Actiunea factorilor fizici si chimici asupra bacteriilor

Obiective
Definirea termenilor Actiunea agentilor fizici: Temperatura Caldura. Caldura umeda. Caldura uscata. Controlul sterilizarii prin caldura Frigul. Refrigerarea. Congelarea. Liofilizarea Radiatiile Ultravioletele Radiatiile ionizante. Ultrasunetele. Presiunea mecanica Presiunea osmotica. Agentii chimici Substante antiseptice, substante dezinfectante. Substante cu actiune asupra membranei citoplasmice: fenolul si derivatii fenolici, detergentii Substante care denatureaza proteinele: acizii. bazele. alcoolii. Substante care inhiba enzimele: agentii alchilanti, metalele grele si sarurile acestora Substantele oxidante

Definitii
Septic - contaminat sau infectat cu microorganisme (viabile, in general patogene) Aseptic - lipsit de microorganisme (patogene sau nepatogene) viabile steril Asepsie - ansamblul de metode prin care se previne contaminarea cu microorganisme sau prin care se mentine sterilitatea tesuturilor, mediilor de cultura, medicamentelor injectabile etc. Antisepsie - nlaturarea sau distrugerea formelor vegetative microbiene de pe substraturi vii ex. tegumente, mucoase sau din plagi ; cu ajutorul substantelor antiseptice netoxice pentru tegument ex. alcool etilic 70, tinctur a de iod 5%, KMnO4 0,1%, detergen_i cationici etc. Contaminare microbiana - este un termen utilizat n institutiile sanitare care se refera, n general, la contactul cu microorganisme conditionat patogene sau patogene (capabile sa produca infectii sau boli infec_ioase). deosebita de contaminarea chimica si cea radioactiva

 Decontaminare orice procedeu utilizat pentru ndepartarea si/sau omorrea microorganismelor. acelasi termen se aplica si pentru ndepartarea sau neutralizarea substantelor chimice periculoase si a materialelor radioactive.
Curatenie - este metoda de decontaminare care asigura ndepartarea microorganismelor de pe suprafete, obiecte sau tegumente, odata cu ndepartarea prafului si a substantelor organice. Aplicarea corecta a metodelor de curatenie a suprafetelor, obiectelor si echipamentelor poate realiza o decontaminare de 9598 %, foarte apropiata de cea obtinuta prin dezinfectie. Dezinfectie - este procesul prin care sunt distruse cele mai multe sau toate microorganismele patogene (n proportie de 99,99%) cu exceptia sporilor bacterieni, de pe obiectele din mediul inert. Sterilizarea - este operatiunea prin care sunt eliminate sau omorte microorganismele, att cele aflate n stare vegetativa ct si cele sub forma de spori, de pe obiectele inerte contaminate, rezultatul acestei operatiuni fiind starea de sterilitate care, conform EN 556, este starea unui produs liber de microorganisme viabile

Antimicrobian - un agent care omoara microorganismele sau le suprima (inhiba reversibil) cresterea si multiplicarea efect bactericid - distrugerea microorganismelor efect bacteriostatic - inhibarea reversibila a multiplicarii microorganismelor Antiseptic o substanta care inhiba cresterea si dezvoltarea microorganismelor fara sa le omoare neaparat. Antisepticele se aplica usual pe suprafata corpului. Biocid un termen general care se aplica oricarui agent care ucide organismele Germicid chimic o substanta chimica sau un amestec de substante chimice utilizat pentru omorrea microorganismelor. Microbicid o substanta chimica sau un amestec de substante chimice care omoara microorganismele. Acest termen se utilizeaza adesea n loc de biocid, germicid, sau antimicrobian. Sporocid - o substanta chimica sau un amestec de substante chimice care omoara microorganismele si sporii. ACTIUNEA FACTORILOR FIZICI Temperatura Psihrofile - optim la 20C dar si sub aceasta temperatura Mezofile - optim ntre 20-40C. Sunt cele patogene deoarece se nmultesc la temperatura organismului Termofile, care se nmultesc optim la peste 45C Temperaturile ridicate distrug bacteriile, aplicatia practica a acestui aspect fiind sterilizarea Celulele bogate in apa sunt mai sensibile (formele vegetative) 2

