDIMEI Ceftazidima materie prim a fost urmrit din punct de vedere cantitativ timp de 3 ani. Determinrile au fost efectuate cu ajutorul celor trei metode spectrometrice i metodei HPLC elaborate i descrise n capitolul 7. 33

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

CERCETAREA STABILITII CEFTAZIDIMEI N CONDIII NORMALE I DE STRES Lund n considerare o cercetare asupra ceftazidimei efectuat de Servais H., am cercetat stabilitatea ceftazidimei materie prim pstrat n condiii normale de temperatur i supus unor condiii de stres (mediu acid, alcalin, oxidant i reductor). URMRIREA STABILITII CEFTAZIDIMEI N CONDIII DE TEMPERATURI CUPRINSE NTRE 21 I 37 OC

Graficul celor patru determinri cantitative Concluzie: Coninutul n ceftazidim scade uor de-a lungul celor 12 luni de depozitare n condiii normale. Cele patru metode arat valori apropiate, variind ntre 98,88 i 98,55%. Determinrile demonstreaz acurateea i exactitatea metodelor elaborate pentru determinarea cantitativ. Evoluia cantitativ a ceftazidimei de-a lungul celor trei ani
Anul 1 2 3 Acid CA 98,88 96,33 95,51 MBTH 98,87 96,35 95,35 NEDA 98,85 96,77 95, 45 HPLC 98,85 96,69 95,55

Graficul degradrii ceftazidimei incubat la diverse temperaturi URMRIREA STABILITII CEFTAZIDIMEI N CONDIII STRES Am urmrit procesul de degradare sau de stabilitate al ceftazidimei n condiii stres de mediu acid, alcalin, oxidant i reductor.

Graficul coninutului n ceftazidim la sfritul fiecrui an Concluzii: 1. Cele patru metode de evaluare cantitativ a ceftazidimei materie prim sunt n concordan i reliefeaz faptul c substana i pstreaz coninutul admis de-a lungul celor trei ani de determinri. 2. Limita de 90% este cea minim luat n considerare pentru a considera o substan medicamentoas utilizabil. 34

Graficul degradrii n mediu acid a ceftazidimei

35

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

EVALUAREA CANTITATIV A STABILITII CEFIXIMEI Ca i n cazul ceftazidimei, cefixima materie prim a fost urmrit din punct de vedere cantitativ acelai numr de ani. Determinrile au fost efectuate cu ajutorul celor trei metode spectrometrice i metodei HPLC.

Graficul degradrii n mediu alcalin a ceftazidimei

Graficul celor patru determinri cantitative Evoluia cantitativ a cefiximei de-a lungul celor trei ani Anul Acid p-CA MBTH NEDA 1 102,1 102,1 102,1 2 98,88 98,83 98,81 3 96,11 96,07 96, 08 HPLC 102,1 98,85 95,89

Graficul degradrii n mediu oxidant a ceftazidim STABILITATEA CEFIXIMEI MATERIE PRIMA

Graficul coninutului n ceftazidim la sfritul fiecrui an Concluzii: Cele patru metode de evaluare cantitativ a cefiximei materie prim sunt n concordan i reliefeaz faptul c substana i pstreaz coninutul n limitele admise de-a lungul celor trei ani de determinri. 37

Variaia pH-ului cefiximei n timpul unui an de conservare

36

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

CERCETAREA STABILITII CEFIXIMEI N CONDIII NORMALE I DE STRES Cefixima materie prim pstrat n condiii normale de temperatur a fost supus unor teste de stabilitate n condiii de temperaturi moderate i de stres (mediu acid, alcalin i oxidant).

Graficul degradrii cefiximei n mediu alcalin

Graficul degradrii cefiximei incubat la diverse temperatura URMRIREA STABILITII CEFIXIMEI N CONDIII STRES Am urmrit procesul de degradare sau de stabilitate al cefiximei n condiii stres amintite: mediu acid, alcalin i oxidant. Degradarea oxidativ a cefiximei

CAPITOLUL 9
STUDIUL STABILITAII CEFTAZIDIMEI SI CEFIXIMEI IN FORME FARMACEUTICE DOZATE MODALITI DE STUDIERE A STABILITII SUBSTANELOR I FORMELOR FARMACEUTICE 1. TESTAREA IN TIMP REAL Testarea n timp real reprezint evaluarea stabilitii caracteristicilor fizice, chimice, biologice si microbiologice ale unui produs medicamentos i/sau ale unei substante medicamentoase pe ntreaga perioad de valabilitate si pe cea de retestare. 2. TESTAREA N CONDIII ACCELERATE Studiile efectuate n condiii accelerate sunt acele studii n cadrul crora se crete viteza degradrii chimice sau a modificrilor fizice ale unei SA sau ale unui produs medicamentos folosind condiii de depozitare i de pstrare extreme; aceste studii fac parte din programul definitiv i oficial de depozitare. 39

