Categorii de medii sintetice utilizate

pentru cultura fungilor

Butură Mihail
• Medii sintetice – compuse din substanţe chimice pure cu
compoziţie minimală sau foarte complexă și structură chimică
cunoscută.
• Mediile sintetice pot fi: simple (solide –geloză, sau lichide –
bulion, apă peptonată), sau complexe ( solide – geloză sânge,
geloză ser, sau lichide -bulion ser, bulion sânge).
Mediile Sabouraud
Mediul Sabouraud cu
Chloramfenicol și
Gentamicină
Compoziție:
• 1000 mL apă distilată
• Peptonă peptică 10 g
• Glucoză 20 g
• Cloramfenicol 0,04 g
• Gentamicină 0,05 g
• Agar 15 g Figura 1. Placă cu mediu Sabouraud
• pH = 6,8 ±0,2
Mediile Sabouraud
Sabouraud cu dextroză
Compoziție:
• 100 mL apă distilată
• 2% dextroză;
• 1% peptonă;
• 2% agar.
Dacă lipsește agarul se obține un mediu Sabouraud lichid.
Se poate adăuga și glucoză în concentrație de maxim 4% obținându-se
Bulion Sabouraud glucozat.
Se repartizează aseptic mediul în tuburi sau recipiente de diferite
capacități care se sterilizează prin autoclavare la 121°C timp de 15
minute.
Tuburile cu mediu pot fi sterilizate și prin fierbere pe baie de apă, timp
de 30 minute.
Mediile Sabouraud
• Adaugarea de antibiotice la mediul Sabouraud este frecvent
utilizată. Se poate utiliza, în acest sens, asocierea penicilină -
streptomicină: penicilină 20 mg, streptomicină 40 mg, la un litru de
mediu Sabouraud.
• Alte antibiotice ce pot fi utilizate pentru inhibarea dezvoltării unor
bacterii sunt: cloramfenicolul 50 mg/L mediu, aureociclină 0,05 -
0,1 mg/L mediu, cycloheximidă (actidionă) 400 - 500 mg/l mediu.
• Dacă la mediul Sabouraud se adaugă antibiotice, această operațiune
va fi efectuată înainte de turnare în plăcile Petri.
• Mediul Sabouraud este utilizat pentru controlul sterilității tuturor
produselor biologice și farmaceutice injectabile. Mediul cu
antibiotice , utilizat pentru izolarea și cultivarea fungilor patogeni
din diverse probe este special și datorită reducerii conținutului în
glucoză și creșterii valorii pH-ului aproape de neutru.
Mediul CHROM Agar Candida
Compoziție:
• 1000 mL apă distilată
• Cromopeptonă 10 g
• Glucoză 20 g
• Amestec cromogen 2 g
• Cloramfenicol 0,5 g
• Agar 15 g
• pH 6,0+/-0,3.
Incubarea plăcilor se face în
condiţii de aerobioză la 35±2
°C pentru 20 până la 48 de ore
într-o poziţie inversată.
Recomandări de păstrare:
Plăcile se păstrează la Figura 2. Placă cu mediu CHROM
temperaturi de 2-8°C. Agar pe care s-au dezvoltat colonii de
candida după însămânțare.
DNT (mediu specific pentru dermatofite)
Compoziție:
• 1000 mL apă distilată
• Extract papaic de făină de soia 10 g
• Glucoză 10 g
• Roşu fenol 0,2 g
• Cicloheximidă 0,5 g
• Gentamicină 0,1 g
• Clorhidrat de tetraciclină 0,1 g
• Agar 20 g
• pH 5,5 +/- 0,2
Antibioticele din mediu se utilizează ca agenți antifungici și
antibacterieni. Roșu fenol are rolul de indicator de pH. Dermatofiții
utilizează la început proteinele din mediu cu eliberare de metaboliți
bazici ce virează mediul de la galben la roșu.
Geloza nutritiva 2% (Geloza simpla 2%)
Compoziție:
• agar - 20 g;
• apă distilată – 1000 mL.
Modul de preparare: După
adăugarea agarului în apă, acesta
se fierbe până la dizolvare
completă;se sterilizează la 121°C
timp de 15 minute.
Aspect: geloză incoloră,
transparentă. Favorizează
sporularea majorității speciilor de
micromiceți saprobioți.
Recomandări de păstrare: Plăcile
se păstrează la temperaturi de 2-
8°C.
Figura 3. Placă cu geloză simplă
2%.
Mediu cu extract de drojdie de bere
Compoziție:
• extract de drojdie de bere – 1000 mL;
• glucoză sau maltoză - 35 g;
• geloză – 20 g;
• pH de 5,6.
Sterilizarea se face la 121°C, timp de 10 minute.
Modul de preparare: Extractul de drojdie de bere se obține prin
fierbere, timp de 5 minute, a 100 g drojdie de bere in 1000 ml apă
distilată. Se filtrează și se răcește. Mediul este utilizat pentru
fungii levuriformi și dermatofiți.
