Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
PARTEA A V-A - mp
start
- in:
METODA CROMATOGRAFICA DE ANALIZL A steri
CONSIDERATII TEORETICE
I
Rodica Sirbu, Ticula Negreanu_ptrjol,
Iuliana Stoicesc u, -Co}*
B ogdan $tefan Negreinu_pirj ol,
Elena Lupu
"r,
METODE $I TEHNICI DE ANALIZI FIZICO-CHIMIC,,{
A COM OR FAR]UTACEUTICI
unde L este
Fracliunea din timpul de refinere in care o moleculd se gdsegte in faza mobil5 sc
componenti s
noteazi.cu R qi reprezinti probabilitatea ca molecula s[ se gdseasc6 infaza mobill, respectiv
fracliunea din totalul moleculelor care se afld in faza mobil[. I - R reprezinti resd se lege mirir
moleculelor care se gdsesc infaza stalionarS. La echilibru reiese c5: precum gi m
no{iune cupri
R \i il
gi selectiviut
c,\t,_R=\* +K\i=-l=-l-.R=urn=t{,ot}"
l-R-c,v* l+K! l+k I+K-3
!- Anali
1t IJ ee include m
YH 'u (12.1)
din prob6. in
unde Vr V, reprezintd volumul fazei mobile, respectiv stalionare iar k : KV./VM
gi mrmlrmare (
poarti denuu
raportul dintre cantitatea totali de substan![ aflatd" in fazi stalionard qi cantitatea total6
substanld aflatd ?n fazamoblld gi se numeqte factor de capacitate.
fua mobild -
h coloana en
Pentru o specie oarecare A afTati in amestec, factorul de capacitate knva fi: Faza
interstifiile G
_ k, _ K, _ tu_1u3 - f*
Ko\r. to eelorn co T
, -t* ^. e introdue
---a ll-M ti kA I{.u turo, - t* (t2.2) ifiroducere a
h incepunrl ,
de talere N este o misur6 a eficienlei intregului supotl al coloanei. O alt5 masura a e * lichide t(
coloanei, folositd curent in cromatografie este datd de inillimea unui taler H (i csE un gaz:
echivalenti a unui taler teoretic): tEe terya
:7tto12; H : LA{: ti matografi
N: [Vniov12 o'lL;H: tWzna ; (12.3bt
ftc5reia dir
R:2tp61-2tqa;/Wa +Ws in cadrul
296
Rodica Strbu, Ticula Negreanu-Pirj ol,
Iuliana Stoicescu, Bogdan $tefan Negreanu-Hrjol, Carmen Elena Lupu
297
Rodica Sirbu, Ticula Negreanu-Ptriol,
Iuliana Stoicescu, Bogdan $tefan Negreanu-Piriol, Carmen Elena Lupa
polimer poros. Pe aceste centre are loc o reacfie ionici (numitl reaclie de sfi coafe
ionic) inke substanla din solulie (electrolit sau neelectrolit) qi funcliunea t Cr'R
chimic de suportul solid,. 5i ],a
Crontatografia de excluziune stericd, se desfiqoardpe faze stalionare poroase dn xh-:
Frza qs,.
porozitatea seleclionatd astfel incAt sI corespundi dimensiunilor moleculelor
separdrii. O parte dintre molecule intrd prin pori, reugind si interacliofleze cil fril:*
solid, prin for{e de adsorb{ie foarte slabe, iar altele sunt excluse ryE',@
practice nerelinute odatd cu faza moblld. Se obline astfel un gen de siti h Etcis
molecular, sepalarea moleculelor fbcAndu-se funclie de dimensiune. Tehnica &ln
intAlneqte qi sub denumirea defiltrare prin geluri salr permealie prin geluri
natura apoasd sau organicd afazei mobile.
Cromatografia lichid-lichid (LLC), in care faza stalionari este a fazit
nemiscibilS cu cea mobili qi imobilizatd pe un supolt solid, intr-o colod- l,;
suportul solid este, cel pulin principial, inert fa!6 de componentele din prob6- s:fl
rpq*
simpla impregnare a unui suport poros cu un lichid permitea spdlarea acestuia
I
s-a recurs lalegarcape cale chimicl a acestora de suport, oblin6ndu-se ni,ae
totul specifice - faze stalionare legate chirnic. Molecule organice de di ri
sunt, prin sirfiezd,legate de suportul poros, fenomenul de pierdere prir s
cdtre faza mobild, fiind practic anulat. Aceasta tehnicd este cea mai ailI
devenind aproape sinonimi cu cromatografia de lichide.
Cromatografia pe coloand deschisd sa:u cromatografia planara (PC), SE
grup de tehnici inrudite cu cele din LC, care au toate in comun faptul cd fa.z
m
circuld printr-un material poros dispus intr-un plan 9i formAnd un strai relatir
thr
dar de compozilie asemindtoare cu cele men{ionate la cromatografia pe rr
disting:
crornatogafia pe h6rtie, tehnica in care faza stalionar6 este o hartie
celulozd (ini1ial o hartie de frltm) care este i,rjgata- de solvent prin forle
tehnicd, azi, cu valenle istorice.
Cromatografia pe strat subyire (TLC), in care faza sta\ionari pulvemlenri c
de suportul plan (sticli, aluminiu, material plastic) cu un liant, formi:xi
sublire (0.1- 0.5mm) irigat prin capilaritate.
Cromatografia pe strat sublire de inaltd performanld (HPTLC), in care fa-r:
are granulalie foarte finb cu rezttltate in eficientizarea separdriior der ;
viteza acestora.
298
Rodica Sirbu, Ticula Negrean u-Ptri ol'
Iuliona Sloicescu, Bogdan $tefan Negreanu'Pir.iol, Carmen Elena Lupu
Toate acestea se caracteizeazd prin simplitate, accesibilitate ;i prel de cost scdzut dar 9i
prin perfonn ante ceva mai slabe decAt cromatografia de lichide pe coloani Ia presiune
ridicatd (HPLC), varianta modernd a l,C.
in mod analog, in cazul croruatografiei ele gaze (sau cromatogafia in fazd gazoasd),
denurnitd prescuriat CG se disting urmitoarele teh:dci:
* Cronrctografia gaz-lichid in care faza stalionard este un lichid nevolatil imobilizat pe
un supofi solid. Aici supofful poate fi granular. poros, situat intr.o coloand in aqa-
numita cromatografie de gaze convenfional5 sall chiar pe pere{ii coloanei,
confeclionati de dimensiuni capilare,in cromatografia pe coloand capilard.
c Cromatografia gaz-solid este analog[ cu cele discutate Ia cromatogra{ta de adsorblie
qi la cea de excluziune steric6 cu deosebirea ci schimbarea gaz:ului nu modificd
selectivitatea.
Faza sta{ionar6 o constituie tot silicagelul sau alumina, respectiv "sitele moleculare"
nigie silicali naturali sau sintetici) respectiv granulele de carbon poros. Metoda este extrem
1e imporlanti pentru separarea gazelor permanente (CO, COz, Oz, Nz, gaze nobile etc.)
Evolulia cromatografiei a cunoscut o suitd de progrese, care au adus-o din situalia
-il1ia15 de metod6 de separare qi purificare de laborator la o tehnic[ de separare qi anaiizd
:himrci cu o arie de aplicare aproape universali. Cromatografia de lichide pe coloan6 a fost
':trodusi in 1903. Metoda a fost uitatd ins6 multa weme qi abia dup[ 1930, anul descoperirii
:romatografiei in strat sublire pe alumin6, s-a perfeclionat, datoritd nevoii de separare 9i
:urificare a compuqilor organicfnaturali sau sintJtici irnpliea{i in biochimie. in 1941 englezii
l,Iarlin qi Synge descoperS cromatografia de repartilie pe h6rtie, reugind si separe cu ajutorul
;rui arnestec de solvenli aproape toli aminoacizii, descoperire extrem de importanti pentru
::zvoltarea ulteriorl a biochimiei. Doar in 1952, aceiagi A. J. P. Martin and R. L. M' Synge
.r inlocuit faza mobild lichidd cu un gaz, realizdnd pentru prima oari cromatografia de
:partilie gaz-lichid. in aceastd variantd, deteclia a fost realizatd fizico-chimic, in efluentul
::zos, dupi ieqirea din col,:and, reugind astfel sd imbunitifeasc[ marcant separirile. Acest
:oment a insemnat demarajul extraordinar al acestor tehnici, devenite azi unele din
:incipalele mijloace de analizd in chimia organicd qi biochimie, dar qi ?n criminalisticd,
_:ien5, controlul alimentelor, controlul cafitelii medicamentelor
.
Din anul 1968, s-a pus la punct CL folosind un solvent sub presiune in calitate de fazd
:,:bili gi deteclie fizico-chimici in efluentul lichid, aceasta fiind inceputul dezvoltdrii
.:cmatografiei de lichide sub presiune inalti (200 atm). Din anul 1980, s-a reugit qi oblinerea
-:ior separdri analitice performante bazate pe schimb ionic - prin introducerea eluen{ilor
-..ua1i gi a supresoruiui ionic, tehnicd care de atunci a primit denumirea
de croruatografie
.,ic'd'(IC).Azi se luqeazd nu numai crr cromatografe de laborator, analitice, ci qi cu
::.rmatografe de proces, dedicate analizelar automate ale proceselor industriale sau
.:lmatografe preparative, destinate oblinerii de substanie pure in industria fatmaceuticd sau
-- biotehnologii.
in oriie tip de cromatografie detectorul di urr selnnal proporlional, uneori cu
.:rcentrafia, alteori cu masa componentului aflat in celula de misurd, semnal ce poate fi
:egistrat funclie de timp. Diagrama semnal, funclie de timp sau de voiurnul de eiuent se
-
-rne$te cromatograntd.Pe cromatogram[ distingem o serie de maxime,
numite picuri {peak
'.. englezd), care se produc deasupra liniei de bazd sau a porliunii orizontale a curbei.
