LP 4 Determinarea activităţii catalazei

CATALAZA

Catalaza este o enzimă din clasa oxido-reductazelor, care catalizează descompunerea

apei oxigenate cu eliberare de oxigen molecular.
Se află în toate celulele aerobe, în mitocondrii și peroxizomi, alături de peroxidază și
glutation-peroxidază (GSH-peroxidază). În condiții de stres oxidativ, infecții, când se produc
afte sau ulcerații in cavitatea bucală din cauza dezvoltării unor bacterii ce secretă mult H2O2,
capacitatea antioxidantă enzimatică este depașită.
Catalaza sanguină se află în eritrocite, iar activitatea ei este dependentă de numărul de
eritrocite. De aceea pe lângă determinarea activităţii catalazei, se face şi numărarea
eritrocitelor.

Determinarea catalazei serice

Principiul metodei

Metoda indirectă

Catalaza acţionează asupra unei cantităţi în exces de apă oxigenată, la temperatura camerei,
un timp determinat. Excesul de apă oxigenată rămasă netransformată de catalază se titrează în
mediu acid cu permanganat de potasiu.

Activitatea catalazei se determină prin cantitatea de apă oxigenată descompusă de catalază în

30 min. şi la 170C.

Reactivi
Solutie apa oxigenata 1%
Solutie acid sulfuric 20%
Solutie KMnO4 0,1N
Alcool amilic

Proba
Sânge diluat 1/1000

Tehnica de lucru

- Se recoltează 0,1 ml sânge din pulpa degetului cu ajutorul unei micropipete.

- Se introduc intr-un balon cotat de 100 ml in care se afla 10 ml apa distilată.
- Se agita bine pentru a produce hemoliza si se completeaza la semn cu apa distilată.

In 2 flacoane Erlenmayer martor si probă se pipeteaza cate 10 ml ad si cate 1 ml ser diluat.

- Martorul se fierbe 3 – 5 min pentru a distruge enzima.
- Apoi se adauga in ambele pahare cate 2 ml apa oxigenata.
- Se agita si se incubeaza 30 min la 170C.
- Se adauga cate 5 ml acid sulfuric si cate 2 -3 picaturi alcool amilic.

Se titreaza cele 2 flacoane cu KMnO4 0,1N pana la roz pal, culoare stabila.
Calcul
mg apă oxigenată = (VM – VP) x T KMnO4/H2O2
unde:
T KMnO4/H2O2 – titrul prmanganatului in raport cu apa oxigenata = 1,7 mg/ml
VM – volumul de permanganat in ml folosit la titrarea probei martor
VP - volumul de permanganat in ml folosit la titrarea probei

Activitatea enzimei se exprimă prin numărul catalazic care reprezintă cantitatea în mg de

apă oxigenată descompusă de catalaza dintr-un microlitru de sânge.

IMPORTANT !!!

Valoare de diagnostic are indicele catalazic care se calculează astfel:

Indicele catalazic = numărul catalazic / număr eritrocite

Valori normale: 12 – 14

Variaţii patologice

Valori scăzute: cancer, anemie, caşexie, afecţiuni hepatice (80%)