PENICILINE DE SEMISINTEZA

Deoarece majoritatea penicilinelor de biosinteza sunt inactivate usor de penicilinaza, au labilitate termica mare si nu actioneaza asupra microorganismelor gram-negative, s-a pus problema obtinerii unor produse ce nu prezinta aceste dezavantaje. Penicilinele ideale ar trebui sa prezinte: spectru antibacterian larg stabilitate in mediu acid stabilitate la penicilinaza. Produse ideale nu s-au obtinut, dar dupa obtinerea ac. 6aminopenicilanic (6 AP) au fost obtinute peniciline de semisinteza, care satisfac doua din conditiile impuse. Numarul mare de Peniciline de seminteza, cunoscute pana in prezent, a impus clasificarea lor care se poate face: a) dupa structura chimica S NH N O CH3 CH3

96

C O

98

metil monosubstituite metil disubstituite metil trisubstituite , - nesaturate aril, heterociclic , cicloalchilpeniciline b) dupa rezistenta in mediu acid si la penicilinaza penicilinele de semisinteza se clasifica in patru grupe: rezistente la acizi rezistente la penicilinaza rezistente la ac. si penicilinaza cu spectru larg Caracteristicile principalelor peniciline de semisinteza

S R NH N O Denumire

CH3 CH3

Structura radicalului R

Stabilitate la pH + + + +

Rezistente la Activ. asupra germ. penicilinaza + + gram negativi + + -

Propicilinia (Brocilin) Ampicilina Amoxicilina (Amoxil) Oxacilina

C6H5

CH C=O C2H5

C6H5

CH C=O NH2

HO

CH Co NH2

C6H5

25

C N

24

C=O

CH3

Sulfocilin Fenxacilina (Fenxapen)

C6H5

CH C=OSO3H

+ +

+ -

Cl C N F O CH3 C C=O-

Meticilina

CH3

C=OO CH3

Metode de obtinere a penicilinelor de semisinteza Metodologia genarala se bazeaza pe acilarea acidului 6aminopenicilianic (ac6AP) cu a) cloruri acide metoda cea mai simpla; se realizeaza in prezenta de NaHCO3 si a trietilaminei, in solv. org,. mediu apos sau amestec apaacetona. PNH2+ClCOR
N(C2H5)2 NaHCO3

P-NHCOR+NaCl+H2O+CO2

In locul clorurii acide se pot utiliza bromuri acide, anhidride ciclice sau aromatice. 2

b) arihidride mixte se foloseste in cazul in care clorura acida se obtine greu sau nu se poate obtine. Anh. mixte se obtin din acizi carboxilici tratati cu clorocarbonat de Et sau iBu, in prezenta aminelor tertiare: RCOOH + ClCO-O-C2H5
+P-NH2 -C2H5-OH -CO2

R-COO-CO- C2H5

P-NH-CO-R c) acizi carboxilici in doua trepte: N

74

in prezenta N, N diciclohexilcarbodiimidei

C6H11 + C6H11 HO C R O
80 86

N C

C6H11 O Co R + H2N P

C N

NH C6H11 NH C6H11

P NH Co R

104

NH C6H11 Costul si puritatea penicilinelor de semisinteza sunt determinate in mare parte de calitatea acidului 6aminopenicilanic. Pentru obtinerea A6AP se cunosc doua procedee: 1. hidroliza enzimatica a benzilpenicilinei si 2. hidroliza chimica a benzilpenicilinei. Hidroliza cu enzime imobilizate pare a fi cel mai avantajos procedeu aplicarea practica este conditionata de costul enzimei, de cheltuielile tehnologiei de imobilizare, de timpul de injumatatire a activitatii enzimei, de randamentul, si calitatea acidului 6AP obtinut. Hidroliza enzimatica se realizeaza fie cu masa microbiana obtinuta de la culturile de Escheridria coli sau Nocardia, fie cu enzima de penicilnamidaza imobilizata pe diferite suporturi. Hidroliza cu Escherichia coli se realizeaza in etape: I. obtinerea masei microbiene de E. coli prin fermentatii biochimice si separarea de lichidul de cultura. II. scindarea enzimatica a penicilinei cu E. coli si separarea solutiei apoase de A6AP. III. conc. sol. apoase, cristalizare si purificare.