299
Rodica Strbu, Ticula Negreanu-Piri ol,
Iuliana Stoicescu, Bogdan $tefan Negreanu-Piriol, Catmen Elena Lupu
paraleld cu axa timpului. Aceasta apare ori de c6te ori ?n detector nu apare nici un . Yol
in afara eluentului evident. (lee
I
x(D
c 'E" ' Tim
timt
HA dife
E*r
i l*
#t* ' Cor
:i..,:":'
.' ',f i, ,,".: .:1
voh
Pr0l
tubr
Titu$
fVnh*u tl* retenfic)
F ig.ll. 2. Elementele unei cromatograme
Oicare pic are, in caztl ideal, forma distribuliei normale Gauss. Sd considerfu CR
mai simplS cromatogramd posibilS: cazul introducerii unui singur component, intr-un gaz,
ce conline urme de aer - aerul {iind un component inert. Aspectul acestei cromatograme Asp
cel prezerrtat in Fig.12.2. Pe axa absciselor s-a considerat timpul (sau volumul) de reprezentar
scurs, cu debit cunoscut, de la introducerea (injectarea) probei, iar pe cea a coordonaE
semnalul detectorului - in unitSliarbitrare. Distingem urmdtoarele elemente debazd:
. Picurile cromatografice.lncaztilprezentat in Fig.12. 1, cele doud semnale sau y{:
sunt denumite picuri. Acestea sunt semnalele valorificabile in analiza calitatiti
cantitativd in toate metodele cromatografice. Primul pic, mai mic, corespunde undep-or
'' component inert (aerul de exemplu in CG) - care nu este relinut de ioc - iar cel eorespundt
doilea, notat cu C, corespunde componentului (unic in caztl de falir) al care reprez
considerate gi este datorat moleculelor care se distribuie pe parcwsul migrarii elulie. Vak
coloani intre faza mobil5 Ei cea stalionari 9i care, in consecin!6, ies mai tAran
coloani.
. Timpul mort, ty1- este timpul in care un component, complet nerelinut de citre
stalionar6, parcurge coloana qi tuburile de legitur[ pindla detector. Acesta nu poa&
zerc. in cazul CG timpul mort, de exmplu, este egal cu timpul de retenlie al aerul
tM : tR (R: Retenlie). Deci, cu alte cuvinte, reprezintd timpul scurs de la inj
(introducerea) probei in coloand gi aparilia maximului de concentralie ?n
pentru componentul nerefinut.
. Timpul de retenlie, tR - o mdrime caracteristicd pentru fiecare componeflt
amestecului separat de coloand - reprezintd timpul scurs de la injectarea prohi
apanlia maximului de concentralie in detector. De exemplq in cazul
anterior, in Fig.l2.Z, acesta este distanla de 7a axa ordonatelor (
cromatogramei) p6na la vetticala prin vArful picului C. Acest timp, pentnr
F
component gi o coloand, date (plus condilii experimentale) este constant, indi
dr
daci componentul respectiv este singur sau in amestec.
300
Ro di c a Str b u, Tic uya Neg reanu _ pirj ot,
luliana Stoicescu, Bogdan
$tefan Negrei""_it irt, Carmen Elena Lupu
3'{x.pq*}:-+-**ry-ts-}r}t }
o,\E; -'u't--lIr,i: y-(x.0.11 o x2.
: -5-expq-::-1
Y_ rr t12.5)
i;
-: u - o constantd - simbolizea zd media dishibuliei;
in cazulcrornatografiei aceasta
-"punde chiar
timpului de retenlie, iar o - abaterea
': -iprezintd distanla standarJ a Jlstriuuliei - tot o constantd
pe axaabsciselor cle la maxlm iu prr.iJ
-,
-'/aloarea J. irrR.^iune ai curbei de
o rei'reeti chiar r[rgirea picurui ra trecerea
u.".toiu prin coroan6.
301
Rodica Sirbu, Ticula Negreanu-Ptrjol,
Iuliana Stoicescu, Bogdan $tefan Negreanu-Ptrjol, Carmen Elena Lupu
Picurile reale nu respecte intotdeauna forma gauss-iand din mai multe motive. Pe c.:-
patte, coeficientul de distribulie K nu este constant la orice concentratie iar pe altd p",--
existd qi diferenle intre viteza eluentului transversal prin coloand (in vecindtatea per-: *
aceasta este practic zerc pe cAnd la mijloc este rnaximd).
Coeficientul de distribulie,K (sau Kp) este o mdrime identicd celei din extractie (re:. , -riir.
intre faze) definit intotdeauna prin rapoftul dintre concentraliiie componentului in ch=,--:urr
din fazele stalionard, Cs, respectiv mobil6, C,vr. Conform definiliei (dupa Nernst): F i ---
',il
K: Cs/Cv (1t -
In cazul cromatografiei de adsorbtie, acesta a fost denumit coeficient de adsc,.'' :,
cazul cromatografiei de schimb ionic (denumitd ulterior cromatografie ionicd), coefici.
distribulie ionicii iar in cadml cromatografiei de excluziune stericd coeJicient tle clifit:.:. .
Factorttl de cctpacitale, k (notat in tratate mai vechi k') se definegte ca raporlul dintre :.----nu
de moli distribuiti intre fazele: stalionard, respectiv mobild. Numdrul de moli : - *;;
sta{ionard pot fi exprimali prin produsul Cs'Vs iar din cea mobild Ctr'Vv unde cu C s-.- - ,;uur
concentratiile molare gi cu V5respectiv V1a s-au notat volumele fazelor stalionari :::t": "''
mobila - din coloand, volumul ultimei fiind egal numeric cu volumul morl ai : --*l
Ecualia de definilie pentru k este aqadar:
,il- -. r'
tB: txa(1+k) ( ,1
i_*-
!
Deci, cu c6t factor-ul de capacitate este mai mare coloana reline mai Fr!.:- luiltfi
component iar timpul de retentie cre$te. Pe de altd parte, din ecualia anterioar::: r,ullmtr
obsen a cd, dacd k : 0 atunci tn: tr,r.
ffinF,h"4
302
jlodica S{rbw, Tieu{a Negrean a_ptrjol,
'Ixliana stoicescu, Eogda* $t.fitn Negrei*u-Ftryot, carmen Erena Lupu
H: L"orA.tr (r2.12)
:= cu L".1 s-a notat lungimea coloanei iar cu N numlrul
de talere teoretice. Cu cat valoarea
:sle mai mare separarea este mai bund. Numdrul n se poate
calcula pebazacro*utogru*"i
:::irte experimental din lilimea picului
rrr r.Lrrrr(rd pruurur Ld
rabazd, *0, care dupa
oaza) wb, dupi cum se vede
vede dinFig.LZ.2,
dinFig.Ly.2
: de 4 ori valoarea dispersiei curbei gaussiene eare"ur" modele azd matematic picul, ceea ce
:eite scrierea ecuafiei:
Rodica Sirb u, Ticula Negreanu-Pirj ol,
Iuliana Stoicescu, Bogdan $tefdn Negreanu-Ptrjol, Carmen Elena Lupu
N: tx.2ls2 (12.14)
Acest raport reprezintd p[tratul numSrului de picuri ce ar inc6pea pe o cromatogrami fu
intervalul corespunzltor timpului tp, picurile fiind separate toate doar parlial (de exemplu
cele cu rezolulia Rs: 0.75.
Deci, cu c0t numdrul de talere este mai mare cu atAt vor "inc[pea" mai multe picuri pe aceeagi
cromatogram[. intruc0t se pot separa mai multe componente, separarea picurilor, dou[ cite
dou[, va fi mai net[, considerdndu-se astfel coloana mai eficientd.
Rezolulia, simbolizatd Rs, este mdrimea ce exprimd gradul de separare a dou[ componente
date de pe o cromatogram[. Pentru componentele oarecare A qi B aceasta se exprimi prin
raportul:
R.s:
&te. -- &t*
t{*s +*n} A (12.1s)
Prin iniocu
unde Atp este diferenla dintre timpii de retenfie ai componentelor B gi A adic6 Atn: tn,e - tx.a,
iar w y2reprezintd ldlimea medie a picurilor la bazd, w yz: (wa + we)/2.
unei hiperbole ce trece printr-un minim. Se observd cd inillimea talerului, H, are un optim gazelor, dt
pentru o vitezd care se poate calcula. Anume, prin derivarea ecualiei lui Van Deemter gi Deemter et
egalarca ca zer o a r eniltatului derivdrii, se obline : in
coloanei e
{.- de retenlie
Y r{
E (r2.17)
344
llstlic * S?ritu, Tir:utc h egreenu-?trj ol,
l:,!i;;tl: Srititr:;cu, Be.qd.:t,; ,ffeji;ti 7ci;ri.$iln-?it".iol, {ar:ncn Eieta Lulttt
. * __ - - _ _ - - *-_4S
s!_!l !;_trL 9 8-{A R M A C: E t r r C r t
$t
-* E:-' -*
-i..t'"'
Piin i:ilocuirea valorii v cu vopt ?n ecualia iniliala se obtiile optirnul pentr"u H (adici minimul)
H*;-:Atir,6f (12.1 B)
+tr 1k:
Hru :r'
(t2.19)
Rodica Sirbu, Ticaga Negreanu-Pirjol,
Ialiana Stoicesca, Bogdan $tefan Negreanu-Ptrjol, Carmen Elena Lupu
Se poate remarca cd" valoarca H este ct atat mai micd cu cdt taza, r, scade.
