Tema 6: BIOTEHNOLOGIA OBINERII ACIDULUI CITRIC

Elaborat de:

dr., asist. univ.

Sorina URSU

CUPRINS

1.

Domeniile de utilizare i proprietile produsului............................................................................ 3

1.1.

Domenii de utilizare .................................................................................................................... 3

1.2.

Materii prime, intermediare i auxiliare ................................................................................... 6

1.3.

Variante tehnologice de obinere a acidului citric ..................................................................10

1.3.1.

Obinerea acidului citric prin sintez ................................................................................10

1.3.2.

Obinerea acidului citric prin biosintez ...........................................................................10

1.4.

Alegerea variantei optime .........................................................................................................11

1.5.

Descrierea procesului tehnologic adoptat ...............................................................................12

1.5.1.

Elaborarea schemei tehnologice cu descrierea detaliat a procesului tehnologic .......12

Bibliografie.................................................................................................................................................20

1. Domeniile de utilizare i proprietile produsului

1.1.

Domenii de utilizare

Acidul citric este un acid monohidroxi-tricarboxilic ce se prezint ca substan anhidr cu

masa molecular 192,12 sau ca monohidrat cu masa molecular 210,14. Se gsete foarte mult
rspndit n natur n esuturile i sucurile vegetale i n specialn citrice fiind solubil n ap i
solveni organici. Formula de structur (fig. 1):

Fig.1. Structura acidului citric

Pentru acid citric, se mai ntlnesc denumirile tehnice i comerciale: acid 2 hidroxi-1,2,3propan tricarboxilic; sare de lmie, E330.
Acidul citric are multiple ntrebuinri n industria alimentar:
1. Ca adaos n sucurile de fructe ca atare sau diluate, precum i n racoritoare carbonatate, n
care acioneaz ca agent de conservare i ca agent de protejare a culorii i aromei, avnd n
aceli timp i capacitatea de a chela metalele care pot provoca modificri deculoare i arom.
Se consider c stabilitatea culorii se realizeaz datorit inhibrii atacului oxidativ asupra
culorii existente, inhibrii dezvoltrii oxidrii culorii, prevenirii formrii de complexe
metalice colorate. Capacitatea de a forma chelai a acidului citric i a citrailor sedatoreaz
existenei gruprii hidroxil i a gruprilor carboxilice.
2. n scopul stabilizrii aromei produselor prin inhibarea atacului oxidativ a supra
componentelor de arom i n acelai timp, prin inhibarea formrii produselor cu miros
neplcut. n cazul adaosului la vinuri, acidul citric contribuie la ajustarea (corectarea)
aciditii, previne formarea de precipitate i casarea feric datorit faptului c se
complexeaz fierul subform de acid ferocitric solubil, form sub care particip la formarea
casei. Acidul citric poatefi atacat de bacteriile lactice din vin, cu formare de acid lactic i
acetic, n cazul n care vinul nu este protejat biologic. Se recomand ca acidul citric s se
adauge n faza final a acondiionrii vinului. Doza de acid citric autorizat este de 50 g/hL,
n special pentru vinurile puin predispuse casrii care au 10 - 15mg fier/L i care, gustativ,
suport acidifierea. Tratamentul cu acid citric, n funcie de coninutul de fier, tanin, pH,
potenial redox, poate suplini n multe cazuri trata mentul cu ferocianur de potasiu, care
este mai scump i mai dificil;
3