Recomandări de păstrare: Plăcile se păstrează la temperaturi de 2-
8°C.
Mediul Dixon
Compoziție:
• agar cu extract de malt -60 g;
• peptonă -36 g;
• bilă de bou –20 g;
• tween 40 – 10 mL;
• glicerol mono-oleat –2,5 mL;
• apă distilată până la –1000 mL.
Modul de preparare: Se dizolvă succesiv diferitele componente în apă și apoi
se sterilizează mediul obținut, 20 minute, la 115°C. Mediul se utilizează pentru
izolarea și cultivarea speciei Malassezia furfur.
M. furfur este o drojdie lipofilă, prin urmare creșterea in vitro trebuie stimulată
de uleiuri naturale sau de alte substanțe grase. Extractul de malț și Peptona
furnizează compuși azotați. pH-ul scăzut favorizează creșterea fungilor și
inhibă bacteriile contaminante din probele de testare.
Mediul Christense (Geloza cu uree)
Compoziție:
• Pentru 1000 mL apă
• Agar 15 g
• NaCl 5 g
• KH2PO4 2 g
• Peptonă 1 g
• Glucoză 1 g
• Roșu fenol 0.012 g
• Soluție uree 100 mL
• pH 6,8 ± 0,1 la 25°C
Mediul se folosește pentru
identificarea unor dermatofiți, în
special a speciilor T. rubrum și T.
mentagrophytes. T. mentagrophytes
este ușor pozitiv (roșu), iar T. rubrum
ureazo-negativ (oranje). Figura 4. Eprubetă cu mediul
Christense.
Geloza Mycosel (Micobiotic Agar)
Compoziție:
• peptonă – 10 g;
• glucoză – 10 g;
• agar – 15 g;
• cicloheximidă – 0,4 g;
• apă distilată – 1000 mL.
Mod de preparare:Se amestecă ingredientele și se fierb până la
dizolvarea lor complecta. Se sterilizează la 121°C, timp de 15
minute.
Aspectul mediului este de geloză gălbuie, transparentă. Mediu
selectiv utilizat pentru izolarea primară a dermatofiților.
Cycloheximida inhibă dezvoltarea majorității levurilor și fungilor
filamentoși potențial patogeni. Trebuie să permită dezvoltarea
speciei Trichophyton verrucosum și să inhibe total sau parțial
dezvoltarea speciilor Aspergillus flavus și Staphylococcus
epidermidis.
Mediul Czapeck-Dox
Compoziţie:
• 1ooo mL ală distilată;
• Zaharoză 30 g;
• Azotat de sodiu 2 g;
• Fosfat de potasiu 1 g;
• Sulfat de magneziu 0,5 g;
• Clorură de potasiu 0,5 g;
• Sulfat feros 0,01 g;
• Agar 15 g;
• PH final (la 25 ° C) 7,3 ± 0,2.
Sterilizați prin autoclavare la (121 °
C) timp de 15 minute. Acest mediu
asigură creșterea și dezvoltarea
speciei Aspergillus flavus (colonii
verzi-galbui). Mediu de referință
pentru identificarea speciilor ce Figura 5. Placă cu mediul Czapeck-
aparțin genului Aspergillus. Dox.
Alte medii specifice pentru
fungi
Geloza cu purpur de bromcrezol, lapte praf, glucoză:
Mediu selectiv folosit la decelarea dermatofiților și
diferențierea speciilor T. rubrum și Microsporum persicolor
de T. mentagrophytes. Trichophyton rubrum nu produce nici
o modificare de pH și crește greu în 7 zile la 25°C;
Trichophyton mentagrophytes alcalinizează mediul și crește
abundent în 7 zile la 25°C.
Mediul cu orez: Se utilizează pentru identificarea speciei
Microsporum audouinii și a sușelor nesporulate de M. canis.
M.canis se dezvoltă bine, secretă un pigment galben și
sporulează abundent; M. audouinii nu crește sau creșterea
este deficitară.
Mediul cu extract de semințe de Niger: Este mediu selectiv pentru
cultivarea speciei Cryptococcus neoformans.
Geloza Blasto D: Mediu specializat, care asigură transformarea formei
filamentoase a micromicetului B. dermatitidis într-o formă levurică prin
cultivare la 37°C.
Geloza cord-creier: Permite dezvoltarea speciei Candida albicans,
obținerea formei levurice a speciei Sporothrix schenckii la 37°C.
Mediul cu cloramfenicol inhibă dezvoltarea bacteriilor de contaminare,
în special Staphylococcus epidermis.
Mediul se poate folosi pentru izolarea fungilor patogeni prin
însămânțarea prelevatelor din leziuni. Varianta mediului înbogățit cu
sânge de oaie poate favoriza apariția formelor levurice la fungii
dimorfici.
Bibliografie:
• https://microbiologie.umftgm.ro/atlas/bacteriologie
• http://www.tgw1916.net/notedecurs/microbiologie/medii.ht
ml