Graficul degradrii cefiximei n mediu acid 38

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

3. TESTAREA N CONDITII DE STRES (DEGRADARE FORAT) Studiile n condiii de stres se efectueaza pentru a elucida caracteristicile intrinseci de stabilitate. Aceste studii fac parte din strategia de dezvoltare i se efectueaz de obicei n condiii mult mai severe dect cele utilizate n testarea in conditii accelerate. FORMELE FARMACEUTICE OBINUTE CU CEFTAZIDIM I CEFIXIM Ceftazidima i cefixima, materii prime obinute din India au fost incluse n cteva forme farmaceutice dozate, care s fie testate cantitativ timp de un an. S-au obinut urmtoarele forme care au fost analizate n intervalul de timp amintit. 1. Ceftazidim, pulbere pentru solutie injectabil 0,25 g, 0,5 g, 1 g, 2 g 2. Ceftazidim pulbere pentru administrare intravenoas 500 mg ceftazidim 3. Cefixim - capsule 200 mg 1. CEFTAZIDIM, PULBERE PENTRU SOLUTIE INJECTABILA Analiza stabilitii ceftazidimei n fiolele cu 0,25 g ceftazidim Rezultatele obtinute sunt prezentate n tabelele i n figurile urmatoare. Coninutul n ceftazidim n primul an de analiz al fiolelor cu 0,25 g
Timp, luni 0 3 6 9 12 Timp, luni 12 15 18 21 24 Aspect galben galben galben galben galben Aspect galben galben galben galben galben Coninut n ceftazidim Coninut % 102,10 100,5 99,66 98,00 98,20 g/fiol 0,250 0,250 0,247 0,246 0,240 4,54 4,58 4,65 4,66 4,63 pH 4,64 4,65 4,68 4,69 4,70 pH

Variaia coninutului n ceftazidim de-alungul celor trei ani Anul 1 2 3 102,10 98,20 92,10 100,50 97,20 91,50 99,66 96,50 90,55 98,00 95.10 89, 10 98,20 92,10 88,20

Graficul variaiei coninutului n ceftazidim

Coninutul n ceftazidim n al doilea an de analiz al fiolelor cu 0,25 g


Coninut n ceftazidim Coninut % 98,20 97,20 96,50 95.10 92,10 g/fiol 0,240 0,238 0,237 0,236 0,232

Variaia coninutului n ceftazidim/fiol n cei trei ani de determinri

Coninutul n ceftazidim n al treilea an de analiz al fiolelor cu 0,25 g Timp, luni Aspect Coninut n ceftazidim pH Coninut % g/fiol 24 27 30 33 36 galben galben galben galben galben 92,10 91,50 90,55 89, 10 88,20 40 0,232 0,230 0,227 0,225 0,220 4,70 4,58 4,55 4,66 4,63

Variaia pH-ului ceftazidimei n cei trei ani de determinri 41

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

Concluzii 1. In cei trei ani de determinri coninutul n cefalosporin scade pna la 88,88% 2. pH-ul soluiilor crete, acesta lund valori ntre 4,54 i 4,73 Analiza stabilitii ceftazidimei n fiolele cu 0,50 g ceftazidim Rezultatele obtinute sunt prezentate n tabelele i n figura urmatoare: Coninutul n ceftazidim n primul an de analiz al fiolelor cu 0,50 g
Timp, luni 0 3 6 9 12 Timp, luni 12 15 18 21 24 Timp, luni 24 27 30 33 36 Aspect galben galben galben galben galben Aspect galben galben galben galben galben Aspect galben galben galben galben galben 92,10 91,50 90,55 89,10 88,20 Anul 2 98,20 97,20 96,50 95.10 92,10 Anul 2 0,40 0,39 0,36 0,32 0,30 98,20 97,20 96,50 95.10 92,10 102,10 100,5 99,66 98,00 98,20 Coninut n ceftazidim Coninut % g/fiol 0,50 0,47 0,46 0,43 0,40 Coninut n ceftazidim Coninut % g/fiol 0,40 0,39 0,36 0,32 0,30 Coninut n ceftazidim Coninut % g/fiol 0,30 0,29 0,28 0,27 0,25 4,70 4,71 4,75 4,78 4,79 pH 4,64 4,65 4,68 4,69 4,70 4,54 4,58 4,65 4,66 4,64 pH pH

