Opioidele si macul de opiu

De Costinescu Rares
Vlaicu Mara

1. Introducere

Opioidele sunt o clasă mare de medicamente care sunt legate ca structură de

alcaloizii naturali din plante găsiți în opiu, care sunt derivate din rășina macului de
opiu, Papaver somniferum. Macul de opiu este o plantă cu flori din familia
Papaveraceae, originară din Turcia. Este cultivat pentru semințele sale minuscule
coapte, nenarcotice, care sunt în formă de rinichi și care pot lua culori de la albastru
gri până la albastru închis; semințele sunt folosite în produse de panificație și pentru
condimente, ulei și semințe de păsări. Macul de opiu este o plantă anuală și poate
atinge aproximativ 1-5 metri înălțime. Are frunziș lobat sau dințat de culoare verde-
argintiu și poartă flori albastre-violet sau albe de aproximativ 13 cm lățime. Tulpinile
cu flori roșii și duble și semiduble au fost dezvoltate ca ornamente de grădină.
Semințele sunt purtate într-o capsulă sferică acoperită de un disc format din
stigmatele florii; semințele scapă din porii de sub disc atunci când capsula este
scuturată de vânt ( Encyclopaedia Britannica, 2017). În secolul XXI, cele două
utilizări legitime principale ale macului de opiu sunt ca sursă de compuși alcaloizi
pentru industria farmaceutică și ca sursă de semințe de mac pentru industria
alimentară (Gumuscu et al., 2008). Din familia de plante Papaveraceae genul
Papaver are două specii care conțin morfină, codeină, tebaină, noscapină (numită și
narcotină) și papaverină: Papaver somniferum L. și Papaver setigerum D.C. Tebaina
a fost raportată la Papaver orientale L. și Papaver bracteatum Lindl. dar nu a fost
găsită nicio interconversie biosintetică la codeină și morfină la aceste specii. Deși se
știe că compușii alcaloizi pot fi găsiți atât în Papaver somniferum L. cât și în Papaver
setigerum D.C., primul are niveluri considerabil mai mari ale celor cinci alcaloizi
majori, în procente în greutate, de opiu decât cel prezent în setigerum. Semințele de
mac cu un conținut ridicat de lipide și metaboliți secundari nu sunt un obiect simplu
pentru extragerea ADN-ului. Acest lucru este și mai complicat cu semințele
măcinate, umpluturile din semințe de mac de la brutărie produse și ulei presat.
Numărul de rapoarte științifice relevante în mac este foarte limitat și procedurile de
extracție de ADN au fost publicate numai din semințe degresate și probe de
heroină.

2. Materiale si metode

Au fost comparate mai multe proceduri de extracție utilizate în mod obișnuit și

kituri comerciale extracția ADN din semințe de mac de opiu, semințe măcinate,
boabe de polen, umplutură de semințe de mac dintr-un produs de panificație și ulei
de mac. Protocolul de extracție nou dezvoltat a fost mult mai simplu, a redus costul
și timpul necesar pentru extracția ADN-ului din nativ și din sol, semințe și boabe de
polen. Calitatea ADN-ului extras prin protocolul nou dezvoltat a fost mai bună sau
comparabila cu cele mai eficiente. După ce a fost extins printr-o etapă simplă de
purificare pe o silice coloană cu membrană, protocolul nou dezvoltat a fost, de
asemenea, foarte eficient în extragerea ADN-ului de mac din umplutura cu mac.
ADN-ul extras din această matrice de mac a fost amplificabil prin analiza PCR. ADN-
ul extras din ulei de mac presat la rece și potrivit pentru amplificari a fost obținut
numai prin metode dezvoltate anterior pentru uleiul de măsline.
O noua metoda de extractie a ADN-ului din semintele de mac de opiu este din
heroina. Izolarea ADN-ului din heroină reprezintă o provocare nouă și din ce în ce
mai complexă în comparație cu cea întâlnită în procesul de extracție a opiumului.
Mostrele de heroină sunt în mod cert diverse. Acestea variază în ceea ce privește
puritatea, agenții de tăiere, nivelul de prelucrare și condițiile de depozitare. Acești
factori au un impact semnificativ asupra calității și cantității rezultate din ADN de mac
obținut din probă. Metodele de extracție care au fost evaluate includ metode
comerciale de la raft (COTS): (1) un sistem automat Metoda Promega Maxwell 16
Tissue ARN LEV pe bază de silice/perle magnetice și (2) Qiagen Plant DNeasy
metoda de extracție a ADN-ului pe coloană de siliciu și (3) o versiune modificată a
kit-ului Qiagen Stool pentru extracția ADN-ului (Tabelul 2). Designul studiului ia în
considerare câțiva factori care pot afecta recuperarea ADN-ului din probele de
heroină: (1) puritatea heroinei, (2) cantitatea de probă (grame), (3) metoda de
extracție și (4) tipul de probă de heroină (albă sau pulbere maro sau gudron negru).
Au fost selectate probe de heroină cu cantități suficient de mari (masă totală) pentru
a permite comparații consistente între metodele de extracție (Tabelul 1) ( Scientific
Reports, 2018 )

