L.3. Determinarea calciului din ser 3.1.

Rolul calciului n organism

Calciu este cel mai abundent mineral din organism. Necesarul zilnic de calciu este 1 gram, din care se absorb doar 10-20%. Calcemia (concentraia plasmatica a calciului) normal este 9-11 mg% sau 2,25 -2,75 mmol/l. Calciul ndeplinete n organism un rol plastic participnd prin combinaiile sale insolubile la structura scheletului osos a crui principal component mineral este hidroxiapatita, Ca10(PO4)6(OH)2, i un rol dinamic sub form de ioni Ca2+ prezeni n fluidele, cum ar fi plasma sau urin, sub forma a trei fraciuni: 1. Calciu legat de proteine (proteinate de calciu) aproximativ 1 mmol/l. Aceast form depinde de concentraia relativ a proteinelor i calciului din plasm. Pe baza acestei dependene se poate aprecia fraciunea de calciu ionizat, cunoscnd calciul total din ser sau plasm i nivelul proteinei din ser sau plasm. Tehnica const n folosirea nomogramei MacLean i Hastings, cunoscnd cei doi parametri amintii anterior se citete direct valoarea calciului ionizat de pe nomogram. 2. Calciul legat de molecule mici (compleci de calciu sau chelai) acizi organici, numit i calciu complexat dializabil. Acesta poate strbate membranele semipermeabile (celofan) spre deosebire de calciul legat de proteine. 3. Calciul liber, forma biologic activ ce intervine n coagularea sngelui n activarea enzimelor (proteaze), n buna funcionare a inimii, muchilor i nervilor. Calciul seric se afl n dou forme: calciu neionizabil combinat cu proteinele serice i calciul ionizabil care reprezint calciul total al serului . Calciul are n primul rnd un rol plastic, deoarece are rol n permeabilitatea fraciunea fiziologic activ i constituie 45-55% din

membranelor, n metabolismului hidric, coagularea sngelui etc. Scderea calciului sub 5 mg% provoac fenomene tetanice. Metabolismul calciului este reglat de hormoni, vitamine (D, A i C).

3.2. Dozarea calciului prin metoda complexometric

Principiul metodei Se titreaz direct ionii de calciu n mediu intens alcalin cu sare disodic a acidului etilendiaminotetraacetic (Na2EDTA numit i complexon III), n prezena murexidului (purpurat de amoniu) ca indicator. Iniial indicatorul va fixa ionii de calciu (culoarea soluiei va fi roz) care prin titrare vor fi apoi complexai de EDTA. Indicatorul eliberat va colora soluia n violet. Murexidul, indicator metalocromic (pentru calciu i ali cationi) are gradul de ionizare n funcie de pH-ul mediului.
NaOOC CH2

CH2

COONa

N O C O CH2

CH2

CH2

N CH2 C O O

+ Ca2+

NaOOC

CH2 N

CH2

COONa

:
CH2 CH2 CH2 Ca2+

:
N CH2 C O O

C O

Reaciile prin care ionii Ca2+ sunt complexai de indicator i de complexon III sunt:

CaInd Ca 2+ + Ind 3- roz 2+ 4 CaY2Ca + Y

complexon deprotonat Virajul culorii indicatorului are loc n urma reaciei titrimetrice:
CaInd + Y 4 CaY 2 + Ind 3 roz incolor violet

Reactivi : soluie de NaOH 9n ( se solubilizeaz 36 g substan n ap distilat, iar dup rcire se aduce la volumul de 100 cm3)

 murexid (purpurat de amoniu) - indicator. Se face un amestec de murexid cu clorur de potasiu n proporie de 1/800 i se mojareaz fin omogen soluie de EDTA n /100. Se introduc ntr-un balon cotat de 1000 cm3, 1,86 g EDTA anhidru i se adaug 200 cm3 ap deionizat. Se alcalinizeaz cu NaOH 10% pn ce soluia devine perfect clar. Se completeaz la semn cu ap deionizat. Dac se folosete EDTA x 2H2O (sare disodic C10H14O8N2Na2) se cntresc 2,03g EDTA x 2H2O i se aduce la semn. La 1000cm3 cu ap demineralizat. Pentru verificarea concentraiei soluiei de EDTA n/100 se poate prepara un etalon n modul urmtor: se iau ntr-o capsul de porelan 2g CaCO3 p.a. cntrit foarte exact i 1 cm3 acid clorhidric i se evapor la sec. Se dizolv reziduul de clorur de calciu n ap distilat se trece ntr-un balon cotat de 1000 cm3 i se completeaz la semn. Un cm3 din aceast soluie conine 0,8 mg calciu. Aceast soluie diluat 1/10 va conine 0,08 mg calciu; 5cm3 din aceast soluie trebuie s se titreze cu exact 2 cm3 EDTA n /100 .