1. Et. de biosinteza a masei microbiene se realizeaza prin fermentatie in trei etape (inoculator, intermediar, regim). Faza Temp.
0

pH

Presiune, ata

Aeratie, l aer/l med,min 1 1 1-1,2

Agitare, rot/min 210 140 110

Conc. masei, mg/l 3,05 3,1 4,1

Timp, h

C 8 8 8

inoculator intermediar regim

301 301 301

1,8 1,5 1,5

18-20 18-20 20

Masa microbiana separata prin centrifugare, sub forma de crema este suspendata in sol. apoasa de penicilina. Scindarea penicilinei are loc la 3035C timp de 4 h, dupa care masa microbiana se separa prin centrifugare si se recircula. Din solutia apoasa se extrage in AcBu la pH 22,5 penicilina nereactionata, iar dupa conc. stratului apos cristalizeaza ac. 6AP. Procedeele mai noi utilizeaza enzima penicilininamidaza imobilizata prin legaturi covalente pe: dextran, polimetacrilat, triacetat de celuloza, prin includere in gel de poliacrilamide, absorbtie pe bentonite Tehnologia penicilinelor de semisinteza Marea majoritate a penicilinelor de semisinteza se obtin printr-o tehnologie comuna, diferentele care apar se refera la componenta de acilare si solventul utilizat in faza de obtinere a ac. 6AP. Tehnologia cuprinde trei etape: obtinerea clorurilor acide condensare cu ac. 6AP separarea, cristalizarea si purificarea penicilinei de semisinteza. Clorurarea ac. org. se realizeaza fie in solv. (C6H6, C2H4Cl.2 (C2H5)O2 CHCl.3) fie in absenta lor, folosind drept agent de clorurare SOCl2, POCl3 sau PCl5. Se prefera clorura de tionil (SOCl.2) deoarece produsii secundari, SO2 si HCl, fiind gaze se elimina usor. Reactia cu SOCl2 se realizeaza fie in prezenta acceptorilor de HCl fie in absenta lor. In prezenta acceptorilor de HCl, reactia are un mecanism SN2 RCOOH+SOCl2 +Py R-COOSOCl+[PyH+]Cl-

C O

107

OSOCl

+Cl.

C O

111

S O

Cl

R C Cl

120

O SO2 + Cl-

iar in absenta bazei reactia decurge dupa un mecanism SN1: O R COOH +SOCl2 -HCl R C
128 131

C SO R

O C
133

Cl

136

+SO2

Cl

Indiferent de procedeul de clorurare adoptat, procesele se realizeaza in instalatii standard, in care se obtin toate penicilinele si cefalosporinele de semisinteza.

SOCl2

SOLVENT

ACETONA/CH2Cl2

N(C2H5)3

APA

TOLUEN

10

11

4
RCOOH
NaHCO3 Ac 6AP

6 1 7

13

5
APA CH3COOK

12

14

16

15

1. reactor clorurare 2. vas masurare SOCl2 3. vas masurare solv. 4. condensator 5. rezervor SOCl2 6. rezervor clorura acida

7. reactor condensare 8. vas masurare RCOCl 9. vas masurare (C2H5)3N 10.vas masurare apa 11. vas masurare AcBu

12. decantor 13. turn uscare 14. vas pp 15. filtru nuce 16. uscator

Pentru obtinerea clorurii acide se incarca in reactor acidul organic apoi se dozeaza SOCl2 si solventul, dupa care amestecul se incalzeste la temperatura de reflux a solv. sau a SOCl 2. Durata etapei de clorurare depinde de modul de realizare: in solv. org. 2,53 ore in exces de SOCl2: 1,21,5 ore. Dupa terminarea reactiei se distila solventul si SOCl2, la presiune normala, apoi sub vid se distila clorura acida. Daca se urmareste obtinerea clorurii unui aminoacid, atunci are loc intai o clorhidratare a gr. NH2, dupa care se realizeaza clorurarea in solvent in sistemul eterogen LS, iar clorura acida se separa prin filtrare. In toate cazurile clorura acida se dizolva in acetona sau diclormetan si trece la condensare cu ac. 6AP. Condensarea are loc in reactor in care se introduce solvent adecvat si ac. 6AP, se agita pana la omogenizare apoi se adauga N(C2H5)3 pentru protejarea gr. COOH din ac. 6AP si NaHCO3 pentru legarea HCl degajat din reactie. Materia obtinuta se raceste la 15C, dupa care se adauga in portiuni solide de clorura acida dizolvata in acetona. Condensarea are loc la t=15C timp de 1, 5 ore, iar perfectarea reactiei la 020C timp de 0,50,6 ore (3035). Dupa terminarea reactiei, masa obtinuta se raceste si se aciduleaza la pH = 22,5 pentru eliberarea penicilinei acid care se extrage cu AcBu. Stratul asig. ce contine Penicilina, se readuce in reactorul de condensare, se spala cu apa si se supune din nou sep. fazelor. Faza organica se usuca pe Na2SO4 anh., dupa care se trateaza cu CH3COONa sau K pentru separare Penicilinei , care se filtreaza, se usuca cu aer cald, la 5060C.

