Sunteți pe pagina 1din 67

ENZIME

PLASMATICE
Conf. CSII Dr. Cristiana TANASE

ENZIME PLASMATICE
Consideratii generale

Catalizatori ai reactiilor chimice care au loc in


organismele vii

Determinarea activitatii enzimelor plasmatice,


precum si a concentratiei diferitelor substrate
prezinta importanta clinica - acesti parametrii
biochimici reflecta modificari aparute la nivel tisular
in diverse organe

Enzimologia clinica permite astfel:

- un diagnostic pozitiv si diferential corect


- monitorizarea evolutiei unor boli si a eficientei terapiei
- identificarea unor defecte genetice si a consecintelor

CLASIFICAREA ENZIMELOR
PLASMATICE
Se realizeaza in functie de localizarea substratului

Enzime functionale - specifice plasmei

Secretate activ in plasma mai ales de catre ficat

Actioneaza in mod normal in plasma

Sunt decelate in concentratii relativ mari dar constante

Exemple: ceruloplasmina, lipoproteinlipaza, enzimele


care intervin in procesele de coagulare si fibrinoliza

B. Enzime nefunctionale nespecifice


plasmei

Concentratii plasmatice foarte mici ajung in


plasma ca urmare a turnoverului celular

Aceste enzime se subclasifica in:


a. Enzime de excretie
b. Enzime celulare

a. Enzime secretate de glande exocrine care


difuzeaza pasiv in sange
Nu

exercita rol in plasma

Nivelul

lor scade in caz de atrofie glandulara

Nivelul

lor creste in caz de obstructie a glandelor


excretoare sau in caz de crestere a permeabilitatii
membranelor celulare
Exemple:

amilaza, lipaza si tripsina pancreatica,


pepsinogenul gastric, fosfataza alcalina de origine biliara
si fosfataza acida prostatica

b. Enzime celulare
Provin

din celulele diferitelor organe; actioneaza exclusiv


intracelular; nu prezinta substrat de reactie si cofactori in
plasma
Se

gasesc in plasma in cantitati mici si cresc in situatii


patologice ca urmare a distructiei celulare
Determinarea

activitatii lor in ser reflecta un anummit tip de


"spectru enzimatic" al organului afectat
Exemple:

transaminazele,
dehidorgenaza

creatinfosfokinaza,

lactat

Clasificarea enzimelor

Exista 6 clase de enzime in functie de tipul reactiei


catalizate:

- oxido-reductaze
- transferaze
- hidrolaze
- liaze
- izomeraze
- ligaze

IZOENZIME

Forme moleculare multiple ale unei enzime care se gasesc in


diverse tesuturi

Toate izoenzimele unei enzime catalizeaza aceeasi reactie - difera


doar viteza de reactie

Exemple:

- creatinfosfokinaza - 3 izoenzime,
- lactat dehidrogenaza - 5 izoenzime,
- fosfataza alcalina - 3 izoenzime principale
- amilaza 2 izoenzime principale

ANTIENZIME (ANTIPROTEAZE)

Proteine reglatoare care inhiba activitatea enzimelor proteolitice


provenite din zimogeni

Serpinele - inhibitori de serin proteaze; din familia serpinelor fac


parte:

Antitrombina

1-antitripsina

Inhibitorul pancreatic al tripsinei

Inhibitorul proteinei C

Cauzele aparitiei enzimelor in


plasma
A. Necroza tisulara afectari celulare severe cu modificari
ale permeabilitatii membranelor cauzate de ischemie,
substante toxice, agresori biologici virus, bacterie, etc
- Cantitatea de enzime direct proportionala cu gravitatea
afectarii si marimea zonei afectate
B. Metabolismul /multiplicare celulara intensa
-

Perioade de crestere activa: primul an de viata, pubertate fosfataza alcalina

Procese de reparare tisulara (postfracturi) - fosfataza


alcalina

Asociere procese maligne - fosfataza alcalina

C. Inductie enzimatica:

sinteza indusa de medicamente, stari


patologice gama glutamiltranspeptidaza
alcool, medicamente antiepileptice,
contraceptive orale, etc
D. Obstructia de duct excretor:
enzimele secretiilor exocrine - amilaza