Op
Coloana 4,
CROMATOGRAFIA DE GAZ[, (CG) dispozitiv p
c:rre mai es
Aceastd tehnic[ cromatografic5 este printre cele mai rdspAndite gi totodatd este prirna ermostatart
dintre metodele de analizl cromatograficl, aplicatd"pe scard largdin analizele chimice. in"
Compugii amestecului supus separirii nu trebuie sd fie neapdrat gaze, ci pot sd fie qi lichidc coloan6 de
sau chiar solide volatile. Substanlele de analizat se introduc in coloana de separare, la o hmperatua
temperatur[ potrivitd, prin intermediul unui dispozitiv de introducere a probei. Singrrn mmPorede
restricfie este temperatura de vapoizare care uneori poate fi mai mare decAt temperatura & Golecteazi s
descompunere a substanlelor de analizat. in aceste cazui se poate recurge la alte tehnici rgmfl
cromatografice care au ca eluent un lichid sau fluid supracritic. De asemenea, se mai pot Aaea
rcaliza, inainte de introducerea probei in cromatograf, nigte derivali (compuqi noi), volatili, citindri de
ilJ:ilizdnd anumite reac,tli chimice specifice, procedeu denumit deivahzarc. Uqurinla cu care laborator. G
se pune la punct o analizd. noud, sensibilitatea sa, posibilitatea de artomatizare precum gi plejudicia fi
largile posibilit5li de aplicare sunt avantajele principale ale acestei metode. Printre domeniile reducerea or
in care CG qi-a cucerit un loc de prim rang sunt: industria farmaceuticd,, proteclia mediului pot utiliza Ei
igiena qi criminalistica. Spre
importanf5 r
CROMATOGRAFUL DN GAZE componentel
gazele gi se
Instrumentul care realizeazd, separdile gi totodatd analiza in CG poartd numele de regleazl cu i
cromatograf de gaze. Functionarea acestuia se poate inlelege urm6rind schema din Fig.12. 5
cu aga-mrmi
domeniul 0.
pistonul, se i
din dispoziti
0.5m1, fie nrt
DisW
a plovoca l'(
coloan[. Act
F i9.12.5 a G az Cromatograf KoniK HRGC 40008 Fig.12.5b Schema de principiu a unui coloanele cu
cronratograf de gaze dispozitive cr
incdlzit6., int
In aceastl schemd sunt prezentate doar componentele principale. Astfel gazttlpurtdtor de ridicatE p
(eiuentul), de exemplu hidrogenul sau heliul, pdriseqte cilindrul sub presiune, l, in care sus al dispoz
acesta se gdsegte inilial gi pdtrunde in coloand, la o presiune de intrare, de 1- 3atm, prin pastild din ca
intermediul unui reductor 2. Gazul se ramifici, apoi (op{ional) prin doud conducte. al.dispbzifivt
306 unei garriituri
t^
Rodic a Strb u, Ti c uta N e g re an u-ptrj o l,
Iuliana stoicescu, Bogdan $tefin Negreanu-ptrjol, carmen
Elena Lupu
o parte intrr in coloan6, in mod conlinuu iar cealalt[ ramura, direct in detector.
loloana 4, se afld' intr-o etuvd - termostat, 3, izolatd
termic ai prevdzut[ in exterior eu un
-ispozitiv pentru introducerea probei (care de regulr include gi o microseringd),
notat,s, etuvi
' are mai este dotatd in interior cu un ventilatoi v qi
cu un disporitiv electric de incdlzire -
,:rmostatare, R.
in coloana cromatograficd se produce separarea probei. Aceasta se introduce
- rloani doar dupd ce instrumentul este in regim de funclionare in
-:mperatura continui qi a fost adus la
de lucru' Dypa c-e_prrlsegte co,loina 4, gazulpurt[tor
intrd, antrenAnd pe r6nd
':mponentele separate, in celula de misurd din dete-ctor de uncle iese in
rrorf".a"iuf .J
-iecteazd separat. Faza rnobild in aceastd tehnicd este un guz "t
::QOIIUl.
hiarog.rrl h;ii;i, azotut sau
Aceasta poaie fi eliberati, prin intermediul unor ventile gi regulatoare de presiune,
din
' lindri de gaze presurizate, fie oblinute.din generatoare-(caztl
Nz sau Hz) - direct in
''5orator' Gazul nu'trebuie sr conlin6 urme de1pE, oxigen sau tlioxid de caibon care pot
::ejudicia fazele stafionare. De aceea se mai intercileazdirltr"
.u auutu rot- u*u.", i"*p".tiu.,
' Jucerea oxigenului, dispozitive situate imediat dupi sursa ,Je gaz.
rn cantiexceplionale se
- i utiliza gi alli eluenli cum ar fi COz, Ne etc.
Spre deosebire de cromatografia cu lichizi, in CG, natura gazului
:'portan{d minord asuAra selectivitrlii separErii-eluenli are o
deoarece gazul,practic, nu inteiaclio meazd. c,t
' ' rtponentele probei sau cll suporlul. Desigur cd viteza
Jptima nu este aceeagi pentru toate
-'zele 5i se stabile$te p.e baza ecualiei Van Deemter. Prlsiunea de la caprtul
'= tleazd coloanei se
cu ajutorul unui regulatol de presiune rgi r.entil u". lrrt
oou."r", p.ob.i se redizeazd
- - e$a-numiteb seringi microrne)trice (Fig.tz..a1,
in cazul probelor care au volumele in
-"meniul 0'1-10p1' Cu acestea, ayni umplerea cu volumul de probd necesar,
aprs6nd
: stonul, se injecteazr conlinutul pria cauciucul siliconic sau garnituia
inelard
:r dispoziti'ul de introducere a probei. penrru gaze sefoloseJc ""i;;;;;;
i;;;;;;;^;""J,iri*"ri,
!r',1, fie nrr$te dispozitive speciale nurnite ventile pentru a"
in8oducerea probei.
Domeniul dir
concentra{ia (
Septum Acest
care apar at
experimental
-Sertn&fl de componenr
Existi
*ac mai ridicat dr
purffit*r Iflsrtl{
practica eur
ccnductibilita
f,otoionizare (
detectori aco
cromatografel
Ta
Fig.l2.7. Dispozitiv de injeclie simplu folosit adesea in GC
-C*loan*
Pentru coloane capilare, care au debitele mult mai mici iar volumele introduse in
tr"t*t*
coloane deosebit de mici, introducerea cu o seringd a probelor, direct, ar compromite coloane I FID-cu ic
IECD-cr
definitiv. De aceea se folosesc nigte dispozitive speciale cu ajutorul cdrora doar o mici 1,.
I elcfforu
fracliune din probd, cunoscut5, intr5 in coloan6 iar restul este evacuati in atmosfer6.
Dispozitivele se numesc split/splitless iar fracliunea de probd introdusl efectiv ?n coloan6
mD-*,
reptezintd UZA pdnd,Ia 1/500 din volumul injectat cu seringa. l.ilNPn - c
ronica
Incinta termostatati in care se afld coloana, numit6 etuvd-termostat, are temperatura
FPD - fla
reglabil5 intr-un domeniu larg (4A-45A'C) frind foarte precis stabllizatil (+0.1'C) qi totodati
ventilati, pentru o stabilizare rapidi a temperaturii. La anumite cromatografe, se pot efectn PID
gi anumite incdlzin controlate ale coloanei, ?n timp, pe parcursul efsctuirii analizei. Are lc fotoioniu
in acest fel o volatilizare treptati" a compugilor - la inceput ies cei volatili care migreazd raprt
qi la urm6, cei mai pulin volatili care migreazd foarle lent mdrind mult durata analizei. Coasfia
componentr:lui
D E TE C TORII GAZ CRO MATO GRA F ICI detectorului pe
Reactivitatea i
Detectorii sunt instrumentele analitice propriu zise din gaz- cromatografe, avdnd rchl aceasta prin de
de a sesiza in mod continuu; rapid qi cu o mare sensibilitate, componentele din proba supus6
Efectul asupcl
analizei. in corpul detectorului zonele cromatografrce carc ies separate din coloanh, conlinind fi izolat6. De e
de preferinli moleculele unei singure substanfe, se transform[ in semnale electrice (picuri).
Pentru a se putea compara, ca performanfe, fiecare detector este caracteizat de rnfi DETEl
mirimi ftzice: specificitate, sensibilitate, zgamot de fond, drift, limit5 de detecfie, constan6 Este r:n
de timp, reactivitate, efect asupra probei qi altele, comune multor metode analitice. De compuqii cu c
asemenea, unii detectori distrug proba iar allii o lasd nealteratd, permildnd sepatarea ftziedt substanlele oq
acesteia. Despre sensibilitate gi limita de deteclie am amintit in cursurile introductive cAtevz cromatografia ,
gazelor ih prez
lucruri esenliale valabile qi aici. in orice gaz uomatograf trebuie sd existe cel pulin un
detector universal care sd permit6 inregistrarea sigurd a tuturor componenfilor. In afard & gi temperatura
acesta mai pot exista gi alli detectori specifici, care rndresc siguranla analizei componenlilr momentul cAnr
de interes practic, deoarece rSspund doar la anumite tipuri de molecule. acestora in ctn
308
t-
rutianar,",,,,,f#;;i;iti:;tr!;,r;:_;;ff
:;!,^enEteaaLupa
*r,
?"XT#,1*,f?:#i;,i:lT,"ilj:l::::lllreprezinti
oncentrqtia,f
.-
domeniur in careare semnalul
semnarur \vaiazdriniar cu
d" . o*pon"nr) vu
:: i:Xy,*?^rt,ul T,ur"j
Acesta se misoard de ra rimita
d";";;;;i;"'vu'L,'|
ce trece
rr.,Utr prin
pnn oete*or.
detector.