Monstra Tip % Heroina(HCl sau baza)

WP-1 pulbere alba 86.4(HCl)

BPc-1 pulbere maro aspra 55.7(HCl)

BPf-1 pubere maro fina 12.1(baza)

Tabelul 1-Probe de heroină selectate pentru evaluările inițiale ale metodelor de extracție a ADN-ului

Tabelul 2-Evaluarea metodelor de extracție și a masei probei pe probe de heroină de diferite purități.
Valorile inferioare punctului de trecere (Cp) indică concentrații mai mari de ADN. Controalele fără
șablon (NTC) sunt, de asemenea incluse și prezintă valori Cp peste 35, ceea ce indică un semnal
nesigur pentru a determina cu exactitate prezența unei amplificări semnificative. Rețineți că metoda
Maxwell ARN LEV a fost folosită numai pentru extragerea ADN-ului din proba WP-1 deoarece probele
rămase nu aveau masa necesară pentru a efectua cele trei extracții. QP- Qiagen plant Mini kit, QS-
Qiagen Stool Mini Kit.
 O alta metoda de extractie a ADN-ului de mac de opiu este direct din
samanta. Semințele mature și boabele de polen de mac de opiu au fost colectate de
la cultivar înregistrat Major, cultivat la Stația de Cercetare și Ameliorare din Malý
Šariš (Slovacia). Au fost depozitate la 4 ◦C înainte de extracția ADN-ului. Semințele
și boabele de polen au fost omogenizate prin pistil și mortar înainte de extracție.
Semințele au fost măcinate și cu moara de mac. Macul de semințe și uleiul de
semințe de mac presat la rece au fost cumpărate în magazin alimentar și păstrate la
4 ◦C înainte de extragerea ADN-ului. ADN-ul genomic din semințe a fost extras din
0,2-0,5 g de semințe prin șase metode: Dellaporta et al.[4] cu și fără CTAB; Bayer
BioScience N.V[1]; Compania Monsanto[2]; Murray și Thompson[3]; Sagwan et al.[5]
și folosind patru truse comerciale: DNeasy® Plant Maxi Kit, QIAamp DNA Stool Mini
Kit, PowerSoil DNA Isolation Kit (toate de la QIAGEN N.V., Hilden, Germania) și
Plant DNAzol® Reagent (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, SUA).
Un alt protocol de extracție a fost dezvoltat, conceput pe baza procedurii
Bayer BioScience N.V.[1], dar care conține mai multe modificări. Conținutul acestui
protocol este după cum urmează. Proba (200 mg) de semințe a fost măcinată până
la o pulbere fină cu mortar și pistil și extras cu 2,7 mL de tampon de extracție (50
mM EDTA, 100 mM Tris-HCI, pH 8,0, 500 mM NaCI), 190 µi de 20% SDS și 10 µi
de 2-mercaptoetanol. . Amestecul a fost agitat în vortex şi incubat la 65 ◦C timp de
30 min. În timpul incubației, probele au fost amestecate la fiecare 10 minute. După
incubare, s-au adăugat 2,3 ml de amestec fenol:cloroform:alcool izoamilic (25:24:1),
amestecul fiind agitat timp de 1 min și centrifugat timp de 20 min la 5500 x g. Faza
apoasă superioară a fost transferată într-un nou tub, amestecat cu 2 mL de
izopropanol și precipitat 30 min la -20 ◦C. Acizi nucleici precipitați au fost transferati
în tubul Eppendorf și spălati cu 70% și 96% etanol. Pellet după uscare a fost dizolvat
în tampon TE (10 mM Tris-HCI, 1 mM EDTA, pH 8,0) și tratat cu 10 µL de RNase A
(10 mg/mL) timp de 30 min la 37 ◦C. După incubare, 800 µL de amestec
cloroform:alcool izoamilic (24:1) s-a adăugat, s-a agitat energic și s-a centrifugat
timp de 10 minute într-o microcentrifugă la viteză maxima. Faza apoasă superioară a
fost transferată într-un tub Eppendorf nou, 600 µL de izopropanol a fost adăugat și
după agitare a fost incubat timp de 20 de minute la -20 ◦C. ADN-ul precipitat a fost
din nou spălat cu 70 și 96% etanol, uscat, dizolvat în tampon TE și depozitat la -20
◦C.
 Se mai poate extrage ADN-ul si prin folosirea tehnologiei PCR de amplificare.
ADN-ul extras a fost amplificat prin PCR folosind primeri pentru microsatelitul locus
psSSR69. Două perechi de primeri pentru gena de referință care codifică lanțul
tubulin beta-7 (Tabelul 3) a fost proiectat din secventa codificata (XM_026557633.1,
GenBank®, http://www.ncbi.nlm.nih.gov) folosind intrarea Primer3
software (Whitehead Institute for Biomedical Research, SUA).