Metode de sterilizare prin mijloace fizice Caldura uscata Caldura umeda Filtrarea Radiatii CALDURA USCATA Incinerarea materiale contaminate, de unica folosinta, deseuri medicale Incalzirea la incandescenta (la rosu) - firul ansei de platina Flambarea gatul recipientelor, manerul ansei Sterilizarea cu aer cald - Etuva (Poupinel) 180 - 1 ora sau 160C - 2 ore DA - obiecte de sticla, portelan - instrumentar metalic (atentie la decalire) - pulberi inerte si termostabile, uleiuri anhidre

NU

- solutiile apoase - obiectele de plastic, cauciuc, vata, bumbac, fibra sintetica - materiale termolabile - materiale contaminate Controlul sterilizarii: indicatori fizici (temp, timp), chimici (zaharoza), biologici (spori de Bacillus subtilis) CALDURA UMEDA MAI EFICIENTA DECAT CALDURA USCATA (aer cald) AUTOCLAVAREA (ABUR SUB PRESIUNE) Relatie presiune - temperatura 0,5 atm 115 oC 1 atm 121 oC 2 atm 145 oC DA - obiecte de sticla, instrumentar metalic - medii de cultura - obiectele de plastic, cauciuc, vata, bumbac, fibra sintetica - materiale termolabile - materiale contaminate Controlul sterilizarii: indicatori fizici (presiune, temp, timp), chimici (benzi indicatoare si integratori), biologici (spori de Bacillus stearothermophilus) TINDALIZAREA (Pasteurizare repetata) medii si solutii 56-100C timp de 30-60 minute, 3 pna la 8 zile succesiv PASTEURIZAREA medii de cultura, lapte (joasa, medie, inalta) FIERBEREA NU ESTE O METODA EFICACE DE STERILIZARE Frigul

temperaturile moderat scazute, de +4oC din frigidere, nu distrug bacteriile dar opresc nmultirea lor prelungindu-le viabilitatea. Tulpini criofile!!! nghetul la temperaturi nu prea mici fata de 0oC determina cristalizarea apei ce determina leziunea structurilor membranare a celulelor bacteriene. Conservarea prin congelare. Temperatura optima este cea realizata de CO2 (-78C) sau de azotul lichid (- 180C). Liofilizarea deshidratare in vid, la temperaturi scazute Durata mentinerii sterilitatii 24 h - materialele ambalate n cutii metalice perforate sau casolete cu colier , mentinute inchise 2 luni - n pungi de hrtie plastic sudate Materiale supuse sterilizarii 1. Materiale care se sterilizeaza cu aer cald - sticlaria si instrumentarul care nu suporta sterilizarea cu aburi sub presiune (otel neinoxidabil: cromat). ATENTIE ! Sterilizarea cu aer cald este contraindicata pentru materiale textile, lichide, cauciuc, lemn, si plastic care nu rezista la temperatura de 180oC (combustie sau deteriorarea materialelor). 2. Materiale care se sterilizeaza cu abur sub presiune - deseuri infectioase lichide si solide, materiale contaminate cu agenti biologici. Dupa sterilizare acestea fie se elimina ca deseuri menajere, fie recipientele si instrumentarul care nu sunt de unica folosinta se spala si se resterilizeaza. - medii de cultura, solutii - materiale curate (recipiente si instrumentar de sticla si metal inox, materiale din cauciuc, plastic si textile) ATENTIE ! Daca se utilizeaza un singur autoclav se sterilizeaza in cilcuri separate, intai materialele curate si in ciclul urmator deseurile contaminate. Evaluarea eficacitatii sterilizarii Indicatori fizici: temp., durata, presiunea Indicatori chimici: benzi impregnate, fiole cu s. chimice, integratori Indicatori biologici: spori Bacillus stearothermophilus (autoclav) Bacillus subtilis (Poupinel) Bacillus pumilis (radiatii gamma) FILTRARE SOLUTII, MEDII LICHIDE filtre clasice (portelan, sticla poroasa, azbest impregnat cu caolin, pamnt de infuzori Membrane filtrante Millipore, Sartorius Capsule filtrante AER - Filtre HEPA, ULPA RADIATII

