Introducere:

Licopenul este un colorant vegetal, solubil n grsimi, care d culoarea

roie pepenelui, roiilor i n cantitate mai sczut i altor fructe. Aparine
familiei carotenoidelor ca i -carotenul, substane pe care organismul omului nu le
sintetizeaz.
Codul alimentar desemnat de ctre Uniunea European acestui colorant este E160d.
Are ca sinonim Galben natural 27, Licopina. Denumirea sa chimic este Licopen.
Are formula brut C40H56, iar M = 536,85. Se gsete n unele fructe, n ficat, n unt i n
tomate (Solanum Lycopersicum).
Licopina se extrage din deeurile rezultate de la prelucrarea tomatelor, cu ajutorul
apei, la temperatura de 550C i pH = 7,5-9. Prin corectarea pH-ului la 4,8, colorantul
precipit. Se mai obine i prin extracia cu un solvent din soiuri de tomate, dup care
solventul este ndeprtat prin distilare sub vid.
Ca solveni se utilizeaz diclormetan, dioxid de carbon, acetat de etil ,aceton,
popanol-2, metanol, etanol sau hexan. Aditivul mai conine, alturi de licopen (5% din
totalul de colorani), i ali pigmenti carotinoidici. Pe langa pigmenii de colorare, n
aditivi se mai gsesc i alte componente prezente n mod normal n tomate (ca de
exemplu uleiuri, grsimi, cear i substane aromatice diverse).
Licopina formeaz prisme prin recristalizare din eter de petrol. Are p.t. = 1750C,
este solubil n cloroform, n CS2, n benzen fierbinte, dar este greu solubil n alcool i n
eter de petrol. Banda caracteristica de absorbie n CS2 este la 547; 507,5 i 477 m.
Aditivul alimentar se prezinta sub form de lichid vscos de culoare rou-nchis.
Reziduul de solveni este de maximum 50 mg/kg separat sau n combinaie.

Risc
Licopenul este unul dintre carotenoizii alimentari cu cea mai puternic aciune
antioxidant.Unii autori sugereaz faptul c licopenul are chiar activiti antiproliferatice
celulare, anticancerigene i antiaterogenetice, avnd aciune benefic n bolile cardiace i
n cancer.
Licopenul a,b-carotenul i zeaxantina sunt eseniale n funcionarea normal a ochilor. n
prezena vitaminei i a zincului, reduc riscul formrii cataractei i a degenerescenei
maculare (AMD). Doza zilnic admisibil este de 2-5 mg/kilocorp.

Capitolul 1. Consideraii teoretice

Tomatele i diverse produse derivate din tomate prelucrate termic sunt principalele
surse de licopen, dar n afar de acest micronutrient, carotenoidele, cum ar fi betacaroten, de asemenea, sunt prezeni n fructe. Ele apar n fructe roii i diverse produse de
tomate n concentratie de 2.62 la 629.00 (licopen) i 0.23 - 2.83 mg/100 g (beta-caroten).
Metode standard pentru determinarea coninutului de carotenoide necesit extracia
analitului, precum i alte msuri aleatorii.
Consumul de fructe i legume este asociat cu un risc redus de diverse afeciuni,
inclusiv cancerul i bolile cardiovasculare. Carotenoidele, cum ar fi licopenul i betacaroten, sunt componente naturale de plante comestibile i pot proteja mpotriva bolilor.
Biosinteza de licopen din plante eucariote i n cianobacterii procariote este
similar, astfel cum sunt enzimelor implicate. Sinteza ncepe cu acid mevalonic, care este
convertit n pirofosfat dimetilalil. Acesta este apoi condensat cu trei molecule de
pirofosfat isopentenil (un izomer de pirofosfat dimetilallil.
Cele dou grupuri izopren terminale de licopen pot fi ciclizate pentru a produce
beta-caroten, care pot fi apoi transformate ntr-o mare varietate de xantofili.