Tabelu 3-Perechi de primeri utilizate pentru amplificarea ADN-ului macului de opiu. Tm: Temperatura
de topire.

Reacțiile PCR au fost efectuate în reacție de 15 µL care conține 11,7 µL

ddH2O, 1,5 µL 10x PCR tampon, 0,3 µL ambii primeri (0,20 µM), 0,3 µL fiecare
dNTP (200 µM), 0,2 µL Taq-polimerază (1U/µL), şi 1 pl ADN (25 ng/pl). Parametrii
PCR pentru locus psSSR69 au fost: 94 ◦C timp de 3 minute, 45 de cicluri de 45 s la
94 ◦ C, 1 min la 54 ◦ C, 1 min la 72 ◦ C și 1 ciclu suplimentar la 72 ◦ C timp de 10
min. Gena de referinta pentru lanțul tubulinei beta-7 a fost amplificată folosind
programul: 94 ◦C timp de 5 min, 35 de cicluri de 45 s la 94 ◦C, 1 min la 59 ◦C, 1 min
la 72 ◦C și 1 ciclu suplimentar la 72 ◦C timp de 5 min. Ampliconii erau analizati în
geluri de agaroză 2% în tampon TBE și colorat cu bromură de etidiu.
De asemenea, s-a descoperit ca se poate obtine ADN-ul de mac de opiu si
din produsele cu umplutura cu mac. ADN-ul a fost extras din 0,5–2,0 g de umplutură
de produs de panificație folosind metodele: Bayer BioScience N.V[1], Compania
Monsanto[2], Kit QIAamp DNA Stool Mini și protocol nou dezvoltat. ADN-ul extras a
fost purificat prin coloanele spin-membrane de silice.
Se mai poate obtine si din ulei de seminte de mac. ADN-ul a fost extras din
0,2-15 ml de ulei conform Doveri et al.[7]; Compania Monsanto[2]; Bayer BioScience
N.V[1]; Consolandi et al.[8]; Giménez et al.[9]; Raieta et al.[6], nou dezvoltatul
protocol și kitul comercial (QIAamp DNA Stool Mini Kit).
 3. Rezultate si discutii

Analiza spectrofotometrică, precum și electroforeza pe gel a ADN-ului din

semințe au scos la lumina diferențe semnificative între protocoalele de extracție
utilizate, atât în ceea ce privește cantitatea, cât și calitatea obținutului ADN.
Parametrii calitativi ai ADN-ului au fost în primul rând importanți (Tabelul 4).
Protocolul de Dellaporta et al.[4] și modificarea sa prin încorporarea CTAB a arătat
că mecanic omogenizarea semințelor direct în tamponul de extracție, chiar și fără
utilizarea azotului lichid, nu duce la deteriorarea calității sau cantității de ADN
(Tabelul 4, Figura 1a). Se poate concluziona că necesitatea folosirii azotului lichid în
timpul omogenizării mecanice a semințelor de mac nu este necesară pentru
prevenirea degradării ADN-ului extras. Calitatea ADN-ului extras a variat în funcție
de procedura de extracție. Proceduri conform Sangwan et al., Bayer BioScience
N.V.[1], Compania Monsanto[2], Murray și Thompson[3], QIAamp DNA Stool Mini
Kit, DNeasy® Plant Maxi Kit, precum și noul protocol dezvoltat, au furnizat ADN-ului
macului valori A260/280 în interval 1.77–2.11. Proceduri Dellaporta et al.[4], Kit de
izolare ADN PowerSoil și reactiv Plant DNazol® a avut rapoartele A260/280 în
intervalul 1,54–1,75 (Tabelul 4).

