Determinarea consumului biochimic de oxigen

Principiul metodei
Consumul biochimic de oxigen rezult din diferena ntre concentraiile
oxigenului dizolvat n proba supus analizei la nceputul i la sfritul
perioadei de incubare. Incubarea probelor de ap ca atare, saturate n
oxigen sau a probelor diluate n proporii convenabile cu ap de diluie
saturat n oxigen i nsmmate(dac este cazul), se realizeaz la
temperatura de 201C i la ntuneric pe o perioad de 5 zile 6 ore.
Diluarea probei se face n cazul apelor cu un coninut mare de substane
organice, respectiv pentru care s-ar nregistra n cele 5 zile de incubare
un consum biochimic de oxigen mai mare de 70 % din concentraia de
oxigen dizolvat la saturaie, existent iniial n proba analizat.
Interferene
n determinarea CBO5 interfer substanele organice consumatoare de
oxigen prin reacii chimice i substanele toxice inhibitoare ale activitii
microbiene, inclusiv clorul activ. Substanele interferente se ndeprteaz
n modul descris mai jos.
Declorinare
Probele de ap cu un coninut mic de clor activ (pn la aproximativ 0,5
mg/l) se las n repaus dou ore. n caz contrar proba se trateaz cu
sulfit de sodiu. Cantitatea de sulfit de sodiunecesar se stabilete astfel:
se adaug n proba de ap de 100 ml, 10 ml soluie iodur de potasiu 10
% i 10 ml acid acetic 1:1 i se titreaz cu soluie de sulfit de sodiu, n
prezena soluiei de amidon 1 % pn la dispariia culorii albastre.
Cl2 + Na2SO3 + H2O = Na2SO3 + 2HCl
Cantitatea de sulfit de sodiu care trebuie adugat n proba de analizat
este aceea calculat n urma titrrii.
ndeprtarea substanelor anorganice
Eliminarea interferenei substanelor anorganice consumatoare de
oxigen pe cale chimic (prezena acestora mrete rezultatul
determinrii CBO5) se realizeaz prin aerare intens timp de 10 15
min., pentru atingerea saturaiei n oxigen i lsare n repaus timp de 2
ore dup care se poate efectua analiza CBO5.
Probele de ap care conin dioxid de sulf, hidrogen sulfurat sau sulfuri,
se aciduleaz cu acid sulfuric la pH = 3 i se barboteaz cu azot gazos,
n bule fine, timp de 30 min. Pentru analiza CBO 5, pH-ul probei astfel
tratate se corecteaz la 6,5 8,5.
Verificarea interferenei consumatorilor chimici de oxigen se face
determinnd consumul imediat de oxigen dizolvat (CIOD) astfel: 100
250 ml prob se titreaz cu soluie standard de iod n preten de soluie

de amidon ca indicator, pn la apariia coloraiei albastre: CIOD al

probei care poate fi supus analizei CBO5 nu trebuie s depeasc 0,1
mg/l.
ndeprtarea substanelor toxice inhibitoare
n cazul probelor de ap care conin substane toxice, care inhib
activitatea microbian, rezultatele testului CBO 5 nu sunt concludente.
Efectul unor substane inhibitoare poate fi diminuat sau eliminat prin
diluarea probei. Acest efect se constat prin creterea valorilor CBO 5
obinute la mrirea treptat a gradului de diluie. n cazul obinerii, peste
un anumit grad de diluie, a unor valori ale CBO semnificative i
apropiate, acestea vor fi cele luate n considerare.
Activitatea bacterian poate fi ncetinit sau inhibat de mai muli factori:
metale grele (Fe, Mg, Ag, Cu), cianuri, ageni oxidani (ex. clor activ), pH,
coninutul mare de substane organice, din ap, etc.
ntruct fiecare ap uzat care conine substane toxice constituie un caz
particular, ndeprtarea substanelor toxice se recomand a se efectua n
msura n care sunt disponibile metode adecvate pentru aceasta.
Reactivi i prepararea soluiilor de reactivi
a) Prepararea soluiilor de reactivi:
Se folosete ap distilat cu urmtoarele caracteristici, n test ap total
lipsit de substane organice, prin adugarea ctorva cristale de
permanganat de potasiu; lipsit de clor activ i substane inhibitoare;
coninutul ionilor de cupru maxim este 0,01mg/l.
a.1)Reactivi pentru ajustarea pH-ului
Acid sulfuric 1 N: ntr-un balon cotat de 100 ml se dilueaz cu
ap distilat, un volum de 2,7 ml acid sulfuric concentrat.
Albastru de bromtimol soluie 0,1%: 0,1 g se dizolv n ap
distilat, ntr-un balon cotat de 100 ml.
Hidroxid de sodiu 1 N: 4 g se dizolv n ap distilat, ntr-un
balon cotat de 100 ml.
Reactivi pentru eliminarea inhibitorilor chimici i a
interferenelor
Acid acetic1:1 : se dilueaz o parte ap distilat cu o parte acid
acetic glacial (d= 1,049 g/ml).
Amidon, (indicator) soluie 1%: 1g amidon se dizolv cu ap
cldu, ntr-un balon cotat de 100 ml
Iodur de potasiu, soluie 10%:10 g iodur de potasiu se dizolv
n ap ntr-un balon cotat de 100ml i se aduce la semn.
Iod, soluie standard: se dizolv 1,27 g iod i 20 g iodur de
potasiu ntr-un balon cotat de 1000 ml i se aduce la semn cu ap
distilat. Soluia se las n repaus 24 ore nainte de folosire i se
pstreaz in sticl brun;

