1

4. Preparatele microscopice i frotiurile

4.1. Generaliti

- examinarea microorganismelor necesit o mrire de 1.000x

preparate microscopice proaspete (ntre lam i lamel)
frotiuri (fixate i colorate)

4.2. Preparatele microscopice proaspete

- lama se degreseaz prin flambare

- dac pp. este lichid se utilizeaz ca atare
- dac se exam. microorg. care au format colonii pe mediu solid o ans din colonie se descarc ntr-o
pictur de soluie salin fiziologic

- pictura se acoper cu o lamel i se preseaz uor => se elimin bulele de aer

- dac se suspecteaz o micoz superficial se nclzete preparatul
- se examineaz cu obiectiv de 40x

4.3. Frotiurile

- lama se degreseaz prin flambare i se aaz cu partea flambat n sus

- se sterilizeaz ansa bacteriologic i se ateapt s se rceasc

- se prelev pp. i se depune n centrul lamei, apoi se ntinde pe axul lung al lamei ntr-un strat subire
- lama se las la uscat lng becul de gaz
- frotiul se fixeaz, trecndu-l prin flacr

Colorarea frotiurilor
1. ALBASTRU DE METILEN
- frotiul se acoper cu soluie de albastru de metilen 3 min
- se spal cu ap distilat i se las la uscat

2. GIEMSA
- fixarea se face chimic, cu alcool metilic
- lama se scurge i se ateapt evaporarea alcoolului metilic
- frotiul se acoper cu soluie May-Grnwald 3 min, apoi se scurge soluia
- frotiul se acoper cu soluie Giemsa 10 min
- se spal cu tampon fosfat i se las la uscat

3. GRAM
- se dilueaz fucsin ntr-un recipient (9 pri ap distilat, 1 parte fucsin)
- frotiul se acoper cu violet de genian (de metil) 2 min, apoi se scurge soluia
- frotiul se acoper cu lugol 2 min, apoi se scurge soluia
- frotiul se acoper cu un amestec alcool-aceton (3 pri alcool, 1 parte aceton) 7-8 s
- se spal cu ap distilat
- frotiul se acoper cu fucsin diluat 1 min
- se spal cu ap distilat i se las la uscat

4. ZIEHL NEELSEN
- pt. identificarea de bacili acid-alcool rezisteni (BAAR)
- frotiul uscat se acoper complet cu fucsin bazic nediluat
- becul de gaz este trecut pe sub lama cu fucsin pn la emiterea de vapori (nu fierbere)
- dac frotiul nu mai este acoperit complet cu fucsin, se adaug colorant i se repet de 3 ori
 2

- se spal cu ap distilat i se adaug amestec de acid-alcool 2 min

- se spal cu ap distilat i se acoper cu albastru de metilen 1 min
- se spal cu ap distilat i se las la uscat

5. KINYOUN
- pt. identificarea BAAR fr a utiliza nclzire
- lama se acoper cu hrtie de filtru
- se picur fucsin Kinyoun pn se mbib hrtia complet i se ateapt 5 min
- se ndeprteaz hrtia de filtru i se spal cu ap distilat
- lama se acoper cu amestec de acid-alcool 30 s, se vars i se repet
- se spal cu ap distilat
- frotiul se acoper cu albastru de metilen 1 min
- se spal cu ap distilat i se las la uscat

6. FLUORESCENT
- pt. identificarea BAAR
- frotiul se acoper cu soluie de auramin O 15 min
- se spal cu ap distilat i se adaug amestec de acid-alcool 5 min
- se spal cu ap distilat i se adaug soluie de permanganat de potasiu 2 min
- se spal cu ap distilat i se las la uscat

7. GIMENEZ
- pt. identificarea rickettsiilor i incluziunilor de Chlamydia spp.
- lama se acoper cu xilol 5 min, apoi se ndeprteaz
- lama se acoper cu alcool etilic 2 min, apoi se ndeprteaz
- frotiul se acoper cu fucsin Gimenez 2 min
- se spal cu ap distilat
- frotiul se acoper cu verde malahit 7-8 s
- se spal cu ap distilat i se las la uscat

4.4. Examinarea la microscopul optic

1. Examinarea unui preparat proaspt

- cu obiectiv 40x
- se pot examina: sediment urinar materii fecale
suspensii de bacterii preparate umede

- sediment urinar -> celule epiteliale (malpighiene, vezicale, uretrale)

-> sangvine (leucocite, hematii)
-> cristale urinare
-> levuri

- preparat montat n sol. de KOH -> levuri, blastoconidii, atroconidii

- preparat colorat cu tu de India -> levuri nconjurate de un halou clar

2. Examinarea unui preparat fixat i colorat

- cu obiectiv cu imersie, o pictur de ulei de cedru n zona care se examineaz
- se pot examina: morfologia celulelor din pp.
prezena leucocitelor / bacteriilor i dispunerea lor

- frotiu cu AM -> bacterii capsulate = albastru nchis

-> celule inflamatorii = citoplasm n nuane de albastru, nucleu albastru nchis
 3

- frotiu cu Giemsa -> hematii = roz-roii

-> PMN = citoplasm roz, nucleu violaceu
-> limfocite i macrofage = citoplasm albastr, nucleu violaceu
-> bacterii = violet

- frotiu cu Gram -> microorg. gram pozitive = violet

-> microorg. gram negative = roii din cultur pur
-> levuri = violet

-> celule inflamatorii = citoplasm i nucleu n nuane de rou

-> bacterii gram pozitive sau negative din produs patologic
-> levuri = violet

- frotiu cu ZN / KY -> BAAR = roii, fini

-> celule inflamatorii = albastre