Dozarea lactozei din lapte

Principalul glucid in lapte este lactoza, care constituie aproximativ 4-6% din laptele de vacă și 2-
3% din laptele uman. Fiind un zahar reducător, concentrația lactoezi poate fi determinată prin orice
metodă convenabilă pentru zaharuri reducătoare, după deproteinizarea laptelui.
În cazul acestui experiment se realizează deproteinizarea laptelui cu wolframat de sodiu, dozarea
efectivă a lactozei realizându-se prin metoda Nelson. În cazul acestei metode, ionii de Cu (II) sunt
reduși la ioni de Cu (I), care la rândul lor reduc acidul fosfomolibdenic la un produs de reacție de
culoare albastră.

Reactivi și soluții:
- Soluție stoc de lactoză 1%
- Soluție de wolframat de sodiu 10%
- Soluție acid sulfuric M/3
- Reactiv alcalin de cupru (Se dizolvă 40 g de Na2CO3 anhidru în aproximativ 400 ml apă.
Se adaugă 7,5 g acid tartric și după dizolvarea acestuia 4,5 g CuSO4 x 5 H2O. După
omogenizare energică, soluția se diluează cu apă distilată până la final de 1000 ml).
- Reactiv fosfomolibdenic (Se dizolvă 70 g acid molibdenic și 10 g de wolframat de sodiu
în 700 ml de NaOH 5%. Soluția se fierbe aproximativ 40 de minute. După răcire se adaugă
250 ml H3PO4 85% și reactivul se diluează la un volum final de 1000 ml).

Mod de lucru:
La 1 ml de lapte degresat prin centrifugare se adaugă 2 ml de soluție wolframat de sodiu 10%
și încet, sub agitare constantă, 2 ml soluție M/3 de acid sulfuric. Amestecul este adus la un
volum final de 100 ml, iar după 5 minute de staționare este filtrat printr-o hârtie de filtru.
Într-o eprubetă (E1) se pipetează 1 ml de filtrat și 1 ml de apă distilată. Într-o a doua eprubetă
(E2) se pipetează 2 ml soluție standard de lactoză (conținând 0,6 mg de lactoză – preparată
prin diluarea a 3 ml soluție stoc de lactoză la un volum final de 100 ml cu apă distilată). Într-o
a treia eprubetă (E3) se prepară un blanc prin pipetarea a 2ml de apă distilată.
În fiecare eprubetă se pipetează 2 ml reactiv alcalin de cupru, se incubează pe o baie de apă la
fierbere timp de 8 minute. În timpul acestei incubări eprubetele se astupă cu dopuri de vată
pentru a preveni reoxidarea ionilor de Cu (I). Eprubetele se răcesc și în fiecare dintre ele se
adaugă 4 ml reactiv fosfomolibdenic. După un minut de repaus, amestecurile de reacție se
diluează la un volum final de 25 ml cu reactiv fosfomolibdenic, diluat 1:4. Se citește absorbanța
probei (E1) și a standardului (E2) față de blanc (E3) la 630 nm.

Calculul rezultatelor
Absorbanțele fiind proporționale cu concentrațiile este valabilă relația:
Aproba/ Astandard= Cproba/ Cstandard, unde Cproba este concentrația lactozei din 0,01 ml lapte, iar
Cstandard este concentrația lactozei din standard.
Concentrația lactozei din lapte, exprimată în g/100 ml este dată de relația:
Aproba/ Astandard x 0,6/1000 x 100/0,01