Mărul se înnegrește foarte repede după ce a fost feliat sau muscat.

Deși acest lucru este un

fenomen natural, înnegrirea a fost considerata ca o trăsătură care descurajează adesea consumul
si provoacă deșeuri inutile. În SUA a fost recent acceptat un nou produs modificat genetic –
Mărul Arctic, un nou soi de mere care nu se oxidează după ce este feliat. Acest tip de măr a fost
creat de o companie British Columbia în frunte cu Okanagan Specialty Fruits (OSF) care au
dezactivat genele care controlează producția enzimei răspunzătoare de oxidarea mărului. Astfel,
primim un soi de măr care se strică cu mult mai greu, unica diferență între merele simple si cele
Arctic este că merele simple, în mod natural, se strică mult mai repede decât acele modificate

Cum sunt reduse activitățile polifenolilor în merele Arctic? Una dintre metodele utilizate în mod
obișnuit în reducerea activității unei enzime specifice in celula vie este de a înlătura expresia
ARNm din gena țintă. OSF utilizează o tehnică ce permite suprimarea specific ARNm din una
sau mai multe gene țintă în funcție de secvențele de ADN. Un element necesar pentru această
tehnică, în mod evident, este o secvență de ADN pentru gena vizata. Un alt element este faptul că
a doua secvență (parțială sau completă) a genei țintă este transformata in celule și exprimate in
concentrații mari. O astfel exprimare a concentrației mare a transgenei va declanșa o interferență
ARN numit proces ARNi, care va fragmenta ARNm din atât gena țintă cat și transgena în bucăți
mici pentru a ucide ARNm, ceea ce duce la cosuprimarea ARNm .

După o serie de căutări in literatură și in propriile sale studii, OSF a identificat zece gene care
codifică polifenolii din genomul de mere. Pe baza asemănărilor secvenței de ADN, OSF a
clasificat cele zece gene în patru grupe, și anume PPO2, GPO3, APO5 și pSR7 (PGAS) ,aceste
denumiri fiind date de genele reprezentante fiecărei grupe

Deoarece secvențele sunt unități mari în cadrul unui grup, si unități reduse între grupuri, OSF s-a
decis pentru a viza cele patru gene reprezentative pentru a suprima cele zece

gene ale polifenolilor OFS a produs un fragment de ADN de 450 perechi de baze din fiecare
grupa de gene si apoi le-a combinat într-un singur hibrid transgena PGAS transgena PGAS a
fost asamblata într-un vector echipat cu alte elemente genetice necesare pentru transformarea
plantei. Vectorul asamblat, numit GEN-03 ,permite transgenei PGAS sa fie integrata în genomul
mărului și exprimate in concentrații mari in celulele de măr.
OSF a transformat celulele mărului cu bacteria Agrobacterium tumefaciens purtătoarea
vectorului GEN-03, și apoi le-a analizat si selectat pentru definirea plantelor OSF a redus sau
stopat înnegrirea caracteristica

Activitățile polifenolilor sunt reduse în mod semnificativ în merele Arctic .Comparativ cu merele
normale, în merele Arctic activitățile polifenolilor s-au redus cu 76% 82% în frunze și 90% -
91% in fructele mature. Datorita acestor reduceri ale activității polifenolilor se explica de ce
merele sunt mai deschise la culoare. Potrivit reprezentanților companiei, realizarea lor are
numeroase beneficii. Între acestea se numără un profit mai mare pentru producătorii de mere
(prin comercializarea merelor tăiate felii mai atrăgătoare pentru cumpărători) și un consum mai
mare la nivel de consumator (care consumă anual cu 1,5 kg mai puține mere decât în urmă cu 20
de ani). După aprobarea lor pe piață de către guvernul american, specialiștii din industrie nu s-au
arătat prea încântați de idee și se tem că anumiți consumatori ar putea să evite produsele
modificate genetic. Mai mult, ei spun că exporturile ar putea fi afectate, având în vedere numărul
mare de state unde consumatorii sunt reticenți să consume alimente transgenice. Dezavantajele
pe care le enumeră criticii acestui soi de măr modificat genetic depășesc avantajele pe care le
subliniază compania. Mai întâi, reprezentanții producătorilor de mere din SUA consideră că nu
era nevoie de o asemenea mutație genetică, deoarece împiedicarea oxidării alimentelor proaspete
se face simplu, cu câțiva stropi de suc de lămâie – vitamina C este un oxidant foarte bun.
Jackfruit (Artocarpus heterophyllus) provine din familia dudului (Moraceae) și se crede că
provine din pădurea veșnic verde din Western Ghast, India . Jackfruit-ul este o cultură
importantă în agricultura malaeziană și este recunoscut ca „Nangka” .