Factori care influenteaza nivelul


enzimelor plasmatice

Viteza eliberare a enzimei din tesuturi;

Rata de eliminare a enzimelor plasmatice prin


catabolism sau excretie,

Volumul de distributie in fluidul extracelular

Alti factori: activatori sau inhibitori enzimatici din


plasma

TRANSAMINAZELE

Enzime implicate in matabolizarea aminoacizilor;

Au drept coenzima piridoxal-5-fosfat derivat din vitanima


B6; in deficitul de B6 reactia de transaminare scade,
precum si activitatea plasmatica a enzimei

Transaminazele serice acioneaz la nivel intracelular, cataliznd


reacia de transfer a unei grupri amino (-NH2) de la un aminoacid la un -cetoacid.

Exist dou transaminaze serice cu aplicaii clinice importante:

a) ALANINAMINOTRANSFERAZA (TGP/ALAT/ALT)
b) ASPARTATAMINOTRANSFERAZA (TGO/ASAT/AST)

ALANINAMINOTRANSFERAZA
(TGP/ALAT/ALT)
Consideratii generale

ALT (transaminaza glutampiruvica - TGP) - enzima ce


face parte din clasa transferazelor si catalizeaz
transferul gruprii amino (-NH2) de la L-alanin la
acidul -cetoglutaric, rezultnd acidul piruvic i acidul
L-glutamic

Se gaseste in principal in ficat (la nivelul celulei


hepatice -citosol) si in ordine descrescatoare a
concentratiei in rinichi, miocard, muschi scheletici si
pancreas.

Semnificatie clinica
- indicator de citoliza cel mai frecvent explorat
- ALT este mai specifica pentru afectiunile hepatice decat
AST
- sunt necesare determinari in dinamica
- valori de referinta: adulti 4 - 36 U/L; varstnici: crescute
Recomandari pentru determinarea ALT
diagnosticul bolilor hepatice
diagnosticul diferential al bolilor hepatobiliare si
pancreatice
monitorizarea evolutiei si a tratamentului hepatitei virale

Semnificatie clinica
Valori crescute:
- Hepatite acute virale si toxice (cele mai mari valori, de 20
100 ori valoarea normala)
- Hepatite cronice (de 5 10 ori valoarea normala) si ciroza
hepatica (de 1 5 ori valoarea normala)
- Ictere obstructive (cresterile pot fi mici si tardive)
- Metastaze hepatice si hepatom (cresteri usoare /
moderate)
- Steatoza hepatica (cresteri de 2-3 ori normalul)
Valori scazute:
- infectii urinare, neoplazii, deficit de piridoxal fosfat

ASPARTATAMINOTRANSFERAZA
(TGO/ASAT/AST)
Consideratii generale

AST - catalizeaz transferul gruprii amino de la acidul


L-aspartic la acidul -cetoglutaric rezultnd acidul
oxalilacetic i acidul L-glutamic

Spre deosebire de ALT care se gaseste in principal la


nivelul ficatului, AST este intalnita in mai multe tesuturi:
miocard, ficat, muschi scheletici, rinichi, pancreas, tesut
cerebral, splina, fiind astfel un indicator mai putin
specific al functiei hepatice.

La nivelul celulei hepatice, izoenzimele AST se gasesc


atat in citosol, cat si in mitocondrii

Semnificatie clinica
- Valorile AST cresc in aproape toate hepatopatiile precum
si in numeroase afectiuni extrahepatice, cu precadere in
infarctul miocardic si in maladii ale muschiului striat.
- Valori de referinta:
- barbati: 20 47 U/L;
- femei: 10 37 U/L.