Variaia coninutului de ceftazidim n cei trei ani de analiz Rezultatele determinarilor pH-ului ceftazidimei sunt redate in tabelul i figura de mai jos: pH-ul fiolelor cu ceftazidim n cei trei ani de analiz
1 4,54 4,58 4,65 4,66 4,64 Anul 2 4,64 4,65 4,68 4,69 4,70 3 4,70 4,71 4,75 4,78 4,79

Coninutul n ceftazidim n al doilea an de analiz al fiolelor cu 0,50 g

Coninutul n ceftazidim n al treilea an de analiz al fiolelor cu 0,50 g

Coninutul % de ceftazidim n cei trei ani de analic


1 102,10 100,5 99,66 98,00 98,20 3 92,10 91,50 90,55 89,10 88,20

Variaia pHului ceftazidimei din fiolele cu 0,50 g Concluzii: 1. In cei trei ani de determinri coninutul n cefalosporin scade pna la 88,88% 2. pH-ul soluiilor crete, acesta lund valori ntre 4,54 i 4,79 Analiza stabilitii ceftazidimei n fiolele cu 1,0 g ceftazidim Rezultatele obtinute sunt prezentate n tabelele i n figurile de mai jos. Coninutul n ceftazidim n primul an de analiz al fiolelor cu 1 g
Timp, luni 0 3 6 9 12 Aspect galben galben galben galben galben 102,10 100,5 99,66 98,00 97,60 Coninut n ceftazidim Coninut % g/fiol 1,00 1,00 0,99 0,99 0,98 4,54 4,58 4,65 4,66 4,67 pH

Coninutul de ceftazidim pe fiola de 0,50 g


1 0,50 0,47 0,46 0,43 0,40 3 0,30 0,29 0,28 0,27 0,25

42

43

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

Coninutul n ceftazidim n al doilea an de analiz al fiolelor cu 1g


Timp, luni 12 16 19 21 24 Timp, luni 24 27 30 33 36 Aspect galben galben galben galben galben Aspect galben galben galben galben galben Coninut n ceftazidim Coninut % g/fiol 97,60 0,98 97,58 0,97 97,55 0,97 97,53 0,98 97,50 0,97 Coninut n ceftazidim Coninut % 97,50 97,45 97,42 97,39 97,30 Anul 2 0,98 0,97 0,96 0,95 0,94 g/fiol 0,97 0,95 0,93 0,90 0,88 pH 4,67 4,68 4,68 4,69 4,70 pH 4,70 4,72 4,75 4,76 4,79

Coninutul n ceftazidim n al treilea an de analiz al fiolelor cu 1 g

Variaia pH-ului n cei trei ani de analiz Anul 1 2 4,54 4,66 4,58 4,67 4,65 4,68 4,66 4,69

3 4,69 4,71 4,75 4,78

Coninutul de ceftazidim pe fiola de 1,0 g


1 1 1 0,99 0,99 0,98 3 0,94 0,93 0,92 0,9 0,88

Variaia pH-ului ceftazidimei din fiolele cu 1,0 g Concluzii: 1. In cei trei ani de determinri coninutul n cefalosporin scade de la 102,10 pna la 97,30% 2. pH-ul soluiilor crete, acesta lund valori ntre 4,54 i 4,73 Analiza stabilitii ceftazidimei n fiolele cu 2, g ceftazidim Coninutul n ceftazidim n primul an de analiz al fiolelor cu 2 g Coninut n ceftazidim Timp, luni Aspect Coninut % g/fiol

pH 4,54 4,58 4,65 4,66 4,63 pH 4,63 4,65 4,68 4,69 4,70

Variaia coninutului cefiximei pe parcursul celor trei ani

0 Galben 102,66 2,00 3 Galben 100,5 2,00 6 Galben 99,66 1,98 9 Galben 98,00 1,97 12 Galben 97,60 1,96 Coninutul n ceftazidim n al doilea an de analiz al fiolelor cu 2 g Timp, luni Aspect Coninut n ceftazidim Coninut % g/fiol 12 15 18 21 24 galben galben galben galben galben 97,60 97,58 97,55 97,53 97,50 45 1,96 1,95 1,94 1,94 1,92