Industria jackfruit-ului din Malaezia este în prezent amenințată cu o boală numită „jackfruit-
bronzing”. Examinarea și păstrarea înregistrărilor de inspecție cu privire la starea de bronzare a
fructelor este esențială pentru păstrarea unei calități ridicate și pentru asigurarea securității
aprovizionării locale cu Jackfruit. Recent, au fost raportate trei cazuri de bronzare a fructelor de
Jack în Filipine, Malaezia Peninsulară și Mexic . Din punct de vedere vizual, boala este
asimptomatică în ceea ce privește aspectul exterior al fructului, dar prezintă o decolorare gălbuie-
portocalie până la roșiatică și pete ruginite pe pulpe .Celălalt simptom vizibil conform unui
raport anterior despre focarul bolii în Malaezia a fost pete evidente de culoare maro-roșcată pe
pulpe.

Bronzarea fructelor de Jack este cauzată de bacteria Pantoea stewartii subspecia stewartii.
Pantoea stewartii subsp. stewartii poate fi identificată utilizând primerii proiectați din
distanțierul intern transcris (ITS) 16S-23S ADN ribozomal pentru a confirma identitatea
tulpinilor bacteriene. Deoarece tulpinile bacteriene pure au fost confirmate pozitive , testul de
patogenitate este vital pentru a confirma dacă bacteria este agentul cauzal sau acest lucru le-ar
infirma statutul de noi agenți patogeni.

Un total de 28 de fructe de jack bolnave (varietatea Tekam Yellow J33) au fost colectate din
zonele de plantații cu focare din Malaezia Peninsulară, cuprinzând 7 fructe de la Jenderam
(Selangor), 7 fructe de la Maran (Pahang), 7 fructe de la Muadzam Shah (Pahang) și 7 fructe din
Ipoh (Perak) din septembrie-noiembrie 2017 .Fructele au fost colectate aleatoriu, cu trei replici
pentru fiecare probă pe locație (în total 21 de fructe pe zonă de colectare). Fructele infectate au
fost împachetate, introduse în pungi sterile de plastic, etichetate și aduse la laborator pentru
diagnosticul inițial și izolarea agentului patogen. Procedura de izolare a fost efectuată nu mai
târziu de 24 de ore după ce probele colectate au fost aduse la laborator.
Probele infectate au fost tăiate și clătite cu apă distilată sterilizată (conținând 1% hipoclorit de
sodiu, Chlorox™) timp de 3 minute. Pulpele de fructe de jac au fost puse pe mediu de agar
King’s B, sigilate corespunzător și incubate în poziție inversată timp de 24 până la 48 de ore la
28 ° C. După incubare, coloniile izolate au fost subcultivate până când s-au obţinut tulpini
stewartii. După cum a menționat EPPO, coloniile erau de așteptat să fie de culoare galben închis
până la galben pal sau galben-portocaliu, plate până la convexe, transparente cu margini întregi și
cu creștere lentă până la medie.Pentru utilizare ulterioară, culturile bacteriene pure au fost
crescute în mediu bulion nutritiv cu glicerol 20% (v/v) și depozitate la -80°C.

