Sunteți pe pagina 1din 4

Lucrare de laborator

Determinarea activitii enzimei catalaza

Enzimele sunt proteine sau proteide care catalizeaz reaciile biochimice din organism, avnd un rol esenial
n biosinteza i degradarea substanelor din materia vie, ntlnindu-se n toate organismele animale, vegetale
i n microorganisme, mai fiind denumite din aceast cauz biocatalizatori.Fr enzime , procesele
biochimice s-ar desfura cu viteze foarte mici.

Dup tipul reaciei catalizate se clasifica in:

* Oxidoreductaza
* Transferaza
* Hidrolaza
* Liaza
* Isomeraza
* Ligaza

Enzimele oxidoreductaze dup mecanismul de aciune se clasific n trei grupe:


dehidrogenaze anaerobe i aerobe, care sunt enzime transportoare de hidrogen;
citocromi, care sunt enzime transportoare de electroni;
oxidaze, enzime care catalizeaz reaciile de oxidare a substratului cu oxigenul molecular sau
cu oxigenul peroxidic.
Oxidazele se mpart n trei subgrupe:
oxigenaze;
hidroxilaze;
oxidaze transportoare de electroni.

Oxigenazele catalizeaz reaciile de combinare a substratului cu oxigenul molecular (cu


ambii atomi din molecul):
AH + O2 AOOH; sau A + O2 AO2

Hidroxilazele enzime care oxideaz substratul cu formarea concomitent a apei. Un atom


din oxigenul molecular particip la oxidarea substratului, iar alt atom la formarea apei:
AH2 + S + O2 A + SO + H2O
unde: AH2 donator de hidrogen; S substrat; A donor liber; SO substrat oxidat.

Oxidazele transportoare de electroni conin n molecula sa ioni metalici i catalizeaz reacia


de oxidare a substratului cu ajutorul oxigenului atomic. Oxidazele se mpart n dou subgrupe:
cupruoxidaze, enzime care conin cupru, din ele fac parte fenoloxidazele, polifenoloxidazele,
ascorbatoxidaza, tirozinaza etc.;
feroxidaze, enzime care conin fier, din ele fac parte peroxidazele i catalazele.

Peroxidazele sunt enzime ce conin Fe3+. Ele descompun peroxidul de hidrogen (H2O2) numai
n prezena unui acceptor de oxigen sau a unui donor de hidrogen:
1
H2O2 + A AO + H2O;

H2O2 + AH2 2 H2O + A


Ele sunt larg rspndite n regnul vegetal (mai ales n rdcinile de hrean) i mai puin n cel
animal (lapte, saliv, ficat, leucocite).
Peroxidazele sunt active n struguri n perioada maturrii lor. Temperatura de peste 70 oC i
dozele ridicate de SO2 inactiveaz sau distrug peroxidazele din must i vin.
Catalazele sunt enzime ce conin Fe3+. Se gsesc n toate celulele vegetale, dar pot fi prezente
i n microorganisme, n special n bacteriile acetice. La animale se conin mai mult n snge i ficat.
Catalaza este o enzim din clasa oxidoreductazelor, rspndit n majoritatea
mcroorganismelor aerobe, n celulele animalelor i plantelor superioare . Domeniul de temperatur la
care acioneaz optim este cuprins ntre 0...10C .Catalaza (are proprietatea de a descompune
peroxidul de hidrogen (apa oxigenat) n ap i oxigen molecular. Peroxidul de hidrogen poate fi i
donor de oxigen:

catalaza
H2O2 H2O + 1/2 O2
catalaza
2 H2O2 2 H 2O + O 2

Activitatea catalazei este inhibat de cianuri, hidrogenul sulfurat i fluoruri, i pierde


activitatea funcional la nclzire.
Apa oxigenat se formeaz la etapa final de oxidare biologic, cnd dehidrogenazele aerobe
(flavinice) transmit hidrogenul direct oxigenului atmosferic. Apa oxigenat (H2O2) este toxic pentru
celulele vii.
Preparatele enzimatice de catalaz, obinute din ficat de bovine sau prin sintez microbian, se
utilizeaz n industria alimentar pentru distrugerea H2O2 rmase n urma pasterizrii laptelui.