Semnificatie clinica
Valori crescute:
-Hepatite acute virale si toxice (cele mai mari valori,
de 10 100 ori valoarea normala)
-Infarctul miocardic acut, stari septice, interventii pe
cord, traumatisme hepatice, metastaze hepatice,
rabdomioliza (cresteri marcate uneori peste 3000
U/L)
-Ictere obstructive (cresteri si scaderi rapide)
-hepatita acuta virala, hepatopatii cronice (hepatita
cronica activa, ciroza), hepatita alcoolica (valori mai
putin crescute)
Valori scazute:
-azotemie; dializa renala cronica; deficit cronic de

Raportul de Ritis
Raportul
dintre
activitatea
TGO
(AST)/TGP
(ALT)
(RDR)

Valori de referinta: 0,7-1,4

Valori patologice:

RDR crescut (in necroza se elibereaza enzime


mitocondriale/TGO): IMA, hepatita alcolica, ciroza
sau neoplasm hepatic, colestaza intrahepatica, etc

RDR scazut: boli inflamatorii cresterea


permeabilitatii celulare, eliberare de enzime
citoplasmatice; hepatite infectioase, alte afectiuni
inflamatorii.

FOSFATAZA ALCALINA (ALP)


CONSIDERATII GENERALE

Hidrolaza (ortofosfomonoesterfosfohidrolaza),
cu trei forme izoenzimatice principale:

Hepatobiliara (30-50%)

Osoasa (50-70%)

Intestinala (0-20%)

la care se adauga in timpul sarcinii o forma


tranzitorie (forma placentara).
-

Prin metode biochimice se


diferentierea intre izoenzime.

poate

face

Determinarea fosfatazei alcaline este folosita pentru


diagnosticul diferential al bolilor hepatice, in afectiunile
osoase, in hiperparatiroidism.

In tumorile de diverse etiologii fosfataza alcalina are


valoare de marker tumoral (depistarea metastazelor
hepatice sau osoase).

CRESTERI ALE ACTIVITATII ALP

patologie hepatica: cele mai marcate cresteri se


intalnesc in obstructia mecanica a cailor biliare
extrahepatice sau in colestaza intrahepatica: cancer
de cap de pancreas, litiaza coledociana, hepatita
colestatica medicamentoasa (cresteri de 10 ori);
ciroza biliara primitiva, carcinoame hepatice primare
sau metastatice (cresteri de 5-20 ori); hepatita
virala (crestere de 2 ori);

mononucleoza
infectioasa
si
infectia
cu
citomegalovirus cresteri de pana la 5 ori normalul;

bolile hepatice de cauza infiltrativa (sarcoidoza,


tuberculoza, amiloidoza, abcese).

Cresteri - origine osoasa: hiperparatiroidism;


hipertiroidism; boala Paget; metastaze osoase;
tumori osoase; osteomalacie, rahitism; in
evolutia fracturilor multiple.

In sarcina saptamanile 16-20 ale unei sarcini


normale, nivelul maxim (de 2 ori normalul) la
debutul travaliului.

Afectiuni de origine intestinala: in diverse


afectiuni
ulcerative
ale
tractului
gastrointestinal, malabsorbtie severa, infarct
intestinal.

SCADERI ALE ACTIVITATII ALP

hipofosfatemie

hipotiroidism, cretinism;

malnutritie;

deficit de zinc;

deficit de magneziu;

femeile aflate in post menopauza cu osteoporoza care


urmeaza tratament estrogenic substitutiv

FOSFATAZELE ACIDE
CONSIDERATII GENERALE

enzime larg raspandite in tesuturi, intalnite la nivel


osos, hepatic, splenic, renal, in eritrocite si
trombocite.

importanta diagnostica in special in cazul


fosfatazei acide de la nivelul prostatei, unde
activitatea enzimatica este de 100 ori mai mare
decat in celelalte tesuturi.

fosfataza acida este de asemenea prezenta in


concentratii crescute in lichidul seminal.

SEMNIFICATIE CLINICA
- utile in diagnosticul si monitorizarea cancerului de
prostata metastatic; evaluarea unei posibile histiocitoze
- Valori de referinta:
- barbati: < 6,6 U/L;
- femei: < 6,5 U/L
Valori crescute:
- tumori de prostata cu metastaze (in special osoase).
- valori moderat crescute: metastaze osoase (de origine
non-prostatica), leucemia granulocitara, boala Paget
avansata, hiperparatiroidism, boala Gaucher si boala

Antigenul specific prostatic (PSA) este utilizat mai


mult in screeningul cancerul de prostata.

Valori de referinta: <4 ng/mL

PSA are sensibilitate mai buna - apare in stadiile


timpurii dozare facila.