Modul de lucru: se introduc 1 cm3 ser ntr-o fiol Erlermeyer ; se dilueaz cu 24 cm3 ap demineralizat (deionizat). se adaug 0,2 cm3 NaOH 9n i un vrf de cuit de indicator, murexid. se titreaz cu soluie EDTA n / 100 (conc. 0,01N) pn ce culoarea vireaz de la roz la roz-violaceu. Paralel se titreaz i o prob martor, folosind ap demineralizat n loc de ser.

Calculul: Cantitatea de calciu se exprim n mg /100ml ser (sau mg/100cm3, sau mg/dL) mg Ca /dl ser = (n -n1) x 0,2 x 100 n care: n = cm3 EDTA n / 100 folosii la titrarea probei n1 = cm3 EDTA n /100 folosii la titrarea probei martor

0,2 = cantitatea de calciu n mg ce corespunde la 1cm3 EDTA n/100 100 = factor pentru raportarea la 100 cm3 ser Valorile normale: Concentraia normal de calciu n serul sanguin are valori normale cuprinse ntre 5,3713,87mg /dl n funcie de specie: bou = 9,5-11,0 mg/dl; cal = 10,5-13,8 mg/dl; porc= 5,37- 12,7 mg/dl ; cine= 12,0 - 12,5 mg/dl Hipocalcemia se ntlnete n rahitism, osteoporoz, osteomalacie, osteofibroz, tetanii, etc. Hipercalcemia (rareori la animalele domestice)- formarea de calculi (calculoz renal, vezical), nefrocalcinoz, paracheratoz.

L4. Determinarea magneziului prin metoda cu galben de titan

Magneziu este distribuit inegal n organism, avnd o concentraie mai mare n esuturile cu activitate metabolic mai intens, cum ar fi creierul, inima, ficatul, rinichii, tiroida. Scheletul conine 60% din magneziu. Muchii scheletici i miocardul conine 35%, iar 1% se gsete n compartimentul extra-celular, din acesta aproximativ dou treimi fiind sub form ionizat, restul fiind legat de albumine. Principalele organe implicate n metabolismul Mg sunt intestinul i rinichii. Magneziul are un rol cheie n numeroase funcii mediate enzimatic, fiind implicat n formarea de substrate enzimatice (ATP Mg, GTP Mg) precum i n activarea direct a enzimelor.

Principiul metodei ntr-o soluie puternic alcalin magneziul din ser formeaz particule coloidale de hidroxid de magneziu. Colorantul galben de titan (galben de tiazol cu structur complex) este absorbit pe aceste particule formnd un complex colorat n rou care este apoi stabilizat cu alcool polivinilic, pentru a se evita flocularea. Intensitatea culorii roii se determin fotocolorimetric la 540 nm.

Reactivi: Colorant soluie etalon stoc galben de titan (galben tiazol) 0,5%: Se dizolv 0,5g galben tiazol n 100 cm3 ap demineralizat i se adaug 1cm3 soluie alcool polivinilic 0.1%. Colorant soluie de lucru galben de titan: 2 cm3 din soluia etalon stoc la 100ml ap demineralizat; se prepar extemporaneu soluie de NaOH 7,5%. reactiv alcool polivinilic: 1g alcool se dizolv n uor, se rcete i se aduce 400 ml ap demineralizat, nclzindu-se demineralizat. Soluie etalon de magneziu stoc - 1 mg Mg2+/ml: 8,358 g MgCl2 x 6 H2O se dizolv n 1000 ml ap demineralizat. sau 1,0129 g MgSO4 x 7 H2O dizolvai n 100 ml H2SO4 0,1 N la volumul de 1000 ml cu ap

 Soluie etalon de magneziu de lucru - 5 g Mg2+ /ml: 1ml soluie stoc se dizolv n 200ml ap demineralizat. Acid tricloracetic soluie 10%

Modul de lucru: Prima etap - deproteinizarea serului. ntr-o eprubet de centrifug se pipeteaz 0,5ml ser (sau plasm) + 0,5 ml ap demineralizat + 1 ml acid tricloracetic conc. 10%. Se agit, se las apoi n repaus 10 minute i se centrifugheaz la 3000 rot/minut, timp de 2-3 minute.