1ml soluie standard de iod corespunde la 0,08 mg O 2.

Sulfit de sodiu , soluie 0,01 N: 1,26 g sulfit de sodiu se dizolv n
ap distilat, ntr-un balon cotat de 1000 ml i se aduce la semn cu ap
distilat. Soluia se utilizeaz proaspt preparat.
Reactivi pentru prepararea apei de diluie
Clorur de calciu, soluie: 27,5 g clorur de calciu anhidr se
dizolv n ap distilat, ntr-un balon cotat de 1000 ml i se aduce la
semn cu ap distilat.
Clorur de fier (III), soluie: 0,25 g clorur feric hexahidratat se
dizolv n ap distilat ntr-un balon cotat de 1000 ml, se adaug acid
sulfuric pn la pH > 2 pentru a evita precipitarea fierului sub form de
hidroxid i se aduce la semn cu ap distilat.
Fosfai, soluie tampon: 8,5 g dihidrogenofosfat de sodiu
(KH2PO4), 21,75 g hidrogenofosfat de potasiu (K 2HPO4), 33,4
hidrogenofosfat de sodiu heptahidratat (Na 2HPO4 x 7H2O) i 1,7 g
clorur de amoniu se dizolv n ap, ntr-un balon cotat de 1000 ml i se
aduce la semn cu ap distilat, pH-ul soluiei s fie 7,2.
Sulfat de magneziu, soluie: 22,5 g sulfat de magneziu
heptahidratat (MgSO4x7H2O) se dizolv in balon cotat de 1000 ml i se
aduce la semn cu ap distilat.
Reactivi pentru testul de verificare
Soluie de glucoz - acid glutamic, substrat standard: se
dizolv separat n ap distilat, 150 mg glucoz (C 6H12O6) i 150 mg acid
glutamic (C5H9NO4); ambele substane vor fi uscate n prealabil la 105 o
C, timp de 3 ore i apoi rcite n exicator. Se amestec cele dou soluii
n balon cotat de 1000 ml i se aduce la semn cu ap distilat. Soluia se
folosete proaspt preparat sau se pstreaz n congelator n poriuni
de cte 20 ml.
Reactivi pentru determinarea oxigenului dizolvat
Iodura, soluie alcalin: ntr-un balon cotat de 1000 ml se dizolv
700 g de KOH (sau 500 g de NaOH) n suficient ap i se rcete la
temperatura camerei; 150 g iodur de potasiu (sau 135 g iodur de
sodiu) liber de iodat se dizolv n apa distilat; 10 g de azid se dizolv
n ap distilat. Se amestec cele trei soluii n balonul de 1000 ml i
apoi se aduce la semn cu ap distilat.
Sulfat de mangan, soluie: se dizolv 364 g sulfat de mangan
( MnSO4x4H2O) n ap, soluia obinutse transvazeaz ntr-un balon de
1000 ml i se aduce la semn cu ap distilat, apoi soluia obinut se
filtreaz.
Acid sulfuric concentrat d=1,84
Amidon, soluie 0,5%: se cntresc circa 0,5 g amidon solubil i
se amestec cu 2 ml ap rece; pasta obinut se introduce n 100 ml ap
distilat care fierbe i se continu fierberea 1-2 minute. Pentru