AMILAZA SERICA

CONSIDERATII GENERALE

face parte din categoria hidrolazelor, subgrupa de enzime care


catalizeaza degradarea hidrolitica a amidonului, a glicogenului, a
poli- si oligozaharidelor.

enzima de secretie exocrina, prezenta in ser sub doua forme


izoenzimatice principale: pancreatica (40% din amilaza serica
totala) si salivara (60% din amilaza serica totala).

prezenta in cantitati mult mai mici in ficat, sucul duodenal,


intestinul subtire, trompele uterine, muschii scheletici.

macroamilaza - forma moleculara rara - izoenzima care, datorita


dimensiunii sale mari, nu se elimina la nivel renal poate
determina cresteri ale activitatii enzimatice

SEMNIFICATIE CLINICA
- utile in diagnosticul si monitorizarea tratamentului in
pancreatita acuta, evaluarea in urgenta a cazurilor de
abdomen acut
-in conditii fiziologice: cresteri moderate sunt raportate in
sarcina normala; valori scazute se inregistreaza la sugari
- Valori de referinta: < 100 U/L

Valori crescute:
afectiuni pancreatice
pancreatita acuta (crestere marcata, apare dupa 3-6 ore de la
debut);

puseul acut survenit in cursul evolutiei unei pancreatite cronice;


pancreatita indusa medicamentos;
obstructia ductului pancreatic (calcul sau carcinom, spasmul
oddian indus medicamentos, obstructia partiala plus stimularea
medicamentoasa);

traumatism pancreatic (leziune abdominala, CPRE colangio


pancreatografie endoscopica retrograda);

complicatii ale pancreatitei (pseudochist, ascita, abces);

afectiuni non-pancreatice :
- afectiuni ale tractului biliar (obstructia caii biliare
principale, colecistita acuta);
- alterarea permeabilitatii tractului gastro-intestinal: boala
intestinala ischemica sau perforatie franca, ruptura
esofagiana, ulcer perforat sau penetrant, postoperator
dupa o interventie chirurgicala la nivel abdominal superior,
mai ales gastrectomie partiala;

afectiuni non-pancreatice :
-ingestie acuta de alcool sau intoxicatie alcoolica;
-afectiuni ale glandelor salivare (parotidita epidemica,
inflamatie cu caracter supurativ, obstructie ductala
litiazica, iradiere);
-tumori metastatice cu secretie ectopica de amilaza (valori
mai mari decat in pancreatita)
-ruptura de anevrism aortic,
-apendicita acuta;
-traumatisme cerebrale;
-arsuri si soc traumatic;
-abces tubo-ovarian; ruptura de sarcina ectopica;
-macroamilazemie.

Valori scazute:
distructie marcata si extinsa a pancreasului
(pancreatita acuta fulminanta, pancreatita cronica
severa, fibroza chistica severa etc.),
pancreatectomie,
leziuni hepatice severe.

AMILAZA URINARA

Consideratii generale. Semnificatie


clinica

amilazele se elimina obisnuit in urina

amilaza urinara creste intotdeauna in paralel cu valoarea amilazemiei

in pancreatita acuta amilaza urinara creste dupa 6-10 ore de la


cresterea amilazei serice si se mentine crescuta mai mult timp decat
aceasta

cresterea amilazei serice asociata cu niveluri scazute ale amilazei


urinare se intalneste in insuficienta renala si in macroamilazemie

Semnificatie clinica
- determinarile sunt utile in diagnosticul si monitorizarea
tratamentului in pancreatita acuta, evaluarea in urgenta
a cazurilor de abdomen acut
-in conditii fiziologice: cresteri moderate sunt raportate in
sarcina normala; valori scazute se inregistreaza la sugari

Semnificatie clinica
Valori crescute:
afectiuni pancreatice
pancreatita acuta (crestere marcata, apare dupa 3-6 ore de la
debut);
puseul acut survenit in cursul evolutiei unei pancreatite cronice;
pancreatita indusa medicamentos;
obstructia ductului pancreatic (calcul sau carcinom, spasmul
oddian indus medicamentos,
obstructia partiala plus stimularea medicamentoasa);
traumatism pancreatic (leziune abdominala, CPRE colangio
pancreatografie endoscopica retrograda);
complicatii ale pancreatitei (pseudochist, ascita, abces);

