Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Introducere
3. Metode de extractie
Acidul ascorbic se obţine prin extracţie din diferite materii prime vegetale, prin sinteză
chimică, prin biosinteză sau prin procedee combinate de sinteză chimică şi biosinteză. Indiferent
de metoda de obţinere, separarea şi purificarea necesită numeroase etape, care implică consumuri
ridicate de materiale şi energie. Soluţia finală din care trebuie extras acidul ascorbic conţine
numeroase produse secundare, cel mai important dintre acestea fiind acidul 2-cetogluconic. În
ciuda faptului că fiecare etapă a procesului decurge cu randamente de 90%, conversia globală a
glucozei în acid ascorbic nu depăşeşte 60% [8].
Datorită caracterului labil al acidului ascorbic, procedurile de extracţie sunt proiectate
pentru a o stabiliza. Cooke şi Moxon [11] a revizuit literatura de specialitate până la 1981 şi a
constatat că 20 sau mai mult soluţiile de extract au fost folosite de către cercetători cu un număr
mare de matrici biologice. Soluţiile de extract ar trebui să menţină un mediu acid, să inactiveze
oxidază acidului ascorbic, să limiteaze oxigenul şi să precipite amidonul şi
proteinele. Alegerea depinde de soluţia de extract si de probă matrice determinand
procedur.
Acidul metafosforic inhibă oxidaza acidului L-ascorbic, inhibă cataliza din metal, şi precipita
protein. Amidonul este problematic în sensul ca interferează cu titrarea colorimetrica şi
teste fluorometrice. Adaosul de etanol sau acetonă pentru a extrage precipitate metafosforic
solubilizeaza amidonul. Acest pas este necesar pentru a analiza prin metode spectroscopice multe
legume, inclusiv cartofi, legume, porumb. Acetonă este de asemenea util pentru a elimina
metabisulfit şi dioxid de sulf din fructele deshidratate si din sucuri de fructe. Aceşti agenţi de
reducere interfereaza cu 2,6-dichloroindophenol (DCIP) in titrare. EDTA este ca un chelator
activ în extractia acidului ascorbic. [11]
Toate procedurile de extracţie trebuie să fie completat de lipsa lumini pentu a limita
reactile oxidative. Metodelor de reducere a dimensiunii particulelor ar trebui să evite acumularea
căldurii. Ori de câte ori este posibil, eşantionul trebuie adugat azot peste eşantionul iniţial.
Liofilizare nu este recomandata pentru concentraţia probei sau conservarea, deoarece stabilitatea
vitaminei C scade în umiditate matricei poroase.
Stabilitatea acidului ascorbic total (acid L-ascorbic + acid L-dehidroascorbic) în ser poate
1.Titrarea cu 2,6-Dichloroindophenol
Titrare cu DCIP a fost introdusa de Tillmans în 1930[14]. DCIP este redus de acid L-ascorbic la
o soluţie incoloră de la culoarea albastră. Acid L-ascorbic este oxidat la dehidroascorbic
acid şi colorant în exces roz rămâne în soluţie de acid, formând final vizuală a titrării.
Absorbanţa la 518 nm, pot fi utilizate alternativ, la determinarea vizuală punctul final.
Există o serie de deficienţe importante cu acesta metoda. Cel mai important, este de titrare acid
dehidroascorbic nu va fi măsurată cu excepţia cazului în care este redus la acid ascorbic. Titrarea
nu va face diferenţa între acid L-ascorbic şi isoascorbic acid. Metoda nu poate fi folosit pentru
analiza de vitamina C. DCIP titrare poate fi folosit pentru sucuri proaspete si multivitamine
care nu conţin cantităţi excesive de cupru sau iron. Extracte foarte colorate din fructe şi legume
pot masca schimbarea culoari la titrare lui.
Reducerea DCIP nu se limitează la acid L-ascorbic, precum şi orice substanţă prezentă
reducerea în eşantion poate reduce colorantul. Astfel de interferenţe pot duce la măsurători în
mod eronat de mare, în cazul în care nu sunt recunoscute. Substanţe care pot interfera includ ioni
de cupu, de fier, şi ioni de staniu, sulfite, tiosulfat, taninuri, betanin, cisteina, glutation..
Metoda include următoarele etape:
1. Extracţia: acid L-ascorbic este extras din materiale uscate cu metafosforicacid care conţin acid
acetic glacial. Soluţia este stabilizată timp de 7 până la 10 zile in frigider. Extractul, este utilizat
pentru a dilua sucuri sau alte probe de lichid. Pentru analiza, extractantul este pregătit prin
înlocuirea apei în extractant cu 0,3 N H2SO4. După filtrare sau centrifugare, reziduurilor ar fi
extras cel puţin o dată suplimentare prin amestecul în extractant. Extracţie corespunzătoare,
inclusiv protecţia de lumina, viteza, duce la recuperări mai mare de 95%, cu formarea minim de
acid dehidroascorbic.
