Metode de laborator – Determinarea pH-ului şi a concentraţiei bicarbonatului

sangvin

Metodele moderene folosesc un microechipament care determină o serie de parametri

vitali corespunzători echilibrului acido-bazic (presiunile parţiale ale gazelor respiratorii,
pH sangvin, concentraţia bicarbonatului, excesul de baze). Aceste determinări, însă într-
un număr mai restrâns şi cu o rapiditate mult mai mică împreună cu aparatura specială
asociata, poartă numele de microechipament Astrup (după numele biochimistului daney
P. Astrup care a pus bazele electrochimiei aplicate în măsurarea gayelor din sînge).
Dintre acestea în tehnica de faţă este prezentată determinarea pH-ului sangvin şi a
concentraţiei bicarbonatului actual (rezerva alcalină) folosind un card special în
construcţia căruia intră nişte senzori sensibili la oxigen, dioxid de carbon, ioni hidroniu, o
serie de metaboliti, cationi, glucoză, şi lactat. Toate determinările se efectuează din sânge
integral recoltat pe heparină cu ajutorul unor seringi speciale care nu permit contactul
probei cu mediul ambiant şi astfel este evitată pierderea gazelor respiratorii sau
dizolvarea în probă a gazelor atmosferice.

pH ul sagvin
pH este măsurat prin potenţiometrie folosind un microelectrod cu membrană hidrogen
selectivă cu un ionofor reprezentat de tridodecilamină.. Concentraţia ionilor de hidrogen
se obţine din măsurarea potenţialului şi folosind ecuaţia lui Nernst. În cardul de analiză
există şi un microelectrod de referinţă şi o soluţie tampon cu pH 7.35. In fond,
determinarea pH-ului sangvin se face ca orice determinare de pH cu menţiunea că aici
avem de-a face cu nişte microelectrozi inseraţi într-un card special (Fig.1.). Cardul se
inserează într-un cititor conectat la o imprimantă.

Fig. 1. Cardul de analiză de tip Astrup

Determinarea concentraţiei bicarbonatului actual (după Ghergariu şi colab., 1999)

Echipamentul folosit calculează concentraţia bicarbonatului pe baza pCO2 şi a pH-ului
măsurat prin tehnica mai sus menţionată. Calcularea concentraţiei bicarbonatului se
bazează pe ecuaţia Henderson-Hasselbalch care arată dependenţa dintre pH, pCO2 şi
HCO3-(Fig. 2.).

Fig. 2. Ecuaţia Henderson-Hasselbalch

Vlad Al. Toma, M2, Chimie criminalistică
Relațiile de mai sus provin din expresia constantei de echilibru la disocierea unui acid:
K = [H+][A-] / [HA]
[H+] = K[HA] / [A-] /logaritmare
-lg[H+] = -lgK[HA]/[A-]

pH pK
lg cHCO3- = pH + lg pCO2 – 7.608
O altă metodă des folosită în laboratoare clinice care nu au în dotare un astfel de
echipament foarte costisitor, este dozarea rezervei alcaline, adică titrarea acido-bazică a
bicarbonatului din ser sau plasmă.
Principiu: Bicarbonatul din ser este descompus cu acid azotic diluat, iar excesul
de acid azotic se titrează în prezenţă de roşu fenol, cu hidroxid de sodiu.
Reactivi: Acid azotic 0,1n cu factorul 1, hidroxid de sodiu 0,1n, roşu fenol 60
mg/100 mL etanol 60%.
Tehnica: Într-un Erlenmeyer mic se pipetează 1 mL ser nehemolizat şi 0,7 mL
acid azotic 0,1n. Se agită 2 minute pentru îndepărtarea dioxidului de carbon rezultat din
descompunerea bicarbonaţilor. Se adaugă acum 4 picături soluţie de roşu fenol şi se
titrează până la primul viraj ţiclam care durează cel puţin 30 de secunde.
Calcularea rezultatului:
Bicarbonatul actual mEq/L = (0.7-n*f) *100
(unde n este numărul de mL NaOH folosiţi la titrare iar f este factorul soluţiei de hidroxid
de sodiu stabilit faţă de acidul azotic).

Mult mai simplu şi mai practic este modul de lucru următor: La titrarea probei pipeta se
umple până la gradaţia 0.7 cu NaOH 0.1n. După terminarea titrării se citeşte de pe pipetă
numărul de mL rămaşi. Acum calculul se face astfel:
Bicarbonatul actual mEq/L =n*100
(unde n reprezintă numărul de mL de hidroxid de sodiu 0,1n rămaşi în pipetă)
În acest caz trebuie ca 1 mL de acid azotic să corespundă la 1 mL hidroxid de sodiu.

Referințe:
Ghergariu, S., Pop, A., Kadar, L., Spânu, M., Manual de laborator clinic veterinar, 1999,
Editura All, Cluj-Napoca.
Epoc system manual, editia 2014, Epoc Blood Analyses, capitolele 11-14.

Vlad Al. Toma, M2, Chimie criminalistică