Greutatea moleculara=536,89
Formula moleculara= C40 H56
Copozitia moleculara= C 89,49% H 10.51%

Capitolul 2. Proprietatile licopenului

Licopen, un carotenoid gsit n produsele de tomate, previne oxidarea
lipoproteinelor cu densitate mic (LDL) colesterol i reduce riscul de a dezvolta
ateroscleroza i boala coronarian.
Licopenul din roii i produsele din roii se compune n principal din toate translicopene (35-96% din licopen coninutul total) i nivelele sczute de cis-licopene (122% din coninutul total de licopen).
Licopenul are 11 legturi duble conjugate i 2 duble obligaiuni nonconjugate,
fcndu-l un compus foarte saturat.
Capacitatea antioxidant de licopen a condus la rezultate promitoare n reducerea
riscului cancerului i a unor boli. Mai multe studii au artat c licopenul este capabil de
prevenirea oxidarii n (LDL), care determin procesul erogen i bolilor de inim. n
roiile proaspete, coninutul de licopen a fost raportat la intervalul 2.5 - 200 mg/100 g de
materii prime tomate.
Coninutul de licopen din roii variaz de obicei de la 70 - 130 mg / kg n procent
de 5% la 15% din produs.
Factorii care ar putea afecta stabilitatea licopenului n tomate:
- soi;
- tehnica de cultivare;
- condiiile climatice i localizarea geografic;
- gradul de maturitate al fructului;
- prelucrare, cum ar fi enzimele n tomate;
- temperatura de prelucrare: Izomerizarea licopenului a crescut la peste 75 C;
- aditivii;
- natura fructelor din care a fost extras;
- cantitatea de ulei din semine de tomate care este inclus n extras.

Biosinteza licopenului n tomate a crescut odat cu :

1 cresterea efectului de ser din cauza acumularii de temperatura;
1 factorii de mediu;
1 diferite ex-metode de aciune;
1 diferene de nivel de licopen, chiar n aceeai prob de tomate.
n acest studiu, un standard de licopen pur a fost folosit pentru investigarea
stabilitatii termice a licopenului, pentru a se evita orice probleme i discrepane n
extracie i statutul de licopen coninut n roii; se vor folosi roii neprelucrate termic
(coacere, microunde i prjire).

Capitolul 3. Analiza licopenului

Cunoaterea coninutului de licopen din alimente, este primul pas spre a studia rolul
su n alimentaie i sntate. Licopenul difer de alte carotinoide prin proprietile
fizico-chimice ale sale. Identificarea i cuantificarea de licopen poate se face cu metode
diferite: HPLC, spectrofotometrie.
Licopenul joac de asemenea un rol crucial n sistemele biologice ca un puternic
radical de oxigen. Evaluarea capacitii antioxidante este bazata pe inhibarea anumitor
reacii n prezena antioxidantilor.
Produsul este fabricat prin presarea tomatelor, pentru a produce sucul de roii
crude, care este apoi separat .
Pasta este apoi extras utiliznd acetat de etil ca solvent. Extractul de ulei const n
licopen, mpreun cu un numr de alte componente care apar n mod natural n roii, care
sunt dizolvate i dispersate. Acestea includ acizi grai i acilglicerol, materie
nesaponificabil, compui de fosfor i fosfolipide, cis-izomerii, ali carotenoizi i
substanele aferente, inclusiv -caroten, fitofluene, tocoferoli ce sunt de asemenea
prezente.
Licopenul extras s-a dovedit a fi stabil la temperatura camerei i la 4C timp de
pn la 37 luni.
Stabilitatea licopenului depinde de anumite produse alimentare n care se adaug,
precum i de procesul de producie.

3.1. Metoda de lucru

Licopenul extras din tomate este produs dintr-o varietate de tomate cu un coninut
ridicat de licopen, n intervalul de 150 - 250 mg / kg.
Extractul este produs prin strivirea roiilor n suc de roii crude, care este apoi
separat n ser. Pasta de tomate este apoi extras cu acetat de etil. Produsul final este
obinut dup eliminarea cu solvent prin evaporare sub vid la 40-60 C.

Licopenul extras din tomate conine carotenoizi precum i non-carotenoide

componente.
Non-carotenoidele componente majore ale extractului de tomate includ acizi grai
i acilglicerols (69-74%), fosfolipide (8.9 - 14%) i cear (5-8.4%). Valorile raportate au
fost determinate prin metodele de analiz descrise n raportul unui studiu care vizeaz o
caracterizare calitativ i cantitativ complet a extractului.

3.2. Materiale i metode de determinare pentru analiza HPLC

Substante: Hexan, metanol, aceton
Tomate proaspete
- Un amestec de solvent de aceton (1 ml), etanol (1 ml) i hexan (1 ml) au fost
adugai ntr-o eprubet cu proba de tomate (250 mg) i mixate pentru 30 de secunde.
- Soluia de extracie a fost pstrata la temperatura camerei timp de 30 min i a fost
amestecata la fiecare 10 min.
- Dupa 30 min, 1 ml de ap a fost adugat n soluie.
- Apoi, tubul de test a fost centrifugat la 1500 rot/min timp de 10 min pentru a
separa soluia n polar i nonpolar straturi distincte. Supernatantul strat nonpolar conine
licopen i se transfer ntr-un tub curat. Acest solvent supernatant a fost evaporat folosind
un CentriVap sistem mobil la 60C. 1 ml de metanol a fost apoi adaugat la extracia
uscat. Soluia de extract a fost amestecat i transferat ntr-un flacon HPLC. 100
microlitri de soluie au fost injectai ntr-un sistem HPLC pentru

