Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Metoda Bach-Zubkova
2 H2O2 = 2 H2O + O2
Principiul metodei
Are la bază dozarea excesului de apă oxigenată rămasa nedescompusă,
după întreruperea acţiunii catalazei, prin titrare cu o soluţie de permanganat de
potasiu în mediu acid:
Reactivi
Soluţie H2O2 1% proaspăt preparată din perhidrol; soluţie acid sulfuric 10%;
soluţie permanganat de potasiu 0,1 N.
Mod de lucru
Pentru determinarea activităţii catalazice se foloseşte sânge diluat 1/1000.
În două baloane Erlenmeyer se măsoară câte 1 ml sânge diluat şi 7 ml apă
distilată. Unul din baloane, care constituie proba martor se fierbe 3-5 minute
pentru inactivarea catalazei, apoi se răceşte. În ambele probe se adaugă 2 ml
H2O2 soluţie 1% agitându-se bine. Ambele probe se introduc pentru 30 minute
într-o baie de apă la 17 0C, timp în care se observă degajarea bulelor de oxigen în
proba cu enzimă datorită descompunerii apei oxigenate de către catalază, pe
când în proba martor, în care catalaza a fost inactivată prin fierbere, această
degajare nu se observă. Se adaugă în fiecare probă 5 ml soluţie H2SO4 10% în
scopul blocării reacţiei de descompunere a apei oxigenate de către catalază.
Probele se titrează apoi cu o soluţie de permanganat de potasiu 0,1 N până la
apariţia culorii roz pal persistentă 30 secunde.
Calcul