Variaia ceftazidimei n cei trei ani de analiz 44

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

Coninutul n ceftazidim n al treilea an de analiz al fiolelor cu 2 g pH Timp, luni Aspect Coninut n ceftazidim Coninut % g/fiol 24 galben 97,50 27 galben 97,45 30 galben 97,42 33 galben 97,39 36 galben 97,27 Coninutul de ceftazidim pe fiola de 1,0 g Anul 1 2 2,00 1,96 2,00 1,95 1,98 1,94 1,97 1,94 1,96 1,92 1,92 1,90 1,89 1,85 1,82 3 1,92 1,90 1,89 1,85 1,82 4,70 4,71 4,72 4,74 4,76

Variaia pH-ului n cei trei ani de analiz Anul 1 2 4,54 4,66 4,58 4,67 4,63 4,68 4,66 4,69

3 4,7 4,71 4,72 4,75

Variaia pH-ului ceftazidimei din fiolele cu 1,0 Concluzii: 1. In cei trei ani de determinri coninutul n cefalosporin scade de la 102,10 pna la 97,27% 2. pH-ul soluiilor crete, acesta lund valori ntre 4,54 i 4,75 2. CEFTAZIDIM PULBERE PENTRU ADMINISTRARE INTRAVENOAS Analiza stabilitii ceftazidimei n fiolele cu 0,200 g ceftazidim Rezultatele obtinute sunt prezentate in cele ce urmeaza: Coninutul n ceftazidim n primul an de analiz al fiolelor cu 200 mg Coninut n ceftazidim Timp, luni Aspect pH Coninut % g/fiol 0 3 6 9 12 Variaia ceftazidimei n cei trei ani de analiz 46 galben galben galben galben galben 102,1 100,5 99,66 98,00 97,60 0,200 0,199 0,196 0,192 0,190 4,54 4,58 4,65 4,66 4,63

Coninutul n ceftazidim n al doilea an de analiz al fiolelor cu 200 mg 47

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

Timp, luni

Aspect

Coninut n ceftazidim Coninut % g/fiol

pH

12 galben 97,60 0,190 4,64 15 galben 97,58 0,188 4,65 18 galben 97,55 0,187 4,68 21 galben 97,53 0,185 4,69 24 galben 97,50 0,182 4,70 Coninutul n ceftazidim n al treilea an de analiz al fiolelor cu 200 mg pH Timp, luni Aspect Coninut n ceftazidim Coninut % g/fiol 24 galben 97,50 27 galben 97,45 30 galben 97,42 33 galben 97,39 36 galben 97,33 Coninutul de ceftazidim pe fiola de 1,0 g Anul 1 2 0,200 0,190 0,199 0,188 0,196 0,187 0,192 0,185 0,190 0,182 0,182 0,180 0,177 0,175 0,172 3 0,182 0,180 0,177 0,175 0,172 4,70 4,58 4,55 4,66 4,63 Variaia ceftazidimei n cei trei ani de analiza Concluzii: 1. In cei trei ani de determinri coninutul n cefalosporin scade de la 102,10 pna la 97,33% 2. pH-ul soluiilor crete, acesta lund valori ntre 4,54 i 4, 3. CEFIXIM, 200 mg - CAPSULE Analiza stabilitii cefiximei n capsulele cu 0,200 g ceftazidim Rezultatele obtinute sunt prezentate n tabelele i n figurile urmatoare. Coninutul n cefixim n primul an de analiz al fiolelor cu 200 mg Coninut n ceftazidim Timp, luni Aspect pH Coninut % g/fiol 0 3 6 9 12 galben galben galben galben galben 102,1 100,5 99,66 98,00 97,60 0,200 0,196 0,195 0,192 0,190 4,54 4,58 4,65 4,66 4,63

Coninutul n cefixim n al doilea an de analiz al fiolelor cu 200 mg Coninut n ceftazidim Timp, luni Aspect pH Coninut % g/fiol 12 15 18 21 24 galben galben galben galben galben 97,60 97,58 97,55 97,53 97,50 0,190 0,198 0,197 0,195 0,192 4,64 4,65 4,68 4,69 4,70

