Principiul metodei

Germenii GRAM (+)si GRAM (-) sunt coloraţi neselectiv de violetul de genţiană (cristalul violet).
Adaugarea de iod formeză un complex de cristal voilet – iod in peretele celular al bacteriilor.
Decolorantul, aflat in componenţa setului, extrage lipidele din peretele celular al germenilor GRAM  (-).
În acest fel, creste poroyitatea peretelui, ceea ce permite migraîia colorantuluiiar bacteriile devin
incolore.
Germenii GRAM(+) sunt deshidrataţi, producându-se o reducere a porozitaţii peretelui celular. Drept
urmare, complexul colorant este prins ca într-o „capcană” şi bacteriile rămân colorate.
Recolorarea germenilor GRAM (-) se efectuează cu fucsină.

Compunerea setului: 

Soluţie violet de genţiană           1 x 250 ml

Soluţie Lugol                              1 x 250 ml
Soluţie decolorare                       2 x 250 ml
Soluţie de fuxină                         1 x 250 ml

Prelevarea şi pregatirea probelor pentru analiză

Coloniile bacteriene se recoltează cu o ansă sterilă, se suspendă într-o picătură de apă distilată şi se
etalează pe lamă.
Probele de lichide se întind direct pe lame degresate, cu ajutorul unei pipete Pasteur.
Probele de paste,creme, geluri etc se etalează direct pe lame cu ajutorul unor spatule sterile.

 Fixarea frotiurilor:

Fixarea se efectuează prin trecerea lamei prin flacără, cu atenţie, evitându-se încălzirea excesivă care are
efecte negative la colorare.

Pregătirea setului pentru lucru:

Soluţia de fucsină se diluează de 10 ori. Pentru aceasta se ia 1 ml.soluţie de fucsină şi se amestecă cu 9

ml. apă distilată. Soluţia diluată este valabila 12 ore.
Pentru lucrul soluţia de decolorare se transferă în flacoane cu gâtul suficient de larg pentru a permite
accesul lamelor.

Tehnica de lucru:

Frotiul fixat se imerseză un minut în soluţia de violet de genţiană şi se spală bine cu apă distilată
Se imersează 2 minute în soluţia de Lugol şi se spală cu apă distilată
Se imersează în soluţia de decolorare ori de câte ori este necesar, pană ce „norii”de substanţe colorate
nu se mai degajă din părţile groase ale frotiului
Se imersează un minut în soluţia de fucsină diluată şi se spală cu apă distilată
Se scurge excesul de lichid prin pamponare cu hârtie de filtru
Se examinează la microscop cu obiectivul de imersie.

Intrepretarea rezultatelor:

Germenii GRAM (+) apar coloraţi in purpuriu-violet, iar cei GRAM (-) se coloreazş in portocaliu – roz sau
roşu.

Erori posibile:

Tratamentul pacienţilor cu medicamente antibacteriene poate face ca germenii GRAM  (+) să apară ca
GRAM (-). Rezultatele pot fi afectate şi de folosirea unor culturi bacteriene vechi sau de încălzirea
excesivă a frotiului la flacără.