3. La conservarea fructelor prin congelare, caz n care, acidul citric, prin chelareametalelor,
face ca acidul ascorbic natural din fructe i legume s nu fie distrus. Fructele i legumele
depielate se trateaz, de aemenea, cu soluie de acid citric pentru prevenireambrunrii
enzimatice;
4. Ca sinergetic alturi de antioxidanii BHA, BHT, galatul de propil, pentru mpiedicarea
rncezirii grsimilor i uleiurilor. Se consider c efectul sinergetic se datoreazrestului
citrat i nu acidului ca atare, ceea ce nseamn c se poate folosi ca sinergetic i citratul de
sodiu, acolo unde nu se cer condiii de acidulare. Pentru grsimi i uleiuri este recomandat
monostearil citratul care are o solubilitate mare n grsimi;
5. Ca un component al srurilor de topire, n cazul brnzeturilor topite. Se utilizeazmpreun
cu fosfaii,efectul de emulsionare fiind ns realizat de tartrai. Lactaii au ns efect invers,
coagulnd proteinele din brnz;
6. La tratarea molutelor supuse refrigerrii si congelrii. La aceste produse se formeazo
culoare albastr, datorit complexului cupru tiol. Concomitent se formeaz i
mirosuristrine. Prin tratarea molutelor cu soluie de acid citric, defectele meniona te nu
mai apar, datorit faptului c acidul citric complexeaz cuprul;
7. Pentru mpiedicarea zaharisirii mierii de albine, n clarificarea enzimatic a sucurilor, ca
agent de stabilizare pentru condimente, boia de ardei n sinteza grsimilor rearanjate neces
are obinerii de shortening uri n dressingurile pentru salate;
8. Ca un component al srurilor efervescente mpreun cu bicarbonatul de sodiu (acestea, la
adaos de ap degaj dioxid de carbon);
9. La obinerea de ape minerale artificiale.
Acidul citric mai este folosit i n producerea medicamentelor i n biotehnologie precumi la
sapunuri i detergenti, datorit proprietii de a combina metalele n apa dur.
Are i alte utilizri cum ar fi: Circa 6 % acid citric va ndeprta pete de ap dur de pe sticl fr
frecri, ca ingredient n ngheat sau folosit cu bicarbonat de sodiu, ajut la indigestie. Mai poate
fi utilizat in fotografie, la developarea filmului. Datorit faptului c, acidul citric poate fi folosit la
prepararea unui explozibil sensibil la ocuri, cumprarea acidului citric in cantiti mari duce la
suspectarea de activitate terorist.
Proprieti fizice:
Acidul citric se prezint sub form de cristale incolore, translucide, inodore, cu gust plcutuor
acid; poate cristaliza din soluii apoase la rece ca monohidrat sub form de cristale rombice, cu
masa molecular 210,14.
Acidul citric monohidrat este stabil la aer cu umiditate normal, dar pierde uor apa
decristalizare n atmosfer uscat sau n vid; prin nclzire lent, pierde apa de cristalizare la 704

75 C i se topete complet n intervalul 135-152 C; la nclzire rapid, pierde apa la 100 C i se

topete la 153C.
Densitatea acidului monohidrat este 1,542, iar a acidului anhidru 1,665. Acidul citric este uor
solubil n ap, parial solubil n alcooli alifatici inferiori i greu solubil n eter etilic. Acidul anhidru
este insolubil n cloroform, tetracorur de carbon, benzen, toluen, sulfur de carbon. Este un acid
organic destul de tare: Ka1=8,210-4, Ka2=1,7710-5 i Ka3=3,910-6 la 18C.
Presiune de vapori la 20C : >0.1hPa;pH-ul sol 50g/l n ap la 20 C: 1,8;
Temperatura de autoaprindere: 345 C.
Acidul citric este stabil n condiii normale de depozitare i manipulare, se descompune sub
aciunea acidului sulfuric cu formare de acid formic si bioxid de carbon. Prin nclzire cusulfur
de carbon se formeaz un compus biciclic-tiofen.
Proprieti chimice:
Dup cum s-a mai spus acidul citric este un acid tricarboxilic. Sarea lui de calciu este mai greu
solubil n ap la cald dect la rece: ea se precipit la fierberea soluiei i seredizolv la rcire. Prin
nclzirea acidului citric la 175C se produce nti eliminarea unei molecule de api se formeaz
acidul aconitic. Aceast reacie a servit i la stabilirea structurii, cci acidul aconitic, tricarboxilic
nesaturat se transform prin hidrogenare cu amalgam de sodiu, n acidultricarbalilic.
Prin distilarea uscat a acidului citric se formeaz anhidrida acidului itaconic i a acidului
citraconic.
Cu acidul sulfuric concentrat, acidul citric d o reacie caracteristic a -hidroxi-acizilor, anume
elimin acid formic i trece n acidul aceton-dicarboxilic, un acid -cetonicdicarboxilic, usor de
obtinut pe aceast cale. Un tratament mai energic duce la aceton.
Prin nclzirea acidului citric cu pentasulfur de fosfor se formeaz tiofen:

Efectul chelatizant al acidului citric explic relaia sinergic cu antioxidanii princomplexarea

prooxidanilor:

Proprieti biologice
Acidul citric face parte dintr-o serie de compui implicai n oxidarea fizic a lipidelor,
proteinelor i carbohidrailor n CO2 i H2O. Aceast serie de reacii este legat de aproapetoate
reaciile metabolice i asigur din energia derivat din alimente n organismele evoluate.
Proprieti farmacologice
Acidul citric se foloseste n industria farmaceutic datorit efectului su anticoagulant. Asigur
rapida dizolvare a ingredientelor active. Are proprietatea de a regla pH-ul, este folosit deasemenea
ca i efervescent n comprimate n combinaie cu bicarbonai.

Tabelul 1. Indicii fizico-chimici ai acidului citric comercial

Nr. ord.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.