48

49

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

Coninutul n cefixim n al treilea an de analiz al fiolelor cu 200 mg pH Timp, luni Aspect Coninut n ceftazidim Coninut % g/fiol 24 galben 97,50 27 galben 97,45 30 galben 97,42 33 galben 97,39 36 galben 97,29 Coninutul de cefiximp e fiola de 0,200 g Anul 1 2 0,200 0,190 0,196 0,198 0,195 0,197 0,192 0,195 0,190 0,192 0,192 0,190 0,185 0,182 0,180 3 0,192 0,190 0,185 0,182 0,180 4,70 4,58 4,55 4,66 4,63

Variaia pH-ului n cei trei ani de analiz Anul 1 2 4,54 4,66 4,58 4,67 4,65 4,68 4,66 4,69

3 4,70 4,71 4,75 4,79

Variaia pH-ului cefiximei din fiolele cu 200 mg Concluzii: 1. In cei trei ani de determinri coninutul n cefalosporin scade de la 102,10 pna la 97,29% 2. pH-ul soluiilor crete, acesta lund valori ntre 4,54 i 4,7

CONCLUZII GENERALE
Din ntreaga lucrare se pot trage urmtoarele concluzii: Lucrarea cuprinde dou pri bine distincte: O parte care se refer la problemele generale i speciale legate de cunoaterea din literatura de specialitate a celor dou cefalosporine, a fost inclus n Stadiul cunoaterii. Aceast parte cuprinde 3 capitole (1-3). Partea de cercetare este inclus n Contribuii proprii i este inserat dea lungul a 6 capitole. Iata cateva dintre contributiile proprii pe care le-am adus in aceasta lucrare: 1. Am prezentat ceftazidima i cefixima din punct de vedere structural, modalitile de identificare, problemele complexe ale posibilelor impuriti. 2. Am scos n eviden metodele de depistare a acestor impuriti i am insistat asupra analizelor lichid cromatografce. 51

Variaia cefiximei n cei trei ani de analiz

50

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

3. Am propus sisteme cromatografice pe strat subire pentru identificarea ceftazidimei i cefiximei. Am artat valorile Rf pe baza crora se pot identifica. 4. Am identificat spectrometric n UV cele dou cefalosporine prin maximele de absorbie de la 256 i 287 nm. 5. Am propus mai multe sisteme de solveni pentru identificarea cromatografic i am indicat valorile Rf determinante pentru ceftazidim i cefixim 6. In cadrul a dou capitole (5 i 6) am elaborat metodologia de validare a unor metode de analiza a caftazidimei pentahidrat, cefiximei i a substanelor nrudirte. 7. Am contribuit la elaborarea a trei metode spectrometrice de determinare cantitativ a ceftazidimei i cefiximei. 8. Folosind metoda Job am determinat raportul analit reactant. 9. Am dezvoltat o a doua metod spectrometric de determinare cantitativ a ceftazidimei prin complexare (derivatizare) cu 3-metilbenzotiazolin-2-on hidrazona (MBTH). 10. Am determinat ceftazidima, printr-o metod spectrometric de derivatizare cu N-(1-naftil)etilendiamin (NEDA). 11. Am validat cele trei metode spectrometrice prin calcularea tuturor parametrilor (linearitate, specificitate, exactitate, precizie, etc). 12. Pentru cefixim, am elaborat condiiile i procedeele de determinare cantitativ prin derivatizare cu acid p-cloranilic, MBTH i NEDA. 13. Toate metode spectrometrice de determinare cantitativ a cefiximei au fost validate determinnd n final limitele de cuantificare i detecie. 14. Pentru cefixim, am elaborat condiiile i procedeele de determinare cantitativ prin derivatizare cu acid p-cloranilic, MBTH i NEDA. 15. Am urmrit stabilitatea a dou produse, ceftazidim i cefixim, materie prim livrat de o firm indian. 16. Stabilitatea celor dou cefalosporine materii prime, pstrate n condiii normale, pentru nglobarea n forme farmaceutice s-a urmrit timp de un an determinnd aspectul, pH-ul i coninutul. 17. Ceftazidima, materie prim introdus a fost urmrit din punct de vedere fizic (aspect, culoare) i al pH-ului, timp de trei ani. Din date obinute rezult ca materia prim constituit din ceftazidima corespunde din punct de vedere al aspectului i al pH-ului cu cele nscrise n documentele companiei productoare. 18. Determinarea cantitativ efectuat de-a lungul celor 12 luni s-a efectuat cu ajutorul celor 4 metode elaborate de noi: spectrofotometric cu: - acid pcloranilic (p-AC), - MBTH, - NEDA, cromatografic: -HPLC 19. Am cercetat stabilitatea ceftazidimei materie prim pstrat n condiii normale de temperatur i supus unor comdiii de stres (mediu acid, alcalin, oxidant i reductor).