,ar abateri de la liniar it*,, ao ,"",p411 Ia nivelul. superior de concentratie
:[:#:ili;:;.j;.fl
construi'"u
,[x,x1,,lx':,
j:*:*"::";;;;;;';ilffi
^---^
#i;;.;";";;;"ilj::,lilX1: H;:xTlltrffil:
Ia
ffi P
Limita
10-'"
cie detecrie(n_- Domeniul
10',
dint;icliniar
elctroni !U
ffi
NFD - imiile Ern* ru
iil' IU
ionicl "u i0'
ffi
\1u - U.dzail
10-"
To*
pe 10-''
flotoionizare 10'
%_
voili (Fig.12
intensificati de prezenla unei flEc6ri de hidrogen, care arde in aer intr-o incintd, flacdrd e ln iipsa oricr
atinge temperaturi ridicate (20A0-2200"C). rnolecr:lelor
Gazul purtitor in cromatografia de gaze este Nz, He sau Ar, condilii in care detectord M, care cont
di un semnal debaz1 minim, foarte stabil. Schila simplificatd este prezentatl in Fig.12. 8 *trasta va ct
curentuiui dt
DET
Gaz putfltor:
Azot din Dete
N2, Ar, He coloana pentru hidro
Fig. 1 2. 8. Principiul de funclionare alF ig.lZ. 9. Schila de principiu a detectonrlui 10) se baze
detectorului cu ionizare ?n flacnri GID) cu capturi de electroni (ECD) coloana o t}
prcdqi suu
in momentul apariliei ?n flac[rd a unor molecule organice, de exemplu hidrocarffi forelinerea
sau derivafi, iorizarea duce la un semnal (curent) specific fiecdreia dintre acestea. Curentul * ur detector
transformi in tensiune pe rezistenla cu valoare ridicatd R. $i aici debitele gazelor trebuie 15 futre 5.6 gi
fie riguros constante. Sensibilitatea FID la fluctualiile debitului^gi ale temperaturii sunt ec melecuiele t
mai mici decdtla detectorul bazatpe conductibilitatea termicd.In gazul purtitor provenit dL
coloan6, se dilueazl cu hidrogenul qi aerul necesare qi eventual cu un alt gazinert (Nz, Ar).
Detbctorul cu ionizare ?n flacdri FID (Fig.12. 8) este confeclionat adeseori din old
inoxidabil iar intre corpul metalic qi placa cilindrici pozitivd, de deasupra sa, se aplici r
potenlial de polaizare de 100-300V, continuu. Rispunsul detectorului, depinde ds nrrrnirl
de molecule ionizate ce apfi tn flacir5.
Cele mai stabile rentltate se oblin pentru alcani. Pentru alte substanle semnalul i
general scade cu cre$terea numErului de heteroatomi din moleculi. De aceea, aici este ner,rft
de un factor de corecgie specific pentru fiecare compus analizat De regu16 se folosesc
de coreclie relativi, adicd raportul dinke arie gi unitatea de mas[ a unui compus de referin6if
rispunsul, pentru unitatea de masd a speciei chimice anahzate.
Gazti purtdtor este in acest caz azotul. La pitrunderea in detector, acesta este ioniil
de c6tre o sursd B- radioactiv[ (sunt suficienli cd[iva mCi fumizali de o sursd conlindnd
6hfi[
Gazul, trece apoi printre doi electrozi, intre care se asigurd o cidere de tensiune de o sutE dc
310
L-
I
. Rodica Strbu, Tica{q Negreanu_ptrjol,
Iuliana Stoicescu, Bogdu $tefan Negreinu_ptrjol,
Carmen Eletta Lupu
F ereastri
transparenti Electrozli
in UV limpii UV
Garnituri Secnlill
.<- Y
30* -_+
.R
Evacuare h-.1 la elertrornetrn
gar, I
+
glcanl
I
Ile la
coloanl
Fig.l? 10. Principiul de funclionare ar detectoruiui cu fotoionizare (pID);
radialiile uv sunt fumizate de o iampd situat5 in contact cu camera
de
Tomzate
311
Rodica Strbu, Ticula Negreanu-Ptri ol,
Iuliana Stoicescu, Bogdan $tefan Negteanu'Piriol, Carmen Eleua Lupu
mde termo
fure garu,
Cd
Granul*-suport plus
faza stsfionari ryinse io
w Perete dLr stictE E llazi stationtrS colrcta
DEbiBI pri
Ftg.l2.1 1. Cele doul tipuri de coloane, cu umputurd - A qi capilare - B;
drran perfi
coloanele 530 pm (wide bore) nu diferi ca geometrie de cele capilare
Fe'
Suportul poros (qi totodatd inert) este format dintr-un material solid, ela ryolue &
industrial, de formd pteferatd sferici gi cu o granulalie cdtmai uniformd (de exemplu
sdcs
rt4imfie t
mesh sau 80-100 mesh [109]). in raport cu suportul poros, faza stalionarS constituie doar
rfud o co
25o/o. Cele mai rlspdndite sunt confeclionate din pimdnturi diatomitice dar multe
mf,rul r
fabricate qi din silice. Acestea se modifici chimic prin silanizare pentru a deveni inerte.
Coloanele capilare sunt, la rindul 1or, de cel pulin doui tipuri: cu fazd s
Frel fuE
depuse chiar pe peretele coloanei capilare (WCOT) sau cu faza stalionard depusi pe r
,eilnil
roiid, poror, aderent, format in prealabil pe peretele acesteia (SCOT). Au diametre
csm-F
312
rutia*ar,,,,,,,:';:,;::;:;;:#:{,:r;::;#:i:,;:,,tenEtenaLupa
ME T o D E $ I TE E Nr c I D E,q x,
euzi p tzt c o cnt a t
_
ci
A COMPU$ILqR FARMACE (iTrcl
ffiffiTT"ti::l 1::1T'.lx:i::'i':.r::r$:q":r,^'i
:a rnterni a coloanei. i,"u,a un n,m grerat pe
se pot disins" d"ii;p*;.ff#;lo1t.fli,*t
!." ":.1a*uar6
tiloxanii si polietilenglicotii '-
fiecare int io,r*i"ti" ,i-ir""'itas modificarea
tora. Formulele acestora sunt ilustrate uruu,rLiartsa polaritnlii
polant-',--
""r"
in Fig. 12. 13.
313
Rodica Strbu, Ticala Negreanu-Ptrj ol,
Iuliana Stoicescu, Bogdan $tefan Negreanu-Piirjol, Carmen Elena Lupu
retentie, unul mai mare $i altul mai mic decit substanla respectivd. Pentru seria omoloagi e
alcanilor este respect atd ecualia: Me
Atu
componeal
log(tp'):a'n*b (r2.28)
csmpocenl
detectarulu
unde a gi b sunt niqte constante numerice glsite pe cale experimentald, care sril
aceleagi pentru o coloand qi condilii fizico-chimice date. Se observi cd in formula valorii L celui bazat
termenul b se va reduce qi factorul a se va simplificd. Astfel, indicele Kov6ts, I, va depin& moiecuii.
doar de numdrul aparent de atomi de carbon ai substanlei respective - constant. Pen
Experimental se procedeazd, astfel: dup6 cdteva incerclri preliminare se injecteazi prealabil ct
impreuni cei doi alcani, cu Cn respectiv Cn+r impreund cu substan{a de analizat, X iar &ryi
mdsurarea pe cromatogramd a valorilor tn' pentru toate trei picurile componentrh
amestecului, prin inlocuirea acestora in formula precedenti sau pe cale grafrcd, se oblb
indicele Kovats. uf,d,
etalon (stal
fizicE a fr
tus fL concentra$ir
Ma,
Cils flr-t Der
a afr t4
li fr alta. Pentm
ilfl ri
*i
tl
_i,,'-]l
ti;l
\'-_j ! -
ii
1l
il
j\-
I
analog cu aJ
Acel
constituie p
-J
o tn: [!!,
*{x tr-i fiecare da
e
ffi tlx Il+I n ariile unui p
Fig.l2.l4. Calculul grafic al indicelui Kovdts (l : 100.n ) aitor pernrt
substanla et
funcfie de a
Analiza cantitdtivd
in anumite condilii (pe porliuni liniare ale rdspunsului detectorului, condilii
experimentale identice etc.), suprafala dintre linia de bazd Si curba picului cromatografic -
semnalul analitic - este proporlionald cu cantitatea de component injectatd. Deci, pe
domeniul liniar al detectorului, oricare ar fi acesta, existS relalia: unde Cx-x-es
concentragia
Masa injectatd: K'(Aria picului) (t2.2e) picului subrs
intern din pr
unde, K este o constantd numerici. Aceastd proprietate poate servi pentru construirea d Se ol
curbe de etalonare fiind general valabild. atdt in cazri GC cAt pi in celelalte teffi la-anEltra p
cromatografice. Se poate qi aici aplica metoda adausului standard, mai ales la domenii lirlh concentrafie
largi. Pentru valori tn'mici, c6nd picurile sunt gi asculite gi inguste, se poate ttlliza ?n lord ce intervia t
ariei ?ndllimea sa - cu rezerva unei pierderi din precizia determindrii. Prezentilm in cek c intern - coo$
urmeazl cdteva practici debaz\,legate de analiza cantitative folosind ariile picurilor.
Deta
Dets
3t6 rrai multe pr
ts
Rotlicc S?rhu, Ticulo Negrean u_pirjol,
-C
Iu Iia n a sto lcesc u, B ogdan $rcfan N eg red u-pitj o r,
tt arm en E r e u a L u pu
M e to da fac
trs ru iu i d e rdsputr s
Atunci cand se dovedeqte ca detectorul riisptinde la fei de bine pelitru i-recare
cofilpcilent al amesiecuir:i, aria reiatir'5 a picuriior este propo4ionaid
cu cantitatea drverselor
coinponenie' Aceastl condilie este ?ndepiinit[ extrern de rar.