LACTAT DEHIDROGENAZA(LDH)
Consideratii generale

LDH - catalizeaza (in conditii anaerobe) reducerea acidului


piruvic cu formare de acid lactic in prezenta de NADH + H +

enzima intracelulara larg distribuita in organism,


intalnita cu precadere in rinichi, miocard, musculatura
scheletica, creier, ficat si plamani

2 forme: tipul H (Heart) si tipul M (Muscle)

se cunosc 5 izoenzime (LDH1, LDH2, LDH3, LDH4,


LDH5 ) rezultate prin combinarea celor 2 tipuri (H si M)

Valori de referinta:
- barbati 135-225 U/L
- femei 135-214 U/L

cresterile LDH sunt nespecifice, cu toate acestea testul este


util pentru confirmarea diagnosticului de infarct miocardic sau
pulmonar. In infarctul miocardic persistenta nivelului LDH
crescut este mai indelungata decat a celorlalte enzime

Recomandari pentru determinarea LDH:

diagnosticul retroactiv al infarctului miocardic,

marker al hemolizei (anemii hemolitice),

monitorizarea terapiei citostatice in diverse tumori.

Semnificatie clinica

cresteri ale valorilor LDH:

- in infarctul miocardic apar niveluri crescute de LDH


la 36-55 ore de la debut care persista 3-10 zile;
- in infarctul pulmonar cresterile LDH se inregistreaza
in decurs de 24 ore de la debutul durerii toracice;
- alte cauze de cresteri: insuficienta cardiaca congestiva,
afectiuni hepatice (ciroza, alcoolism, hepatita acuta
virala),
tumori
solide,
leucemii,
limfoame,
hipotiroidism,
afectiuni
musculare
(distrofii,
traumatisme), anemii megaloblastice si hemolitice,
convulsii, delirium tremens, soc, hipoxie, hipotensiune,
hipertermie, infarct renal, pancreatita acuta, fracturi,
obstructie intestinala, mononucleoza infectioasa

GAMA-GLUTAMILTRANSFERAZA GGT
- (GLUTAMILTRANSPEPTIDAZA)
Consideratii generale

catalizeaza transferul grupului glutamil de la


peptide ca glutationul (GSH) catre alti
aminoacizi.

proteina heterodimerica, fiecare subunitate


constand dintr-un singur lant polipeptidic.

localizata la nivelul membranei citoplasmatice a


numeroase celule, centrul activ al enzimei fiind
situat la exterior.

Consideratii generale

singura
enzima
care
cliveaza
cantitati
semnificative de GSH si conjugati ai GSH in
cadrul ciclului -glutamil

joaca un rol important in metabolismul


mediatorilor inflamatiei, cum ar fi leucotrienele,
substantelor carcinogene si toxice

GGT masurat in ser provine in special din ficat cea mai mare parte este legata de lipoproteine,
in special HDL si LDL

Semnificatie clinica

indicator sensibil pentru depistarea alcoolismului enzima a carei crestere depaseste celelalte enzime
hepatice dozate in mod curent

in bolile hepato-biliare GGT se coreleaza cu nivelurile


fosfatazei alcaline; cresterile nu sunt totusi specifice
si pot fi asociate si cu afectiuni pancreatice,
cardiace, renale, diabet zaharat.

utila pentru diagnosticul unei hepatopatii in prezenta


unei afectiuni osoase, a sarcinii sau in perioada
copilariei (conditii in care valorile fosfatazei alcaline
cresc, in timp ce GGT ramane la valori normale)

valori de referinta: barbati: < 61 U/L; femei: < 36 U/L

Valori crescute:
afectiuni hepatice :
- sindromul de colestaza GGT are valoarea diagnostica
cea mai mare; in medie cresterile depasesc de 6 ori
normalul; in colestaza extrahepatica GGT creste de >10
ori, GGT/AST=3-6 in obstructia recenta si >6 in obstructia
de lunga durata; in colestaza intrahepatica (hepatita
acuta, sarcina, medicamente, boala Hodgkin, nutritie
parenterala, atrezia ductelor biliare etc.) cresterile GGT
sunt mai mici; in sarcina GGT nu creste la fel de mult ca
fosfataza alcalina; copiii cu colestaza recurenta benigna
au niveluri normale de GGT desi icterul este prezent;