Tabelul 4-Parametrii ADN-ului extras din semințe native de mac de opiu, semințe măcinate și boabe
de polen prin diferite proceduri de extracție și truse comerciale.

*-Omogenizarea semințelor cu azot lichid; Bayer BioScience N.V[1]. —0,2 g de semințe extrase în
volum de tampon de extracție pentru 0,2 g semințe; Bayer BioScience N.V[1]. —ADN extras din 0,2 g
de semințe extrase în volum de tampon de extracție pentru 0,5 g de semințe.
 ADN-ul din umplutura de mac a fost extras prin două proceduri, un kit
comercial și protocolul nou dezvoltat (Tabelul 5). Etapa de purificare folosind
coloanele spin-membrane de silice a fost adăugată la protocoale Compania
Monsanto [2] și una nou dezvoltată. ADN-ul extras folosind aproape toate
protocoalele de extracție a avut aceste valori în afara intervalului optim (Tabelul 5).
ADN-ul nedeteriorat cu greutate moleculară mare extras din umplutura cu semințe
de mac din produsul de panificație
nu a fost vizualizată în gel de agaroză. Aceasta reflectă fragmentarea ADN-ului de
mac la fragmente foarte scurte datorită degradării mari în timpul coacerii. Acest lucru
este comun pentru ADN-ul extras dintr-o matrice care a suferit prelucrare prin
temperatură înaltă și o combinație de măcinare, manipulare mecanică și tratament
termic. Cu toate acestea, calitatea obiectivă și capacitatea de utilizare a ADN-ul
extras poate fi dezvăluit doar prin amplificare.

Tabelul 5-Parametrii ADN-ului extras din umplutura cu semințe de mac și ulei din semințe de mac
folosind diferite proceduri de extracție și kituri comerciale

*-purificarea ulterioară a ADN-ului extras prin coloane spin-membrane de silice, ap/ulei - ADN izolat
din faza apoasă (aq) sau uleioasă (o).

