Producerea biotehnologic a

compuilor antitumorali - poliamine

ndrumtor: Conf. dr. Smaranda Vntu

Masterand: Elena-Alexandra Sicora
Cuprins
Poliaminele generaliti;
Biosinteza poliaminelor;
Funciile poliaminelor;
Metode biotehnologice utilizate pentru obinerea de
poliamine;
Poliaminele
Poliaminele sunt un grup de amine alifatice, cationice la un pH neutru care sunt eseniale
pentru creterea i viabilitatea celulelor.
Datorit sarcinii lor pozitive ele sunt capabile s se lege prin legturi electrostatice la mai
multe macromolecule celulare, incluznd ADN, ARN, proteine.
Sunt implicate n reglarea unei game diverse de procese vitale n ambele tipuri de celule
(eucariote i procariote), inclusiv proliferarea celulelor, transducia semnalului i stabilizarea
membranei.
Acestea sunt implicate i n traducerea i reglarea expresiei genelor.
n unele organisme controleaz si moartea celular programat.
n plus, poliaminele sunt considerate ca fiind una din rezervele de carbon i de azot , cel puin
n esuturile n cultur.

Biosinteza poliaminelor
Funciile poliaminelor n plante

Poliaminele sunt asociate cu creterea i dezvoltarea plantelor
Au rol n embriogeneza rdcinilor, particip la nflorirea i dezvoltarea fructelor.
n ultimii ani s-a artat un interes major pentru rolul jucat de poliamine ca molecule
ce ajut plantele s se protejeze mpotriva stresului oxidativ, temperaturilor ridicate,
deshidratrii.
Cercetrile au demonstrat c poliaminele celulare au fluctuaii semnificative att n
compoziiei ct i concentraie ca rspuns la condiiile de mediu.
Este clar rolul lor important n protejarea celulelor plantei dar modul lor de aciune
rmne nc o chestiune de speculaie.


http://www.toyobo-global.com/seihin/cosme/phytopolyamine.htm
Studii efectuate pentru a demonstra efectul lor
protector
Fructele de litchi au fost tratate cu cte 1 mm/L poliamin: putrescein,
spermin i spermidin apoi depozitate la 5C pn la 30 zile. n acest timp
ele au fost analizate; s-a comparat nivelul de poliamine ntre plantele
depozitate i cele n care s-a adugat poliamine. Coninut de ap, producia
de etilen a fost i ea msurat. Fructul n timpul depozitrii s-a nnegrit ca
urmare a creterii nivelul de peroxizi i etilen i scderii nivelului de
poliamine. Adaosul fiecrei poliamine a determinat creterea nivelului
celorlalte dou n aproape fiecare caz i au determinat ntrzierea apariiei
modificrilor caracteristice senescenei. Cea mai eficient s-a dovedit a fi
spermina.
Plante bogate n poliamine
Metode biotehnologice utilizate pentru obinerea
de poliamine
Triticum sp. aparine familiei poaceae i este cultivat n ntreaga lume. Este polenizat de
plante anuale i este cultura de cereale cea mai rspndit n lume. n acest moment se fac
eforturi mari pentru a mbunti productivitatea prin utilizarea biotehnologiei.
Regenerarea de plante de la calus i selecia in vitro sunt cele mai folosite strategii de
mbuntire i obinere de linii celulare de gru regenerate i eficiente pentru manipularea in
vitro.
Abordarea biotehnologic a culturilor de gru a dus la mbuntiri ale soiurilor i producerea
unor noi linii celulare.
Realizarea culturilor de esut utiliznd culturi de embrioni maturi urmat de embriogenez
somatic i selecie de calus cu o capacitate mare de regenerare poate accelera dezvoltarea de
noi soiuri prin realizarea rapid a homozigozitii.
Sursa de explant variaz n funcie de capacitatea lor dea genera variaie. esuturi difereniate
precum: rdcina, tulpina, frunza produc o variaie mai mare dect explantele cu meristeme
pre-existente (muguri axilari,).



Embrionii att maturi ct i imaturi au fost larg
utilizai n culturile de esut dar embrionii maturi s-au
dovedit a fi o alegere mai bun n comparaie cu embrionii
imaturi.
Embrionii imaturi sunt bune surse de explant dar
au nevoie de timp i faciliti de cretere, n timp ce
embrionii maturi sunt disponibili pe tot parcursul anului.
Acetia pot fi disecai sau utilizai direct.
Pentru realizarea de calus au fost utilizate
explante precum: embrioni imaturi, frunze imature,
inflorescene imature, embrioni maturi, meristeme apicale
Inducia de calus i regenerarea plantei
A. Calus nodular i friabil din embrioni imaturi
B. Formarea embrionului somatic
C. Rdcini i lstari formai din germinarea embrionului somatic
D. Embrioni somatici
E. Plantule regenerate din calus
F. Plantula prezint rdcini adventive bine definite
G. Aclimatizarea plantulelor n sol

Etapele cultivrii in vitro a grului
Datorit apariiei tehnologiei de ADN recombinant s-a mbunti calitatea
nutriional a grului, acest fapt se realizeaz prin identificarea de gene
responsabile de o anumit trstur i transferat unui noi soi mai bun. Pentru a
dezvolta gru transgenic trebuie ca culturile in vitro s aib o capacitate mare de
regenerare pentru ca planta cu genele utile s se dezvolte.
Frecvena de regenerare a grului in culturi in vitro este un factor de limitare pentru
crearea de gru transgenic.