Principiul metodei

Determinarea activitii catalazei se bazeaz pe evidena apei oxigenate, descompuse de


enzim timp de 30 minute, prin titrarea peroxidului cu permanganat de potasiu 0,1 N:

5 H2O2 + 2 KMnO4 + 4 H2SO4 5 O2 + 2 KHSO4 + 2MnSO4 + 8 H2O

Diferena volumelor de soluie 0,1N KMnO4 (cm3) a probei de control i probei de lucru, indic
cantitatea apei oxigenate descompuse de enzim.

Ordinea ndeplinirii lucrrii pentru probe solide

Aparate, vase i materiale:


baloane conice 100 cm3 i 250cm3 ;
cilindru de 100 cm3;
mojar cu pistil;
pipete 5, 10 i 20 cm3;
biuret 25 cm3;
soluie 1 % ap oxigenat;
2
soluie 0,1N KMnO4;
soluie 10 % H2SO4;
probe de produs (fin, cereale, mal).

5 g de produs se infuz timp de 1,5 ore cu 100 cm 3 de ap distilat la temperatura camerei n


balon conic de 250 cm3. Suspensia obinut se filtreaz prin hrtie de filtru pliat.
Pentru determinare se iau dou probe cte 20 cm3 de filtrat limpede. Coninutul probei de
control se fierbe timp de 5 minute pentru inactivarea enzimei. n ambele probe se dozeaz cte 20 cm3
ap distilat i 3 cm3 soluie 1 % peroxid de hidrogen i se las pentru 30 minute la temperatura de
camer. Aciunea enzimei este stopat prin administrarea a 3 cm3 soluie 10 % de H2SO4, iar restul
de peroxid de hidrogen se titreaz cu soluie 0,1 n de KMnO4.
Diferena volumelor de soluie 0,1n de KMnO4 (cm3) a probei de control i probei de lucru,
indic activitatea enzimei. Activitatea catalazei poate fi exprimat n mg peroxid de hidrogen sau cm3
soluie 0,1 n KMnO4 la 1g produs analizat. 1 cm3 soluie 0,1n KMnO4 corespunde 1,7 mg peroxid de
hidrogen.

Activitatea catalazei (Ac) n mg H2O2/g x 30 min se determin dup formula:

(a-b) x 1,7 x 5
Ac =
n
unde:
a volumul soluiei 0,1N KMnO4 pentru titrarea probei de control, cm3;
b volumul soluiei 0,1N KMnO4 pentru titrarea probei de lucru, cm3;
5 recalcularea la volumul extractului
1,7 mg H2O2 echivalente 1cm3 0,1N KMnO4;
N masa probei, g.

Ordinea ndeplinirii lucrrii pentru probe solide

Aparate, vase i materiale:

soluie 1 % de ap oxigenat, prealabil neutralizat cu soluie 0,1n NaOH;


soluie 0,05 n de KMnO4;
soluie 10 % de H2SO4;
probe de produs (vin, suc).

n 4 baloane conice cu dop rodat de 100 cm3 se adaug cte 10 cm3 de vin sec. Dou probe (
de control) se fierb 5 minute cu rcitor invers pentru inactivarea enzimei. n dou probe de lucru i n
cele de control se adaug cte 10 cm3 de ap distilat i cte 3 cm3 soluie 1% de H2O2, preventiv
neutralizat cu soluie 0,1n NaOH i se las n repaus 30 minute la temperatura camerei. Apoi n toate
probele se adaug cte 5 cm3 soluie 10 % H2SO4, se agit bine i se titreaz cu soluie 0,05 n KMnO4.
Titrarea continu pn cnd apare culoare roz stabil 5 secunde.
Activitatea catalazei se exprim prin cantitatea de peroxid, descompus de enzim timp de 30
minute, care se conine n 1 cm3 de vin.
Activitatea catalazei se determin dup formula:
(a-b) x 0,85
Ac =
n
3
unde: a volumul soluiei 0,05 n de KMnO4 pentru titrarea probei de control, cm3;
b volumul soluiei 0,05 n de KMnO4 pentru titrarea probei de lucru, cm3;
0,85 mg de H2O2 echivalente cu 1cm3 0,05 n de KMnO4;
n volumul vinului analizat, cm3.

Rezultate:
V1Titrare = 4.56 cm3
V2Titrare = 3.90 cm3
(4.563.9)0.85
Ac= = 1.112 mg/l*30min
5

Concluzie:
In urma efectuarii acestei lucrari am determinat activitatea enzimei catalaza care e
egala cu 1.112mg/l*30min .

S-ar putea să vă placă și