Opioidele sunt analgezice extrem de puternice și eficiente, dar majoritatea au

un potențial ridicat de dependență și abuz. Opioidele acționează prin angajarea
receptorilor specifici de suprafață celulară; receptorii opiacee, care sunt denumiți µ
[miu], κ [kappa] și δ [delta]. Acești receptori se găsesc predominant în sistemul
nervos central, creier și coloana vertebrală, dar sunt prezenți și pe celulele
mononucleare vasculare, cardiace, pulmonare, intestinale și chiar din sângele
periferic. Angajarea receptorilor de opiacee generează o serie de semnale
intracelulare, inclusiv inhibarea adenilat-ciclazei, scăderea deschiderii canalelor de
calciu, creșterea curenților de potasiu și activarea proteinei kinazei C (PKC). Efectul
major al acestor căi este reducerea excitabilității celulare și a neurotransmisiei.
Liganzii naturali ai receptorilor de opiacee sunt așa-numitele peptide opioide
endogene, cum ar fi encefalinele, endorfinele și endomorfinele. Opioidele au o
varietate de efecte clinice, dar sunt cunoscute și utilizate în principal pentru efectele
lor profunde de calmare a durerii. Alte efecte care sunt adesea legate de analgezia
cu opiacee includ euforia, schimbările de dispoziție, somnolența și tulburarea
mentală. Cu toate acestea, trăsătura distinctivă a analgeziei induse de opioide este
lipsa pierderii cunoștinței. Durerea este adesea descrisă ca fiind mai puțin intensă,
dar totuși prezentă, deși este mai bine tolerată. Astfel, opioidele nu scad sau
tratează cauza stimulului dureros, ci mai degrabă scad percepția acestuia. Alte
efecte ale opioidelor includ depresia respiratorie, scăderea motilității
gastrointestinale, sedarea, greața, vărsăturile, constipația și balonarea intestinală.
Opioidele au și efecte cardiovasculare directe, scăzând tensiunea arterială,
provocând vasodilatație și scăzând activitatea cardiacă. Majoritatea opioidelor au
efecte și efecte secundare similare, deși diferențele farmacocinetice, distribuția
tisulară și specificitatea tipului de receptor explică probabil variația efectelor diferiților
derivați sintetici și semisintetici ai morfinei. Morfina este considerată opiaceul
prototip, față de care alți agenți sunt măsurați pentru efectele lor analgezice, precum
și pentru efectele secundare adverse.
Opioidele pot fi clasificate în subclase, pe baza structurii lor chimice, ca
alcaloizi de opiu (opiacee: codeină, morfină), derivați semisintetici ai alcaloizilor
naturali (hidrocodonă, hidromorfonă, oxicodonă, buprenorfină) și diferite clase de
opioide sintetice, cum ar fi anililopiperidine (fentanil, alfentanil, sufentanil,
remifentanil), derivați de difenilpropilamină (propoxifen, dextropropoxifen, metadonă,
difenoxilat, loperamidă) și alții (pentazocină, butorfanol, nalbufină, levorfanol,
tramadol, opioidaltrexonalona, opioidaltregona, nalbufină ). Ele pot fi, de asemenea,
clasificate informal pe baza utilizării lor majore, cum ar fi anestezia (fentanil,
alfentanil, remifentanil, sufentanil), durere severă (morfină, hidromorfonă, levorfanol,
meperidină), durere acută sau cronică moderată până la severă (fentanil transdermic
sau transbucal, codeină, oxicodonă, hidrocodonă, levorfanol, metadonă), diaree
(loperamidă, difenoxilat) și tuse (codeină, hidrocodonă). În cele din urmă, opioidele
pot fi clasificate pe baza acțiunii lor ca agonişti completi, agonişti parţiali sau
agonişti/antagonişti mixţi şi antagonişti ai receptorilor opiacei. Antagoniştii
receptorilor opioizi sunt utilizaţi pentru a inversa efectele opioidelor şi sunt de
nepreţuit în gestionarea supradozajului cu opioide (naloxonă, naltrexonă,
nalmefenă). Antagoniștii opioizi specializați pot fi utilizați pentru a inversa efectele
nedorite ale opioidelor, cum ar fi constipația la pacienții cu durere cronică la opioide
pe termen lung. Acești agenți (naldemedină, naloxegol) sunt în general modificați
pentru a nu traversa sângele creier și a inversa efectele opiaceelor asupra sistemului
nervos central.
Agonisti completi si partiali: alfentanil, buprenorfina, butorfanol, codeina,
difenoxilat, fentanil, heroina, hidrocodonă, hidromorfonă, levorfanol, loperamidă,
meperidină, metadonă, morfină, opiu, oxicodonă, oximorfonă, pentazocină,
remifentanil, sufentanil, tramadol.
Antagonişti ai receptorilor opiacei: naldemedină, nalmefen, naloxegol,
naloxonă, naltrexona.

Opioidele sunt cauze rare ale bolii hepatice induse de medicamente și nu sunt
menționate în serii mari de cazuri de leziuni hepatice evidente clinic cauzate de
medicamente. În doze fiziologice, pentru ameliorarea durerii, opioidele nu au fost
implicate în cauzarea de leziuni hepatice aparente clinic, insuficiență hepatică acută,
hepatită cronică sau sindromul căilor biliare de dispariție. Cu toate acestea,
supradozele de opioide mai puternice au fost legate de cazuri de leziuni hepatice
acute, de obicei cu debut precipitat și model de toxicitate acută, cu creșteri marcate
ale nivelurilor serice de aminotransferaze și debut precoce al semnelor de
insuficiență hepatică. Acest sindrom a fost cel mai bine caracterizat după
supradozajul sau abuzul cu buprenorfină, dar probabil apare cu alții. Este posibil ca
opioidele implicate să nu fie direct toxice pentru ficat, dar să provoace leziuni
hepatice ischemice din cauza insuficienței respiratorii, colaps cardiovascular, șoc și
anoxie care pot apărea în cazul supradozajului sever cu opioide. Sindromul clinic
seamănă cu necroza hepatică acută și insuficiența hepatică, dar este rapid reversibil
și rareori cauza principală de deces prin supradozaj.
O formă specială de leziune hepatică legată de consumul de opioide apare cu
combinațiile lor fixe de medicamente cu acetaminofen. Aceste combinații sunt
utilizate în mod obișnuit pentru durerea moderată până la moderat severă și pot
duce la abuz. Dacă sunt luate prea des, dozele de acetaminofen pot atinge niveluri
toxice, în special cu o utilizare excesivă timp de câteva zile în fața malnutriției,
abuzului de alcool sau a bolilor intercurente. Aceste alte stresuri pot scădea
nivelurile hepatice de glutation și pot predispune la hepatotoxicitatea
acetaminofenului. Această constelație de evenimente este denumită supradozaj
accidental sau neintenționat de acetaminofen sau, mai colocvial, „neaventura
terapeutică”. Din cauza potențialului lor de hepatotoxicitate, combinațiile de opioide
în care doza de acetaminofen este mai mare de 325 mg per comprimat sau capsulă
au fost întrerupte.