20. Cea de a doua cefalosporin, cefixima a fost cercetat n mod asemantor constatnd c materia prim corespunde din punct de vedere al aspectului i al pH-ului cu cele nscrise n documentele companiei productoare. 21. Determinarea cantitativ efectuat de-alungul celor 12 luni s-a efectuat cu ajutorul celor 4 metode elaborate de noi; spectrofotometric cu: - acid pcloranilic (p-AC), - MBTH, - NEDA, cromatografic: -HPLC 22. S-au formulat: Ceftazidim, pulbere pentru solutie injectabil (0,25 g, 0,5 g, 1 g, 2 g), Ceftazidim pulbere pentru administrare intravenoas (500 mg ceftazidim) i Cefixim capsule (200 mg). 23. Toate formele farmceutice propuse au fost urmrite timp de trei ani din punct de vedere al aspectului, coninutului n cefalosporin i al variaei pH-lui. 24. Am constatat modificri din punct de vedere al aspectului, al coninutului n ceftazidim i cefixim i al pH-ului. 25. Concluzia care se trage n urma determinrilor efectuate este c cele dou cefalosporine considerate materii prime ntrunesc toate condiiile pentru a fi utilizate la obinerea unor forme farmaceutice la nivelul unui mic laborator farmaceutic. 26. In ceea ce privesc formulrile noastre, va trebui mbuntit compoziia prin adugarea de substane auxiliare, care s asigure o i mai bun stabilitate n timp.

52

53

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

BIBLIOGRAFIA CONSULTATA
1. 2. 3. 4. 5. 6. Abdel Gaber A.A., Ghandour M.A., El-Said H.S., Polarographic studies of some metal (II) complexes with cephalosporins selected from the first generation, Analytical Letters, vol. 36, no. 6, 1245-1260, 2003 Adams R.H. Veterinary pharmacology and therapeutics, 8th Edition, Blackwell Publishing Professional, 2001 Alarfaj A., Abd El-Razeq S. A., Flow-injection chemiluminescent determination of cefprozil using tris (2,2-bipyridyl) ruthenium (II)permanganate system, J Pharm Biomed Anal, vol. 41, no. 4, 14231427, 2006 Ali M.M., Polarographic determination of cephradine in aqueous and biological media, Bioelectrochemistry and Bioenergetics, vol. 33, no. 2, 201 204, 1994 Baggaley K.H., Brown, A.G., Schoefield, C.J., "Chemistry and Biosynthesis of clavulanic acid and other clavams", Nat. Prod. Rep., 14, 309-333, 1997 Bakker-Wudenberg I.A, van den Berg J C, Michel M.F., Therapeutic activities of cefazolin, cefotaxime, and ceftazidime against experimentally induced Klebsiella pneumoniae pneumonia in rats, Antimicrob Agents Chemother., 22(6), 1042-1050, 1982 Balant L. Dayer P., Auckenthaler R., Clinical Pharmacokinetics of the third generation cephalosporins, Clin. Pharmacokinet. 10 (2),101-43, 1985 Baranowska D., Markowski P., Baranowski J., Simultaneous determination of 11 drugs belonging to four different groups in human urine samples by reversed-phase high-performance liquid chromatography method, Analytica Chimica Acta, vol. 570, no. 1, 46-58, 2006 Barbara A. Jantausch M.D., Peripheral Brain Cephalosporins, Pediatrics in Review. 2003, 24,128-136. 2003 Darwish A., Kinetic spectrophotometric methods for determination of trimetazidine dihydrochloride, Analytica Chimica Acta, vol. 551, no. 1-2, 222-231, 2005 Delgado J.N., Gisyold O., ., Wilson and Gisvold's Textbook of Organic Medicinal and Pharmaceutical Chemistry, Remers W.A, Lippincott-Raven, Philadelphia, Pa, USA, 10th edition, 1998 Diaconu E., Nechifor M., Antibiotice beta-lactamice, Ed. Centrala Industrial de Medicamente i Cosmetice, Bucuresti, 1988 Dobrescu D., Farmacoterapia practica, vol. I, Ed. Medicala, Bucuresti, 1989 El Walily F.M., Abdel-Kader Gazy A., Belal F., Khamis E.F., Selective spectrofluorimetric determination of phenolic -lactam antibiotics through the formation of their coumarin derivatives, J Pharm Biomed Anal, vol. 20, no. 4, 643-653, 1999

7. 8.