conservare se poate aduga : cca 0,12 g acid salicilic, 0,125 g salicilat

de sodiu, 2 picturi roluen. Dup limpezire se folosete supernatatul clar.
Tiosulfatul de sodiu 0,1 n (soluia de baz): utiliznd titrofix.
Pentru prepararea soluiei se folosete apa distilat proaspt fiart i
rcit ( lipsit de oxigen dizolvat). Conservarea se realizeaz cu: 1 g
hidroxid de sodiu, 5 ml cloroform, 10 ml alcool amilic.
Tiosulfatul de sodiu 0,01 n (soluia de lucru): obinut prin
diluarea corespunztoare dintr-o soluie de tiosulfat de sodiu 0,1 n.
Soluia se conserv cu cca 2 g de carbonat de sodiu. Se utilizeaz apa
distilat proaspt fiart i rcit.
Factorul soluiei de tiosulfat se verific sptmnal:
ntr-un balon de cifra iod se introduc: 100 ml ap distilat proaspt fiart
i rcit, 10 ml soluie de K 2Cr2O7 0,01 n, circa 2 g iodur de potasiu, 5
ml H2SO4 1+1.
Se ine 5 minute dup care se titreaz cu soluia de tiosulfat de sodiu
0,01 n, n prezena amidonului ca indicator.
Formula de calcul pentru factor:
VK2CrO4 x N K2CrO4 x FK2CrO4 = VNa2S2O3 x NNa2S2O3 x FNa2S2O3
FNa2S2O3 = VK2CrO4 x N K2CrO4 x FK2CrO4 /VNa2S2O3 x NNa2S2O3
FNa2S2O3 = VK2CrO4 /NNa2S2O3
n care:
NNa2S2O3, NK2CrO4 = 0,01
FK2CrO4 = 1
b. Pregtirea apei de diluie i a materialului de nsmnat
b.1) Apa de diluie trebuie s ndeplineasc anumite condiii
pentru ca activitatea bacterian s fie optim: substane minerale
suficiente i pH neutru. La 1000 ml ap distilat cu temperatura de 20 +
1o C, se adaug cte 1 ml din fiecare din reactivii pentru prepararea apei
de diluie. pHul soluiei se aduce la 7-7,2 folosind reactivi pentru
ajustarea pH-ului. Prin soluie se barboteaz aer curat, pn la saturare
cu oxigen (concentraia oxigenului la saturaie, la 20 o C este de aprox. 9
mg/l). Apa de diluie se prepar n ziua folosirii i se pstreaz ferit de
lumin, ntr-un vas curat, folosit numai n acest scop.
b.2) Material de nsmnare: ap uzat menajer, decantat. Se
las apa uzat menajer ntr-un vas deschis timp de 24 ore la 20 oC, apoi
se filtreaz prin hrtie de filtru calitativ, splat n prealabil. Materialul
de nsmnare preparat se poate folosi timp de 4-6 zile, dac se
pstreaz la temperatura de 0-4oC i la ntuneric.
b.3) Alte materiale de nsmnare: efluentul unei instalaii de
epurare biologic, industrial sau de laborator alimentat cu apa uzat
industrial, pentru care se determin CBO 5. Efluentul conine
microorganisme adaptate pentru degradarea substanelor organice
existente n apa de analizat.