Indicii fizico-chimici
Compoziie, (%)
Ap, (%)
Reziduuri, (%)
Oxalai/acid oxalic, (%)
Sulfai, (%)
Arseniu, (ppm)
Metale grele, (ppm)
Plumb, (ppm)
Tridodecylamine, (ppm)

Valoarea
99,5 100,5
Max. 0,5
Max. 0,05
Max. 0,036
Max. 0,015
Max. 1,0
Max. 5,0
Max. 0,5
Max. 0,1

1.2. Materii prime, intermediare i auxiliare

Microorganismul productor
Mucegaiurile fac parte din Phyllum Mycophyta sau Fungi i reprezint, mpreun cu levurile
un grup de organisme incluznd aproximativ 200.000 de specii. Sunt organisme filamentoase
saprofite (care cresc pe substane intrate n putrefacie i nu produc boli) sau parazite (produc
diferite boli). Ei se reproduc pe cale asexuat (fr participarea unor gameide sexe diferite) sau
sexuat (cu participarea unor gamei de sexe diferite).
Sunt organisme cu o mare capacitate de adaptare la condiiile variate, nefavorabile alemediului
n care i desfoar activitatea. Mucegaiurile cresc n condiii extreme de aciditate, presiune
osmotic, uscciune, etc. Au structura celular de tip eucariot.

Fig. 2. Reprezentarea schematic a structurii interne la mucegaiuri

Structura intern
Dei este tipic eucariotelor exist totui i unele deosebiri de la o form la alta demucegai.
Deosebirile ce pot apare se refer la prezena sau absena septului sau peretelui hifal.
n general n structura unei hife se pot distinge urmtoarele formaiuni structurale tipice celor
mai multe eucariote: peretele celular (hifal) , membran plasmatic, citoplasm iconstituenii
citoplasmici i nucleu.
Peretele hifal
Hifa este delimitat la exterior de un perete rigid n structura cruia intr chitin, celuloz,
polizaharide i unii acizi grai. Peretele hifal acoper membrana plasmatic i tot el este celcare
particip la formarea septului hifal.
Membrana plasmatic are o structur tristratificat i se presupune c ar avea rol important n
formarea aparatului Golgi. Are totodat importante roluri n transportul unor substane dinmediu
n celul i din celul n mediu.
Citoplasma se prezint sub forma unei mase fin granulate n care sunt suspendatevacuolele,
picturi de grsimi, numeroase granule de incluziuni i particule. n citoplasm segsesc de
asemenea, reticulul endoplasmatic rugos bine dezvoltat, aparatul Golgi,mitocondrii, ribozomi
7

liberi sau fixai de reticulul endoplasmatic i lizozomi, formaiunistructurale cu rol n liza unor
substane.
Fiziologie i metabolism
Mucegaiurile au o nutriie de tip heterotrof adic necesit pentru cretere i dezvoltaremedii
bogate n substane organice.
Sursa de carbon poate fi glucoz sau oricare alt substan glucidic, alcooli i aciziorganici.
Ca surs de azot fungii pot utiliza compui organici de natur proteic, iar unelespecii pot utiliza
srurile de amoniu i nitriii.
Fungii cresc bine n atmosfer umed, iar pH-ul lor optim este 5-6. Sunt microorganismecu
capacitate biosintetic mare, putnd sintetiza pe ci metabolice diferite polizaharide.Lipide, acizi
organici, pigmeni, substane antibiotice sau alte substane biologice active.
Temperatura optim de cretere este de 22-32 C, ns ei pot crete i la temperaturi de 5-10
C, dar i la temperaturi de 35-40 C. Aproape toi fungii de interes industrial sunt
aerobi,necesitnd o concentraie ridicat de oxigen.
Muli dintre fungii de interes industrial, necesit pentru creterea i dezvoltarea lor bioelemente
cum ar fi: Fe, K, Cu, Mn, Co, Mo, etc. Unele specii necesit factori de creterefr de care
procesele metabolice nu pot avea loc n condiii optime.
Prin activitile lor metabolice i posibilitile de a transforma cu uurin o gam mare
desubstane, mucegaiurile au devenit unii dintre factorii biologici cei mai utilizai n
industriaalimentar, fiind factorii principali n obinerea unor brnzeturi, producerea unor
antibiotice,dar i n obinerea acidului citric.
Melasa
Melasa, principalul subprodus de la fabricarea zahrului din trestie i sfecl de zahr, reprezint
siropul din care nu se mai poate separa zaharoza folosind tehnologia clasic de cristalizare i
centrifugare.
Ea conine cantitatea total de nezahr, care nu a fost reinut n cristalele de zahr i are o
puritate scazut
.Caracteristici fizice:
Aspect : lichid vscos de culoare brun-negru;
Gust : caracteristic;
Densitate: variaz n funcie de coninutul n substan uscat, fiind de 1390 kg/m3, la77
% s.u. i de 1420 kg/m3, la 84% s.u.;
Vscozitate: cuprins ntre 13Cp si 19 Cp;
Caldur specific: 0,5 kcal/kgK.
8

Tabelul 2. Compoziia chimic a melasei din sfecl i trestie de zahr (dup Reiff, 1962)
Compusul
Ap, %
Substan uscat, %
Zahr total, %
Zahr invertit, %
Rafinoz, %
Azot total, %
Substane minerale, %
pH

Proveniena melasei
Sfecl de zahr
Trestie de zahr
20-25
15-20
75-80
80-85
44-52
50-55
0,1-0,5
20-23
0,6-1,8
1,2-2,4
0,3-0,6
7,6-12,3
10-12
6,0-8,6
<7

n compoziia melasei intr 4455 % zaharoz, 1525 % ap, iar restul este reprezentat de
substane organice i minerale.

