LP 5 Determinarea GGT.

Dozarea FAL / 3 ore

GGT gama-glutamiltranspeptidaza

GGT gama-glutamiltranspeptidaza catalizeaz transferul gruprii glutamil de

la peptide ca glutationul (GSH) ctre ali aminoacizi.

Este localizat la nivelul membranei citoplasmatice a numeroase celule, centrul

activ al enzimei fiind situat la exterior.
- cea mai mare concentraie se afl in rinichi;
- cantiti importante se afl in ficat, pancreas, canalicule biliare;
- cantiti mici se gsesc in intestin, splina, miocard i plmni.

GGT msurat in ser provine in special din ficat. Cea mai mare parte este legat de
lipoproteine, in special HDL, dar i de LDL. O mic poriune este hidrosolubil,
fiind asemntoare GGT eliberat de proteaze din membrana celulelor hepatice.
GGT legat de HDL predomin in bolile hepatice non-icterice, in timp ce GGT
legat de LDL este crescut in colestaz, iar forma hidrosolubil intr-o varietate de
boli hepatice.

Determinarea activitii GGT prin metoda enzimatic

Principiul metodei
In mediu alcalin, GGT catalizeaz hidroliza L-gama-glutamil-p-nitroanilida i
transferul gruprii L-gama-glutamil pe glicilglicina, cu eliberarea p-nitroanilidei de
culoare galben. Creterea valorii extinciei msurat la lungimea de und de 405
nm este direct proporional cu activitatea GGT.

Reactivi
Reactiv R1 tampon TRIS pH 8,1
Reactiv R2 glicilglicina si L-gama-glutamil-p-nitroanilida
Se amesteca R1 cu R2 conform indicatiilor.

Proba
Ser nehemolizat

Mod de lucru
Intr-o eprubeta se pipeteaza 1 ml amestec R1 + R2 si 100 l ser.
Se agita si se incubeaza timp de 1min la 370C.
Se masoara variatia absorbantei la = 405 410 nm fata de apa distilata, in cuve
de 1 cm, timp de 3 min.
Se calculeaza variatia absorbantei pe minut (A/min).

Calcul
CP = (A/min) x 1190 la = 405 nm
CP = (A/min) x 1339 la = 410 nm
unde: CP concentraia probei
A/min variatia absorbantei pe minut

daca variatia absorbantei/min este mai mare de 232 U/l, proba se dilueaza cu NaCl
1:10, si se va relua analiza si se va tine cont de dilutie (x 10).

Valori normale
Femei 7 32 U/l
Barbati 11 50 U/l

Variaii patologice

Valori crescute:
- hepatopatie drog induasa (inclusiv etanolica cresteri importante),
- ciroza biliara primitiva (cresteri mari),
- sindroame obstructive (creste de 10 30 ori mai mult),
- hepatite cronice,
- neoplasm hepatic,
- afectiuni pancreatice,
- hipertrigliceridemeie (creteri uoare de 1,5 2 ori).

DETERMINAREA GGT ESTE UN TEST SCREENING AL CONSUMULUI

DE ALCOOL. GGT ESTE PRIMUL PARAMETRU CARE CRESTE SI
ULTIMUL CARE SCADE IN CAZUL CONSUMULUI DE ALCOOL (chiar
dac alte teste hepatice sunt normale)

Fosfataza alcalina - FAL

FAL este o -globulin.

Catalizeaz hidroliza esterilor fosforici la pH alcalin;
Particip la transportul fosforului.
Exist trei izoenzime: hepatic, osoas, intestinal dar i o form tranzitorie, in
sarcin.

Se afl n:

- sistemul osos
- mucoasa intestinala
- corticala renala
- glanda mamara
- ficat
- placent, forma tranzitorie
 Determinarea activitatii FAL prin metoda spectrofotometrica

Principiul metodei

In mediu alcalin, FAL catalizeaz hidroliza monofosfatilor. In urma reactiei

se formeaza p-nitrofenol si fosfat anorganic. Ionii de Mg2+activeaza
enzima. Activitatea enzimatica este direct proportionala cu concentratia de
p-nitrofenol eliberata, respectiv cu intensitatea coloratiei obtinute.

Reactivi
Reactiv R1 tampon dietilamina, pH 9,8 si MgCl 0,6 mmol/l
Reactiv R2 fosfat de p-nitrofenil 10 mmol/l
Se amesteca R1 cu R2 in cantitati recomandate de producator.

Proba
Ser nehemolizat
Plasma heparinizata

Mod de lucru

Intr-o eprubet se pipeteaza 1 ml amestec R1 + R2 si 20 l ser sau plasma.

Se agita si se incubeaza timp de 1min la 370C.
Se masoara variatia absorbanei la = 405 410 nm fa de apa distilata, in cuve
de 1 cm, timp de 3 min.
Se calculeaza variatia absorbantei pe minut (A/min).

Calcul

CP = (A/min) x 3000 la = 405 nm

unde: CP concentratia probei

A/min variatia absorbanei pe minut

Daca variatia absorbantei/min este mai mare de 0,25 U/l, proba se dilueaza cu
NaCl 1:10, si se va relua analiza si se va tine cont de dilutie (x 10).

Valori normale

Femei 55 170 UI/l

Barbati 70 175 UI/l
Copii in perioada de crestere < 700 UI/l
Variaii fiziologice
Valori mari ale izoenzimei osoase duble sau triple fata de adulti se gasesc la copii
in perioada de crestere datorita cresterii osului in lungime.

Variaii patologice
Este singura enzima care se determin pentru diagnosticul afeciunilor osoase.

Valori crescute:
- de origine hepatic cele mai marcate creteri se intlnesc in obstrucia
mecanic a cilor biliare extrahepatice sau in colestaza intrahepatic:
- o cretere de 10 ori in cancer de cap de pancreas, litiaza coledocian, hepatita
colestatic medicamentoas;
- o cretere de 5-20 ori in ciroza biliara primitiva, carcinoame hepatice primare
sau metastatice;
- creteri usoare/moderate (de 2 ori normalul) se inregistreaza in hepatita virala si
ciroza;
- in mononucleoza infecioas i in infecia cu citomegalovirus pot aprea creteri
de pn la 5 ori normalul;
- in ingestia cronic de alcool, fosfataza alcalin poate avea valoare normal sau
crescut, sunt ins constant crescute GGT, AST si eventual bilirubina;
- valori crescute mai pot aparea in bolile hepatice de cauz infiltrativ (sarcoidoza,
tuberculoza, amiloidoza, abcese).
- de origine osoas: hiperparatiroidism, hipertiroidism, boala Paget,
metastaze osoase, tumori osoase, osteomalacie, rahitism, in evolutia fracturilor
multiple.
- de origine placentar: apar in saptmnile 16-20 ale unei sarcini normale,
crescnd pn la nivelul maxim (de 2 ori normalul) la debutul travaliului.
- de origine intestinal: in diverse afeciuni ulcerative ale tractului
gastrointestinal, malabsorbtie sever, infarct intestinal.
- in neoplasme: ocazional tumorile (in special hipernefromul) pot produce o
fosfataza alcalina identica sau similara cu forma placentara (izoenzima Regan).

Valori sczute:
hipofosfatazia familial;
hipotiroidism, cretinism;
malnutriie;
deficit de zinc;
deficit de magneziu;
femeile aflate in post menopauz cu osteoporoz care urmeaz tratament
estrogenic substitutiv.