De exempiu, sensibilita_tea
deiectonrlui bazat pe conductibilitatea tennicd a gazelor depince
de natura substantelor iar a
celui i:azat pe ionizarea in flaciLri are rdspunsui rlepen,Jent rie
numarui a. caruon <inr
moiecul:i. "t""riJ-
Pentru aceste caz.urt este necesar ca tati ctmrponenlii a.naliza{i
sq aiba detersttittali in
prealabil crile rfr Joctor de r&spuns, ! . Eastotli {e r[spuns st ob$n.o oy.to*\ tormu\e\:
ue
F : Cx/Cs r'A1;lAg ( 12.30)
m
unde cu Cx gi Cs s-au notat concentratiile componentelor
X respectiv a substantei
etalon (standard), S, iar Ax gi As sunt ariile picurilor coiespunzdtoare
acestora.
fizicl a tbctorului de rhspuns este aceea ca indic'a ae cate ori este mai Semnificatia
mare raportul
concentralie pet serrmal analitic in cazul unur component
al probei fap. de etalonul ales.
ariei picurilor
D ete nn inare a
Detenninarea ariei picurilor i.e. semnalul analitic al metodei
- se poate realiza p;,n
mai multe procedee, rnulte dintre acestea mai mult de importanld
istoricE:
317
Rodie a Strbu, Ticuya Ne grean u-Pirj ol,
Iuliana Stoicescu, Bogdan $tefan Negreana-Ptrjol, Carmen Elena Lupu
AA&
probi;
Fig.12. 15. Forme {e picuri . (p} Gaussian; (b) deplasat dreapta; (c) deplasat stAnga
Un pic Gaussian este ideal (a). Mai mult, oricum piEurile pot avea o cre$ts,re
pro.gesivd ur,rnati de o cidere abrupti datorati supratncdrcdrii coloanei (b) sau o formi qg
coadi carerazu\ti din faptul ci unele ldcage alo coloanei rqltl solutul rnai mult dectt altele Fig.l
(c). Ldrgimeabenni poate fi explicat6 din punct de vedere cantitativ. O particulS individualE
suportd multe transform[ri in timpul migrarii, in consecinld, timpul de stalionare in coloari
este extrem de diferit precum gi migrarea partr'culelor de.a lungul coloanei este neregulat5-
Odate cu cregterea timpului, IdJimea benzii creqte ?n tirnp re se parcurge coloana, timpul de
stalionare ?n coloani va fi mai rnare, iar vtteza de curgere a fazei mobile scade.
318
Rodica Sirbu, Ticula Negreanu_ptrjol,
luliaaa stoicescuu Bogdan $tefan Negreanu-ptrjor, carmefl Erena Lupu
ffi[,* ,ffi,
lrffifiilF* :liftffi
M
5**M* +lt
lt
H
t#
H
&
&t+Ierrreffi-is*r' rA
;ffiffi
tr$#fid
frprihffirt s*eae**ls
Semfl
mlffid-ffi'ffin tst**S*l#
Fi9.12.16a Prczentarea schematici a unui cromatograf de lichide (HPLC) modern
319
Rodica Sirb u, Ticula Negreanu-Hirjol,
Iuliqna Stoicescu, Bogdan $tefan Negreanu-Ptrjol, Carmen Elena Lupu
Apoi are loc comutareape analizd (Fig.12. l8-B) cAnd prin rotire cu 600, in direcgia acelor &
ceasornic, manual sau automat, bucla este parcurs[ de eluentul de la pomp6 gi conlinutgl Se
acesteia este antrenat in coloan[. Volumul probelor pentru coloane obignuite (25cmx4.6rnm) mult de fa
este de 10-50p1. Evident aceste ventile sunt confeclionate din materiale rezistente la care se ba
coroziune gi la solvenli (o!el inoxidabil, tantal, teflon etc). rnecanism
r +(
r +(
COLOANELE iN CAO*TETOGRAFIA DE LICHIDE r -i{
, +(
Locul tn care se petrece separarea propriu-zis6 gi funclie de calitatea acesteia, sa
mdregte sau micgoreazd ruportul semnaUzgomot, este coloana cromatografici. Degi mul,ti Se disting
autori denumesc coloana "piesa cea mai importantI" dintr-un cromatograf, rezultd, cI fiecare
.Cn
compartiment in parte, contribuie separat la oblinerea rezultatului analitic. Pentru un 'Cn
practician din domeniul LC insd, locul unde acesta intervine efectiv gi unde se concepe logic cal
separarea este intr-adev[r coloana. in primul
Materialul din care se confeclioneazd corpul coloanei ?n LC trebuie sd asigure solvent or1
acesteia rezistenla mecanici adecvat6 presiunilor inalte (20mii kPa) precum gi rezistenga le faza mobi
coroziune fald de faza mobild. in majoritatea cazunlor a fost preferat o1elul inoxidabil 316 faze invet
lucios. Acesta rezistd la majoitatea solventilor, exceplie fbcAnd doar sdrurile halogenilor, h acriloaiail
special insolulie putemic acid5. Alte alternative o constituie coloanele compozite: sticll sa Fig.12.20.
plastic in interior - ofel inoxidabil sau material plastic in exterior.
Din punctul de vedere al geometriei (Fig.12.19), aceste coloane sunt cilindrice, itr
dimensiunile depind, in primul rAnd, de dimensiunea granulelor gi porozitatea umpluturii.
Astfel diametrul coloanelor variazd, intre 0.3-5cm iar lungimea poate fi intre 3-25cm. Pentru
scopuri preparative, in cazul unor componente necunoscute, se utilizeazd, chiar diametre mai
mari.
Cu cAt umplutura este mai find, cu atAt coloana este mai scurtd. Pentru a se relirp
eventualele impuritdli sau componenli care nu pot pdrS.si coloana (fiind relinuli practic
ireversibil) se folosesc adesea precoloane care, fiind de dimensiuni mai mici (acelaF
diametru gi lungimi de 0.4-icm), pot fi inlocuite mai des, evitdndu-se astfel scoateree
Cn
prematuri din funclie a coloanei principale. Pentru a nu fi antrenatl faza stalionard, in afu
coioanei, aceasta este blocat6 la capete de doud discuri metalice, poroase, av6nd diameuC
foloseqte i
schirnHtc
porilor intre 0.5- 10pm. De asemenea pentru a nu se ldrgi prea mult prin coloand zon
in analizel
cromatograficd (cu diluarea ce ate loc simultan), tot volumul mort ale acesteia (goluri L
pereclti de
coloan6, tubul de aducliune de la injector, tubul de evacuare spre detector) trebuie redus h
semn coffi
minim.
ionizabile.
322
Rodica Sirbu, Ticuya Negreonu-pfrjol,
Iuliana Stoiceseu, -Crr*
B ogdan $tefan Negreanu-ptrj ol, Elena Lupu
"o
!|{ETODE $r TEHNTCT DE ANALTZ{ FTZTCO_CHrMrC{
4 C OMPUSTT.O R FARMACE UTrCr
Cromatografia ionicd (IC) are mai multe variante. Cea mai frecvent intalniti
astdzi
foloseqte in calitate de fazd' mobili solventi apoqi diluali de electrolili iar ca fazA stafionari
schimbitori de ioni. Metoda va fi descris[ intr-un capitoi separat datoriti
implicaliilor actuale
in analizeie de ape legate de proteclia mediului. o aita variantr denumit5
cioma'ngrafi" pri,
perechi de ioni folosegte faze stafionare capabile sd fixeze anumili
ioni care rxeizeioni de
i:11,::'ttr (perechi de ioni). Acest mecanism se prefer[ in cazul subsranfelor ionice sau
lonlzaDlte.
323
Rodica .Strhu, Ticupa Negreanu_ptrjol,
Irtli*na Stoicescu, Bogdan $tejan Negreanu-pirjol, Cannen Elena Lupu
m
r.
imr
q1 - S; ,4w."\.la",i'"'.
g; - 5i ,&,;'-"'24\r'\.
L
O- Si "\''\'^'*''""'
f
u
o-si n*',-,\r4-,At
o-si y4a"r''""""r'f-A.
o - si /'\,^",\n
Fig.12. 21.a. Aspectul granulelor de silicagel Fig.12.21.b. Aspectul schematic al unei
Folosite frecvent la umplerea coloanelor granule sferice cufazd stalionar6
Jin HPLC chimic legatd pe suprafafa suportului
OE
ti
r--. \/
I
I I
I
I'-r Jrrr
Si OII I r -.-J
!
,, [:;; i]
I
I
-
CIH
Si02 calcidal
tompuSi *i Sigtr:):
iso$
l-
o 5it0Et)d,
r sicfu.
i :{a:si03.
t{ J:ig$tl }l
Fig.12.22. Schema procesului de ob$nere a silicagelului cu granule sferice
325
Ra dii:a. Sirb u, Ec u|a, Ne grca na.Pt rj o l;
fillian:s,Stoicescui B'o6daai$lef*n'Negrcaaa,P,ir'jol.Ctrynen:El4noLapu
OH- Funli'le de oxigen, apar ihffe, aJonaii de siliciu, cu ooazia pol'irneriz6riir acidu}d, silii:ie, participi 1
s.i{olr)4i reactia:
in ultirnul tir.np, a mai aplrut un tip de fazd staliouard cu perforrraufe ridicate. Esr
vorba de eolo.anele monolil, reatizate din aceieaqi materii prinre, gi pdntr-o. tehnologi
asemin[toare'din punct de vedere chimic cu cele dil Fig.12.19. Coloana este.forrnatE dfued unde cel r
in tubul rigid (metalic), de unde qi nunnole. Aceasta nu, mai are granutre dupS: cum se pmE acoper6 c
sbserva din Fig 12.23'.. Prin noua tehmologie, s-au obfir.rut coloans cu perfomanfe superims mult stabr
fal[ de cele uo.rplute cu granule. mai multo
SU
uniform, r
HI{H inversate"
/', / / radicalulu
dli!