4. Concluzii

Protocoale testate pentru extracția ADN-ului din semințe de mac native și

măcinate, boabe de polen, umplutura din semințe de mac din produsul de panificație
și uleiul de mac au fost diferite și adecvate în funcție de matricele sau produsele
individuale de semințe de mac. ADN-ul din semințe, semințe măcinate și boabele de
polen extrase prin aproape toate procedeele de extracție au avut cantitate și calitate
suficiente pentru analiza PCR a markerului scurt de microsateliți (156 bp) și, de
asemenea, a fragmentului lung al genei de referință (553 bp). Cele mai bune dintre
aceste protocoale au fost testate pentru extracția ADN-ului din umplutura cu semințe
de mac din produsul de panificatie. A fost foarte utilă utilizarea coloanelor cu
membrană de silice pentru purificare a ADN-ului extras. ADN-ul purificat a fost apoi
amplificabil. ADN de mac extras din termic umplutura din semințe de mac procesate
din produsul de copt nu a amplificat fragmentul lung (553 bp) al genei de referinta.
Cu toate acestea, primeri proiectați pentru amplificarea fragmentului mai scurt al
genei de referință (96 bp) precum și pentru markerul de microsateliți (156 bp) au
furnizat ampliconii corespunzători. Noul protocolul de extracție dezvoltat în cadrul
acestui studiu s-a dovedit a fi aplicabil universal la mac semințe, polen și produse
care conțin semințe de mac. Protocoale testate pentru extragerea ADN-ului de mac
din presarea la rece a uleiului de mac a fost inițial dezvoltat sau modificat pentru
uleiul de măsline. Cele mai multe dintre ele au fost eficiente, iar ADN-ul extras a fost
amplificat folosind primeri pentru markerul microsatelit și fragmentul scurt a genei de
referinţă.

5. Referinte

[1]Bayer BioScience N.V: Laboratorul comunitar de referință pentru alimente

și furaje modificate genetic. Eșantionarea semințelor și extracția ADN-ului de
semințe oleaginoase;
[2]Compania Monsanto: Laboratorul comunitar de referință pentru alimente și
furaje modificate genetic. Eșantionarea semințelor și extracția ADN-ului de semințe
oleaginoase;
[3]Murray și Thompson: Izolarea rapidă a ADN-ului plantelor cu greutate
moleculară mare;
[4]Dellaporta et al.: Un mini preparat de ADN de plante;
[5]Sagwan et al.[5]: Izolarea ADN-ului genomic din reziduurile de semințe
uleioase degresate ale macului de opiu;
[6]Raieta et al.: O nouă metodă fiabilă de extracție a ADN-ului din ulei potrivită
pentru trasabilitatea moleculară;
[7]Doveri et al.: Neconcordanța dintre profilurile genetice ale uleiului de
măsline și fructelor; o notă de precauție privind utilizarea markerilor ADN pentru
testarea provenienței;
[8]Consolandi et al.: O procedură pentru trasabilitatea și autenticitatea
uleiului: extracția ADN-ului, analiza multipla PCR și matrice universala LDR;
[9]Giménez et al.: Aplicarea PCR în timp real asupra dezvoltării markerilor
moleculari și pentru a evalua aspectele critice pentru autentificarea uleiului
6. Bibliografie

https://www.nature.com/articles/s41598-018-20996-9.pdf
https://www.britannica.com/plant/opium-poppy
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31643200/
https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fchem.2020.00737/full
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7601356/
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7482649/