2. Titrarea: extractele limpezite se titrează cu vopsea standard pregătit de către dizolvarea
50 mg DCIP Na sare (Eastman Kodak Nr 3463) în 50 ml de apă care conţin 42 mg de
NaHCO3, cu diluare la 200 ml cu apă. Soluţia colorant este filtrat şi stocate la frigider într-un
recipient din sticlă de chihlimbar. Concentraţia DCIP este exprimată în mg echivalent acid L-
ascorbic pe 1.0 ml soluţie colorantă. Factorul de echivalenţă este determinat prin adăugarea a 2
ml de acid L-ascorbic standard (1,0 mg mL-1) la 5 ml de extractant, rapid şi titrare cu o soluţie
de vopsea la o culoare roz persistă timp de 5 s.
Acest lucru ar trebui necesita aproximativ 15 ml de soluţie DCIP. Un martor determinarea
este condus prin titrarea 7 ml de apă de extracţie care conţine egală cu media
volumul de vopsea necesare pentru a se titrează standard de acid ascorbic. Blanks trebuie să se
apropie 0,1 ml soluţie DCIP, care prevede un control imediat asupra reactiv
de calitate
2. Metoda cu 2,6-diclorofenol-indofenol
Studiile efectuate arată că în acetat de butil separarea decurge prin intermediul unei
reacţii interfaciale de ordinul I între acid şi extractant: Procesul este controlat de concentraţia
extractantului în faza organică şi de valoarea pH-ului fazei apoase. Un grad de extracţie de 90%
se obţine la o concentraţie iniţială a extractantului de 160 g/L şi un pH = 1 în faza apoasă iniţială.
Gradul de extracţie poate fi îmbunătăţit cu 6 – 23% prin adăugarea unui modificator de fază (2-
octanol), care măreşte polaritatea solventului. Modelarea matematică a procesului de extracţie
arată că eficienţa extracţiei este influenţată în proporţie de 91,1% de către concentraţia iniţială a
extractantului în faza organică şi de către pH-ul fazei apoase (fig 4), ceilalţi factori (intensitatea
amestecării, temperatura, raportul volumic al fazelor etc.) influenţând procesul într-o mai mică
măsură [3].
Bibliografie
[1] http://ro.wikipedia.org/wiki/Acid_ascorbic
[2] Izumi, K. 1992. Reaction of nitrite with ascorbic acid or ascorbic acid-2-derivatives. J. Food.
Sci.57:1066.
[3] Constantin Banu- Manualul inginerului din industra alimentara. Ed. Tehnica Bucuresti 1998
[4] Gaby S.K , Singh V.N., 1991 - "Vitamin C," – Vitamin Intake and Health: A Scientific
Review, S.K. Gaby, A. Bendich, V. Singh and L. Machlin (eds.) Marcel Dekker, N.Y. p. 103-
1043
[5] Schectman G., Byrd J.C., Hoffmann R., 1991 - Ascorbic Acid Requirements for Smokers:
Analysis of a Population Survey, American Journal of Clinical Nutrition, 53:1; 1466- 70
[6] Valnet J., 2002 – Phytotherapy – Treatment by plants. Gramond, Bucharest
[7] Kronhausen E., Kronhausen P., Demopoulos M.D., 1989 - Formula for Life, William
Morrow and Co., New York, p. 95
[8] Gavrila Lucian., Curs tehnici de separare şi concentrate ȋn biotehnologi.
[9] Carol Reiss. Measuring the Amount of Ascorbic Acidin Cabbage
[10] Ball, G. F. M., Chemical and biological nature of the water-soluble vitamins, In Water
Soluble Vitamin Assays in Human Nutrition, Chapman and Hall, New York, 1994, chap. 2.
[11] Cooke, J. R. and Moxon, R. E. D., The detection and measurement of vitamin C, In Vitamin
C, Counsell, J. N. and Horning, D. H., eds., Applied Science Publishers, London, 1985, p. 303.
[12] Margolis, S. A., Paule, R. C., and Ziegler, R. G., Ascorbic and dehydroascorbic acids
measured in plasma preserved with dithiothreitol or metaphosphoric acid, Clin. Chem., 36, 1750,
1990.
[13] Rizzolo, A., Brambilla, A., Valsecchi, S., and Eccher-Zerbini, P., Evaluation of sampling
andextraction procedures for the analysis of ascorbic acid from pear fruit tissue, Food Chem., 77,
257,2002.
[14] Tillmans, J., The antiscorbutic vitamin, Z. Lebensm. Unters.-Forsch, 60, 34, 1930.