UNIVERSITATEA DE TIINE AGRONOMICE I MEDICIN VETERINAR - BUCURETI FACULTATEA DE BIOTEHNOLOGII Specializarea Biotehnologii Agricole

BIOTEHNOLOGII VEGETALE APLICATE LA CAIS (Prunus Armeniaca L.)

COORDONATOR : Asistent univ. dr. Oana Livadariu STUDENT : Florea Bianca-Mirela

BUCURETI 2010

CUPRINS
ABREVIERI ............................................................................................................................... 3 INTRODUCERE ....................................................................................................................... 4 1. Taxonomie .............................................................................................................................. 6 1.1. Diversitatea speciilor din genul Armeniaca ............................................................... 6 2. Producia de caise pe plan mondial i n Romnia ......................................................... 7 2.1. Cultura caisului n Romnia ......................................................................................... 7 3. Importana economic i valoarea alimentar a caiselor ................................................. 8 4. Necesitatea ameliorrii genetice a soiurilor de cais ........................................................ 9 4.1. Portaltoii caisului ........................................................................................................ 10 4.2. Bolile i duntorii caisului ....................................................................................... 12 4.3. Obiective prioritare i sursele de gene .................................................................... 13 4.4. Metode de ameliorare la cais .................................................................................... 14 4.5. Etape i rezultate ale ameliorrii genetice a caisului n Romnia ....................... 15 5. Cultura in vitro la cais ....................................................................................................... 16 5.1. Istoricul culturii in vitro la cais ............................................................................... 16 5.2. Materialul biologic i metoda de lucru .................................................................... 17 5.2.1. Asepsizarea materialului biologic .................................................................... 18 5.2.2. Mediul de cultur ............................................................................................ 18 5.2.3. Inocularea explantelor ...................................................................................... 19 5.2.4. Condiii n camera de cretere ....................................................................... 20 5.3. Micropropagare ........................................................................................................... 20 5.3.1. Cultura de meristeme ...................................................................................... 20 5.4. Iniierea culturii in vitro ............................................................................................ 20 5.5. Procesul de caulogenez ........................................................................................... 21 5.5.1. Elongarea lstarului principal ......................................................................... 21 5.6. Procesul de rizogenez .............................................................................................. 21 5.7. Aclimatizarea .................................................................................................................21 6. Cultura de embrioni ............................................................................................................ 22 7. Cultura de calus ................................................................................................................. 22 7.1. Compatibilitatea la altoire .......................................................................................... 23 8. Cultura de antere. Androgeneza ........................................................................................ 23 CONCLUZII ............................................................................................................................ 25 BIBLIOGRAFIE ..................................................................................................................... 26

ABREVIERI

IBA = acid idolil butiric NAA = acid naftil acetic IAA = acid indolil acetic ABA = acid abscisic BAP = benzil amino - purina MS = mediu Murashige Skoog QL = mediu Quirin Lepoivre DDW = "double distilled water" = ap dublu distilat GA3 = acid giberelic TMTD = tetrametil tiuram disulfit WPM = "woody plants medium " = mediu pentru plante lemnoase TDZ = tidiazuron 2,4 D = acid 2,4 diclorofenoxiacetic

INTRODUCERE

Caisele sunt foarte mult solicitate de consumatori, att ca fructe proaspete, ct i prelucrate n diferite produse. Pentru multe popoare din zonele cu climat rece, ele sunt considerate delicatese, fructe exotice. Cererea mare pentru aceste fructe este determinat de nsuirile lor calitative i tehnologice : fineea pulpei, aroma specific, coninutul bogat n zahr, aciditate i alte substane utile organismului. Compoziia chimic bogat a fructelor le confer i valoare de medicament, putnd fi consumate n cazuri de astenie fizic i intelectual, anemie, insomnii, convalescen. Sunt recomandate, de asemenea, n alimentaia copiilor rahitici i cu ntrziere n cretere. Caisele sunt prelucrate sub form de compot, fructe n sirop, sirop, gem, dulcea, marmelad. Pot fi prelucrate, de asemenea, sub form de buturi nealcoolizate, ca suc sau nectar, sau alcoolizate, sub form de distilat i lichior. Sunt foarte apreciate att pe piaa intern, ct i la export, sub form de fructe uscate, iar pentru multe popoare din zonele cu climat rece, fructele de cais sunt considerate delicatese. Smburii de caise sunt foarte bogai n substane nutritive, coninnd 29,5 57,7% grsimi; 28% substane pectice i 3,1% sruri minerale i se folosesc n cofetrie, alturi de migdale, sau n industrie, ca materie prim pentru extragerea unor uleiuri industriale. n general, perioada de consum a caiselor, inclusiv n stare prelucrat, este lung. Cererea industriei pentru caise este mare (peste 45% din producia mondial de caise este destinat prelucrrii). Mari exportatori de caise proaspete rmn n continuare Spania, Grecia i Italia. Exist oarecare specializare ntre ri: Turcia prezint caise deshidratate, Grecia caise n sirop, Marocul export semipreparate pentru past. Preurile variaz destul de mult de la un an la altul, n funcie de calitatea fructelor i modul de ambalare. Cele mai bune preuri se obin de la soiurile de cais timpuriu. n ultimii 10 12 ani s-a remarcat o mai mare stabilitate a recoltelor n majoritatea rilor datorit soiurilor mai rezistente la factorii restrictivi (boli, ger, secet) i perfecionrii unor verigi tehnologice de cultur (fertilizare, irigare, tieri). nmulirea in vitro a caisului poate fi o metod eficient de obinere a materialului