Extract de porumb
Este un subprodus de la fabricarea amidonului din porumb, obinut n cursul nmuierii
preliminarea boabelor. Acest extract, ca i extractul de cartofi d un mediu de cultur bogat
nutritiv, mult utilizat n industria de biosinteza.
Caracteristici fizice:
Aspect : lichid cremos de culoare galben nchis;
Substanta uscata : minim 50 %;
pH = 3.5-4;
continutul in acid lactic : minim 20 g la 100 g substan uscat;
zahar total maxim 2.5 %.
Tabelul 3. Compoziia chimic a melasei din sfecl i trestie de zahr (dup Reiff, 1962)
Constituienti g/100g extractde porumb
Substan uscat
Cenu
N total
Zahar total (exprimat caglucoza)
Acid lactic
Aciditate ( ml. sol NaOH 0,1N /100 gextract de porumb )
Fe
P
Ca
Zn
K
SO2
Sedimente solide
9

Coninut, %
46-49,6
8,04-10,43
3,33-3,67
4,00-4,70
0,74-4,39
11,6-19,3
0,009-0,02
1,5-1,9
0,02-0,07
0,05-0,012
2,0-2,5
0,02
38,4-52,9

1.3.

Variante tehnologice de obinere a acidului citric

1.3.1. Obinerea acidului citric prin sintez

Una din sintezele acidului citric const n transformarea dicloracetonei simetrice, cu acid
cianhidric, n cianhidrina respectiv, saponificarea acesteia n hidroxiacidul halogenat i
condensarea celui din urm cu cianur de potasiu:
O alt sintez pornete de la esterul metilic al acidului aceton-dicarboxilic(R=CH3).
Acidul citric formeaz cristale mari, transparente, uor solubile n ap avnd o moleculde ap
de cristalizare (p.t.100 C). Prin nclzire la 80 C pierde apa de cristalizare i are nstare anhidr,
p.t.153 C.
1.3.2. Obinerea acidului citric prin biosintez
Au fost cercetate tehnologiile de obinere a acidului citric prin biosintez pe culturi de
Aspergillus niger, Aspergillus clavatus, Aspergillus ventii, Penicillium citrinum, dar aplicaiile
industriale au gsit numai tehnologiile ce folosesc culturi de Aspergillus niger, iar dintre mediile
de cultur studiate, cel mai eficient s a dovedit a fi mediul de cultur pe baz de melas.
Din punct de vedere tehnologic, procesul de fermentaie a acidului citric cu Asp. niger poate fi
realizat n suprafa sau n profunzime.
n primul sistem fermentaia dureaz 10 - 11zile iar n al doilea dureaz 6-7 zile.
Fermentaia n suprafaa
n acest procedeu, melasa este trimis n reactor, unde la 40 C se trateaz cu ferocianur de
potasiu, dup care se sterilizeaz prin nclzire la 120 C timp de 30 min, se rcete la 45 C i se
adaug fosfatul de potasiu, sulfatul de zinc, sulfatul de magneziu, sub form de soluii sterile.
Mediul de cultur, astfel preparat se trimite n camera de fermentaie steril, construit sub form
de usctor dulap n care se monteaz, pe rafturi, tvi cu nlimea de 20 cm, n care se introduce
lichid de cultur pe o adncime de 10-15cm. Camera de fermentaie se sterilizeaz cu aer, iar dup
introducerea lichidului se ventileaz cu are steril timp de 30 min, iar la sfarsitul perioadei de
ventilaie se face nsmnarea prin curentul de aer.
Dup nsmnare se oprete pentru o ora ventilaia, timp necesar sedimentrii inoculului, iar
apoi se reia pentru toat durata fermentaiei. La terminarea fermentaiei biomasa se filtreaz, iar
soluia se supune prelucrrii pentru separarea acidului citric cristalin. Acest tip de fermentaie este
folosit ns la scara redus n industrie.
Avantajele folosirii acestuia sunt:

efort minim n operaii,

consumuri energetice minime i construcie simpl ainstalaiei.