'o' o/ sreandu-sr
lil
ttt
ti:
si 5i 5i Fr
m Fa
Fig.12. 23. Aspectul Ia microscopul etrectronic aI Fig.12. 24.Pincrpalele tipuri de De aceea r
Adsorbanli muXt mai pulin utilizali sunt alumina, oxidul de zirconiu, cdrbunele macropq se vorteqt
polimerii poroqi (de ex. spuma poliuretanic[). srafionarn
Fazele stalionare chimic legate au apdrut in urma tncercdrilor mai pulin eficace de utilizare r repartilie
unor faze staiionare lichide depuse pe un suport poros solid - permeabil pentru eluent (a il formate-d
preferat kieselgur-ul sau p6mintul diatomitic - in esen!5 tot SiOz dar cu pori mari gi o prinfre fiu
suprafa!5 mult mai rnic5. Pr
Deoarece in toate aceste incercdri faza stalionard era spdlati de pe suport de ci* eluengi cu
eluentul in miqcare qi in felul acesta deranja funclionarea detectorului, s-a recurs la sohf fo care cn
credrii unor faze care sd fie fixate prin legituri chimice - mult mai putemice decAt cele fui*- in cromat
Aspectul unei faze stalionare chimic legate poate fi imaginat ca in Fig.i2.24, adicd. cat* HCl, iar
legate alcituiesc o adevdtatd pddure de molecule care se comportd fizic asem6ndtor unui sEl separali u
subfre, aderent la suporl (imposibil de dizolvat) dar cu o valoare afactorului de capacitw\ o
maifavorabild. folcsirea
Daci grupdrile silanol =Si-OH de pe suprafala silicagelului sunt puse ?n situalia & r consta6 r
reacjiona cu anumili derivali organometalici, se poate realiza sinteza wor faze chimic leg*- confi5" so
Cele mai stabile legituri sunt cele care au la bazd aparilia structurilor legate prin intermefl impartaal
unei punfi: =Si-O-Si=. Oblinerea acestora se reahzeazd prin reaclii de condensare la c- slab prin
326
Ro di c a Stfi u, Tic uta N e g rean u_ptrj ol,
rwlianfl stoicescu, Bogdan $tefan Negreanu-ptrjor, cennen Erena Luptt
Faza mobil il
timp cdteodatd nepractic de lung, lucru care determind diluarea in eluent a componentul fo DET]
uflna parcurgerii coloanei, micgorindu-se astfel calitatea anaTizei.
Tehni
Tabelul 12.3 Cdteva faze mobile (monocomponente) utilizate detectorii in r
intermediul unei camere de amestecare aflate la joasd presiune. Este posibil qi un alt montqi
?n care fiecare solvent are pornpa proprie, comandat[ de un dispo zitiv de control al debitulul
Acegti solvenli intri ?n camera de amestec qi de aici in coloan5. DET}
Gradienlii de faz6, mobild pot fi foarte diferiti in practicl dar formele principale sunt cele
Acest
descrise inFig.l2.25.
qi ?n HPLC.I
- adic[ s[ abr
eluentul trebr
Legea
de legea Lan
De aceea lin
AUFS (presc
intreaga scali
AUFS cnzgo
Motir
organiceo anu
organice cu
hidrocarburil
funcfiuni org:
Tiuip
Fig.12. 25. Cdteva din cele mai cunoscute forme de gradienli de fazd mobila
328
Rodica Strbu, Ticuya Negreanu-Plrjol,
Iuliana Soicescu, Bogdan $tefan Negreanu-Ptrjol, Carnen Elena Lupa
DETECTORT
Acest grup de detectori sunt cei mai folosili detectori pdnd in prezent, atiltinLC, cdt
9i in HPLC. Pentru a putea frutrliza{;i, compugii separali cromatografic trebuie sd"fte colorali
- adic[ sE absoarbd lumina pe domeniul de lungimi de undd al detectorului. Pe de altl parte,
eluentul trebuie sd fie practic transparent pentru acelagi domeniu spectral.
Legea frzicd,pebaza cdreia func{ioneazi acegti detectori a fost prezenta6 - este vorba
de legea Lambert-Beer (A: elC). Deci unitdlile vor fi unitlli de absorbanfi, adimensionale.
De aceea limita de detecfie sau zgomotul de fond se prezint[ in cazul acestor detectori in
AUFS (prescurtare de la Absorbance Units Full Scale : unit5li de absorbanli raportate la
intreaga scald, L engl.). Astfel in cadrul instrumentelor actuale sensibilitatea este de 0,001
AUFS cu zgomotul de fond de lYo.
Motivul principal al popularitdfii acestor detectori este acela ci numeroasele substanle
organice, anume cele care confin legifuri duble (electroni n), respectiv au grefate funcliuni
organice cu electroni neparticipanfi, absorb lumina in UV-VIS. Este vorba de toate
hidrocarburile olefinice qi aromatice precum gi derivalii tuturor hidrocarburilor cu diferite
funcliuni organice (:C:O,:C:S, -N-O, -N:N-, -NH2). intre acestea se includ gi numeroasele
329
Rodica Strbu, Ticula Negreanu-Pirj ol,
Iuliana Stoicescu, Bogdan $tefan Negreanu-Ptrjol, Carmen Elena Lupa
combinalii de interes biologic ca efizime, acizi nucleici etc. Un mare ayantaj al acsu
detectori este faptul ce sunt insensibili la micile varialii de debit gi temperaturl.
Celula de deteclie face parte dintr-un spectrofotometru gi are un volum extrem de mt'
de 8-10p1, respectiv un diametru interior de 1mm la o lungime a celulei de 10 rnm-
C onstrucf ia ace stora e ste ilustratd in F ig. 12. 26.
IA
+t
t-- !
{}..tlrirflt l
Ltmur}a
D]
l'or fi pra
Fi9.12.26. Celila unui detectorbazat pe spectrofotometrie de absorblie ?n UY kr care in
momentu
Se pot distinge qi
in cazul acestei clase de detectori mai multe tipuri de detectori. detector -
Detectorii monocromatici au fost primii ntlhzali, fiind mai ieftini deoarece luweazd doar Ia o in
lungime de undd. Modelul cel mai rdspindit se compune dintr-o sursi luminoasl cu deuterl aducerea
sau cu vapori de mercur, un monocromator care separi un domeniu ingust (de ex. linia 251 (10-smol',
nm a mercurului) gi un detector. Schema bloc a unui astfel de detector este prezenteti i in crorna'
Fi9.12.26. coloani c
Detectorii policromatici mai frecvent utilizali in cromatografele HPLC moderne permit gi asemenea
selectarea lungimii de undl la carc se lucreazd, dar chiar pot inregistra electronic absorbanF termostati
celulei la mai multe lungimi de undl simultan. Acest mod de lucru dd o mai mare siguranfi
analizei, in sensul cI permite stabilirea purit6lii, adicd, dacd picul constituie un semnal dat de Detectori
o singuri substanld sau de un amestec (ceea ce se cunoa$te sub numele de stabilirea puritnf ioni gi sr
picului). Aceqti detectori conlin celula amfuxitd, montatd intr-un spectrofotometru cu relea de detectori
diode. descris se
unei celui
Sursi-'Monocromator--+Celuli--+inregistrator
Fig.l2. 27. Schema bloc aunui detector HPLC spectrofotometric
Pr
dintre acr
FT-IR , C
deteclie i
330
Rodica Strbu, Ticula Negrean u-pirj
ol,
Iuliana Stoicescu, Bogdan g"1o" Negr";;;:;;j;,
Carmen Etena Lapu
METODE $I TETTNICI DE ANALIZ|
FIZICO.CHIMIA{
A COMP a$rl oR FARMACE aTICr
La cal{}alrE
*,
!
W
b,
de) "*. Y
Ell*etrt plus
cult+)*lfEzrt
funcfionare al unui detector refractometric
331
Rodica Strbu, Ticula Negreanu-frrjol,
Iuliana Stoicescu, Bogdan $tefon Negreanu-Ptrjol, Carmen Elena Lapu
molecule
cationi,ti t
se foloser
de carbo:
sehimbda
D,
Fig.12. 30. Cele doud tipuri principale de rl;ini schimb6toare de ioni
k
Granulele de r5gin6 se solvateazd ca apd ttnzdnd spre un volum limitd maxim. Prin mod dire
spa{iile dintre catenele unui cationit pot pdtrunde prin difuziune in fazd lichid6 doar molecule electrolit
neutre sau cationi, anionii fiind exclugi. Pitrunderea in granule a ionilor de semn contrar esk supreso/,
ingreunatd qi de un alt efect, numit efectul Donruan de membrand,, care apare pe suprafap in 1975,i
granulei qi provoacd o selectivitate a acesteia la pdtrunderea ionului, in funclie de cu rolul d
dimensiunile acestuia. Mai exist6 gi un al treilea mecanism util in cazul substanlelor neionicc amintit ar
sau a celor ionice dar cu grqparca ionici identicl dar cu geometria moleculei diferifi - de anioni
difuziaprin granule. Analog stau lucrurile intr-un anionit, cu deosebirea cd de astd dat[ sunt formul[ 1
pnn care
R-H + Na* .* R-Na * H*
se transfo
R-H + K* *, R-K + H+ (r2.33)
i
i
Pomp6nd un eluent prin coloanS, de exemplu o solulie diluati de acid clorhidric, ionii
i
I
332
L
Rodica Strbq Ticaya Negreaua_Ftrjol,
Iulion a Stoicesaa,B ogdan $tql:an Negre; a-pirjol, lCarruen
Eletia Lupu
H.+
fin acid, fiind in concentralie mai mare, vor deplasa
similare spre o porfiune inferioaid:
ionii fixafi, pnln echilibre ionice
DETECTIA
333
Rodic a Sirbu, Ticula Negreanu-Pirjol,
Iuliana Stoicescu, Bogdan $tefan Negreanu-Pirjol, Cormen Elena Lupu
Inafafi, de detectorul conductometric se mai pot utiliza gi alte tipuri de detectori cum Fig.12.31.