sditor sntos, fr ageni patogeni, n condiii controlate. Metodele biotehnologice pot contribui la aplicarea markerilor moleculari n vederea identificrii i conservrii unor importante resurse genetice, identificrii i eliminrii unor patogeni, mbuntirii rezistenei la stres, determinrii moleculare a parametrilor de calitate ai fructelor. n lucrarea de fa, se va avea n vedere descrierea metodelor de ameliorare a acestei specii ct i rolul pe care l ocup biotehnologia n valorificarea acesteia. Metodele de ameliorare au fost de asemenea i ele diversificate, realizndu-se astfel hibridri complexe ntre cei mai buni hibrizi. Toate acestea au contribuit la crearea unei diversiti genetice foarte mari care a permis combinrile i recombinrile de gene necesare studiului propus. Strategiile de ameliorare elaborate s-au construit pe scheletul obiectivelor de ameliorare specifice noii etape i n corelaie cu cele stabilite pe plan internaional, n uniti de cercetare pentru pomicultur din Frana, Italia, Grecia, Spania, Turcia, S.U.A. Aceste obiective se refer la : rezistena la viroze i n special la Plum pox, rezistena la bolile stabile ale caisului: Monilinia laxa, Stigmina carpophila, Cytospora cincta, n corelaie cu creterea calitii fructelor i cu modificarea arhitecturii pomilor care s permit intensivizarea culturii, coacerea extratimpurie a fructelor pentru a acoperi o perioad deficitar pentru consumul de caise pe piaa intern din soiuri indigene, precum i asigurarea n viitor a exportului de caise n rile nord-europene, creterea nivelului genetic productiv, nsuire deosebit de complex n strns legtur cu rezistena la ger, boli, autocompatibilitatea i compatibilitatea cu alte soiuri.

1. Taxonomie Cercetrile lui Hell, Janchen i alii au dovedit c plantele cu frunze cztoare, cu flori i smbure tare au aprut dup ce clima temperat a nlocuit clima de step i deert din perioada memozoic. Dintre pomii fructiferi mai nti a aprut familia Juglandaceae (nuciferele), creia i-a urmat, dup un timp mai ndelungat, familia Saxifragaceae, din care fac parte coaczul i agriul. Acesteia i s-a alturat apoi marea familie Rosaceae, mprit de sistematicieni n mai multe subfamilii, dintre care mai importante sunt : a) subfamilia Pomoideae (smnoase) ; b) subfamilia Prunoideae (smburoase) . Subfamilia Prunoideae cuprinde genurile : Cerasus, Prunus, Piersica i Armeniaca. Genul Armeniaca curpinde mai multe specii, constituind obiectul acestei lucrri. n timpurile vechi, caisul era socotit un fel de piersic i era denumit "piersic timpuriu" (praecox). De aici a provenit probabil denumirea italian "Albercocco", cea franuzeasc "Abricot", ruseasc "Abricos" etc. Primul om de tiin care a deosebit caisul ca gen Fig. 1 Fructe de cais aparte, "Armeniaca", a fost botanistul francez

Tournefort (1700). Linn (1737) a unit caisul, prunul, cireul i piersicul ntr-un singur gen, "Prunus L".

La cais, fructele sunt de obicei pubescente, cu pedunculul scurt, aproape sesil, se coc mai de timpuriu i cad fr peduncul; mugurii floriferi sunt, de cele mai multe ori, grupai cte 2 3 i fiecare mugure conine o singur floare. Se deosebete de piersic sau migdal, prin frunze, smbure (care este neted), flori de culoare alb (sau uor roz) i prin coacerea timpurie a fructelor. (Cociu, V., 1993)

1.1. Diversitatea speciilor din genul Armeniaca

n cadrul genului Armeniaca, sunt cunoscute 8 specii de cais care au participat la formarea a peste 1800 de soiuri existente pn n prezent. (Cociu, V., 2008) Cele 8 specii de cais sunt : 1. Prunus Armeniaca L. var. vulgaris ;

2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

Prunus sibirica L. ; Prunus Mandshurica Koehne ; Prunus Mume Sieb. Et Zucc. (caisul japonez) ; Prunus Armeniaca L. var. ansu Maxim (caisul coreean) ; Prunus dasycarpa (Ehrh.) ; Prunus Armeniaca var. Holosericea Batul ; Prunus Brigantiaca Vill (caisul de Brianon, prunul alpin) .

2. Producia de caise pe plan mondial i n Romnia Producia mondial de caise a prezentat o evoluie oscilant, ajungnd n 1996 la valoarea de 2.530 mii tone i n 1998 la 2.670 mii tone. Valoarea medie a produciei n perioada 1993-1998 a fost de 2.323 mii tone cu o depire de 115,3% a produciei medii pe perioada 1989-1991. n detandu-se perioada 1993-1998, din conform producia

anuarului FAO, Asia a ocupat primul loc, cu 47,5% mondial, Europa 32,3%, Africa 12,4%. Contribuii mici la valoarea de caise au avut America de Nord cu 4,5%, America de Sud cu 2,1% i Oceania cu 1,3%. n topul primelor 10 ri productoare de caise, n Fig. 2 Flori de cais perioada 1993-1998 s-au poziionat : Turcia 362 mii de tone, Spania 179 mii de tone i Frana 149 mii de tone. n ierarhia primelor 10 ri productoare de caise, Romnia a ocupat locul 9 cu 40 mii tone. Dup datele FAO, n anul 2000, producia de caise pe plan mondial a fost de 2.511.000 tone. Turcia este ara cu cea mai mare producie de caise, respectiv, 427.000 tone, urmat de Italia cu 161.000 tone, Spania cu 148.000 tone, Frana cu 142.000 tone, S.U.A. cu 86.000 tone i Grecia cu 62.000 tone. (Cociu, V., 2008) 2.1. Cultura caisului n Romnia Sub aspect climatic, ara noastr se ncadreaz n zona favorabil culturii caisului n privina resurselor termice, de lumin i umiditate, dar prezint diferenieri puternice pe teritoriu, determinate de zonalitatea climatic. 7

Teritoriul Romniei a fost mprit n mai multe zone de favorabilitate pentru cultura caisului n urma unor studii efectuate n acest scop : Zona I - foarte favorabil - cuprinde zona teraselor dunrene, de-a lungul litoralului Mrii Negre (cu excepia unei zone de 3,5 km lime) i n jurul blilor dunrene (Balta Ialomiei i Balta Brilei) ; Zona II - de favorabilitate - cuprinde terasele mai deprtate ale Dunrii i o fie paralel cu litoralul n imediata lui vecintate. Cuprinde, de asemenea, Cmpia Timiului, isr n sud vestul rii dou microbazine favorabile culturii ; Zona III - de favorabilitate - se extinde n partea sudic a Cmpiei partea Moldovei, vestic a Podiul Cmpiei Central Moldovenesc,