10

Principalul dezavantaj este ins productivitatea mic la care se adaug dificultatea pstrrii
condiiilor aseptice, cele mai frecvente contaminri fiind date n principal de speciile Penicillium,
Aspergillus i bacterii lactice.
Fermentaia n profunzime
Se realizeaz n fermentatoare cilindrice, verticale echipate cu agitator, serpentin, barbotor de
aer i dispozitive de reglare.
Inocularea i conducerea procesului de fermentaie se face ca i la alte procese de biosintez, iar
durata procesului este de 6-7 zile la pH de 3-4,5 i un debit de aer de 1L aer pentru 1 L mediu i
minut.
Dup terminarea fazei de fermentaie i filtrarea miceliului, soluia apoas se supune prelucrrii
pentru separarea acidului citric cristalin.
n procesul de obinere a acidului citric, ca i n cel de obinere a acidului itaconic i gluconic,
rezult soluii apoase i miceliu.
Soluiile apose pot fi utilizate pot fi utilizate camedii de cultur pentru biostimulatori, iar
miceliul uscat poate fi utilizat ca adaos la hrana psrilor, avnd un efect stimulator n procesul de
cretere. Se estimeaz ca aproape 80 % din producia mondial de acid citric se obine folosind
fermentaia n profunzime.
Acest tip de fermentaie necesit instalaii mai sofisticate i un control riguros. Pe de o alt parte
prezinta i avantaje cum ar fi productivitatea mare costuri deinvestitie reduse i randamente
ridicate, riscuri de contaminare mici.
1.4.

Alegerea variantei optime

n vederea obinerii acidului citric, se alege procedeul discontinuu de fermentaie n profunzime

folosind microorganismul Aspergillus niger deoarece mai mult de 90 % din acidul citric produs la
nivel mondial este obinut prin fermentaie, ofer urmtoarele avantaje:

operaiile sunt simple i stabile, instalaia este n general mai putin complicat i arenevoie
de un sistem de control mai puin sofisticat, ndemnarea tehnic cerut nu este att de nalt;

consumul de energie este mic, iar cderile frecvente de curent nu afecteaz n mod
criticfuncionarea instalaiei.

Procedeul culturii n profunzime const n cultivarea microorganismelor n fermentatoare de

otel, n care mediul este supus unei aeraii i agitri continue.n aceste condiii, procedeulculturii
n profunzime ofer o serie de avantaje, fa de cultura n suprafaa, printre care: costuri investiii
reduse, flexibilitate ridicat, conversia substratului ridicat, pericol deinfectare al culturii redus,
volum bioreactor relativ mare, se obtin culturi omogene,randamente ridicate, puritatea produsului,
ca i activitatea biologic ridicate.
11

1.5.

Descrierea procesului tehnologic adoptat

1.5.1.

Elaborarea schemei tehnologice cu descrierea detaliat a procesului tehnologic

Aspergillus niger

Pregtirea
mediului de
cultur

Aer nesteril

Sterilizarea
mediului de
cultur

Sterilizarea aerului

Fermentaie

Filtrare

Biomas

CaCl2
Precipitare
Ca(OH)2, 20 %
Neutralizare

Filtrare
H2SO4
Acidulare
Crbune
Decolorare i
filtrare

Demineralizare

Cristalizare

Filtrare

Uscare

Fig. 2. Schema tehnologic de obinere a acidului citric

12

Tehnologia de obinere a acidului citric cuprinde urmtoarele faze:

pregtirea mediului de cultur;

fermentaia;

filtrarea soluiilor native;

separarea i purificarea.

Pregtirea mediului de cultur

n tehnologia obinerii acidului citric, o importan foarte mare o are procesul de pregtirea
melasei pentru fermentaia citric.
n general, melasele rezultate din industria zahruluiconin o cantitate mare de fier, care inhib
att creterea masei celulare, ct i obinerea acidului citric. Pentru evitarea acestui neajuns melasa
se poate prelucra cu ageni chimici, absorbani, schimbtori de ioni, dar rezultatele cele mai bune
s au obinut la prelucrarea cuferocianur de potasiu, care permite sedimentarea ionilor de fier i a
altor metale grele.
Pentru aceasta, melasa concentrat se nclzete la 40C, se corecteaz pH ul la valoarea7,0,
iar apoi se adaug ferocianura de potasiu i se fierbe 45 min. Dup aceasta melasa sercete i se
dilueaz cu ap pn ce concentraia n zahr devine 15%.
Pentru a avea un proces normal de cretere a masei celulare i de producere a aciduluicitric
este necesar ca mediul de cultur s conin i surse de azot, sulf i microelemente. Sursele de azot
se adaug sub form de extract de porumb, iar microelementele se adaug la prepararea mediului.
Este interesant de remarcat c melasa conine iniial i microelemente,dar o parte din ele se separ
odat cu fierul. Dintre microelemente nu trebuie s lipseasczincul, cadmiul, aluminiul, cuprul i
magneziul.
Sterilizarea
Sterilizarea este procesul prin care are loc distrugerea sau ndeprtarea total a
microorganismelor patogene sau apatogene din substane, preparate, spaii nchise, obiecte.
n industria de biosintez, unde se obin culturi microbiene pure, precum i n
industriafarmaceutic i cea alimentar, procesul de sterilizare este de nenlocuit i poate fi realizat,
de obicei, prin:

Metode termice :
sterilizare cu aer cald la 140-200 C;
sterilizare cu vapori de ap sub presiune la 120 -140 C;
sterilizare prin nclziri repetate la 70-100 C.