Etapa a 2-a: Reactivi (ml ) Supernatant prob Etalon de lucru Mg H2O bidistilat Soluie de lucru galben de titan NaOH 7,5 % 1 1 1 1 1.5 Prob Etalon (Standard) 1 1.5 Martor (Blanc) 1 1.5

Dup 5 minute se citesc extinciile la 540 nm fa de proba martor. Coloraia este stabil timp de o or .

Calcul: 1 ml supernatant prob corespunde unui volum de 0,25 ml ser (sau plasm); 1 ml soluie etalon de lucru conine 5g Mg2+.

mg Mg2+/100ml ser =

E proba E standard

x (5x10-3) x 100 / 0,25

mg Mg2+/dl ser =

E proba E standard

x 2

Valoarea normal este de 2-3.5 mg/dl; pe specii: carnivore -2.1 mg/dl, bovine, ovine 1.7- 2.3 mg/dl, suine, cabaline- 2.5 mg/dl, iepure -3.2 mg/dl, psri 3.5 mg/dl Hipomagneziemie: se ntlnete n malabsorbie, diaree, vrsturi, stri de intoxicaie, hipoparatiroidism, pierdere renal de Mg. Deficitul de Mg 2+ (ionzat), nu cel total, poate duce la stri de tetanie nsoite de convulsii, diferit ns de cele produse de hipocalcemie. O asemenea tetanie este mai frecvent la bovinele n stabulaie, respectiv primvara cnd s-a descris de asemenea o tetanie de iarb i o tetanie de lactaie" Hipermagneziemie- se constat n stri de deshidratare, acidoz, stri uremice, etc.

L 5. Determinarea fosforului anorganic din ser

n organism fosforul se gsete distribuit n structura proteinelor, glucidelor, lipidelor i a acizilor nucleici. Astfel, fosforul anorganic este prezent n structura unor proteine, numite fosfoproteine (cazeina din lapte, vitelina din glbenuul de ou), sau a unor acizi nucleici, respectiv nucleoproteine. De asemenea, fosforul se mai gsete sub form acidosolubil, neprecipitabil cu acid
, HPO 2 , Me4P2O7), tricloracetic (fosfor anorganic acid ortofosforic (H3PO4), H 2 PO 4 4

esteri fosforici ai glucidelor; acid fosfogliceric; acid fosfopiruvic; acid creatinfosforic; acizi trifosforici. O alt form a prezenei fosforului anorganic este fosfolipide: lecitine, cefaline, sfingomieline etc. Fosfaii anorganici ndeplinesc unele roluri n lichidele i esuturile biologice:
a) Sistemul tampon al fosfailor ( H 2 PO 4 / HPO 2 4 ), alturi de alte sisteme tampon (de ex. H 2 CO3 /HCO3 ). Acest sistem poate fi alctuit din dou sruri: fosfat monoacid (Na2HPO4

sau K2HPO4) - care constituie componenta bazic a sistemului i fosfatul diacid (NaH2PO4 sau KH2PO4) care este componenta acid.
Componenta bazic, HPO 2 4 , tamponeaz aciditatea mediului prin reacia:

+ HPO 2 H 2 PO 4 4 + H
Componenta acid, H 2 PO 4 , elibereaz protoni care neutralizeaz ionii HO ai

bazelor:
+ HO H2O + HPO 2 H 2 PO 4 4

Produii rezultai n ambele cazuri sunt componentele sistemului tampon care este activ att n hematii ct i n celulele tubulilor renali. b) n snge exist un raport aproximativ invers proporional ntre ionii fosfat i calciu. La nivel renal, hormonul paratiroidian crete reabsorbia calciului i inhib reabsorbia ionilor fosfat (aciune fosfaturic). Efectele la nivelul oaselor i rinichilor, ale hormonului cresc calcemia fr o cretere echivalent a concentraiei fosfatului, mpiedicndu-se astfel atingerea unor concentraii critice la care aceti ioni s formeze fosfat tricalcic insolubil (Fosfatul tricalcic reprezint un amestec variabil de fosfai de calciu obinui prin neutralizarea acidului fosforic cu hidroxid de calciu). Concentraiile serice ale acestor ioni