Siretului, Cmpia Rmnicului, zona Subcarpailor de Curbur, mare parte a Podiului Getic i a Cmpiei Romne. Zona IV - de favorabilitate - cuprinde Valea Siretului, Subcarpaii de Curbur, nordul Cmpiei Romne i a Podiului Getic, Cmpia Someului i pantele domoale ale piemonturilor vestice. (Cociu, V., 2008) 3. Importana economic i valoarea alimentar a caiselor Caisul, originar din zona muntoas a Chinei, caracterizat prin veri clduroase i secetoase, ierni umede i blnde, este o plant iubitoare de cldur i lumin. Din China s-a rspndit la nceput n zone cu condiii asemntoare, apoi, prin apariia soiurilor ameliorate, zonele de cldur s-au extins. Caisul gsete condiii favorabile de dezvoltare n spaiul cuprins ntre paralelele 48o latitudine nordic i 35o latitudine sudic, n zona subtropical, exceptnd zona tropical propriu-zis. nsuirile calitative i tehnologice ale fructelor situeaz caisul printre speciile pomicole foarte mult apreciate de ctre consumatori. Cererea mare de fructe pentru consumul proaspt este determinat de coninutul ridicat n zaharuri, sruri minerale (Mg, P, Fe, Ca, K, S, Na, Mn, Fl, Co, Br), vitamine i acizi, compoziie, care le confer o mare valoare alimentar. Fig. 3 Cais

Fineea pulpei, aroma specific, raportul armonios ntre coninutul n zahr i aciditate la care se adaug i un anume nivel al substanelor pectice sunt cteva nsuiri care fac din caise, fructe foarte apreciate pentru industrializare. (Cociu, V., 2008)

Se consum att n stare proaspt, ct i sub form de numeroase derivate superioare calitativ mulor specii de fructe : compot, marmelad, dulcea, nectar, fructe Fig. 4 Gem de caise uscate. Din caise se prepar, de asemenea, vin i caisat, iar rachiul ce se obine prin distilare se distinge net de celelelate rachiuri. Coaja tare a smburilor se folosete pentru prepararea crbunelui activ, pentru fabricarea tuului, a unor vopsele etc. Lemnul de cais se folosete pentru confecionarea obiectelor de artizanat. 4. Necesitatea ameliorrii genetice a soiurilor de cais Necesitatea ameliorrii soiurilor deriv din particularitile speciei respective, P. armeniaca L. (Cociu, V., 1999) Astfel : Caisul este o plant cu nflorire timpurie. Chiar n coleciile cu numr mare de soiuri, fenofaza nfloritului are loc aproape simultan, diferena de la un soi la altul fiind doar de 1-5 zile. Riscul distrugerii florilor de ctre gerurile de primvar este totdeauna mare. Majoritatea soiurilor din cultur sunt foarte sensibile la diferite boli i accidente, datorit climatului umed. Este vorba, mai ales, de Minilinia pe flori i de asfixierea sistemului radicular, care necesit folosirea unor portaltoi speciali. Din aceast cauz, sortimentul este redus, n fiecare zon de producie i nu permite dispersarea riscurilor pe care le pot aduce bolile, factorii climatici nefavorbaili etc. Distrugerea florilor de ger sau de atacul moniliozei poate afecta cu att mai mult o livad sau o zon de cultur, cu ct numrul soiurilor din livada respectiv este mai mic i pomii se gsesc n aceeai fenofaz. Alternana de rodire, dei nu att de acentuat ca la mr sau prun, este totui o problem i la cais. Dup recolte prea mari sau excesive (n condiii de neirigare), diferenierea mugurilor floriferi, deci nflorirea, este foarte redus, chiar dac condiiile climatice ale anului respectiv sunt favorabile. Invers, o recolt prea mic poate 9

fi cauza uneia excesive n anul urmtor i cum pomicultorii nu intervin pentru reglarea ei, apare periodicitatea (un an de producie; unul-doi , fr) Lipsa unei game de soiuri cu epoci diferite de maturare a fructelor, duce la Cerinele foarte mari ale consumatorilor pentru produsele rezultate din vrfuri de producie cu recoltarea, transportul i valorificarea fructelor. prelucrarea industrial a caiselor (gemuri, compoturi, nectare, fructe deshidratate) impun necesitatea unor soiuri speciale acestor destinaii, care s asigure materie prim de calitate i produs finit corespunztor (fermitatea pulpei dup fierbere, pstrarea aromei, coninutul bogat n pectine, zahr). Orientarea tot mai accentuat a pomiculturii moderne spre cultura de mare densitate, cu mecanizare integral a verigilor tehnologice, aduce pe primul plan necesitatea crerii urgente a unor soiuri de vigoare redus, cu formaii fructifere scurte i durabile, structur solid a scheletului etc. n fine, trebuie reinut faptul c la cais nu exist o gam mai larg de portaltoi, care s permit diversificarea tehnologiilor moderne de cultur i valorificarea diferitelor tipuri de sol. (Cociu, V., 1999)

4.1. Portalatoii caisului Pn n momentul actual n ara noastr nu au fost omologai portaltoi vegetativi pentru cais. Portaltoii generativi pentru cais, mscrii n Catalogul oficial din anul 2001 sunt: caisul franc, zarzrul, corcoduul cu intermediar Buburuz, Albe mici, Constana 14 i Constana 16. De asemenea ca portaltoi pentru cais mai sunt recomandai i portaltoii pentru prun P.F. Buburuz i P.F. Renclod verde F. (Ghena, N., 2003) Atenie deosebit trebuie acordat portaltoilor utilizati pentru altoirea soiurilor de cais, datorit faptului c n ultimul timp au fost omologate pe plan mondial o serie ntreag de soiuri valoroase dar care nu au o compatibilitate bun cu portaltoii dec t atunci cnd acetia aparin tot speciei cais. n ri mari cultivatoare de cais, cum sunt Frana, Spania, Italia, situaia era cunoscut mai demult deoarece soiuri cu valoare calitativ a fructului, avnd mare extindere n cultura comercial: Monqui, Rouge de Rousillon, Canino pun astfel de probleme similare cu grupa de prun Tuleu de la noi. Sortimentul vechi de cais din Romnia nu punea astfel de probleme, dar n sortimentul nou au nceput s apar probleme de compatibilitate la altoirea pe prun sau pe corcodu. (Ghena, N., 2003) Folosirea intermediarului de prun Buburuz pentru altoirea soiurilor de cais se 10

