MVP LP 1

Sterilizarea

Definitia sterilitatii
-reprezinta absenta din interiorul sau de pe suprafata unor substraturi solide, lichide sau
gazoase a microorganismelor vii in forma vegetativa sau sporulata capabile de multiplicare;
notiunea nu exclude microorganismele moarte, toxinele bacteriene sau substante chimice
-sterilizarea constituie ansamblul tehnicilor si metodelor prin care sunt indepartate de pe
substraturi lichide, solide sau gazoase microorganismele vii capabile de multiplicare in forma
vegetativa sau sporulata

Cerintele unei sterilizari corecte

1. Curatirea riguroasa cu apa calda, detergenti si perii speciale a materialelor inainte de
sterilizare urmata de uscarea si ambalarea corecta a acestora
2. Se alege metoda de sterilizare cea mai rapida, mai ieftina si care sa conserve proprietatile
fizico chimice ale obiectului
3. Se alege agentul sterilizant care are proprietati bactericide in conditiile date (foc)
4. Se alege aparatul de sterilizare in functie de volumul de lucru al laboratorului, costuri si
performantele tehnice
5. Este necesara realizarea controlului sterilizarii si sterilitatii materialului
6. Pastrarea corespunzatoare a obiectelor sterilizate in dulapuri inchise etans si curate in
ambalajele sau containerele in care au fost sterilizate

Clasificarea metodelor de sterilizare

I. Sterilizarea prin caldura
II. Sterilizarea cu substante chimice
III. Sterilizarea cu radiatii ionizante
IV. Filtrarea sterilizanta
V. Alte metode

I. Sterilizarea prin caldura

-caldura omoara bacteriile prin urmatoarele mecanisme:
Prin accelerarea proceselor metabolice care conduce la insufienta acuta de oxigen
Prin denaturarea proteinelor care conduce la coagularea acestora
Carbonizarea

Page 1 of 6
MVP LP 1

A. Sterilizarea prin caldura uscata

a) Incalzirea la incandescenta
- bacteriile mor prin carbonizare
-se poate folosi pentru instrumente metalice care se pot utiliza imediat
Ex. Pense, spatule, mai ales anse bacteriologice (anse metalice)

Sterilizarea corecta a ansei bucla

-ansa se tine in mana dreapta ca pe un creion cu degetele 1, 2 si 3
-se trece bucla ansei prin flacara fiind mentinuta initial cateva sec la baza acesteia si apoi la
mijlocul ei pana la inrosirea completa a buclei
-apoi se efectueaza miscari de pendulare prin flacara pana la inrosirea completa a firului
-flacara trebuie sa fie albastra pentru ca arderea sa fie completa

b) sterilizarea in etuve termoreglabile

-exista multe variante dpdv al constructiei etuvelor = cuptor, dar similare ca si principiu de
functionare si componente
-cel mai utilizat este cuptorul Poupinel

Cuptorul Poupinel
Structura
-sunt aparate cilindrice sau paralepipedice cu pereti dubli intre care circula aer cald= agentul
sterilizant
-la baza aparatului se afla sursa de caldura care in general este curentul electric
-in interior se afla rafturi metalice pe care se aseaza materialele de sterilizare cu distante
intre ele si fata de margini
-in peretele superior se afla un termometru care se exteriorizeaza (jumate e inauntru care
masoara temperatura si jumatate afara ca sa ptoti citi temperatura
-contin sisteme de ventilare a aerului pt uniformizarea acestuia
-parametrii aparatului sunt 170-180 grade, iar durata de utilizare este de aprox.1 ora

Functionare
-se deschide usa
-se aseaza materialele pe rafturi
-se inchide usa
-se porneste sursa de caldura si cand se atinge temperatura dorita se mentine functionarea
timp de 1 ora
-se inchide sursa de caldura si se asteapta pana cand aparatul se raceste
-deschiderea bursca a usii poate duce la spargerea sticlariei datorita variatiei bruste de

Page 2 of 6
MVP LP 1

caldura

Materialele
-sticlaria de laborator
-instrumente metalice neascutie
-obiecte de portelan
-pulberile anorganice
-parafina si glicerina cu mai putin de 20% apa

Controlul sterilizarii in autoclav

-se controleaza parametrii de functionare
-se examineaza vata si hartia de ambalaj. Daca sunt galbui, sterilizarea a fost corecta. Daca
sunt arse, se elibereaza gudroane cu proprietati bactericide si se repeta sterilizarea

B. Caldura umeda
1. Sterilizarea in autoclav cu vapori de apa sub presiune

Descriere autoclav
-diferite variante de constructie, dar identice functional si structural
-reprezinta un cazan cilindric sau paralelipipedic cu perete exterior dublu de obicei din fonta
sau material foarte solid si un capac masiv, de obicei de bronz, inchis cu buloane (=suruburi
foarte mari de fier) si etanseizat cu garnituri de cauciuc si azbest
-in interior se amplaseaza cosuri metalice suprapuse in care se pun materialele de sterilizare
-in partea inferioara se afla sursa de caldura (electrica sau combustibil gazos)
-pe circumferinta aparatului se gasesc: robinetul pentru apa, palnia, tubul de nivel, robinetul
pentru vapori, manometrul (se citeste presiunea), supapa de siguranta
-parametri: temperatura 120 grade, presiune 1 atm, iar durata sterilizarii 20-30 min

Materialele care pot fi sterilizate

-mediile de cultura
-instrumentele metalice ascutite
-substante lichide (serul fiziologic steril, apa distilata)
-diverse substante inflamabile si substante uleioase
-materialul moale (textile, tifon)
-glicerina cu peste 20 % apa
-recipientele cu materiale contaminate