9. 10. 11. 12. 13. 14.

15. Hardman G., Limbird, L.E., Oilman A.G., Goodman & Gilman's the Pharmacological Basic of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, NY, USA, 10th edition, 2001 16. Kliebe C., Nies B.A., .Meyer J.F, Tolxdorff-Neutzling R.M., Wiedemann B., Evolution of plasmid-coded resistance to broad-spectrum cephalosporins, Antimicrob Agents Chemother., 8 (2),302-7, 1985 17. Li Y., Lu J., Chemiluminescence flow-injection analysis of -lactam antibiotics using the luminol-permanganate reaction, Luminescence, vol. 21, no. 4, 251-255, 2006 18. Li Y.-M., Zhu Y., Vanderghinste D., Van Schepdael A., Roets E., Hoogmartens J., Micellar electrokinetic capillary chromatography for the separation of cefalexin and its related substances, Electrophoresis, vol. 20, no. 1, 127-131, 1999 19. Mahmoud A. O., Osama H. Abdelmageed, Tamer Z. A., Kinetic Spectrophotometric Determination of Certain Cephalosporins in Pharmaceutical Formulations, International Journal of Analytical Chemistry, 135-147, 2009 20. Masoom Raza Siddiqui, Abu Tariq, Manu Chaudhary, K. Dinesh Reddy, Prithvi Singh Negi, Jitendra Yadav, Nitya Srivastava, Sanjay Mohan Shrivastava, Rajkumar Singh Development and Validation of High Performance Liquid Chromatographic Method for the Simultaneous Determination of Ceftazidime and Sulbactam in Spiked Plasma and Combined Dosage form-Zydotam, American Journal of Applied Sciences 6 (10), 1781-1787, 2009 21. Oliveira R. V., De Pietro A.C., Cass Q. B., Quantification of cephalexin as residue levels in bovine milk by high-performance liquid chromatography with on-line sample cleanup, Talanta, vol. 71, no. 3,1233-1238, 2007 22. Pajchel Genowefa, Tyski Stefan, Adaptation of capillary electrophoresis to the determination of selected cephalosporins for injection, Journal of Chromatography A, Volume 895, Issues 1-2, 27-31, 2000 23. Rahman N., Ahmad Y., Azmi S.N.H, Kinetic spectrophotometric method for the determination of norfloxacin in pharmaceutical formulations, European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, vol. 57, no. 2, 359367, 2004. 24. Reddy V.S., Reddy S.J., Estimation of cephalosporin antibiotics by differential pulse polarography, Talanta, vol. 44, no. 4, 627631, 1997 25. Remers A., Delgado J.N., Eds., Wilson and Gisvold's Textbook of Organic Medicinal and Pharmaceutical Chemistry, W. A. Remers and J. N. Delgado, Eds., Lippincott-Raven, Philadelphia, Pa, USA, 10th edition, 1998 26. Reyes F, Martinez M.J., Soliveri J., Determination of cephalosporin-C amidohydrolase activity with fluorescamine., J. Pharm. Pharmacol., 41, 2, 136-7, 1989

54

55

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

REZUMAT. Studii privind stabilitatea unor cefalosporine, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice

27. Rice L.B., Eckstein E.C., DeVente J., Shlaes D.M., Ceftazidime-resistant Klebsiella pneumoniae isolates recovered at the Cleveland Department of Veterans Affairs Medical Center. Clin Infect Dis., 23 (1):118-24, 1996 28. Sale H.F., Askal M.F., Radwan M.F., Omar M.A., Use of charge-transfer complexation in the G. A. spectrophotometric analysis of certain cephalosporins, Talanta, vol. 54, no. 6, 12051215, 2001 29. Saleh G.A., Askal H.F., Darwish I.A., . El-Shorbagi A.N., Spectroscopic analytical study for the charge-transfer complexation of certain cephalosporins with chloranilic acid, Analytical Sciences, vol. 19, no. 2, 281287, 2003 Tawara S., Hatano K., Wakai Y., Matsumoto S., Watanabe Y., Matsumoto F., Kuwahara S., In vivo antibacterial activity of FK041, a new orally active cephalosporin ,Journal of antibiotics, vol. 52, no7, 660-665, 1999 30. Terrence W. Doyle T.W., Douglas J.L., Belleau B., Conway T.T., Ferrari C.F., Horning D.E., Lim G., Luh Bing-Yu, Martel A., Menard M., Morris L.R., Misiek M., Nuclear analogs of -lactam antibiotics. XIII. Structure activity relationships in the isocephalosporin series, Can. J. Chem. 58(23): 25082523, 1980 31. The European Pharmacopeia, 5th Edition, Council of Europe, 2005 32. The United States Pharmacopoeia XXV and NF XX, American Pharmaceutical Association, Washington, DC, USA, 2002 33. The United States Pharmacopoeia XXV and NF XX, American Pharmaceutical Association, Washington, DC, USA, 2002The Unites States Pharmacopeia XXX and NF XXV, American Pharmaceutical Association, Washington DC, 2007 34. Thonpoon, B. Liawruangrath, S. Liawruangrath, R. A. Wheatley, and A. Townshend, Flow injection chemiluminescence determination of cephalosporins in pharmaceutical preparations using tris (2,2-bipyridyl) ruthenium (II)-potassium permanganate system, Analytica Chimica Acta, vol. 553, no. 1-2, 123-133, 2005 35. Toothaker D., Wright D.S., Pachla L.A., Recent analytical methods for cephalosporins in biological fluids. Antimicrob Agents Chemother. 31(8), 1157-1163, 1987 36. Toothaker R.D., Wright D.S., Pachla L.A., Recent analytical methods for cephalosporins in biological fluids, Antimicrob. Agents Chemother., 31(8), 1157-1163, 1987 37. Yeh H.-H,. Yang Y.-H,. Chou Y.-W,. Ko J.-Y,. Chou C.-A, Chen S.-H., Determination of ceftazidime in plasma and cerebrospinal fluid by micellar electrokinetic chromatography with direct sample injection, Electrophoresis, vol. 26, no. 4-5, 927934, 2005 38. Zajac Marianna, Jeliska Anna, Sobczak Agnieszka, Musia W., Stability of ceftazidime pentahydrate in medicinal preparations Biotum and Ceftim, Acta Pol. Pharm. In Drug Research,62 (1):11-5, 2005

LUCRARI PUBLICATE
1. Doina Lazr, M.I.Lazr, B.Palade, E.Diaconu, Andreia Corciov, Aprecierea calitii unor cefalosporine utilizate pentru obinerea de forme farmaceutice, Ziua medicamentului, Iai, 2004, 29-30 aprilie Doina Lazr, M.I.Lazr, B.Palade, E. Diaconu, Evaluation of the Quality of some Cephalosporines used in Obtaining Pharmaceutical Forms, In News in Antiinfective Therapy, Editat de Mihai Nechifor, Ed. Casa Crii de tiin, Cluj-Napoca, 2005, 185-189, ISBN 973-686-780-3 Doina Lazr, B. Palade, Andreia Corciov, Adriana Tamba, M. I. Lazr, Determinarea spectrofotometric a ceftazidimei i cefeximei, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice, Ziua medicamentului, Iai, 2008, mai 12-15 B. Palade, Doina Lazr, Andreia Corciov, Adriana Tamba, M. I. Lazr, Determinarea spectrofotometric a ceftazidimei i cefiximei, materii prime pentru obinerea de forme farmaceutice, Rev. Med. Chir. Soc. Med. Nat., Iai, 2009, vol. II3, nr. 2, Suplimnt nr.4, 307-311 B. Palade, Doina Lazr, E. Diaconu, Andreia Corciov, M. I. Lazr, Aprecierea calitii unor cefalosporine utilizate pentru obinerea de forme farmaceutice, Rev. Med. Chir. Soc. Med. Nat., Iai, 2009, vol. II3, nr. 2, Suplimnt nr.4, 312-316 B. Palade, B. Cioroiu, Doina Lazr, Andreia Corciov, M. I. Lazr, Evaluarea spectrofotometric i HPLC a stabilitii ceftazidimei, Rev. Med. Chir. Soc. Med. Nat., Iai, 2010, vol. II4, nr.1, 266-271 B. Palade, B. Cioroiu, Doina Lazr, Andreia Corciov, Ileana Cojocaru, M. I. Lazr, Cercetarea stabilitii cefiximei, materie prim pentru obinerea de forme farmaceutice, Rev. Med. Chir. Soc. Med. Nat., Iai, 2010, vol. II4, nr.2, 596-599

2.

3.

4.

5.

6.

7.

56

57