OBSERVAIE: materialul de nsmnare se manipuleaz cu precauie

pt. a evita riscul contaminrii cu germeni patogeni.
c. Pregtirea probelor
Filtrarea i decantarea
Suspensiile reduc precizia analizei. Analiza CBO 5 se poate face pentru:
ap brut, ap decantat sau ap filtrat, n funcie de caracterul probei
i scopul urmrit. n primul caz se obine CBO 5 pentru substanele
solubile i insolubile consumatoare de oxigen; n ultimele dou cazuri se
obine CBO5 pentru substanele dizolvate. Decantarea se efectueaz
astfel: proba de ap se omogenizeaz i se las n repaus o or, dup
care se sifoneaz supernatantul pn la aprox. 5 cm deasupra
sedimentului.
Diluarea
Diluarea stimuleaz activitatea bacterian n apele cu coninut mare de
substane organice i micoreaz efectul eventualilor inhibitori chimici.
Din acest motiv analiza CBO5 se face :
-pe probe nediluate: CCO-Mn (mg KMnO4/ml) al probei este pn
la10-15 mg/l i nu conine inhibitori chimici. CBO 5 scontat este pn la
70 % din concentraia de oxigen dizolvat, existent iniial n prob sau se
sconteaz un CBO5 pn la maxim 6 mg/l.
-pe probe de ap diluat: CCO-Mn mai mare de 10-15 mg KMnO 4/l
mare, efectul eventualilor inhibitori chimici este eliminat.
nsmnarea
Se aplic apelor cu activitate bacterian sczut sau lipsit de
microorganisme, pentru a se asigura un numr de bacterii suficient de
mare astfel nct oxidarea biochimic s aib loc n start rapid i s nu
se denatureze CBO5 prob. Aceste ape fie au un coninut mare de
substane organice, fie snt ncrcate cu inhibitori chimici.
Insmnarea se aplic, dup caz:
-probelor nediluate n cazul n care CCO-Mn (mg KMnO4/ml) al
probei este pn la 10-15 mg/l, lipsite de inhibitori chimici dar sunt
deficitare n bacterii corespunztoare.
-probelor diluate n cazul n care CCO-Mn (mg KMnO4/ml) al probei
este mai mare de 10-15 mg/l sau sunt ncrcate cu substane inhibitoare,
motiv pentru care snt deficitare n bacterii corespunztoare.
nsmnarea se face n aa fel nct s asigure o concentraie
aproximativ constant i egal de bacterii n diferitelor diluii ale aceleiai
probe.
Doza de material de nsmnare se stabilete astfel: se calculeaz CBO5
pentru materialul de nsmnare. Se calculeaz doza de nsmnare
a.. aportul dozei de nsmnare la CBO5 al probei de ap sa fie cuprins
ntre 0,3-1 mg O2, tiind c valorile dozelor sunt cuprinse n intervalele :

1-5ml/l pentru apa menajer, 510 ml/l pentru efluent epurat biologic i
1020 ml/l pentru ap de ru.
Ajustarea pH-ului
pH-ul probei de ap trebuie s fie 6,58,5 pentru ca activitatea
bacterian s fie optim. Se ajusteaz cu soluie de hidroxid de sodiu 1n
sau soluie de acid sulfuric 1n; volumul de acid sau baz se stabilete pe
baza de titrare separat n prezena unei soluii de 0,1 % de albastru de
bromtimol.
n cazul n care se lucreaz pe probe diluate sau nsmnate, ajustarea
pH-ului se face dup diluare (la diluia cea mai mic) sau dup
nsmnare.
Alte pregtiri
Probele de ap suprasaturate cu oxigen dizolvat se agit n vas deschis
pn se atinge valoarea corespunztoare saturaiei la 20 C (9,02
mgO2/l).
OBSERVAIE:orice pregtire a probelor de ap, se menioneaz n
buletinul de analiz.
Modul de lucru
Determinarea CBO5 pe probe de ap nediluate:
Dac CCO-Mn (mgKMnO4/ml) al probei este pn la 10-15 mg/l, CBO 5
scontat este pn la 70 % din concentraia de oxigen dizolvat, existent
iniial n prob sau se sconteaz un CBO 5 pn la maxim 6 mg/l. Se
ajusteaza pH-ul probei de ap, conf. pct 5.3.2.3.c, dac nu este cuprins
ntre 6,58,5, apoi proba se aereaz pn cnd se atinge concentraia
de oxigen la saturaie la 20 0C. Se adaug n proba de ap, cte 1 ml la
1 l prob din fiecare soluie preparat la punctul 5.3.2.3.a.3). Se face
nsmnarea probei de ap, dac este cazul, conform pct 5.3.2.3.b.2) se
omogenizeaz proba i se introduce n trei flacoane de incubare care se
umplu complet (prin sifonare) i se nchid. n primul flacon se determin
concentraia iniial de oxigen dizolvat, conform STAS (6536-62) i se
noteaz rezultatul.
Cele 2 flacoane se introduc n incubator i se menin la 20 + 10C i la
ntuneric timp de 5 zile 6 ore.
Pentru meninerea etaneitii n perioada de incubare, dopul i o parte
din gtul flaconului se parafineaz sau se acoper cu o folie de teflon.
Dup perioada de incubare, se determin concentraia de oxigen
dizolvat rmas n prob, i se face media aritmetic a celor 2 rezultate.
Determinarea CBO5 pe probe de ap diluate:
Dac CCO-Mn (mgKMnO4/ml) al probei este mai mare de 10-15 mg/l
CBO5 scontat este mai mare de 70 % din concentraia de oxigen