recomand doar pentru faptul c n zonele cu ierni mai aspre, trunchiul pomului este mai rezistent la ger. Gradul de compatibilitate la altoirea caisului direct pe corcodu este acelai ca la altoirea pe prun. (Ghena, N., 2003) Principalele avantaje ce le aduce altoirea soiurilor de cais pe portaltoii de prun constau n rezistena sporit la ger i pe soluri grele cu exces temporar de umiditate. Albe mici, portaltoi generativ de prun, aparinnd speciei de prun european Prunus insititia, omologat n anul 1991 ca portaltoi generativ pentru cais de staiunea Bihor. Semincerul este autofertil (31%), are vigoare mare i rezisten la ger i secet. D posibilitatea cultivrii soiurilor de cais altoite pe el, pe soluri argiloase cu un coninut n argil de pn la 40%. Zarzrul, denumire ce nglobeaz biotipuri de cais cu fruct mic, aflate n stare semicultivat. n general puieii de zarzr nu pun probleme de compatibilitate la altoire cu soiuri comerciale de cais deoarece aparin aceleai specii botanice Armeniaca vulgaris/ Prunus armeniaca L. n livad, zarhrul imprim soiurilor altoite rezisten la secet, compatibilitate bun, absena drajonatului. Fig. 5 Zarzre Caisul franc, cuprinde puiei obinui din smburii unor soiuri comerciale cu o bun capacitate de rsrire. Constana 14, omologat n anul 1997 de Staiunea Constana este un portaltoi selecionat dintr-un biotip de zarzr, fiind semiviguros, cu rezisten la ger, la ngheurile trzii de primvar i la boli. Compatibilitatea la altoire cu soiurile comerciale de cais este foarte bun, ar n livad pomii nu drajoneaz, au o nrdcinare bun, de vigoare mijlocie i sunt productivi. Constana 16, portaltoi omologat n anul 1997 de Staiunea Constana, imprim soiurilor altoite precocitate la rodire i vigoare mai mare dect Constana 14. Pentru solurile uscate i cu coninut mai mare de calcar, cei mai utilizai portaltoi sunt puieii franc de cais. Pe solurile fertile se folosete microbolanul sau corcoduul seleciile Microbolan 29 C, Corcodu 163, portaltoii de prun PF Buburuz, Oteani 8, Albe mici, Mariana GF 8-1, Brompton, Saint Julien, piersicul franc selecia GF 305, precum i migdalul. (Ghena, N., 2003)

11

4.2. Bolile i duntorii caisului Pieirea prematur a caisului, denumit i apoplexia caisului, este efectul a numeroi factori, printre care i muli ageni patogeni. Studiile fcute la noi n ar arat c pomul piere atunci cnd plgile cuprind 3/4 - 4/5 din circumferina tulpinii, simptomele caracteristice constnd n nglbenirea frunzelor, rsucirea i cderea prematur ca i pornirea foarte devreme n vegetaie primvara sau n toiul iernii, slaba dezvoltare i nroire a lstarilor i mai ales scurgerea progresiv de gome. (Ghena, N., 2003) Pieirea caiilor poate fi de asemenea provocat de unele bacterii, ntre care mai important este Bacterium armeniaca (N. A. Krasilnikov). Ciuruirea frunzelor (Acospora beijerinckii, Clasterosporium carpofilium) atac ramurile, mugurii, frunzele i fructele, sub form de pete brun-rocate, cu marginile de culoare negricioas sau roie vineie, n care caz vrfurile ramurilor sau ramuri ntregi se usuc. Fructele infectate prezint pete mici de culoare cafenie roietic i aspre, la atac puternic caisele se deformeaz i i pierd din gustul lor plcut. Monilioza i putrezirea (Monilinia sau laxa)

produce uscarea vrfurilor ramurilor mumifierea fructelor. Atac ramurile, frunzele, precum i florile i fructele care se vetejesc i se usuc, iar la baza lor apar scurgeri cleioase. Cancerul bacterian (Agrobacterium tumefaciens) atac rdcinile, provocnd Fig. 6 Monilinia laxa

tumori mai mari sau mai mici. Putregaiul alb (lnos) al rdcinilor (Rosellinia necatrix, Dermatophora necatrix) se prezint ca o psl alb care se ntlnete uneori n pepiniere pe soluri cu multe resturi organice. Putregaiul fibros al rdcinilor (Armillaria mellea) provoac nnegrirea i putrezirea rdcinilor. Finarea (Podosphaera tridactyla) apare pe frunze i mai puin pe lstari cu deosebire n pepinier sub form de pete albe, cenuii, psloase, care se extind. Dintre insecte, mai periculoase pentru cais sunt: grgria fructelor (Rhynchites bacchus), grgria mugurilor (Sciaphobus squalidus), cariul negru (Capnodis tenebrionis), cariul scoarei (Eccoptogaster rugulosus), care se combat prin tratamente cu insecticide la avertizare n momentele optime. (Ghena, N., 2003) 12

