Metode biochimice utilizate in aprecierea efectului poluantilor din mediu asupra organismului Reactivi: -formaldehid, soluie 40%; -pararozanilin

3% n soluie alcoolica; -reactiv fuxin-formolic; -hidroxid de potasiu, soluie alcoolic 1%; -soluie saturat de clorur mercuric(HgCl2); -soluie etalon stoc pentru bioxid de sulf; -soluie etalon de lucru. Metode biochimice utilizate in aprecierea efectului poluantilor din mediu asupra organismului Recoltarea probelor de snge: sngele care se recolteaz din deget e un anticoagulant. Mod de lucru: ntr-o eprubet de centrifug se introduc 0,5 ml soluie alcoolic de KOH 1%, 2,2 ml ap bidistilat i 0,2 ml snge. Eprubeta se agit timp de 2-3 minute apoi se adaug 1 ml soluie saturat de clorur mercuric, agitnd din nou. Se centrifugheaz la 4000 turaii, timp de 5 minute i apoi se iau cu atenie din supernatant 2 ml i se introduc ntr-o eprubeta peste care se adauga 4 ml reactiv foxin-formolic. Dupa 5 se citete extincia la spectrofotometru la lungimea de und de 570 nm n cuva de 1 cm. Valoarea extinciei se raporteaz la curba de etalonare care se ntocmete dup schema de mai jos: Concentraia SO2/proba g 0 1 3 5 7 9 10 Soluia etalon de lucru ml 0 0,1 0,3 0,5 0,7 0,9 1,0 Ap bidistilat ml 1,5 1,4 1,2 1,0 0,8 0,6 0,5 Soluia de clorur mercuric ml Cte 0,5 ml Reactiv fuxin-formolic Ml Cte 4 ml Metode biochimice utilizate in aprecierea efectului poluantilor din mediu asupra organismului Dup fiecare adugare de reactiv se agit eprubetele. Se las apoi 5 n repaus i se citete extincia n aceleai condiii ca i proba. Se traseaz curba de etalonare. Calcul: mg SO2% =c/v 10 C =concentraia ng SO2 din proba de snge; V =cantitatea de snge luat n lucru, n ml. Determinarea fluorului din urin Generalit: calea principal de eliminare a fluorului din organism este cea renal. La o ingestie normal de fluor, concentraia fluorului urinar este proporional cu ingestia. Dac organismul este expus la concetraie crescut de fluor, nivelul fluorului din urin crete, dar fr a se menine proporionalitatea cu gradul de expunere. Principiul metodei: fluorul este separat din urin prin microdifuzie sub forma de HF, care este prins pe o pelicul de hidroxid de sodiu ca fluorura de sodiu. Dozarea se face colormetric, prin decolorarea lacului SPANDS- azotat de thoriu, proporional cu concentraia fluorului. Reactivi i material necesar: -hidroxid de sodiu: soluie alcoolic 0,05 N; -acid percloric 70%;