 IONIZANTE GAMA, X SERINGI, DISPOZITIVE IMPLANTABILE, MEDII DE CULTURA UV SUPRAFETE, AER Ultrasunetele nu sunt eficiente pentru sterilizare In cercetare, biotehnologie Substante chimice (biocide) Antisepticele pot fi utilizate pe tegumente si mucoase. Dezinfectantele pot fi utilizate numai pe suprafete si structuri care nu sunt vii. concentratia durata de timp termenul de garantie Clasificare Substante cu actiune asupra membranei citoplasmice: fenolul si derivatii fenolici, detergentii (anionici, cationici, amfolitici, neionici); indice fenolic Substante care denatureaza proteinele: acizii. bazele. Alcoolii (70), actiune bactericida Substante care inhiba enzimele: agentii alchilanti, metalele grele (saruri de Hg - merthiolat si sarurile acestora, saruri de Ag, Ag coloidal, formaldehida, glutaraldehida, oxid de etilen Substantele oxidante Cl, I, Br si derivatii, hipermanganat de K 1%, peroxid de Hidrogen 3% Substante care altereaza acizii nucleici (colorantii bazici ex. violet de gentiana, derivati de acridina rivanol) Hipocloritii solutiile de hipoclorit se prepara periodic (se inactiveaza dupa mai mult de 24 ore), concentratia n clor activ este diferita n functie de scopul urmarit (ex. 2.500 ppm clor activ pentru dezinfectarea pipetelor contaminate); au efect dezinfectant asupra bacteriilor n forma vegetativa, sporilor bacterieni, fungilor (100 ppm n o ora), virusurilor (200 ppm n 10 minute); efectul este diminuat considerabil n prezenta substantelor organice (n special proteine), maselor plastice, detergentilor. Derivatii fenolici din cauza toxicitatii, potentialului carcinogenetic si corozivitatii, fenolii nu se folosesc ca atare, ci sub forma derivatilor fenolici; solutiile fenolice se prepara periodic (dupa cel mult 24 ore); concentratia poate fi diferita n functie de scopul urmarit (de obicei este de 2-5%); au efect dezinfectant asupra bacteriilor n forma vegetativa, fungilor, unor virusuri (ex. HIV este inactivat de solutia 0,5%); 5

 efectul este diminuat pe suprafetele de cauciuc, lemn sau material plastic. Glutaraldehida cel mai frecvent este utilizata concentratia de 2%, la un pH alcalin; are efect dezinfectant asupra bacteriilor n formavegetativa (n cazul mycobacteriilor este necesar un timp mai ai lung de expunere), fungilor, virusurilor; datorita faptului ca nu corodeaza metalele (asa cum se ntmpla n cazul substantelor prezentate mai sus) se poate folosi si la dezinfectarea suprafetelor metalice; nu poate fi folosita pentru suprafete, datorita vaporilor iritanti si timpului mare de expunere; ideala pentru dezinfectarea echipamentelor contaminate ce pot fi imersate o perioada mai mare de timp n containere mentinute nchise Iodoforii sunt substante care complexeaza iodul pe care l elibereaza n solutii apoase; au efect dezinfectant asupra bacteriilor n forma vegetativa, unor spori bacterieni, fungilor, unor virusuri (ex. virusuri cu nvelis lipidic); sunt inactivati de substante organice (n special proteice), mase plastice, detergenti; pot fi utilizati pentru dezinfectia suprafetelor, dezinfectia pipetelor contaminate