Experiena 7.2.

Separarea cromatografic a pigmenilor din spanac

Pregtirea probei:
30g frunze de spanac se macereaz fin cu nisip ntr-un mojar i se adaug apoi
20ml aceton.
Se amestec energic timp de 10-15 minute dup care soluia acetonic se
transfer ntr-o plnie, de separare de 100ml, la care se adaug 10 ml hexan i
50ml ap.
Se agit intens amestecul din plnie, dup care fazele sunt lsate s se separe.
Faza apoas inferioar se elimin i faza organic se amestec din nou cu un
volum egal de ap, se las s se separe iar faza inferioar (apoas) se elimin
din nou.
Faza superioar se introduce ntr-un flacon Erlenmeyer care conine Na 2SO4
anhidru pentru eliminarea apei rmase n faza organic. Aceast soluie este
apoi filtrat ntr-o eprubet uscat i este concentrat pentru a fi supus
separrii cromatografice.
Separarea pe strat subire:
Pe o plac cu strat subire de silicagel, la o distan de 1,5 cm de margine se
aplic 3 spoturi coninnd cantiti cresctoare de prob.
Cromatograma se developeaz cu un amestec de hexan:aceton=7:3 n cuve
ferite de lumin.
Dup developare se marcheaz imediat poziia spoturilor (valoarea R f),
ntruct acestea se decoloreaz rapid. Valoarea maxim a Rf-ului o prezint un
spot de culoare galben, corespunztor unei molecule nepolare, identificat a
fi -carotenul. Alte carotenoide au valori Rf mai joase, n paralel cu polaritatea
lor cresctoare (datorat gruprilor OH, ceto sau epoxid). Clorofila a poate fi
identificat ca un spot verdealbstrui, iar clorofila b ca un spot verdeglbui.
Experiena 7.3.

Separarea cromatografic a carotenoidelor din boia de ardei

Culoarea specific pudrei de boia de ardei este datorat unor molecule
specifice de carotenoide i anume: capsantina i capsorubina (oxocarotenoide),
anteraxantina i violaxantina (epoxizi), zeaxantina, -criptoxantina (derivai
hidroxilici), -carotenul i izomerii si geometrici.
Aceste sunt doar componentele majore, numrul total de carotenoide depind
cifra de 58.
Pregtirea probei:
- La 1 g de pudr de boia se adaug aproximativ 10 ml hexan i se agit timp de
10-15 minute.

- Soluia colorat obinut se decanteaz apoi de pe pudr i se usuc pe Na 2SO4

anhidru. Proba obinut se divide n 6 eprubete i se folosete pentru separarea
cromatografic.
Separarea pe strat subire:
- Se introduc n tancul de developare aproximativ 10 ml eluent
(hexan:aceton=9:1).
- Extractul se aplic pe plac la o distan de 1,5cm de capt, cu ajutorul unei
capilare, n mai multe spoturi paralele care conin cantiti cresctoarede
prob.
- Dup developare se observ ordinea de eluie de la vrful (frontul eluentului)
spre baza plcii: capsorubina (roie), violaxantina (galben), capsantina
(roie), anteraxantina (galben), -carotenul (galben).
Experiena 7.4.
Separarea i determinarea coloranilor utilizai pentru colorarea
drageurilor
O prob de 1-2 g se mojereaz cu 5-10 mL ap apoi se filtreaza. Filtratul se
amesteca cu 0,5 mL KHSO4 soluie 10 i se menine pe baia de ap 10
minute introducndu se cinci fire degresate de lna .Lna colorat se spala cu
ap rece apoi se inclzete timp de 10 minute cu 5mL soluie hidroxid de
amoniu 1 . Supernatantul separat prin centrifugare se evapor la sec , iar
reziduul se dizolva n 5 picturi de ap i se realizeaz cromatografia pe plci de
silicagel utiliznd ca faz mobila butanol: etanol:ap (2:1:1).
Experiena 7.5.
Separarea cationilor metalelor grele din produsele alimentare.
La separarea i identificarea ionilor Cu 2+ , Co2+ , Mn2+ i Ni2+ din produsele
alimentare prin CSS se utilizeaz ca adsorbant plci de celuloz:POLYGRAMCEL 300 pe care proba se aplic spoturi mici i compacte. Faza mobil este
format din aceton:acid clorhidric 18(100:25)proaspt preparat. Dup 13
minute de developare separarea este complet. Dup uscare la aer se stropete
placa cu 5 mL acid rubeamic (soluie 0,2 n etanol)i apoi se usuc Ionii
metalici formeaza compui chelai colorai cu acidul rubeamic , determinant
fiind concentraia ionilor de hidrogen .Pentru vizualizarea spotului manganului
se ine placa cromatografic ,ctva minute , deasupra unui vas in care s-a
introdus amoniac 25 pentru a o trata cu vaporii de amoniac (dup 30 minute
culoarea dispare) . Se obtine cromatograma din figura 7.3. Cel mai bine se
observa dup separare dou zone :una galben data de [CuCl 4]2- i una albastra
dat de [CoCl4]2- .