4.3. Obiective prioritare si sursele de gene Ameliorarea rezistenei la ger. Este o nsuire complex, care , la cais, trebuie neleas, mai ales n sensul rezistenei mugurilor floriferi la temperaturile sczute din perioada repausului profund. (Cociu, V., 1999) Observaii sistematice n marile colecii din ar i de peste hotare au evideniat o serie de soiuri, care pot servi ca surse de gene (genitori de baz sau de caracter) pentru realizarea acestui obiectiv. Dintre acestea se pot meniona : Sungold, Moongold, Harlayne, Goldcot, NJA 35, Olimp, Litoral, Comandor, Sulmona, Sulina i altele. Ameliorarea rezitenei la boli. Este de asemenea, o nsuire foarte complex, datorit numrului mare de duntori, care atac aceast specie. Se pot folosi ca genitori soiurile : Patriarca temprano, Jaubert Foulon, Maktep, Tardif de Bordaneil, Amal, Hamidi, Nugget, Litoral, Sirena pentru rezisten la Monilinia frutigena; Callatis, Saturn, Olimp pentru rezistena la ciuperca Alternaria tenuissima; Umberto, NJA 8, Sunglo pentru rezistena la Gnomania erythrostroma; NJA 19, cr 2-63 pentru rezistena la Stereum purpureum; Timpurii de Chiinu, NJA 11, NJA 54, pentru rezistena la Pseudomonas syringae .a. Ameliorarea pentru precocitatea de rodire. Este important pentru recuperarea mai rapid a investiiilor de nfiinare a plantaiilor. n acest scop, se pot utiliza ca genitori seleciile americane: NJA 19, NJA 17, CR 2-63, Canada 60011, Canada 60012, RR 18-64, B 11-13. Ameliorarea pentru timpurietate i tardivitate. Din acest punct de vedere, pot servi ca genitori pentru timpurietate: selecia american seria NJA (19, 21, 38, 42, 43, 53), serie CR (2-63, 24-17), soiurile Bucurie, Patriarca temprano, Sazeb i altele. Pentru tardivitate : soiurile Ampuis, Paviot, Trzii de Bucureti, Litoral, Bulida, Poizat, Muscat tardive, Nicole tardive etc. Ameliorarea calitii fructelor. Mrimea este un factor de calitate apreciat n comer. Parametrul minim, n ameliorare, este de 50g/fruct. Pot servi ca genitori soiurile: Mamuth, Mandorlone, Mari de Cenad, Venus, Perfection, Palstein i altele, cu fructe de peste 70g. Mrimea fructului pare a fi un caracter dominant. Soiuri ca Kinred, Wilson Delicious i Venus, folosite ca genitori, au transmis constant mrimea fructului. Pulpa moale, suculent, cum au soiurile din Asia Central i cele Irano Caucaziene, se transmite descendenilor, n cazul ncrucirii cu soiuri europene, uurnd obinerea de noi genotipuri destinate industriei pentru sucuri i nectare. (Cociu, V., 1999)

13

4.4. Metode de amelioare la cais Hibridarea sexuat este principala metod de obinere a soiurilor cu complexul de nsuiri necesare economiei pomicole. (Cociu, V., 1999) Nu exist dificulti deosebite privind tehnica hibridrii dintre soiurile i speciile de cais i nici limite de combinare genetic. De reinut valoarea deosebit a hibridrii dintre diferitele grupe ecologo-geografice, pe care cercettorii rui, ndeosebi, au folosit-o cu abilitate. Astfel, din hibridarea unor soiuri europene cu unele soiuri din Asia Central, au fost obinute soiuri noi cu rezisten sporit la ger a mugurilor floriferi, cu fructe relativ mari i nsuiri organoleptice superioare. De asemenea, din ncruciarea unor soiuri locale (din Ucraina), foarte rezistente la ger, cu soiul european Falc roie i rencruciarea descendeilor respectivi cu soiurile miciuriniste (care sunt hibrizi ntre speciile P. sibirca x P. manshurica) au rezultat soiuri cu mare rezisten la ger, repaus de iarn lung, producie bun i caliti gustative satisfctoare. (Cociu, V., 1999) Sub aspect metodic trebuie reinut faptul c hibridarea n limitele speciei cais asigur o variabilitate mult mai redus, comparativ cu alte specii (ex: mr), indiferent de caracterul sau nsuirea urmrit prin programul de ameliorare. Acest fapt se explic prin gradul redus de heterozigotism al caisului, efect al autofecundrii ndelungate. Autogamia majoritii soiurilor de cais comun (P. armeniaca L.) contribuie la dominana nsuirilor i caracterelor de baz. Pentru obinerea de hibrizi cu vigoare redus se poate folosi fenomenul de "depresie genetic", consangviniznd 2-3 generaii. Mutageneza. Mutaiile la cais nu sunt prea frecvente, iar cele cunoscute atest apropierea caisului de prun. Astfel, Waldon, a observat pe civa pomi tineri de cais Royal, aproximativ la 10 cm mai sus de punctul de altoire, formarea unor frunze originale, mai mici, de culoare nchis, ncreite, ca de prun. Butaii care au fost luai pentru nmulire de pe lstarii normali i de pe cei mutani, au dat descendeni asemntori cu partea plantei din care proveneau. (Cociu, V., 1999) Mutageneza indus artificial este la nceput. Della Strada i Fideghelli au supus radiaiilor ionizante ramuri din soiurile Abate, Boccucia, Don Gaetano, San Francesco i altele. Din 948 V2 muguri au selecionat 9 plante cu nflorire trzie. Iradierea de ramuri i semine, n Romnia, nu a dat rezultate spectaculoase. Selecia clonal pare s fie de perspectiv, datorit faptului c majoritatea soiurilor de cais nu sunt omogene, adesea adevrate populaii. Deosebirile nu sunt numai de natur morfologic, ci i fiziologic, manifestat prin producie, rezisten la ger i boli, 14

nflorire i alte nsuiri, diferite de la pom la pom. n functe de acestea, trebuie s se selecioneze exemplarele cele mai convenabile pentru zon, conform metodei curent folosit n ameliorare. 4.5. Etape i rezultate ale ameliorrii genetice a caisului n Romnia

Primul ameliorator al caisului, cunoscut la noi, este Nicolae Krier, adept al seleciei din polenizarea liber, care a activat n perioada 1910-1930 i de la care au rmas soiurile Trzii de Bucureti i Dulci de Vian. (Cociu, V., 1999) n funcie de obiectivul prioritar al cercetrii i de volumul materialului biologic obinut, se disting urmtoarele etape : Etapa 1949 1956, obiectivul prioritar fiind crearea, prin hibridri sexuate, a unor soiuri cu nflorire trzie i repaus lung de iarn. n acest scop, s-au folosit ca genitori de baz soiurile: Cea mai bun de Ungaria, Luizet, Ananas i Trzii de Bucureti, apreciate atunci pentru productivitatea nalt i calitatea bun a fructelor, iar ca genitori de Fig. 7 Caise Roii de Bneasa caracter soirile soiurile De Silistra i Umberto, pentru nsuirea de nflorire trzie.