Transformarea genetic permite introducerea de gene noi adaptate la nivel local
pentru a crea noi soiuri modificate genetic, utiliznd protocoale de cultur de esut
ca linia lor de baz. Aceste proceduri presupun ca ntreaga plant s fie regenerat
din celule izolate sau esuturi. Multe protocoale au fost dezvoltate, dar n gru ele
sunt foarte mult dependente din punct de vedere genotipic.

Triticum spelta
Triticum emmer
Agrobacterium rhizogenes transformri mediate i
transformri asociate n metabolismul PA.

Plantele transgenice au fost obinute prin adoptarea de diferite strategii cum ar fi
formarea de rdcini noi la planta de tutun prin transferul plasmidului Ri de la
Agrobacterium rhizogenes.
Materialul genetic transferat (T-ADN) are potenial mutagen n celulele de plante i
totodat identifica gene ce specific fenotipuri noi. Plamidul Ri cuprinde
aproximativ 18 gene poteniale dintre care patru au fost studiate mai n detaliu: Rol
A, RolB RolC, RolD. Mai multe studii indic faptul c RolA i RolC altereaz
metabolismul poliaminelor i fenotipul plantei. Gene Rol afecteaz nflorirea,
fertilitatea i morfologia frunzelor de tutun.
planta Vectorul Modificri
fenotipice/biochimice
Nicotiana tabacum Ri T ADN Acumulare de poliamine.
Ri T ADN Creterea i nflorirea plantelor
a fost inhibat.
Rol genes / Ri T ADN Plantele transformate au artat
un nivel sczut de poliamine i
un nivel ridicat de stres oxidativ
n rdcini i plantule.
Rol C gen slbatic Apare o scdere n dimensiune
a florilor i a capsulei i
totodat o scdere a fertilitii
plantelor.
Rol A gen slbatic La plantele transformate a
aprut sterilitatea, o morfologie
anormal a florilor, frunze
ncreite i internoduri scurte.
Inhib formarea polenului sau
determin dezvoltarea
anormal a acestora.
Rol A, RolB, RolC Plantele transformate cu cele
trei gene au crescut mult mai
repede dect plantele
netransformate.

Determinarea coninutului de poliamine prin HPLC
Coninutul de poliamine prin HPLC clasic
Coninutul de poliamine n HPLC rapid

1 putresceina
3 spermidina
4 spermina
Concluzii
Plantele cu un coninut ridicat de poliamine sunt considerate a avea o
valoare nutritiv mare. Joac un rol important n procesele de cretere la
plante i nu numai.
Abordri transgenice au fost folosite pentru a modifica coninutul de
poliamine din orez i cartof, aceste abordri ar trebui s fie extinse i la alte
culturi precum gru, porumb, legume.
Mecanismele prin care poliaminele provoac efecte de cretere i
dezvoltare la plante rmn nc neelucidate. Analiza la nivel global a
expresiei genice prin tehnici speciale va duce la nelegerea rolului lor n
plante.
Cercetrile viitoare cu plante transgenice ar trebui s ofere o mai mare
nelegere a mecanismului poliaminelor, a precursorilor i produilor
intermediari din calea metabolic a acestor compui.
Bibliografie

Polyamines of Plant Origin An Important Dietary Consideration for Human Health
Denise C. Hunter and David J. Burritt
Food & Wellness Group, The New Zealand Institute for Plant & Food Research Limited, Auckland, The Department of Botany, The University
of Otago, Dunedin, New Zealand.
A study on polyamine change and browning of fruit during cold storage of litchi (Litchi chinensis Sonn.) Yue-Ming Jiang, Fang Chen
http://www.pakbs.org/pjbot/PDFs/41(6)/PJB41(6)2869.pdf
In vitro selection and regeneration methods for wheat improvement
Manoj K. Yadav
1
, Manoj K. Tripathi
2
, Dinesh Yadav
1
, Sundeep Kumar
3
, Nagendra K. Singh
4
, Anil Kumar
1
and Govind Krishna Garg
1

High Speed HPLC Analysis of Poliamines in Plant Tissues, Hugo j.P. Walter,
Jan M. C. Geuns

Polyamine research in plants a changing perspective Raj K. Kakkar Vipen K. Sawhney first published online: 17 OCT 2002
http://www.impactaging.com/papers/v3/n8/full/100361.html
Improved Method for HPLC Analysis of Polyamines, Agmatine and Aromatic Monoamines in Plant Tissue, Robert D. Slocum, Hector E.
Flores, Arthur W. Galston and Leonard H. Weinstein Polyamines in plants: An overview Ravindar Kaur-Sawhney1, Antonio F. Tiburcio2,
Teresa, Altabella2, and Arthur W. Galston1
1Department of Molecular, Cellular and Developmental Biology, Yale University, New Haven, CT,
06520-8103, USA;
2Laboratori de Fisiologia Vegetal, Facultad de Farmacia, Universitat de Barcelona,
Spain



Physiologia Plantarum - De novo formation in the cell layers of tabacco changes in free and bound polyamines -
Patrizia torrigiani, Maria Maddalena Altamura, Francesca Capitani, Donatella Serafini, Nello Bagni, 28 apr 2006
http://www.jstor.org/discover/10.2307/2440606?uid=3738920&uid=2&uid=4&sid=21103918581383




V mulumesc pentru atenie!