Valori crescute:
afectiuni hepatice :
- hepatita acuta virala cresterea GGT este mai mica decat
a altor enzime hepatice (GGT/AST=0.1-0.2), dar revine
ultima la normal; in formele colestatice GGT/AST=1;
- hepatita cronica activa, virala sau autoimuna cresterile
pot depasi de 7 ori limita superioara a normalului
(GGT/AST=1-3);
- hepatita alcoolica acuta GGT/AST >6;
- ciroza hepatica cresterile sunt in medie de 2 ori in ciroza
posthepatitica si in jur de 10 ori in ciroza alcoolica;

Valori crescute:
afectiuni hepatice :
- ciroza biliara primitiva GGT creste paralel cu fosfataza
alcalina, inaintea aparitiei icterului, cresterile putand
ajunge pana la de 13 ori limita superioara a normalului;
- ficatul gras de etiologie alcoolica GGT este aproximativ
dublu si persista crescut mult timp dupa intreruperea
consumului; in ficatul gras non-alcoolic predomina
cresterea usoara a aminotransferazelor, mai frecvent decat
GGT;

Valori crescute:
afectiuni hepatice :
- tumorile hepatice primitive, metastazele hepatice
evolutia este paralela cu cea a fosfatazei alcaline si
cresterile pot depasi de 14 ori valoarea normala; GGT este
crescut la 90% din pacientii cu metastaze, nivelurile
normale excluzand practic prezenta acestora, iar
determinarile seriale pot monitoriza raspunsul la
chimioterapie;
- congestia hepatica cronica GGT poate creste de pana la
5 ori, iar in cea acuta (ex.: tromboza de vena porta),
cresterea este mica comparativ cu cea a transaminazelor si

Pseudocolinesteraza/colinesteraza/
colinesteraza IIa
Consideratii generale

provine dinficat, pancreas, cord si creier (substanta


alba); rolul biologic al colinesterazei nu este
cunoscut

indicator al functiei proteosintetice a ficatului

Recomandari
pentru
psudocoliesterazei serice:

indicator al unei posibile intoxicatii cu insecticide;


pentru a evalua functia hepatica;

screening-ul preoperator al colinesterazei serice este


folosit pentru depistarea pacientilor cu forme atipice
ale enzimei, care risca sa prezinte apnee prelungita
dupa administrarea de anestezice de tip blocante

determinarea

Semnificatie clinica

Cresteri ale valorilor pseudocolinesterazei:

- perioada de vindecare a unei hepatite acute


- sindrom nefrotic (datorita exagerarii functiilor
proteosintetice hepatice)

Scaderi ale valorilor pseudocolinesterazei:

- intoxicatia cu insecticide organofosforice


- hepatita cronica
- ciroza
- infarct miocardic
- infectii acute
- fenotipurilor atipice ale acestei enzime

Creatinkinaza/Creatinfosfokinaza(
CPK)Consideratii generale

CPK se gaseste in concentratii crescute in


miocard si muschii scheletici si, in concentratii
mult mai mici, la nivelul creierului 1

are o structura dimerica si apare sub 4 forme:


izoenzima mitocondriala si
3 izoenzimele
citosolice:
CK-MM
(musculara),
CK-MB
(miocardica), CK-BB (cerebrala)

la indivizii sanatosi, nivelul creatinkinazei totale


este dat, aproape in totalitate, de izoenzima MM

Semnificatie clinica

cresteri ale valorilor creatinkinazei:

infarct miocardic acut (la 4-6 ore de la debut),


miocardita severa, dupa interventie chirurgicala
deschisa pe cord si defribilare electrica, distrofie
musculara Duchenne, polimiozita/dermatomiozita,
traumatisme musculare; rabdomioliza in cadrul
intoxicatiei cu cocaina; sindromul mialgie-eozinofilie,
hipertermie maligna,
convulsii, ischemie,
hemoragie subarahnoidiana; sindrom Reye

scaderi ale valorilor creatinkinazei:

reflecta reducerea masei musculare asociata cu


tumori in stadiu metastatic, corticoterapie, boala
alcoolica a ficatului, colagenoze