Etapa 1957 1970, avnd ca obiectiv prioritar obinerea de soiuri rezistente la ger, cu maturarea trzie a fructelor. S-a folosit ca genitori cei mai valoroi hibrizi din combinaiile genomale efectuate n prima etap, efectundu-se urmtoarele combinaii : a) hibrizi din familii diferite (Luizet x Umberto) x (Trzii de Bucureti x Ananas) b) hibrizi din aceeai familie tip SIB (Luizet x Umberto) x (Luizet x Umberto) c) backcross la unul din genitori (Silistra x Ananas) x Ananas d) backcross modificat (Luizet x Umberto) x Persicovaia e) consangvinizare repetat (Ananas x Ananas) x (Ananas x Ananas) Aceast etap a dat rezutate deosebit de valoroase pentru practic, selecionndu-se i omologndu-se 15 soiuri noi. Etapa 1971 1990, avnd ca obiectiv prioritar obinerea de noi soiuri timpurii i extratimpurii, de calitate superioar, cu rezisten satisfctoare la boli i ger. S-a acionat n dou direcii : a) hibridri dialele ntre soiuri de provenien geografic diferit (Romnia, Rusia, 15

Frana, S.U.A.) n general timpurii sau semitimpurii ; b) hibridri ntre cei mai buni hibrizi din etapa a - II a, pentru mbinarea diferitelor nsuiri utile practicii. Etapa 1991 i n continuare este consacrat, cu deosebire, obinerii de noi soiuri cu rezisten genetic la principalele boli, care afecteaz producia i calitatea caiselor. (Cociu, V., 1999)

5. Cultura in vitro la cais 5.1. Istoricul culturii in vitro la cais

La cais, specie cu o mare diversitate a germoplasmei, cu un grad mare de heterozigoie, sensibil la condiiile ecologice i susceptibil la boli, la factorii care limiteaz i chiar compromit recolta, micropropagarea in vitro poate fi o metoda eficient de a obine material sditor sntos, liber de ageni patogeni, uniform, n condiii de mediu controlate, dar i de vitroconservare a resurselor genetice. innd cont de aceste aspecte, aplicarea metodelor biotehnologice poate aduce contribuii inclusiv n aplicarea markerilor moleculari, pentru identificarea i conservarea resurselor genetice valoroase, detectarea i eliminarea agenilor patogeni, ameliorarea rezistenei la factorii de stres, determinarea molecular a parametrilor de calitate a fructelor (de ex. alergenii din fructe). Primele rezultate privind cultura in vitro la Prunus sp. au fost raportate de Boxus i Quirin n 1974. n acelai an, Dounsed a comunicat observaiile privind fiziologia lstririi in vitro la P. avium. Feucht i Daunsed (1976) au comunicat diferenele existente ntre P. pseudocerasus, care este o specie ce nrdcineaz uor i P. avium, o specie recalcitrant. Ochatt i colab. (1987, 1988) au raportat izolarea protoplatilor i regenerarea plantelor la P. avium x P. pseudocerasus i la P. cerasus. n 1989, Marino a obinut regenerarea de plante la P. armeniaca. Continund cercetrile n domeniu, Marino i colab. au comunicat n 1993, importana sursei de carbon asupra ratei de multiplicare, constatnd c sorbitolul d rezultate mai bune dect zaharoza. Oliveira i colab. (1993) au studiat efectul statusului juvenil asupra dezvoltrii i a coninutului n IAA i ABA endogen n calusul de P. avium. n 1998, Scaltsoyiannis i colab. au raportat rezutatele obinute la micropropagarea clonelor recalcitrante la rizogenez la P. avium. Balla i Vertesz (1999) au studiat micropropagarea unor soiuri de cais din Ungaria, n scopul obinerii materialului sditor liber de viroze i au constatat importana auxinelor pentru procesul de elongare a lstarilor. Rezultate remarcabile la cais au fost obinute de PerezTornero (1999,2000), care a indus cu succes iniierea culturii pornind de la meristeme apicale cultivate pe medii cu diferite concentraii de sruri i fitohormoni, cele mai 16

bune rezultate obinndu-le pe medii suplimentate cu BAP. El a constatat i fenomenul de necroz apical care apare frecvent la speciile de Prunus cultivate in vitro. n acelai an, Perez-Tornero i colab. (2000) au comunicat efectul BAP asupra ratei de lstrire, obinnd cele mai bune rezultate la o concentraie de 0,5-0,6 mg/l i a IBA i NAA asupra rizogenezei. Perez-Tornero i Burgos (2006) au studiat efectul originii explantelor asupra iniierii culturii in vitro la patru soiuri, subliniind c dei lstarii axilari sunt mai contaminai dect meristemele, timpul de producere a lstarilor elongai este mai scurt i nu exist diferene semnificative ntre cele dou tipuri de explante, n ceea ce privete rizogeneza. (Blan, V., 2008) Koubouris i Vasilakakis (2006) au studiat factorii care afecteaz proliferarea rapid i nrdcinarea la un soi de cais reprezentativ pentru Grecia. Pentru a obine plante sntoase a utilizat un antibiotic Nacefotaxima, n mediul de cultur. Pentru a mbunti inducerea procesului de lstrire, ei au efectuat subcultura plantulelor pe mediu suplimentat cu BA i IAA, iar pentru optimizarea nrdcinrii au utilizat IBA. n Romnia, preocuprile privind cultura in vitro la cais au luat amploare n ultimii 10 ani i se refer la micropropagarea unor soiuri i hibrizi, germinarea in vitro a embrionilor imaturi ai hibrizilor interspecifici P. armeniaca x P. persicum, P. persicum x x P. armeniaca, micropropagarea unor portaltoi. S-au testat diferite medii de cultur i balane hormonale, unele substane bioactive neconvenionale, pentru mrirea ratei de multiplicare sau nrdcinare (ap superuoar, fluide magnetice). (Blan, V., 2008) 5.2. Materialul biologic i metoda de lucru Iniierea vitroculturilor se face din explante. Explantul este o parte dintr-o plant, organ sau esut, care poate servi la iniierea unei vitroculturi. Capacitatea de regenerare a celulelor unui explant este dependent de numeroi factori: natura i originea explantelor, tipul, structura i gradul lor de juvenilitate, maturitatea celulelor i starea lor fiziologic (prezint importan n manifestarea totipotenei celulare), coninutul endogen n fitohormoni, compoziia mediului de cultur i condiiile de cultur .a. Ca material biologic pot fi utilizate semine mature i imature, din care se excizeaz embrionul; plante tinere de la care se recolteaz meristeme, apicale sau laterale, apexuri, fragmente de frunze, fragmente nodale, radicele; lstari vegetativi sau micti, de 5-10 cm, de la care se recolteaz apexuri i meristeme apicale sau axilare, boboci florali. Lstarii se obin de pe ramuri a cror dezvoltare a fost forat n laborator, n lunile februarie-martie sau se utilizeaz lstari lacomi, recoltai primvara sau toamna. Plantele donor de explante trebuie s fie sntoase, de preferat tinere i crescute n ser sau case 17

de vegetaie, pentru a diminua nivelul contaminrii cu diferii ageni patogeni.