Tulpinile stewartii au fost crescute pe bulion nutritiv timp de 24 până la 48 de ore la 28°C.
Folosind un kit de izolare a ADN-ului genomic, (PrestoTM Mini gDNA Bacteria Kit, Geneaid
Biotech LTD., Taiwan), toate cele 28 de tulpini de bacterii au fost extrase urmând protocolul
furnizat. Reacția în lanț a polimerazei (PCR) a fost efectuată într-un amestec de reacție de 25 μl,
care conținea 1 μg de șablon ADN genomic total extras, 12,5 μl de 2x DreamTaq Red PCR
MasterMix (Thermo Scientific Inc., SUA), 9,5 μl de apă fără DNază și 1 μl din fiecare primer
(Apical Scientific, Malaezia). Amplificarea PCR a fost efectuată urmând protocoale, în Thermal
Cycler „iCycler” (Bio-Rad Laboratories Inc., SUA) pentru a amplifica regiunea 16S-23S ITS,
folosind perechea de primeri: ES16 (5'- GCG AAC TTG GCA GAG AT -3' ) și ESIG2c (5'-
GCG CTT GCG TGT TAT GAG -3').

Pentru testele de hipersensibilitate au fost utilizate transplanturi de Nicotiana benthamiana în

vârstă de patru săptămâni. Folosind o seringă, 1 ml de 108 CFU/ml de suspensie bacteriană (așa
cum este determinat de McFarland Standard, BioMérieux, Marcyl'Etoile, Franța) a fost inoculat
într-o frunză de tutun complet expandată (3 frunze per cultură bacteriană). Frunzele infiltrate cu
apă distilată sterilă au servit drept martor negativ. Starea de seră menținută la temperaturi
cuprinse între 26°C și 35°C. Răspunsul plantei pentru reacția de hipersensibilitate (HR) a fost
înregistrat după 10 până la 36 de ore după infiltrare. Necroza țesuturilor infiltrate a fost
considerată ca HR pozitivă, iar absența a fost considerată ca un test negativ. Au fost efectuate
patru replici pentru fiecare tulpină din cauza oricărei probleme de imprecizie. Pentru acest test
erau așteptate două rezultate, deoarece studiile anterioare au arătat că Tulpinile stewartii au dus
la HR pozitivă și patogenă sau rezultat în alt mod negativ HR, sugerând că tulpinile sunt
nepatogene din cauza mutației în gena hrp.
Pulpele de fructe de jack sănătoase (varietatea Tekam Yellow J33) au fost inoculate cu 10 mL de
108 CFU/mL (după cum s-a determinat de McFarland Standard, BioMérieux, Marcyl'Etoile,
Franța) de 24 până la 48 de ore P. stewartii subsp. stewartii suspensii. A fost inoculată apă
distilată sterilă pentru a controla pulpele sănătoase ale fructelor de jack. Au fost efectuate 4
replici per tulpină. Toate cele 28 de tratamente cu tulpini bacteriene au fost introduse în vase
Petri sterile (sigilate corespunzător) și incubate la 28 °C într-o cameră controlată. Evaluarea
simptomelor de bronzare a fructelor de jack a fost înregistrată zilnic până la două săptămâni de
inoculare.Tot ADN-ul genomic total extras a fost utilizat ca matriță în amplificarea PCR
utilizând primeri.Din totalul de 28 de fructe de jack colectate, toate fructele (7 fructe de la
Jenderam, 7 fructe de la Maran, 7 fructe de la Muadzam Shah și 7 fructe de la Ipoh) au prezentat
simptomele bolii bronzante .Aspectul exterior al fructelor colectate a fost lipsit de simptome. Pe
plan intern, au prezentat simptome vizibile de bronzare fie decolorare gălbuie cu pete bronzate,
fie decolorare roșiatică pe pulpe.