Masurarea activitatii enzimatice

In acest scop este necesara cunoasterea reactiei


chimice mediata de aceste enzime

Activitatea catalitic a enzimelor se poate evalua


n mod diferit: fie dup viteza de acumulare a
produilor reaciei enzimatice date, fie dup viteza
de epuizare (diminuare) a substratelor i
cofactorilor ntr-un interval de timp dat

Metode utilizate: metodele colorimetrice si


spectrofotometrice (cel mai frecvent folosite in
laboratorul clinic), fluorimetrice, manometrice,
conductimetrice, vscozimetrice, cromatografice,
electroforetice

Masurarea activitatii enzimatice


Metodele spectrofotometrice se bazeaza pe principiul
absorbiei luminii n domenii determinate ale spectrului
(ultraviolet, infrarosu, vizibil), de ctre substratele sau
produii de reacie, uneori de ctre cofactorii enzimelor
metodele colorimetrice detecteaza o schimbare de
culoare (domeniul vizibil): enzimele cliveaza un
substrat specific, produsul rezultat fiind colorat sau se
cupleaza cu un cromogen formand un complex colorat.

testele UV-se determina fotometric in lumina uv NADH


/NADPH produs sau consumat in timpul reactiilor,
concentratia
sa
fiind
direct,
respectiv
invers
proportionala
cu
concentratia
analitului
(ex.
determinarea ALT, AST).

Masurarea activitatii enzimatice

Unitatea de masura pentru activitatea enzimatica: U

1U=cantitatea de enzima care in conditii optime


transforma un mol de substrat /minut

pentru ser activitatea enzimatica se exprima in U/L

1 Katal reprezinta o alta unitate de masura pentru


activitatea
enzimatica:
activitatea
catalitica
echivalenta cu transformarea unui mol de
substrat/secunda
1U/L=16,67 nKat/L

(nKat=10 -9 mol/s)

Masurarea activitatii enzimatice

Masurarea activitatii enzimatice

Determinari enzimatice
prin tehnologii high
throughput translatarea in clinica
Tehnologia xMAP array
Luminex

Matrix metalo-proteinaze MMP

Matrix metalloproteinases, key enzymes in


tissue remodeling, are also associated with
tumor growth. Numerous studies show
modifications of MMPs activity in tumors;
especially changes of serum/plasma levels of
MMP2 and MMP9 in different carcinoma
(mammary, pulmonary, gastric). A good
correlation between MMP levels and tumor
evolution transforms these enzymes into dual
targets - of therapeutic and diagnosis interest.

Significant changes (and well correlated) are


visible in serum levels of some tissue
inhibitors of metalloproteinases (TIMP), mostly
for TIMP1 and TIMP2.

Serum MMP-2 levels


in
PDAC patients

Serum MMP-9 levels


in
PDAC patients

Conclusions

Tissue remodeling markers analysis


(MMP1, MMP2, MMP8, MMP9 and TIMP1)
shows a good correlation with positive
diagnosis of PDAC, yet they do not seem
to correlate with disease progression
(based on the existing amount of data).
Correlation analysis must be extended to
other descriptors of disease progression
and perhaps therapeutic approaches.

Protein kinazele

O protein kinaz este o


enzima
kinazica
care
modifica alte proteine prin
adaugarea gruprilor fosfat
(fosforilare). Fosforilarea
determina o schimbare
funcional a proteinei int
(substrat) prin schimbarea
activitii
enzimei,
localizare celulara sau
asocierea cu alte proteine.

Pn la 30% din proteinele umane pot fi modificate prin


activitatea kinazelor, aceastea fiind cunoscute deoarece
regleaza majoritatea cailor de semnalizare celulara transducia semnalului.

Our study revealed that treatment of glioblastoma


cell cultures from patient tumors with PI3K inhibitor
induced significant decrease in the expression level
of several key signaling molecules involved in cell
survival (p38), proliferation (ERK 1/2, IB, p38
MAP[mitogen-activated protein]-kinase, CREB),
differentiation (ERK 1/2, CREB), migration (ERK 1/2,
CREB), and apoptosis (ERK 1/2, P70S6K, IB,
JNK, CREB).