-azotat de thoriu 0,004M; -soluie etalon stoc pentru fluor; -SPANDS, 0,004 M; -soluie etalon stoc entru fluor; -soluia etalon de lucru; -sulfat de argint, pulbere; -acid clorhidric 0,05; -2,5 ml soluie de azotat de thoriu 0,004 M; -5,0 ml soluie SPANDS 0,004 M; -0,04 soluie de HCl 0,05 N; -ap bidistilat; -cutii din polistiren folosite la ambalajul medicamentelor (faringosept sau B complex); -capace din plastic cu care se astup flacoanele de vitamina C. Recoltarea se face din urina din 24 de ore, ntr-un recipient de polistiren. Mod de lucru: 2 ml urin se introduc ntr-un capacel de plastic care se amplaseaz n capacul unei cutii de polistiren. n corpul aceleiai cutii se introduce 1 ml soluie alcoolic de hidroxid de sodiu i se las la etuv la 60C pentru evaporarea alcoolului i formarea peliculei de hidroxid de sodiu. n cpcelul cu urin se introduc 0,1g sulfat de argint i 2 mg acid percloric, se nchide imediat cutia i se lipeste o fie de leucoplast n jurul cutiei pentru a evita pierderile de fluor. Paralel cu proba, n condiiile identice se procedeaz pentru proba martor (apa bidistilat) i 5 etaloane care conin cantiti succesive de fluor (1; 3; 5; 7; 10 g F) introducndu-se n fiecare cpcel cte 0,1; 0,3; 0,7; i 1,0 ml soluie etalon de lucru de fluorur de sodiu. Se completeaza apoi volumul cu ap bidistilat pn la 2 ml. n continuare se procedeaz ca i pentru proba de urin. Cutiile bine nchise se introduc n etuv la 58-60C, timp de 20 ore pentru realizarea difuziei. Se scot cutiile de la etuv i n corpul cutiei unde s-a realizat pelicula de hiroxid i fixarea fluorului se introduc 2 ml ap bidistilat, 4 ml acid clorhidric 0,05 N i 4 ml lac SPANDS-azotat de thoriu.Dup 10 se citete extincia de la spectrofotometru la lungimea de und de 580 nm n cuva de 1 cm. Cu valorile extinciilor obinute pentru proba martor i etaloane se traseaz o curb. Calcul: mg F/dm3 = c/v C =concentraia n g fluor din proba de urin luat n lucru; V =cantitatea de urin luat n lucru, n ml; Obs.: concentraia fluorului n urin la o expunere normal de fluor este ntre 0,5-1,5 mg/dm3. Determinarea mercurului din urin Generaliti: creterea concentraiei mercurului n urin poate indica depozitarea de mercur sau intoxicaie cu acest metal. Totui rezultatele sunt neconstatate, dup ptrunderea n organism mercurul disprnd repede din snge n urin. Mai constant i cu valoare mai ridicat pentru diagnosticul de expunere este determinarea Hg n pr i unghii. Principiul metodei: mercurul formeaz cu difeniltiocarbazona un complex colorat la pH =1,5-2,0. Reactivi: -E.D.T.A-Na2, soluie 0,1 N; -acid sulfuric conconentrat d= 1,84;

-acid sulfuric diluat; -permanganat de potasiu, soluie saturat; -galben de metanil, soluie 0,1%; -rou de fenol, soluie 0,1%; -ditizon, soluie stoc 0,1% n cloroform; -ditizon soluie de lucru; -soluie de hidroxilamin 10%; -soluia e splare; -toluen pur; -soluia etalon stoc pentru mercur; -amoniac concentrat. Recoltarea probelor: urina se recolteaz din prima emisiune de diminea sau urina colectat n 24 ore (vasele n care se face recoltarea trebuie bine cltite) cu soluie de acid azotic (1:25) i apoi cu apa bidistilat. Mod de lucru: ntr-o capsul de porelan se introduc 50 ml urin, 5 ml H2SO4 concentrat (d =1,840) i 15 ml soluie saturat de permanganat de potasiu. Se nclzete moderat pe baia de nisip fr a ajunge la fierbere, acoperind vasul cu o sticl de ceas, pn ce lichidul supernatant devine limpede i incolor prezentnd pe fundul vasului un precipitat brun. Dac precipitatul lipsete nseamn c trebuie s se mai adauge soluie de permanganat de potasiu i se continu nclzirea pn ce lichidul supernatant se decoloreaz complet. Dup rcire excesul de permanganat se ndeprteaz cu hidroxilamina adugnd pictur cu pictur pn la disparia precipitatului brun i apoi un exces de 5 ml hidroxilamin. Se trece proba cantitativ ntr-o plnie de separare, se ajusteaz pH-ul la 1,2-2,0 aa cum s-a artat la determinare mercurului din aer i se procedeaz n continuare la fel ca i la aer. Calcul: g mercur/dm3 urin = C x 20 C = concentraia n g mercur din proba de urin luat n lucru g mercur/urina din 24 ore = C x 20 x V24. V24 = cantitatea de urin colectat n 24 ore, n litri. Obs.: valoarea normal a mercurului n urin este de 30 g/urina din 24 ore. Determinarea mercurului din pr Principiul metodei: ionii de mercur n mediul acid formeaz cu difenilcarbazona un complex colorat n portocaliu, ditizonatul de mercur, care se extrage cu toluen i se poate colorimetra.