ar fi cei amperometrici sau voltametrici. supresomlu
Supresorul electrochimlc (sau autosupresorul) din cromatografele ionice recente, a inlocuit
mica coloand cu schimbdtori de ioni cu membrane schimbitoare (Fig.12.3i) avind aceeagi Elu
compozilie gi, in plus, schimbul ionic este accelerat prin electro dializd. in acest fel s-a m5rit membrane-
viteza procesului qi s-a micqorat volumul mort. Mai mu1t, a crescut durata de funclionare a componeil[
detectorului. De exemplu in Fig.12.32 se prezinti, schematic principiul de funclionare a unrd cationic[ Q
astfel de supresor electrolitic pentru cazul iegirii din coloand a oriciror anioni, notafi peo&rr doi electro:
simplitate cu X. redat rnai d
la,
E
la,
Fig.
i
i 334
L
Rodica Sirb u, Ticuya Negreanu-ptrj ol,
Iuliana Stoicescu, Bogdan $tefan Negreanu-pirjol, Carmen Elena Lupu
tl
rfi
U
ffi
ffi..
ffiiffi.x
ffi.E
ffiE
Mg
ffiffi=
ffiffi{r? TJ
ffiffi
ffi
B *lrnqete@"-.-l
* ,", I .1. ..."
a
Dtlcctor t:.',:.'"' Y
cunrluctornelric
- c$n*l
7 TIMP
a) {bl
Fig.12. 31. Schema de principiu a cromatografiei ionice (IC) -(a) qi a modului de acliune a
supresorului ionic -(b). Aici RH este coloana de separare iar ROH, coloana supresor
Eluentul care a ieqit din coloana de separare trece prin spaliul ingust dintre doud
membrane. Dupi transfornarea eluentului in apd in interiorul supresorului electroliti c, iar a
componenlilor ionici separali ?n acizi, datoritd membranei care, de asti dati este una
cationic[ (RH), solulia intrl in detector iar ulterior alimenteazd, spaliul dintre membrane qi cei
doi electrozi: unul, pozitiv (+), respectiv celIlalt, negativ (-). Fenomenul de electrodializi este
redat mai detaliat in Fig.12.33.
Mcurhrxrfl *endprrxreabilfr
1*r ea::sl
Elue*t -Sr$S $iii8.+,Sie$i- #$#*:EsrS:4ri$ e**ili*S+$$S
la s*natr
335
Ro ilit a Strb u, Ticulo Negrean u'Piiri ol,
Iwliana Stoicescu, Bogdan $tefan Negreanu-Ptriol, Catmen Elena Lupu
L"ts3;1L".
coloani
I
Na'+X Ei N*+ os ruix'l
Canal
f t2o. o,
In a<
Se poate observa cum membrana schimbdtoare de cationi, R-H, permite transferd fochisi ci 1
catonilor H+ (dinspre polul +) gi Na+ (spre polul -) dar nu permite transferul anionului X formdnd uo
datoriti efectului Donnan. Tot datoritd acestui efect nu traverceazd membrana nici ionul OIL grosimi cuP
i n detector intr5, in cantl separdrii unui amestec de anioni X-, respectiv Y-, doar acid tot parcursu
I{X respectiv HY total disociali in apd.In consecin{d in detectorul conductometric, din caua de eluent. P
lipsei de conductivitate a apei pure, raporlul semnaUzgomot este mult ?mbunitilit. unde faza s
sau, extrem
Celi
Aplicalii pulveruient
Una din cele mai importante aplicalii este analiza cationilor gi anionilor din ape, straturi sub
solulii sau fluide biologice, medicamente dar qi pentru analiza unor poluanli (cum ar fi ionul materiale ir
NHa + din apele naturale). Alte aplicalii imediate srnt analiza lichidelor de naturd apoasi formate pe
conlinAnd sdruri: sucuri de fructe, alimente etc. Metoda permite qi anahza unor specii ob$
organice polare cum ar ft acizlt sau aminele. de la o sr:
anorganic (
pentru aPlir
indicatori d
ce absorb
CROMATOGRAFIA PLANARA (TLC) tntunecate
specializate
Pen
Cromatografraplanard (CP) intAlnitd adesea sub denumirea de cromatografie in strat
aplic[ prot
sublire este cea mai simpll gi ieftind dintre toate metodele cromatografice cunoscute.
specializaa
in literatura de specialitate se utilizeazilmaimulte denumiri (cu prescurtSrile asociate
de probe, r
acestora). Pe lAngi termenul consacrat - cromatografta planard (planar chromatoglaphy - PC
din solulii
se mai intdlnesc denumiri cum ar fi cromatografia in strat sublire de inaltd performanp (high
procesul
performance thin layer chromatography - HPTLC) sau cromatografia de lichide planar
dr
336
Rodica Strbu, Ticula Negrean u-ptrjol,
ruliana stoicesca, Bogdan $tefan Negreanu-ptrjor, carmen Elena
Lupu
METODE $I TEHNICI DE ANALIZi FIZICO-CHIMIC{
A COM OR FARMACET]TICI
Fozilia fiqalfi a
.i:l:,
j
frcntului Xa elutic
:.s
li*;
Frnbe Et*lor
A
F{41}
tinie de stafi
... -c
Fig-12. 34'Placacromatograficd gi poziliile rerative ale
spoturilor
in aceastd vaiantd'.a cromatografi.ei de lichide, separarea nu mai
are loc intr-o coloand
inchisr ci pe o fazd stalionard similai5,. granulari (poioasd)
dispusd ?ntr-un strat subfire,
formand un plan (Fig.12. 34). Acest strat denumit subfre,
se rcalizeazri dintr-un adsorbent cu
grosimi cuprinse inhe 100-250pm gi poate fi simplu
sau legat adeziv de un plan rigid, fiind pe
tot parcursul separirii ?n contact cu o fazd. gazoasd-
mai mult sau mai pulin saturatd cu vapori
de eluent' Primul caz a fost mult utilizat in h'ecut
in cazulaga-numitei pe hartie
unde faza stalionard consta dintr-o bandd de hdrtie "ro*utotufii
de filtru, confeclionata din celulozd purd,
sau, extrem de rat, prin{olosirea unor plEci din materiale
ceramice sinteizatepo.ou.".
Celilalt cazmultmaiutllizat face apel la straturi subliri realizate dintr-un
adsorbant
pulverulent (silicagel, celulozd, alumin5, poliamidd
sau derivate ale acestora) dispuse in
sffatud subflri pe pldci rigide din sticld sau, pe folii flexibile
din aluminiu, potiester sau alte
materiale inerte fald de sistemul pe care u." l,o. separarea.
Se mai poate recurge qi la straturi
ibrmate pe baghete de sticli sau tuburi din sticld.
Oblinerea straturilor subiiri se realiza la inceput in laborator (Fig.12.34),pornindu-se
ce la o suspensie apoasd a adsorbenfului pulverulent (10-40pm)
iripreurri'"u un liant
anorganic (de exemplu ghips, Sioz-coloidal) sau organic (amidon,
carboximet ilcelulozd), iar
oentru aplicare se foloseau nigte dispozitive m_ecanice simple.
Straturile subliri pot include qi
indicatori de fluorescenlE care in lumind lrv fac posibild iizualizareaspoturilor
substanielor
--e absorb in acest domeniu prin stingerea
_fluoiescenlei, adicd prin aparilia unor spoturi
:ntunecate pe fond luminos qi pot fi achizilionate gata pieparate-de la^{irme producdtoare
specializate.
Pentru a se putea demara procesul de elulie, in prealabil pe placa
cu strat subfire se
:plica proba' Acest lucru se rcalizeazla cu seringi ,uu *i"ro-pipete,
dar gi alte dispozitive
speciaTizate, astfel inc6t si se oblind aliniate, p" liniu
de start (rrg.t?.1+1,mai multe spoturi
Je probe, respectiv de amestecuri etalon - s.unust simultan."pure.il.
i",*ff;;;i"'se aplic[
iin solulii diiuate (l-2."/"), in anumili solvenli, pentru a se evita interferlnla
acestora in
:rocesul de elufie, pl5cile se usucd inainte de introducerea in amestecul
de solvenfi. Astfel se
:ot supune separdrii probe care se concentreazd. pe zone inguste (de lungime gi
laiime
:reselectate) asigur6ndu-se o eficienl6 mdritd separArii.
337
Rodica Sfrbu, Ticula Negreanu-Ptrj ol,
Iuliana Stoicesca, Bogdan $tefan Negreanu-Ptrjol, Carmen Elena Lupa
Migrarea eluentului, are loc prin coloana deschisd, care aclioneazd ct totul analog celei reactiv, fie
?nchise (vezi LC), are loc sub acfiunea forlelor capllare gi provoac[ migrarea diferenliatd a qi chiar int
componentelor amestecului de separat. Acest lucru se realizeazd in urma simplei scufundiri un aspect i
(manuale) a pldcii cromatografice in eluentul potrivit. Din acest moment, eluentul irigAnd
prin capilaritate straful poros migreaz[ ascendent prin stratul sublire, provocind separarea-
Timpul de separare vaiazd intre 3 gi 60 min.