5.2.1.

Asepsizarea materialului biologic

Materialul vegetal trebuie asepsizat cu pruden, pentru a pstra ntreaga capacitate regenerativ. Agentul dezinfectant nu trebuie s ptrund n profunzimea organelor vegetale, ntruct ele deterioreaz structurile biologice, provocnd necroze grave. Substanele dezinfectante utilizate cel mai frecvent sunt: alcool etilic 70-95%, hipoclorit de Ca sau Na 4-7%, clorur mercuric 0,1-1,0%. Concentraia substanei i timpul de aciune depind de tipul de explant, vrst, proveniena, gradul de infestare cu ageni patogeni. (Blan, V., 2008) Schema general a protocolului de asepsizare cuprinde: splare n jet de ap de robinet; imersie n etanol 70-95% timp de 10-60 de secunde; imersie n agent sterilizant (hipoclorit de Na 0,75-4%, clorur mercuric 0,3%), 10-20 de minute, 3 bi de ap Fig. 8 Hot n flux laminar distilat steril. Pe toat durata imersiei n soluie dezinfectant, flacoanele cu explante se agit manual sau ntr-un agitator mecanic. Dup ncheierea operaiunii de asepsizare i splare, zonele deteriorate (n general albite sau brunificate) sunt ndeprtate, dimensionarea explantelor fcndu-se numai din esuturile vii, nedistruse de agentul sterilizant. Ultima etap a protocolului de asepsizare - splarea n ap distilat steril - are loc n condiii de asepsie perfect, la incinta cu flux laminar. (Blan, V., 2008) 5.2.2. Mediul de cultur Compoziia chimic a mediului de cultur (matura elementelor prezente n substrat, proporia lor i compuii sub care sunt administrate), are un rol important n reuita cultivrii explantelor vegetale in vitro. (Blan, V., 2008) Mediul MS (Murashige-Skoog, 1962) a fost considerat pentru cteva decenii un mediu cu o combinaie de sruri i vitamine, universal valabil pentru plantele de cultur. Plantele lemnoase manifest ns unele cerine speciale, innd cont de reacia acestora la micropropagare. Datorit coninutului ridicat n ioni de amoniu, mediul MS este 18

considerat cel mai nepotrivit pentru cultura lstarilor de cais, inducnd o rat sczut de lstrire i la unele genotipuri mai sensibile moartea explantelor. n general, pentru genul Prunus, s-a constatat un necesar mai mic de amoniu n mediul de cultur. Mediul WPM (woody plants medium) induce formarea unui numr mare de lstari, dar prezint i neajunsuri, plantele neoformate prezentnd simptome de deficiene n frunze i necroza apical - probabil datorate coninutului redus de sruri. Cele mai bune rezultate au fost obinute utiliznd mediile QL (Quirin Lepoivre, 1977) i MS (MS modificat, cu amoniu). Macroelementele QL conin o cantitate mai redus de amoniu dect MS. n privina sursei de carbon organic, cea mai eficient i des utilizat este zaharoza 2-3%, glucoza i fructoza avnd efecte mai reduse. S-a constatat totdat c sorbitolul, utilizat n locul zaharozei (dar n cantitate dubl fa de aceasta), favorizeaz elongarea lstarilor i rata micropropagrii. La unele medii de cultur, n special pentru plantele acesta lemnoase, absorbind se recomand emii de utilizarea explante i crbunelui vegetal activ, n concentraie de 1-3%, fenolii

mpiedicnd astfel necrozarea acestora, n urma autointoxicrii. (Blan, V., 2008) Mediile de cultur utilizate pentru Fig. 9 Culturi de celule vegetale

micropropagarea speciilor lemnoase sunt de obicei solide. Solidificarea mediului se realizeaz cu un agent gelifiant, cel mai utilizat fiind agarul, n concentraie de 6-8 g/l. Ph-ul trebuie s fie de 5,6-5,8, acesta putndu-se regla cu NaOH 1N, adugat cu pictura. Mediul de cultur poate fi suplimentat cu substane bioactive neconvenionale, care stimuleaz procesele metabolice, inducnd o intensificare a organogenezei. Dintre acestea menionm : apa superuoar (ap srcit n deuteriu) i fluidele nano-magnetice, ce determin o stimulare a dezvoltrii i organogenezei, aplificnd efectul fitohormonilor de cretere, sau chiar substituindu-l.

5.2.3. Inocularea explantelor Pentru producerea de material biologic devirozat, meristemele nu trebuie s depeasc 0,20-0,25 mm. Dac se urmrete nmulirea vegetativ rapid, pot fi prelevate i fragmente mai mari, de 0,5-1,0 mm (apexuri). (Blan, V., 2008)

19

5.2.4. Condiii n camera de cretere Pentru cais, temperatura optim este de 24-26o C, iar fotoperioada de 16 ore, la o intensitate luminoas de 2600-3000 Lux. La unele tipuri de culturi (embrioni, antere) este necesar meninerea explantelor n prima perioad, dup iniierea culturii, n ntuneric.