dizolvat, existent iniial n prob sau se sconteaz un CBO 5 mai mare 6

mg/l.
Stabilirea diluiei
Pentru probe cu CBO5 necunoscut
D max. = CCO-Mn/ 4,5 , (mg/l)
CCO-Mn se determin conform STAS 9887/74 i se exprim n mg
KMnO4 /l.
Vp = 1000 / Dmax.
Factorul de diluie = 1000 / Vp
Factorul de diluie este direct proporional cu gradul de poluare al apei de
analizat ;
Vp minim trebuie s fie de cel puin 10 ml.
Se vor efectua ntre 2 i 4 diluii mai mici care reprezint 75,50,25 i 10
% din Dmax.
Pentru probe cu CBO5 cunoscut
Diluia se stabilete conform tabelului din anexa A a STAS-ului 6560/82
Pentru ca rezultatul diluiilor s fie semnificative, consumul de oxigen n
perioada de incubare trebuie s fie mai mare de 2 mg/l i concentraia de
oxigen dizolvat rmas n prob dup incubare s fie cel puin 1 mg/l .
Efectuarea analizei
Se stabilesc volumele de prob pentru diluare, conform pct.
Se pregtete apa de diluie, conform pct. 5.3.2.3.a.3); probele de ap i
apa de diluie se aduc la temperatura de 20 oC. n baloanele cotate de
1000 ml se introduc volumulele de prob alese i ap de diluie. Se
ajusteaz pH-ul amestecului, dac este cazul, conform pct5.3.2.3.c.
Se adaug doza adecvat de material de nsmnare, stabilit conform
pct5.3.2.3.b.2). Se aduc la semn baloanele cotate cu ap de diluie, i se
omogenizeaz prin rsturnare. Se sifoneaz fiecare prob n cte trei
flacoane de incubare, se nchid etan i se procedeaz n continuare
conform ultimelor dou etape de la punctul de lucru de la probe
nediluate.
Se determin CBO5 pentru apa de diluie pe doua trei probe n paralel;
Apa de diluie de bun calitate are CBO 5 cuprins n intervalul 0,1-0,5
mg/l. Se determin CBO5 materialul de nsmnare, dac este cazul.
Calcul i exprimarea rezultatelor
Consumul biochimic de oxigen (CBO 5) se exprima n mg/l i se
calculeaz cu formula :
a) n cazul probelor de ap nediluate:
CBO5= (OD0-OD5) - VI CBO5
1000
n care :

(mg/l)

OD0 - concentraia de oxigen dizolvat al probei la nceputul

perioadei de incubare, n mg/l
OD5 - concentraia de oxigen dizolvat a probei la sfritul
perioadei de incubare, n mg/l
VI - volumul de material de nsmnare adugat probei de
analizat, n mg/l
CBO5 - consumul biochimic de oxigen al materialului de
nsmnare n mg/l
b) n cazul probelor de ap diluate:
CBO5 = 1000[(OD0 - OD5) - 100 - Vp CBO5d - VI CBO5I] (mg/l)
Vp
1000
1000
n care :
OD0 - concentraia de oxigen dizolvat a probei diluate la
nceputul perioadei de incubare
OD5 - concentraia de oxigen dizolvat a probei diluate la sfritul
perioadei de incubare
Vp - volumul apei de analizat connut 1000 ml de amestec.
VI - volumul de material de nsmnare adugat la 1000 ml de
amestec n mg/l
d
CBO5 - cosumul biochimic de oxigen al apei de diluie, n mg/l
CBO5I- consumul biochimic de oxigen al materialului de
nsmnare, n mg/l
Rezultatele obinute se exprim n mg/l i se rotunjesc n conformitate cu
tabelul de mai jos.
Domeniul de valori CBO5
Rotunjirea admis
( mg/l)
(mg/l)
0 6
0,1
4 12
0,2
10 30
0,5
20 60
1,0
40120
2,0
100300
5,0
200600
10,0
400- 1200
20,0
1000- 3000
50,0
2000- 6000
100,0
4000- 12000
100,0
20000-60000
100,0
Repetabilitate

Se efectueaz dou sau trei probe n paralel.