Universitatea de Stiine Agricole i Medicin

Veterinar Cluj-Napoca
Facultatea de tiina si Tehnologia Alimentelor

DETERMINAREA VITAMINEI C
DIN SUCURILE DE FRUCTE

Kovacs Maria-Gabriela
Ignat Ancua-Gabriela
IPA. Grupa 5

Cuprins
I. Introducere
II. Structura chimic
III.Propieti fizice
IV.Determinarea vitaminei C din sucurile de fructe prin
cromatografia lichid de nalt performan ( HPLC )
V. Determinarea vitaminei C prin metoda spectrofotometric
UV
VI.Bibliografie

I.Introduce
Vitamina C se gsete n stare natural n toate plantele i
re
animalele, preponderent n fructele proaspete (n special
citrice) i n multe legume.
Acidul ascorbic reprezint un antioxidant de excepie ce
contribuie activ la frnarea proceselor degenerative din
organism. Fcnd parte din grupa vitaminelor hidrosolubile
(solubile in ap), acidul ascorbic se elimin n cantiti mari
din organism.

II.Structura chimic

III.Proprieti fizice
Vitamina C este o pulbere
alb,cristalin,fr miros, este uor solubil n
ap, solubil n alcool i metanol, practic
insolubil n benzen, cloroform, eter, eter de
petrol i uleiuri grase. Stabil n aer, n stare
uscat. n preparatele impure i n multi produi
naturali, vitamina se oxideaza cnd este expusa
la aer i lumin.
Punctul de topire: 188-192C.

IV.Determinarea vitaminei C din

sucurile de fructe prin
cromatografia lichid de nalt
performana (HPLC)

Metodele cromatografice sunt foarte eficiente n determinarea

acidului ascorbic prin analiza cantitativ a materialelor complexe cum
ar fi sucurile de fructe, legume i buturile.
Prin aceast metod se pot separa,
identifica i cuantifica majoritatea acizilor
organici din sucurile naturale de fructe
folosind HPLC ,care va identifica compuii,
nu doar cu timpii lor de retenie, ci i cu
spectrele lor individuale.

Materiale i metode
Sucul de citrice se centrifugheaz la 3000 de rotaii timp de 10
minute.
Supernantantul se dilueaz n raport 1:50 pentru determinarea
acidului citric i n raport 1:5 pentru ali acizi.
Diluiile sunt filtrate printr-o membran nainte de injectare.
Se analizeaz 2 eantioane n duplicat.
Se prepar o soluie standard mixt ce conine 1000mg/l acid
citric, 2000mg/l acid malic, 300mg/l acid oxalic si acid ascorbic,
700mg/l acid tartric i 400mg/l acid lactic.
Soluia standard si diluiile corespunzatoare sunt preparate cu
ap distilat i sunt pstrate n locuri ntunecoase , la temperatur
joas (+40 C).

Analiza HPLC
Acizii organici din probe sunt separai prin cromatografie cu
faz invers ,i determinai cu ajutorul absorbanei,apoi cuantifica i
cu graficele de calibrare externe.
Pentru detectarea simultan a 6 probe,detectorul este setat la
lungimea de und =254
Timpii de retenie, gradul de concentraie si limita de detec ie
pentru acizi organici standard:

- Determinrile se fac la 10C folosind o faz mobil format din

soluie de fosfat (se dizolv 6,8g dihidrogenofosfat de potasiu n 900ml
ap;
- pH-ul se ajusteaz cu acid fosforic pn la pH=2,8 apoi se
completeaz cu ap pn la 1000 ml) , ce se filtreaz printr-o
membran de poliamid i este introdus la vid.
- Rata de curgere a fazei mobile este de 0,7ml/min pentru toate
separrile cromatografice.
- Coloana de separare este echilibrat cu faza mobil nainte ca linia
de baz s se stabilizeze.
- La acest nivel se fac pipetri cu volume de 5 l pentru fiecare prob
preparat sau soluie standard.
- Valorile abaterilor standard relative variaz de la 0,154 la 3,18%
indicnd c aceast metod este precis ,cu un grad mare de
repetabilitate ,n special pentru acidul citric, ascorbic, lactic i
oxalic Recuperarea acizilor organici din sucurile de citrice variaz
ntre 95,8 si 102,1% confirmnd precizia de separare si condiiile de
analiz.

V.Determinarea vitaminei C prin

metoda spectrofotometric UV
Acidul ascorbic mai poate fi analizat prin metoda
spectrofotometric UV.
Spre deosebire de metoda HPCL (care are avantajul unei
specificiti avansate, dar implic operaii relativ laborioase),
spectrofotometria UV, prezint avantajul unei execuii simple,directe
i extrem de sensibile.

Reactivi:
-acid acetic 5%
-metafosforic 10%
-soluie de tiouree 10%
-soluie2,4-dinitrohidrazin
-acid sulfuric 85%
-soluie standard vitamina C (acid ascorbic)

Pregtirea probei:
-10g prob este omogenizat cu aproximativ 50ml de solutie de acid
metafosforic 5% i acid acetic 10%, apoi este transferat ntr-un balon
de sticl de 100 ml, se agit uor pn la omogenizare.
-se dilueaz pn la semn cu soluie de acid acetic 10% si acid
metafosforic 5%
-soluia se filtreaz i filtratul obinut se colecteaz pentru determinarea
vitaminei C din aceast prob.

Estimarea vitaminei C- procedur:

-Peste filtratul cu proba se adaug ap de brom pentru
a oxida acidul ascorbic in acid dehidroascorbic
-Se adaug cateva picturi de tiouree pentru a elimina
excesul de brom, obinndu-se astfel o soluie limpede.
-Se introduce soluia standard de acid ascrbic i apoi 1
ml de 2,4- DNPH
-Amestecul obinut este meninut timp de 3 ore la o
temperatur de 37 C ntr-o baie de ap.
-Dup incubare ,amestecul este rcit ntr-o baie de
ghea i este tratat cu 5 ml H2SO4 85 % i se agit
constant.
-Se obine o soluie colorat.

Curba de calibrare
-este construit prin reprezentarea grafic a
concentraiei fa de absorbia corespunztoare

BIBLIOGRAFIE:

-WWW.Wikipedia.ro
-https://ro.scribd.com/doc/226122882/
Acidul-ascorbic
-https://www.google.ro/

V mulumim!