Metode fizice:
filtrare prin umpluturi fibroase;
13

 filtrare prin materiale poroase;

filtrare prin membrane;
utilizarea rediaiilor UV, IR, raze X, , , etc.

Metode chimice:
Utilizarea agenilor chimici: oxid de etilen, formaldehid,fenol, azotiperit, ozon,
etc.

Metode de preparare pe cale aseptic

Sterilizarea mediului de cultur

Dei teoretic sterilizarea mediilor de cultur se poate realiz prin metode mecanice(filtrare,
centrifugare, flotatie), termice, cu agenti chimici bactericizi, cu radiaii X, , ,radiatii UV, aplicatii
practice au gsit numai procedee le termice de sterilizare. Sterilizarea termic prezint, ns, i o
serie de inconveniente, generate n special, de reaciile secundare de degradare care au loc in timpul
procesului de sterilizare.
Pentru sterilizarea mediului de cultur pregtit pentru obinerea acidului citric se
prezintinstalaia de sterilizare la 120 125 C (fig. 3), deoarece aceasta prezint o serie deavantaje
cum ar fi: simplitatea, usurina n exploatare a utilajelor de sterilizare i realizarea gradului de
sterilizare dorit.

Fig. 3. Instalaia de sterilizare a mediului de cultur la 120 125 C .

Este alcatuit dintr-o coloan de sterilizare (1), menintor (2) i rcitor (3). Coloana de
sterilizare este conceput din dou evi concentrice, prin eava interioar fiind introdus aburul,
mediul de cultur circulnd prin spaiul dintre cele dou evi. ncalzirea mediului se face prin
barbotarea aburului de 5 ata prin intermediul fantelor practicate pe eava interioar, acesta fiind
14

dirijat tangenial i uniform cu ajutorul unui nec montat pe exteriorul evii. Mediul staioneaz n
coloan 4 6 secunde, dup care ptrunde n menintor, unde rmne 15 20minute pentru
perfectarea procesului de sterilizare.n final, mediul este rcit ntr-un schimbtor de caldur tip
eav n eav, la 35 40 C, temperatur cu care este introdus n fermentator.
Din diagrama timp temperatur (fig. 4), se observ c, n aceast instalaie ,contribuia fazei
de ncalzire i rcire la performana procesului de sterilizare este de 5 6 %, astfel nct se poate
considera c sterilizarea se realizeaz aproape n totalitate n faza demeninere.

Fig. 4. Diagrama timp temperatur pentru sterilizarea continu la 120 125 C

Sterilizarea aerului
Studiind procesul de sterilizare a aerului, Aiba a determinat speciile reprezentative de bacterii
i spori care trebuiesc ndepartate n mod obligatoriu, pentru a putea fi asigurate condiiile unei
fermentaii aseptice.
Cu toate c sterilizarea aerului se poate realiza att prin procedee termice ct i prin
filtare,metoda cea mai utilizat n industrie este filtrarea. Pentru sterilizare prin filtrare se pot folosi
urmtoarele materiale filtrante:
fibre de sticl cu diametru cuprins ntre 5 i 18 ;
nitrat de celuloz, pentru filtrul cu membran;
teflon cu o mare rezisten termic (pn la 300C) i caracter hidrofob, utilizat sub fo rm
de folii de teflon sau n amestec cu polietilena;
poliamid (naylon), caracterizat prin rezisten termic, hidrofobicitate,elasticitate i
durabilitate.
Pentru sterilizarea aerului prin filtrare, n principiu, exist trei tipuri de filtre cu aplicabilitate
practic i anume:
filtrul cu fibr de sticl (fig. 5);
filtre disc cu membrane (filtre absolute);
filtre tip lumnare.
15

Fig. 5. Schema de purificare i sterilizare a aerului

Sterilizarea pe material fibros poate fi descris printr-un model de curgere prin ocolire (fig. 6),
fenomen care impune absena total a umiditii din filtru (prezena umiditiitransform curgerea
prin ocolire n curgere prin alunecare, anulnd total proprietile filtrante).