determinarea

concentraiei de licopen.
Tomate coapte
Pentru a elimina neconcordanele n coninutul de licopen dintre diverse utilizri de
tomate, roiile s-au omogenizat pentru a produce o suspensie de tomate. Suspensia a fost
separat n pri de aproximativ 120 ml pentru fiecare condiie de gtit.

- Pentru coacere, 12 probe (25 g fiecare) au fost cntrite n 8 cupe, ele au fost
introduse n cuptorul prenclzit.
- Probele au fost introduse n cuptor la 177C i 218C, pentru uscare.
-Patru probe au fost luate aleatoriu din cuptor la fiecare interval de timp (15, 30, 35
min).
- Dup ce probele au fost rcite, greutatea a fost msurat. Apoi, 250 mg de fiecare
prob, dupa ce au fost amestecate, au fost luate pentru determinarea coninutului de
licopen.
Tomate la microunde
- Pentru microunde, 20 de probe (25g fiecare) au fost cntrite i coapte individual
ntr-un cuptor cu microunde la o putere mare (aproximativ 1000 W).
- Patru probe au fost coapte i apoi scose la un interval de 5 minute cntaridu-se i
amestecandu-se bine.
- Apoi, 250 mg de fiecare prob a fost luat pentru determinarea de licopen.
Tomate prajite
Pentru prjire, fiecare prob (25 g) a fost prjit n tigaie individual cu 2 linguri (30
ml) ulei vegetal pur (ulei de soia) pentru fiecare prob.
1 Apoi, 250 mg de roii prjite amestecate i proba de ulei a fost folosit n procesul
de extracie licopen.
1 Trei probe au fost gtite la fiecare temperatur/combinaie de timp.
1 Pierderea de licopen a fost exprimat prin procentul de licopen reinut n
comparaie cu prima prob analizat la HPLC de licopen.

Capitolul 4. Cromatografia de lichide de nalt performan

(HPLC)
Cromatografia de lichide de nalt performan (engl. HPLC - High Performance
Liquid Chromatography) cunoscut n literatur i sub denumirea de cromatografie de
nalt presiune (High Pressure Liquid Chromatography) este metoda cromatografic cea
mai performant i este folosit n separarea i identificarea calitativ i cantitativ a
substanelor lichide. Separri i analize de substane imposible de realizat prin alte
metode pot fi realizate uor prin HPLC. Pe de alt parte la aceast tehnic pot fi fcute i
multe greeli. Acesta este motivul pentru care este nevoie de o experien practic bogat,
dar i de cunotine tiinifice fundamentale.
La cromatografia HPLC faza mobil purttoare denumit "Eluent" mpreun cu
substanele lichide de analizat este pompat cu ajutorul unei pompe printr-o coloan de
separare ce conine faza staionar. n mod obinuit naintea coloanei de separare propriu
zise se cupleaz o coloan premergtoare de separare pentru reinerea impuritilor,
coloan, care este mai ieftin dect coloana de baz.
O coloan de separare ntr-un cromatograf HPLC are lungimea cuprins ntre 5 i
30 cm. O substan din faza lichid mobil care interacioneaz puternic cu faza
staionar solid rmne un timp mai ndelungat n coloan, dect o substan care
interacioneaz mai slab cu faza staionar. Substanele din amestec prezint timpi de
retenie diferii i ajung pe rnd la captul coloanei de separare, locul unde se gsete
detectorul. n cadrul cromatografiei HPLC se folosesc dou metode de lucru:
a) Cu faz normal;
b) Cu faz invers.

1 Sistemul HPLC cu pompe, un injector 715, un detector diod foto array i cm 25

4.6 mm diametru 5 - m C18 coloana .
1 Faza mobil a fost metanol: aceton (90:10) i debitul a fost de 0,8 ml / min,
vrful licopenului a fost monitorizat la 470 nm.

1 Concentratia de licopen a fost calculata utilizand curba de calibrare preparata cu

licopen pur standard.