depesc pragul de solubilitate al fosfatului tricalcic. Totui, coninutul n proteine i ali metabolii din ser previne precipitarea srii tricalcice. Fosforul n organism se gsete sub form de compui organici sau anorganici ai acidului fosforic. Combinaiile organice ale acidului fosforic au o importan hotrtoare pentru nsui fenomenul vieii. n snge cantitatea de fosfor organic este aproape de 10 ori mai mare dect cea de fosfor anorganic. Fosforul anorganic este distribuit n mod egal ntre plasm i eritrocite. n sngele proaspt recoltat n primele 2-3 ore, poate crete fraciunea organic acidosolubil datorit fosforului anorganic. Dup acest timp are loc fenomenul invers, fosforul organic acidosolubil sufer o hidroliz formndu-se fosfor anorganic. n sngele hemolizat, hidroliza se produce imediat i cu mare intensitate. n consecin la dozarea fosforului se va evita hemoliza, iar dozarea se va face imediat dup exprimarea serului.

5.1. Determinarea fosforului anorganic prin metoda Briggs

Principiul metodei. Fosforul anorganic din sngele total sau din ser, dup precipitarea proteidelor, formeaz cu molibdatul de amoniu, n mediu acid, fosfomolibdatul de amoniu care, n prezena hidrochinonei i a sulfitului de sodiu, substane cu caracter reductor, trece ntr-o combinaie complex de albastru de molibden. Intensitatea culorii albastre rezultat, proporional cu concentraia n fosfor, se determin fotocolorimetric. 2H3PO4 + 24(NH4)2MoO4 + 21H2SO4 = 2(NH4)3H4[P(Mo2O7)6] + 21(NH4)2SO4 + 20H2O

Reactivi: Soluie tricloracetic 20%; Soluie molibdat de amoniu: 25g molibdat de amoniu se dizolv n 300ml ap demineralizat, se adaug 75ml acid sulfuric conc. i se completeaz la 500ml cu ap demineralizat; Soluie hidrochinon 1%: se dizolv 1g hidrochinon n ap demineralizat. Se adaug o pictur de acid sulfuric i se completeaz la 100ml; Soluie sulfit de sodiu 20% (Na2SO3) se prepar n ziua n care se folosete.

Soluie standard stoc de fosfat 1mgP/ml: exact 0,4394 g KH2PO4 se dizolv n 90ml ap demineralizat. Dup ce se dizolv se completeaz la 100ml. Soluie standard de lucru - 10g P/ml: 1ml soluie standard stoc se dilueaz la 100ml cu ap demineralizat.

Modul de lucru: n trei eprubete de centrifug se introduc: Reactivi (ml) Ser sanguin Ap demineralizat Acid tricloracetic 20% Prob 1 3 1 Etalon (Standard) Martor (Blank) -

Se las n repaus 10-15 minute i se centrifugheaz la 3000 rot/minut, timp de 2 minute Supernatant Ap bidistilat Acid tricloracetic 20% Sol. Standard de lucru (10g P/ml) Molibdat de amoniu Hidrochinon 1% Sulfit de sodiu 20% 1 0,2 0,2 0,2 0,4 0,2 0,4 0,2 0,2 0,2 0,8 0,2 0,2 0,2 0,2

Se agit uor. Se citete extincia probei (EP) i a standardului (ES) fa de soluia blanc (B) dup 30 minute, la = 610nm.