Fig. 6. Modelul curgerii perpendiculare a aerului pe fibr

Din aceste motive, rcirea aerului n rcitorul (3) se face pn la apariia condensului, iar dup
separarea lui, aerul saturat se prenclzete cu aer fierbinte pn cnd temperatura deieire din
filtrul individual (6) depaete cu cel puin 12 C temperatura punctului de rou.Stabilirea
parametrilor de funcionare ai instalaiei de sterilizare se face numai n funcie de parametrii
termodinamici ai aerului. Reinerea microorganismelor pe fibrele de sticl, n procesul de filtrare
a aerului, se realizeaz ca efect al combinrii urmtoarelor fenomene:impact inerial, intercepie,
difuzie i atracie electrostatic. Analiza cantitativ a procesului dereinere a particulelor din aer
pe filtre de fibre de sticl a evideniat c eficacitatea filtrriidepinde de caracteristicile materialului
fibros i de parametrii operaiei de filtrare.
Fermentaia
Procesul de cretere a microorganismelor pe medii de cultur, cu scopul de a biosintetizadiveri
produi, poart denumirea de fermentaie.Fermentaia reprezint etapa fundamental a proceselor
de biosintez. Ea se realizeaz n trei etape:
16

- fermentaia n inoculator - aceast fermentaie dureaza 16 pn la 20 de ore;

- fermentaia n intermediar aceast fermentaie dureaz aproximativ 12 pn la 16 ore;
- fermentaia n regim are loc n fermentatorul de regim, n care se realizeaz aceleai condiii
i parametri ca i n inoculator i intermediar.
n primele dou faze se consider c fermentaia s-a terminat atunci cnd coninutul dezahr
este consumat pn la aproximativ 50% din valoarea iniial.
n toate fazele fermentaiei se administreaz acelai debit de aer (1 litru pe minut) sub ointens
agitare la temperatura de 29 - 32C.
n tehnologia obinerii acidului citric, o importan foarte mare o are procesul de pregtirea
melasei pentru fermentaia citric. n general, melasele rezultate din industria zahruluiconin o
cantitate mare de fier, care inhib att creterea masei celulare, ct i obinerea acidului citric.
Pentru evitarea acestui neajuns melasa se poate prelucra cu ageni chimici,absorbani, schimbtor
i de ioni, dar rezultatele cele mai bune s-au obinut la prelucrarea cuferocianur de potasiu, care
permite sedimentarea ionilor de fier i a altor metale grele.
Pentru aceasta, melasa concentrat se nclzete la 40C, se corecteaz pH ul la valoarea 7,0,
iar apoi se adaug ferocianura de potasiu i se fierbe 45 min. Dup aceasta melasa sercete i se
dilueaz cu ap pn ce concentraia n zahr devine 15%.
Viteza i randamentul procesului de fermentaie cresc cu creterea cantitii de ferocianur,dar
numai pn la concentraia de 50-60 mg-%, dup care scade datorit faptului cferocianura la
concentraii mari inhib procesul de cretere a masei celulare i de producere a acidului citric.
Un alt factor care influeneaz sensibil procesul de fermentaie citrice este coninutul defosfor,
a crui valoare optim este 25 - 30 mg-%. Fosforul regleaz att procesul de cretere a masei
celulare ct i procesul de utilizare a zahrului. Melasa conine, de obicei, 3-20 mg-% fosfor , iar
pn la valoarea optim se adaug n mediu de cultur fie fosfor monopotasic, fie acid fosforic.
Pentru a avea un proces normal de cretere a masei celulare i de producere a aciduluicitric
este necesar ca mediul de cultur s conin i surse de azot, sulf i microelemente.
Sursele de azot se adaug sub form de extract de porumb, iar microelementele se adaug la
prepararea mediului. Este interesant de remarcat c melasa conine iniial i microelemente,dar o
parte din ele se separ odat cu fierul. Dintre microelemente nu trebuie s lipseasczincul, cadmiul,
aluminiul, cuprul i magneziul.
Procesul de fermentaie citric fiind aerob, consumul de aer steril este de 1-1,5L aer pentruun
litru mediu pe minut,iar pH-ul se menine tot timpul ntre 3 i 4,5.
Temperatura procesului de biosintez depinde de stadiul de dezvoltare a masei celulare. Astfel,
nsmnarea serealizeaz la 36-42 C, dup care temperatura se coboar la 34-36 C i se menine
17

la aceast valoare timp de 24-36 ore, ct dureaz dezvoltarea masei microbiene, apoi temperatura
sescade la 30-32 C i se menine la aceast valoare pe toat durata elaborrii acidului citric.
Studiindu-se efectul termic al procesului de fermentaie s a stabilit c se degaj pn la 250
kcal/m3 h, iar aceast valoare se atinge n a 5 a zi de fermentaie i corespunde celei mai mari valori
a vitezei de acumulare a acidului citric (fig. 7).