4.1. Sistem cromatografic HPLC

I. Sistemul HPLC este format din:

1. Cabinetul de solveni - faza mobil
- Stocarea fazei mobile
2. Degazor ( cu vaccum)
- Condiionarea fazei mobile ( extragerea gazelor dizolvate)
3. Pomp (izocratic, binar, cuaternar)
- Amestecarea i deplasarea fazei mobile
4. Autosampler (sistemul de injecie al probei lichide )
- Transferul probei de la operatorul sistemului ctre coloana cromatografic
5. Compartimentul coloanei
- Condiionarea coloanei la o anumit temperatur (termostat)
- Separarea propriu zis (coloana)
6. Detectorul (UV VIS) DAD
- Monitorizarea eluiei, recunoaterea analiilor separai pe coloan
7. Staia de prelucrare a datelor pe computer, program LC solution.
10

II. Parametrii sistemului cromatografic

1. Parametrii pompei
Debit (exemplu: 0,8-1,2ml/min) - se selecteaz de operator n funcie de metoda
de analiz;
Compoziia fazei mobile % pentru o pomp binar se selecteaz %B iar %A se
regleaz automat din 100% ( B solventul organic ACN, alcool metilic, n funcie de
metod).
Pmax < 200 bar (20MPa)
Pmin 2-3 bar (0,2-0,3 MPa)
2. Parametrii injectorului
Volumul de injecie l
Locul probei n autosempler
3. Parametrii coloanei
Se alege coloana n funcie de metoda de analiz
Temperatura termostatului coloanei este dat de metoda de analiz
4. Parametrii detectorului (UV-VIS) cel mai rspndit
Lungimea de und ( dat de metoda de analiz)
5. Timpul de analiz (min)
III. Instruciuni de pornire:
1. Se verific conectarea instrumentelor la sursa de curent electric
2. Se deschide valva de purjare (180) Fig. 1
3. Se deschid n urmtoarea ordine strict componentele sistemului apsnd
POWER:
- POMP (a)

11

- AUTOSAMPLER (b)
- CUPTOR (termostat pentru coloan) (c)
- DETECTOR (DAD) (d)
4. Se ateapt iniializarea (se verific s nu apar vreun mesaj de eroare pentru
niciun instrument)
5. Se acceseaz prin LC Solution (desktop) astfel:
- se conecteaz softul la instrument semnalat prin dou sunete ascuite emise de
ctre aparat;
- dublu click LC Solution Launcher;
- click pe Operation n stnga ecranului;
- click pe 1 (Analysis);
- introducei ID-ul Admin fr parol);
- click pe OK (va aprea fereastra LC Real Time Analysis);
6. Se introduce sorbul pompei:
TRASEUL A soluie tampon n funcie de metoda de analiz (TFA) tampon fosfat
pH=3,5
TRASEUL B solvent organic (ACN) acetonitrile;
7. click pe Download;
8. Click AutoPurge din bara de asisten. Se purjeaz sistemul;
9. se nchide valva de purjare.

12

Fig. Cromatograma: 1: astaxanthin; 2: phoenicoxanthin; 3: canthaxanthin;

4: hydroxy-keto--carotene; 5: keto--carotene;6: hydroxy-echinenone; 7: echinenone; 8:
lycopene; 9: neurosporene; 10: -carotene and 11: -carotene. In the upper right of the
chromatogram, colony phenotype is shown.

13

4.2. Stabilitatea standard de licopen pur n timpul nclzirii

1 Standardul de licopen pur a prezentat o stabilitate descresctoare, temperatura a
crescut de la 100 - 150oC, iar ca timp, a crescut de la 0 - 60 min. Dup 10 minute de
nclzire, licopenele pure au

fost degradate cu aproximativ 90%, 70% i 30% din

licopenul coninut original pur rmas la temperaturi de 100, 125 i 150C,

1 Procentul de licopen reinut a sczut la 53,5%, 20,9% i 5,3% la 100, 125,
respectiv 150C, dup 60 de minute de nclzire. Rezultatele indic faptul c licopenul
este stabil n timp lung si scade in raport cu cresterea temperaturii. Calea propus de
degradare a licopenului const din 2 etape:
- izomerizare
- auto-oxidare.
2 Degradarea de licopen a avut loc la o temperatur ct mai sczuta ( 25C ).

14

BIBLIOGRAFIE
1. Elena Oranescu- Aditivi alimentari. Necesitate si risc
2. C. Banu- Aditivi si ingrediente pentru industria alimentara
3.

www.sfatulmedicului.ro/.../licopen_6107

4.

www.taifasuri.ro/.../2064-licopenul-din-rosii-cel-mai-puternic-antioxidant. html

5.

www.suplimente.ro/.../licopen-10mg-60-softgels.html

15