Calcul:
mgP / 100ml ser = E Proba E 0,02 100 = Proba 2 E Etalon E Etalon

n care 0,02 reprezint cantitatea de substan standard, exprimata n mg, din cei 2ml soluie; 100 reprezint diluia soluiei standard stoc. Valorile normale: bovine adulte 5,56 1,56 mg/dl, viei 8,090,6mg/dl, bovine tineret 6,20,6 mg/dl; suine (nou ftai) 16,9 (9-24) mg/dl, 2-9 sptmni 5-11 mg/dl, adulte 6-8 mg/dl; psri 2spt- 8,690,38 mg/dl, 4 spt. 6,921,23 mg/dl, 8spt. 4,850,87 mg/dl Valorile normale ale fosforului seric pentru diferite specii de animale se ncadreaz ntre urmtoarele limite: Specia de animal Cine Pisic Bovine Cabaline (cai) Suine (porc) Oaie Capre (Iepuri) Fosfor seric [mg/dL] 2,9-6,2 4,0-7,3 4,3-7,8 2,3-5,4 5,5-9,3 4,0-7,3 3,7-9,7 4,0-6,9 [mmol/L] 1,0-2,0 1,3-2,4 1,4-2,5 0,7-1,7 1,8-3,0 1,3-2,4 1,2-3,1 1,3-2,2

Hipofosfatemie se ntlnete n cazurile de rahitism, osteomalacie, hipertiroidism, ajungnd pn la valori cuprinse ntre 1-2 mg/dl. Hiperfosfatemia se observ n hipervitaminoze D, iradieri cu raze ultraviolete i n perioada de consolidri ale fracturilor, cnd cantitatea de fosfor crete pn la valori cuprinse ntre 5-7mg/dl. n nefrite, valorile sunt uneori peste 8ml/dl fosfor anorganic, de asemenea n tetanii creterile de fosfor sunt 10mg/dl.

5.2. Determinarea fosforului anorganic prin metoda cu acid ascorbic

Principiul metodei. Fosforul anorganic din sngele total sau din ser (dup precipitarea proteidelor) formeaz cu molibdatul de amoniu, n mediu acid, acid fosfomolibdenic care n prezena unei substane reductoare trece ntr-o combinaie complex de culoare albastr (albastru de molibden). 2H3PO4 + 24(NH4)2MoO4 + 21H2SO4 = 2(NH4)3H4[P(Mo2O7)6] + 21(NH4)2SO4 + 20H2O Reactivi: soluie acid tricloracetic 20%

soluie molibdat de amoniu: se pun 25 g molibdat de amoniu se dizolv n 300 cm3 ap

distilat i se adaug 75 cm3 acid sulfuric conc. i se completeaz la semn ntr-un balon cotat de 500 cm3 sol.etalon: 0.44 g KH2PO4 i ap distilat la 1000 ml; soluia etalon diluat se prepar din 1 cm3 soluie concentrat i ap distilat la 10 cm3 (10gP/ml). soluie de acid ascorbic 1,5% Modul de lucru: n trei eprubete de centrifug se introduc: Reactivi (cm3) Prob 0.2 2 0.8 Martor (Blank) Ser Ap demineralizat Etalon Acid tricloracetic 20% Se las n repaus 10 minute i se centrifugheaz la 3000 rot/minut, timp de 10 minute Supernatant Molibdat de amoniu Ap bidistilat Acid ascorbic 1.5% 0.8 0.1 0.8 0.1 0.8 0.1 1.5 0.6 1.5 0.6 1.5 0.6 2.2 0.8 Etalon (Standard) 2 0.2 0.8

Se citete extincia dup 30 minute la = 600nm.

Calculul: mgP / dl = Cetalon = 10 mgP/ml 100 = raportare la 100ml ser. Factor de conversie: mg/dl x 0,323 = mmol/l Interferene
valori

E proba E etalon

Cetalon 100

mai mari ale concentraiei fosforului se ntlnesc la animalele tinere, n perioada

de dezvoltare a scheletului. Exist i variaii legate de sezon, respectiv valori maxime sezoniere se nregistreaz n lunile mai-iunie, iar valori minime se nregistreaz n lunile de iarn. De asemenea, exist i variaii legate de momentul zilei la care se face recoltarea, respectiv valori maxime circadiene se nregistreaz dimineaa i valori minime seara
stressul valori de

este un factor de fals cretere a fosforului seric

fals crescute pot s apar i datorit hemolizei probei de snge

asemenea, false creteri ale fosforului pot s apar ca o consecin a administrrii

unor medicamente (difenilhzdantion sau fenitoin, heparin, pituitrin, meticilin, tetracicline, steroizi anabolizani, hormoni androgeni, hormoni de cretere, calciferoli (ergocalciferoli), beta blocani adrenergici (acebutolol, pindolol), eritropoietina, antiacide, furosemid, hidrocloratiazida, fosfai, etidronat de sodiu.
utilizarea