Fig. 7. Variaia concentraiei acidului citric i a efectului termic n procesul de fermentaie

T1-variaia efectului termic,kcal/m2h;
T2-temperatura preluat de agentul de schimb termic;
A-variaia concentraiei n acid citric, g/ m2h;
B-viteza specific de cretere a masei celulare, g/ m2h.
Din analiza dinamicii procesului de biosintez a acidului citric rezult c acumularea sancepe
dup 25-30 ore de fermentaie, iar viteza de acumulare atinge n ziua a 5-a i a 6 a valori de 105106 g/m3h. De asemenea consumul de zahr din biomas este n perfectconcordan cu
acumularea acidului citric: n perioada de cretere a masei celulare seconsum 10 15 %, iar n
perioada de acumulare a produsului 48-50 % din cantitatea total de zahr din mediu. O utilizare
mai raional a zahrului se obine n cazul n care coninutulacesatiua n mediu de cultur este
cuprins ntre 14 i 16 %, concentraie ce asigur un coninut de 10-12 % acizi organici, n care
acidul citric reprezint 80 95 %.
Procesul

de

fermentaie

se

realizeaz

prin

fermentaie

profunzime,

fermentatoarecilindrice, verticale echipate cu agitator, serpentin, barbotor de aer i dispozitive de

reglare.
Inocularea i conducerea procesului de fermentaie se face ca i la alte procese de biosintez,
iar durata procesului este de 6-7 zile la pH de 3-4,5 i un debit de 1 L aer pentru 1L mediu i minut.

18

Filtrarea
Filtrarea reprezint separarea biomasei rezultate n urma procesului de fermentaie de produsul
util. n principiu filtrarea lichidelor de fermentaie se utilizeaz aceleai tehnici ca nindustria
chimic, ns n cazul biotehnologiilor apar unele particulariti legate de:
- volume ridicate de mediu supus filtrarii;
- prezena microorganismelor care nfund porii materialului filtrant.
Dup fermentaie i filtrarea miceliului, soluia apoas se supune prelucrrii pentrusepararea
acidului citric cristalin. Separarea acidului citric sub form de cristale se bazeaz pe proprietatea
unor sruri ale sale (sare de calciu) de a nu se dizolva n ap.
Precipitarea i neutralizarea
Pentru obinerea citratului de calciu se adaug n soluia filtrat, rezultat de la fermentaie
CaCl2, se nclzete la 100C i se neutralizeaz la pH 6,8 - 7 cu Ca(OH)2, cnd precipit srurile
de calciu ale acizilor organici formai (acid citric, succinic, malic) prin biosintez.
Filtrarea i acidularea
Precipitatul format se filtreaz i se spal cu ap fierbinte 95 C dup care se trateaz cu acid
sulfuric pentru eliberarea acidului citric din sarea sa de calciu.
Decolorarea i filtrare
Soluia obinut se trateaz cu crbune activ i se filtreaz, iar filtratul se trateaz cuferocianur
de potasiu pentru separarea fierului i a altor metale grele i se filtreaz din nou lacald. Se obine
n acest fel o soluie de acid citric de concentraie 20-25 % care se supune unei evaporri la vid, la
temperatura de 70 C. Evaporarea se continu pn ce concentraia soluiei ajunge la densitatea de
1,35-1,36 g/cm3 dup care se trimite la cristalizare.
Cristalizarea i filtrarea
Pentru aceasta soluia se rcete la 37 C cu o vitez de 20 C pe or; de la 37 C la 27 C cu o
vitez de 10 C pe or, de la 27 C la 20 C cu o vitez de 5 C pe or, iar de la 20 C la 8 C cu o
vitez de 3 C pe or. Acidul citric cristalizat se filtreaz pe centrifug, dup care se supune
procesului de uscare.
Uscarea
Uscarea acidului citric se poate face discontinuu sau continuu la la temperatura de 60-70 C,
iar durata uscrii variaz cu temperatura. Acidul citric monohidrat la temperatura de 20 C nu
pierde apa de cristalizare la o umiditate a aerului de 40-50 %. Dac ns umiditatea aerului crete
la 90 % atunci acidul citric absoarbe umiditatea aerului, trecnd n soluie. Acidul citricanhidru se
poate obine numai prin uscare cu aer a crui umiditate trebuie s fie sub 50 %.

19

Bibliografie
1. Banu, C., et al., 2000 Biotehnologii n industria alimentar, Editura Tehnic, Bucureti
2. Banu, C., et al. Aditivi i ingrediente pentru industria alimentar, Editura Tehnic,
Bucureti
3. Cojocaru, C., 1969 Procedee tehnologice n industria fermentativ, Editura Tehnic,
Bucureti
4. Sasson, Al., 1993 Biotehnologii i dezvoltare, Editura Tehnic, Bucureti.
5. http://ru.scribd.com/doc/112246297/Tehnologia-de-fabrica%C8%9Bie-Acid-citric
6. http://www.biotehnologii.usamv.ro/fisiere/file/MICROBIOLOGIE%20APLICAT%C4%
82.pdf
7.

20