CEFALOSPORINE Cefalosporina este un antibiotic produs de Cephalosporus acremonium, inrudit structural cu penicilina, rezistenta in mediu acid, activ asupra gerrmenilor gram-pozitivi si gram-negativi. Analogia structurala dintre penicilina si cefalosporina C a sugerat ideea obtinerii de cefalosporine de semisinteza.
S R NH N O CH3 CH3 OOC + H3N HC O COOH S (CH2)3 NH N CH2OCOCH3

ciclu tiazolidinic

ciclu dihidrotiazinic

Cefalosporinele sunt antibiotice lactamice, ce contin in structura lor un ciclu lactamic, destul de labil la atac nucleofil sau electrofil, precum si un ciclu dihidrotiazinic substituit. In functie de natura substituentilor din catena laterala si ciclul dihidrotiazinic, variaza si spectrul antibacterian. Dintre cefalosporinele cunoscute, act. biologica de seama au numai derivatii de semisinteza si sinteza. Cefalosporinele de semisinteza sunt substante albe, cu absorbtie cracteristica. in UV la 260 nm, sensibili la atac nucleofil cu desfacerea ciclului -lactamic si apoi degradari succesive in pozitiile 3,4 si 7. Sunt relativ stabili in mediu acid, cand este afectat numai substituentul. din pozitia 3. Structura generala: S R1 NH N O COOH CH2 R2

Exemple: Cefalexin

R1

R2

CH Co NH2 Cefapirin

-H

CH2 Co

-OCOCH3

Ceparin

CH2 Co S NH2

+ N

Cefazolin N N N CH2 Co N CH S N S N CH3

Cefacetil
N C CH2 Co -OCOCH3

Cefaloglicina
CH Co NH2 -OCOCH3

Tehnologia obtinerii cefalosporinelor S-au studiat urmatoarele procedee: a) procedeul de biosinteza se foloseste. numai pentru obtinerea Cefalosporiniei C prin cultivarea pe un mediu adecvat a unui mutant de Cephalosporum acremonium. Tehnologia este similara penicilinei. Procedeul prezinta importanta deoarece ofera sursa de Cefalosporina C, din 9

care prin hidroliza se obtine ac. 7 aminocefalosporanic (ac. 7 ACA) care prin acilare conduce la cefalosporine de semisinteza. b) procedeul de transformare a penicilinelor in cefalosporine este putin industrializata deocamdata datorita randamentelor scazute, costul proc.esului fiind ridicat. c) procedee de sinteza ch. sinteza pleaca de la tiazolidina substituita, care sufera o serie de transformari (condensare, oxidare, deshidratare, reducere, aductare, acilare, reducere, hidroliza). Sinteza chimica confirma structura determinata prin degradari. Prin sinteza chimica a fost posibila obtinerea unor structuri neaccesibile prin alte metode.
H3C H 3C S H COOH

HN

d) procedeul de semisinteza constand din acilarea acidului 7 aminocefalosporanic (7 ACA) constituie metoda cea mai accesibila. Tehnologia este similara obtinerii penicilinelor de semisinteza. Acidul 7ACA se obtine prin scinderea cefalosporinei C cu ac. acetic anhidru, cu ac. azotos in mediu de acid acetic apa si prin intermediul iminoesterilor. Ultimul procedeu este aplicat industrial. Scindarea enzimatica a cefalosporinei nu ofera deocamdata posibilitatea industrializarii datorita randamentelor foarte mici si a tehnnologiei foarte scumpe.

10

S
OOC O NH3

NH N O COOH
1)ACILARE 2)ESTERIFICARE

CH2OCOCH3

S
R1 OOC O NH R2

NH N O COOH
PCl5,Py

CH2OCOCH3

S
R1 OOC

NH Cl
NH R2

N O COOH
+R3-OH

CH2OCOCH3

S
R1 OOC

NH R3 NH
R2

N O COOH S
+H-OH R1 + R2 OOC NH OR3

CH2OCOCH3 O

NH2 N O COOH CH2OCOCH3

11