de laxative sau alte medicamente care conin cantiti semnificative de fosfat

de sodiu, determin false creteri ale fosforului. La 2 3 ore dup administrarea de laxative concentraia de fosfor la nivel sanguin poate crete cu 5mg/dL, dar doar pentru o scurt perioad de timp (5-6 ore dup administrare).
trombocitoza este asociat cu nivelul

hiperfosfatemia

de fosfor seric poate crete i postprandial care prezint forme severe de malnutriie pot prezenta hipofosfatemii. De

animalele

asemenea, administrarea intravenoas de glucoz sau alte fluide n exces, dializa, precum i alimentaia excesiv, pot conduce la scderi ale concentraiei de fosfor seric
administrarea

de unele medicamente poate duce la scderi false ale concentraiei de

fosfor n snge (administrare de hidroxid de aluminiu sau alte antiacide pe baz de aluminiu,

adrenalin sau epinefrine, insulin, manitol, calcitonin, hormoni estrogeni, contraceptive orale, fenitoina, glucocorticoizi, ifosfamida, mithramicin, administrare injectabil de hormon paratiroid), aminoacizi, anestezice,
scderi

uoare ale fosforului seric pot aprea ca urmare a unor intervenii chirurgicale

(aproximativ la 30% din cazuri)

L. 6. Determinarea fierului din ser prin metoda Heilmeyer

Principiul metodei Fierul seric este eliberat sub aciunea acidului clorhidric (HCl) din legtura sa cu proteinele (transferina) sub form de ioni de Fe3+ . In urma deproteinizrii serului cu acid tricloracetic (TCA), ionii de Fe3+ din supernatant sunt redui la Fe2+ de ctre hidrochinon. Ionii de fier Fe2+ formeaz cu orto-fenantrolina un complex foarte stabil, o-fenantrolina feroas, de culoare roie. Intensitatea culorii este proporional cu concentraia fierului din prob. Se fotometreaz la = 510nm .

o-fenantrolina

o-fenantrolina feroas

Reactivi: soluie etalon stoc - 10mgFe% : 0,0497 g FeSO4 x 7 H2O la 100 cm3 ap demineralizat sau 0,0702 g Fe(NH4)2(SO4)2 x 6 H2O. Soluia etalon concentrat se pstreaz la frigider. Soluie etalon de lucru - 100 g Fe%: Se dilueaz extemporaneu 1 cm3 soluie etalon stoc la 100 cm3 ap demineralizat obinndu-se o soluie cu o stabilitate limitat la 12 luni. soluie acid clorhidric 1 n ( 82,65 cm3 de HCl p.a, = 1,18, n 1000 cm3 ap bidistilat); soluie de CCl3COOH 20% n ap demineralizat. soluie de hidrochinon 2% n ap demineralizat

 soluie de orto-fenantrolin clorhidric 1% n ap demineralizat (se poate utiliza i ortofenantrolin, iar pentru dizolvare se aciduleaz iniial cu 2-3 picturi de HCl concentrat) soluie semisaturat de CH3COONa. Se dilueaz extemporaneu o soluie saturat (25ml CH3COONa la 25ml ap la temperatura camerei) n proporie 1:1.

Modul de lucru :

Se determin fierul dup urmtoarea tehnic : Soluii (ml) Ser (nehemolizat) Soluie etalon Ap bidistilat HCl 1n Soluie CCl3COOH 20% - se agit i se las 10 min.n repaus - se centrifugheaz 5minute la 2500rot/min supernatant hidrochinon 2% orto-fenantrolin 1% sol. semisaturat de CH3COONa Se agit i dup 5 min se citete exincia probei i a etalonului fa de proba martor la 510nm. Sideremia se calculeaz cu formula:
E proba E etalon E proba E etalon

Prob 2

Etalon (Standard) 2

Martor (Blank) -

2 1 1 1

-se agit i se las 10 min . n repaus 2 2 2

2 0,2 0,1 2

2 0,2 0,1 2

2 0,2 0,1 2

gFe / dl =

Cetalon =

100

Cetalon = concentraia etalonului de fier = 100 g%

Valori normale: cabaline- 181 55g%, bovine-145- 160g%, ovine- 182g%, suine- 180g% Hiposideremie se constat n stri inflamatorii acute, septice i sterile, n hepatite, n anemii feriprive