Nu este totuqi exclusd utilizarea unor dispozitive mai sofisticate de alimentare cu
solvenli (minipompe) - fredndu-se uneori apel chiar la gradienli de concentrafie. Se poate de
asemenea practica migrarea eluentuiui pe orizontald sau descendent.
Se poate elua o plac5 chiar de mai multe ori sau se poate evapora solventul in timpul migrdrii,
in aeest fel mirindu-se eficienla pe seama timpului de separare.
Penku realizarca separdrii (elufiei) se utilizeazi calnere de developare. Cdteva dintre
cele mai utilizate dintre aqestea se prezintS in Fig.12.35. Formele preferate sunt cele
paralolipipedice sau cilindriee (pahare), prevdzute cu un capac qi eventual cu un dispozitiv de
fixare a placii plane (h6rtie sau strat sublire) gi pot fi saturate cu amestecul de solvenli din
tanq, pentru a se miri viteza de elulie. Camerele paralelipipedice se Rumesc camere de tip N
D(
(nor-nrale) iar cele subliri poartd numele de camere de tip S (sandwich). Ultimele prezinti.
generali,
4vant4jul unui volum mai redus al fazei gazoase av6nd a vitezd de saturare mai mare qi o
majoritaEi
duratd a procesului de separare cu ceva mai mic6, (Fig.12.35).
altdvaiu
unor sfrd
fluorescer
spoturi in
substanlel
suficieati
fond intur
o
consti in
caz pldcll
avdnd cul
ffi.Jh.m
Fig.12. 34. Aparatul Linomat: aphcdprobele Fi9.12.35. C6teva dintre cele mai uzuale
in formi de benzi pe straturile subliri camere cromatografice in PC
separate
culoare. l
spotului r
Fr
:
Elulia are loc dupd introducerea plicii in camera cromatograficd", pdnd cAnd amestecul A
de solvenli atinge o ?nillime finald, fixat[ de obicei intre 5 qi 18 cm, sau un anumit timp mai mult
stabilit, in prealabil, prin incercdri preliminare. Solveniii utilizali se aleg in funcfie de repartilie
propriet5lile de elulie a1e substanlelor supuse separlrii (analizei). Natura acestora depinde nu cromatog
numai de substanlele implicate dar gi de mecanismul de separare propus, respectiv de faza deriva6i a
stafionari avutd la dispozilie. II
DupE elu{ie, placa se scoate, se usucd qi dacd spoturile nu se v6d, se trece la vizualizarea cromatog
acestora (operalie numitd uneori revelare). Pentru aceasta, placa fie se scufundi intr-un
338
Rodica Strbu, Ticu(a Negreonu-Pirjol,
luliana Stoicescu, Bogdan $tefau Negreanu-Ptrjol, Cannen Elena Lupu
::activ, fie se pulverizeazd cu acesta sau se introduce intr-o atmosfera coniindnd gaze reacti\-e
.i chiar intr-o efuvi. 1a cald, c6,nd spoturile devin vizibile ?n urma unor reactii chimice (av0nd
.rn aspect apropiat celor din Fig. 12. 36).
.,r,=..r, :iil]]l;r,r
c**k @ :# iRllrFf
ryryry
@llwiill@,
r.<<vr..4 qsrffi ryr
339
Rodica Strbu, Ticula Negreatta-Pitj ol,
Iulianq Stoicescu, Bogdan $tefan Negreanu'Pirjol, Carmen Elena Lupu
in HPLC, se uttlizeazi tot silicagelul silanizat avAnd grefate gruperi alchilice con{inAnd 8 m Tor
18 atomi de carbon - echivalente cu o peliculS sublire de fazA nepolarl depusi pe graauh bidimensir.
suport. singur) se r
Fazele mobile sunt adesea amestecuri de 2 pdnd la 5 solvenli cit mai diferili ca natd de solvenp
chimici, alegi prin incercdri preliminare. Pentru straturi subliri din silicagel (cele nrai cu 90o gi s
utilizate) prezentim o list6 cu i0 solvenli extraqi din 8 grupe de selectivitate (propus placa se vi
deSnyder, un cercetitor american care a clasificat solvenlii organici in funclie de mai muli cunoscut.
parametri structurali qi fizici), care diferi intre ele prin structura chimic[: eter etilic (grupa If
izopropanol qi etanol (I!, tetrahidrofuran (III), acid acetic (IV), diclormetan (V), acetat de ed
gi dioxan (VI), toluen (VII) li cloroform (VIID. Hexanul este un solvent considerat compk
nepolar gi este recomandat a fi introdus in amestecuri penku aducerea spoturilor in domenid
considerat optim, de Rf : 0.2-0.8 dacd mai este necesar.
R1: x1 / xo (12.38)
unde cu xr, respectiv x0, s-au notat distanlele parcurse de componentul dat, respectiv &
frontul solventului, pAnI la oprirea cromatogramei. Toate m6rimile calculate pentru o colocmi
inchisi au o mlrime corespondentl gi in PC. De exemplu parametrul de retenlie R devine Rr
(f de la front):
a: ts
Ri:
(t2.3e)
unde v reprezintdviteze de migrare, t - timpi de migrare iar k factorul de capacitate. De aici" Fig.l
implicit:
Anal
k: llRr- I (12.40) executarea I
concentralia
Compar0ndu-se valorile Rf ale spoturilor etaloanelor cu cele ale substanlelor densitometn
proba de analizat (lucru rcalizat de cele mai multe ori vizual) se spune ci se face $CanareA. D
calitativd. Aceasta este cea mai uti15 aplicalie a metodei PC. Se pot identifica pesticide posibill gi u
ape, sol dar qi alte substanle pentru scopuri gtiinlifice gi tehnice cu o sensibilitate mult curbe de er
buni decdt in eprubetS. Desigur c[ sensibilitatea atinsS este inferioarl celei drn HPLC. crescitoare I
aeeea, in aplicaliile analitice de performan{[, cu toatS simplitatea gi prelul de cost scdzut netada curb
nu poate inlocui intotdeauna HPLC. liniar al met
principal pe
340
ft- .8arft Ticult tcgreu*pirjol,
IJar ,Sr-er lrt- ${dr ttpr>Dil ,'Cr:sa Dlesc LsS
METODE $I TETINICI DE ANALIZ{ FIZICO.CHIMIC{
A COMPU$ILO R FARMACEUTICI
Aptic*re Elutia I
Axpect fiunl
@# *:ffi
_ IIII
d#
__ #__ @e: #i#
# #,
neuniformitdlile stratului sublire care contribuie in mod hotdrAtor la mdirea raporhrlui indllimii p
semnaVzgomot, notat SA{. Astfel, confo m Fig.12.38, H este ?nIllimea picului (semnalulud semnalul i
analitului iar h, - ldlimea domeniului ?n care vaiazd" zgomotul de fond (intervalul +2o). spot, duce
liniar.
Ur
constituie
aceasta se
realiza ctt
Mr
HPLC. in
aparaturi I
semicantit
Este preze
De
Dar pentr
Fig. 1 2. 3 8. Ilustrarea mdrimilor care afectea zd, raporftlJ semnaUzgomot expertize
H suficient6.
- h"2 :3H
sa+: - h"
u2.4t)
O varianti mai simplS dar mai laborioasi de analizd cantitativ6 constl it spdlaru
zonei corespunzdtoarc analitului de pe suport ?ntr-un pahar, folosind un solvent adecvat gi
apoi determinarea, cu o altd metodd instrumentald, a concenkaliei soluliei reniltate.
Evaluarea cu ajutorul foto-densitometrelor este pdnd in prezent cea mai utllizatd metodd. in
aceste instrumente , placa cromatograficd cu stratul pe ea, se deplaseazd odatd, cu suportul (de
reguld in direclia developdrii), prin faq fantelor sistemului optic de iluminare, respectiv de
misurare a intensitilii luminii reflectate. Schema unui astfel de dispozitiv se poate observa fu
Fis.12.39.
(Xi x*
tr{g
indllimii picurilor, fie a suprafelei acestora. Oricare dintre mlrimile misurate poate constitui
semnalul analitic. Trasarea graficului semnal analitic in funclie de cantitatea de substanln
din
spot, duce Ia o curb6 de etilonare. in cazul determindrilor de fluorescenti acest grafic
este
liniar.
Un exemplu de determinare cantitativd din domeniul controlului poluirii mediului il
constituie determinarea seleniului din ape. in acest caz inainte de aplicarea probei pe placd,,
aceasta se supune unei reaclii chimice numitl deivatizarc. Deivatizarea sellniului
se poate
r ealiza cu 2, 3 -diaminonaft alinr (DAN). Compusul rentltat este fl
uore scent.
Metoda PC este simpld gi ieftind dar, ca precizie qi exactitate, este adesea inferioara
HPLC' ln calitate de metodi semicantitativ5, PC este o metodi competitiv[ qi in lipsa unei
aparaturi performante (de exemplu HPLC) rdmAne uneori singura alternativ6. O analizd,
semicantitativd poate rdspunde la ?ntrebarea:
Este prezetttd speciaX intr-o concentralie mai mare decdt o concentralie limitd, C?
De foarte multe ori rlspunsul la aceastd intrebare este suficient in practica curent6.
Dar pentru monitorizarea automatd a conlinutului de poluanli din ape sau sol, pentru
-doar
expertize sau pentru conh"olul alimentelor, medicam"nt"lor, metoda pC nu este
suficient[.
343