Page 3 of 6
MVP LP 1

Functionare
-se umple aparatul cu apa distilata prin palnie lasand robinetul pentru apa deschis si
urmarind tubul de nivel
-se inchide robinetul de apa
-se pun in aparat cosurile cu materiale
-se inchide capacul cu multa riguoare strangand buloanele 2 cate 2 pe diagonala
-se deschide robinetul de vapori si se porneste sursa de caldura
-incep sa iasa vapori, initial discontinuu si apoi in jet continuu
-atunci se inchid robinetul de vapori si se urmareste presiunea pe manometru
-cand se atinge presiunea dorita se regleaza sursa si se mentine aceasta presiune timp de 30
min
-apoi se inchide sursa de caldura
-se asteapta pana cand acul manometrului ajunge la 0, se desface atunci robinetul de vapori-
vaporii ies in jet, apoi discontinuu
-cand nu mai ies vapori, se poate deschide capacul

Controlul sterilizarii
1. Prin controlul parametrilor
2. Folosirea markerilor chimici
-sunt foile care contin pulberi din substante chimice cu punct de topire cunoscut si aflat
foarte aproape de temperatura autoclavului
Ex. Sulf sublimatul, punct de topire 119 grade, acid benzioc 121 grade
- se introduc printre materiale in autoclav la diferite niveluri si se scot la finalul sterilizarii
-daca si-au schimbat culoarea, sterilizarea a fost corecta
3. Markerii (martori) biologici
-sunt fiole de sticla in care se afla un mediu de cultura lichid ce contine spori foarte rezistenti
la caldura
-stearotest-contine spori de Bacillus stearotermophilus
-martorii se pun printre materiale la diferite nivele
-la finalul autoclavarii, lichidul din foila ramane violet si atunci martorii se introduc in baie de
apa la 56 grade se lasa 24 de ore. Daca martorii raman violet, sterilizarea a fost corecta. Daca
se ingalbenesc si se tulbura-sterilizarea a fost incorecta 56 de grade fiind temperatura de
germinare a acestor spori

II. Sterilizarea cu substante chimice

agentul sterilizant se alege in functie de:
-rapiditatea si intensitatea actiunii
-potentialul toxic asupra organismului

Page 4 of 6
MVP LP 1

-actiunile nocive fata de obiect (coroziunea)

a. Substante gazoase
-se folosesc la niv indistrial pentru obiecte de unica folosinta, pulberi, uleiuri, diverse
medicamente injectabile
-se utilizeaza incinte speciale in care se asigura anumite conditii de temperatura si umiditate
si o anumita perioada de timp
Ex.: oxidul de etilena, formadehida, bromura de metil

b. Substante lichide
-se folosesc pentru instrumentar metalic care poate fi imersat in lichid
-ex. Alcool etilic 70 grade, alcool propilic 45 grade, derivati halogenati, oxidanti, compusi
organici de mercur, compusi cuaternari de amoniu
-obiectele se imerseaza in recipientul cu lichid si se lasa 2, 3 ore inchide etans
-apoi se folosesc imediat, dar dupa spalarea cu ser fiziologic steril pentru indepartarea subst
chimice

III. Radiatiile ionizante

-foarte eficiente, dar scumpe
-se folosesc mai ales la niv industrial
-ex. Rad de Ca sau Cs, fasc de electroni accelerati
-se folosesc pentru obiecte de plastic de unica folosinta (sonde urinare sau endotraheale,
dializoare, seringi

IV. Filtrarea sterilizanta

-este o metoda prin care se indeparteaza bacteriile dintr-un lichid fara a le omora
-consta in trecerea lichidului prin filtre cu porozitati cunoscute care retin bacteria
-se utilizeaza pt l.b. (ser sau lichid de ascit)
-se folosesc in solutii injectabile

V. Alte metode
-ultrasunete cu peste 20 KHz cu actiuni bactericide
-fascicule laser
-cuptorul de microunde (pentru medii de cultura bogate in albumina)
-flambarea este considerata o metoda de protectie suplimentara folosita pentru obiecte din
sticla cu gura ingusta sau pipete sau lame care au fost deja sterilizate. Se mai poate folosi cu
succes la instrumente metalice

Page 5 of 6
MVP LP 1

Metode de reducere a incarcaturii microbiene

1. Pasteurizare
-consta in incalzirea la o anumita temp, o anumita perioada de timp

Joasa 60-65 grade, durata 30 minute

Medie 70-&5 grade, durata 10-20 min
Inalta 80-95 grade, 5-6 sec
-se foloseste la lapte, must, sucuri de fructe si legume

2. Ultrapasteurizare
-consta in injectarea brusca a unor vapori supraincalziti la 150 grade intr-un lichid aflat in
curgere turbulenta
-se foloseste la lapte

3. Tyndalizare
-consta in incalzirea mai multe zile la rand la temp de 50-60 grade
-se practica la conservele casnice / mediile bogate in albumina

4. Fierbere
-poate fi eficienta in urmatoarele conditii:
sa fie cu apa distilata intr-un vas special, adauga bicarbonat de sodiu sau borax 2% pt
cresterea punctului de fierbere a apaei, se adauga nitrit de sodiu 1% anticoroziv, sa durere
minim 30 min

5. Lampa bactericida
-este lampa cu UV
-se foloseste pentru aerul incaperii
-trebuie sa nu fie nimeni de fata
-minim 30 minute
-atentie, poate produce arsuri si orbire (cecitate)

Page 6 of 6