5.3. Micropropagarea nmulirea in vitro a plantelor poart denumirea de micropropagare i este o form de multiplicare vegetativ. Micropropagarea in vitro presupune multiplicarea rapid, n mii de copii identice a materialului vegetal n condiii aseptice de cultur. (Blan, V., 2008)

5.3.1. Culturi de meristeme Constau n detaarea unei poriuni meristematice de la nivelul vrfului de cretere i inocularea acesteia pe un mediu nutritiv, n condiii aseptice, n vederea regenerrii de plante. 5.4. Iniierea culturii in vitro Explantele ce au dat cele mai bune rezultate sunt apexurile. (Blan, V., 2008) S-a remarcat c mbuntirea rezultatelor la prepararea mediului de cultur cu DDW, procesul de elongare foliar, innd cont de a fiind de lastarului i organogeneza mbuntite. efectului semnificativ specificitatea pentru cultur,

genotip x mediu

fiecare cultivar efectul mediului trebuie studiat separat. Exist genotipuri la care necroza meris Fig. 10 Iniierea de culturi in vitro temelor este total i altele la care diferenele dintre dintre rezutatele obinute, pe diverse medii de cultur, sunt nesemnificative. Pentru majoritatea soiurilor strine, autorii recomand mediile WPM, QL i Balla, cu un coninut mai redus n amoniu, ns genotipurile romneti reacioneaz favorabil i pe mediul MS, tolernd o cantitate mai mare de azot. (Blan, V., 2008) Lstarii neoformai trebuie transferai (subcultura) pe medii proaspete la 15-21 de zile, dup acest interval itervenind necroza apexului n procent ridicat.

20

5.5. Procesul de caulogenez Se consider c o concentraie de 0,5-1,0 mg/l BAP induce un numr mare de lstari secundari, la majoritatea genotipurilor. Necroza apical, care apare frecvent la speciile de Prunus cultivate in vitro, poate fi corelat cu un coninut sczut n apexul lstarilor, aceasta fiind drastic redus, cnd mediile de cultur au fost suplimentate cu BAP. 5.5.1. Elongarea lstarului principal Dezvoltarea lstarilor i procesul de elongare sunt dependente att de genotip, ct i de balana hormonal a mediului de cultur. Elongarea lstarilor este afectat semnificativ de concentraia BAP i de interaciunile BAP x genotip i Bap x mediul de cultur. La majoritatea genotipurilor studiate, lungimea lstarilor este corelat negativ cu concentraia BAP. (Blan, V., 2008) Procesul de organogenez foliar a fost stimulat semnificativ la care raportul auxin : citochinin, a fost n favoarea citochininei. Procesul de caulogenez secundar, la baza lstarilor a fost influenat semnificativ, att de balana hormonal a mediului de cultur, ct i de prezena DDW n mediul de cultur de iniiere i de mrimea explantului. Cel mai mare numr de lstari secundari/explant a fost nregistrat la lstarii de 1 mm, pe mediu MS + 2,0 mg/l BAP + 2,0 mg/l IBA + 0,1 mg/l GA3, provenii de pe mediu cu DDW, acesta dovedind c DDW are efect remanent. 5.6. Procesul de rizogenez Unele genotipuri de cais necesit un supliment hormonal mai ridicat, la care rata maxim de nrdcinare a fost obinut cu 4,0 mg/l IBA i numrul maxim de rdcini a fost indus de 6mg/l NAA.

5.7. Aclimatizarea n general, aclimatizarea plantulelor se realizeaz n 3-4 sptmni i este considerat ncheiat, n momentul n care apare prima frunz nou, dup trecerea ex vitro. (Blan, V., 2008) Pentru a evita infeciile la nivelul coletului sau al rdcinilor, cu diveri ageni patogeni, solul trebuie dezinfectat prin tratament cu antifungice cu spectru larg, slab 21

fitotoxice, cum ar fi TMTD. Rdcinile plantulelor pot fi tratate cu soluii de fungicide, cum este de exemplu 0,075% Benomyl sau cu preparate de micorizare, pentru facilitarea formrii de micorize simbionte, fapt care asigur o nutriie mai bun i o mai mare rezisten a plantulelor la stresul de aclimatizare i mbolnvire. Rata de supravieuire a plantulelor neoformate in vitro este de 70-80% n general. La plantulele dezvoltate din embrioni imaturi, protocolul de aclimatizare este mai scurt ca timp, datorit faptului c perioada de cultur in vitro este redus i plantulele au un statut fiziologic apropiat de cel normal.

6. Cultura de embrioni Cultura in vitro a embrionilor poate fi un instrument n ameliorare, cu aplicaii pentru salvarea embrionilor rezutai n urma hibridrilor interspecifice, care de cele mai multe ori sunt avortai datorit incompatibilitii genetice ntre endosperm i embrion sau pentru a preveni o germinare slab a seminelor. Studiile referitoare la cultura embrionilor imaturi in vitro la cais au fost iniiate de ctre Pieterse R. E. (1989), pe mediul MS suplimentat cu BAP i 2,4D. Mediile utilizate pentru iniierea culturii, nu au fost ntotdeauna i cele optime pentru dezvoltarea plantulelor. S-a observat c reducerea cantitii de macroelemente i fier i dublarea celei de microelemente stimuleaz germinarea embrionilor i dezvoltarea plantelor. (Blan, V., 2008)

7. Cultura de calus Calusul este o mas inform de celule, cu structur histologic uniform, fiind format din celule nedifereniate ce se divid activ. esutul calusal se formeaz i in vivo, dar actvitatea sa mitotic este limitat, fiind corelat cu repararea unor leziuni mecanice. Mecanismul inducerii calusului este procesul Fig. 11 Cultur de calus de dedifereniere celular, proces opus citodiferen ierii, care, conform teoriei lui Hozler i

Rubinstein (1975) asupra ciclurilor mitotice, ar reprezenta o denaturare a ciclurilor celulare cu decizie binar, caracteristice diferenierii i organogenezei, prin revenirea la o serie nedeterminat de cicluri mitotice nespecifice. 22

Semnalul dediferenierii, un factor care perturb ritmicitatea i progresivitatea ciclurilor mitotice specifice, este dat prin supradozarea unor substane regulatoare de cretere n mediul de cultur. n timpul dediferneierii, substanele de rezerv acumulate n esuturi se mobilizeaz, zonele meristematice se supraactiveaz i noi meristeme apar, genernd celule nedifereniate, parenchimatice, lipsite de direcionarea structural a esuturilor de origine. (Blan, V., 2008)

7.1. Compatibilitatea la altoire A fost studiat in vitro utiliznd esut calusal de cais i diferii portaltoi de Prunus, pentru a forma combinaii altoi/portaltoi, cu diferite grade de compatibilitate. La aceste specii incompatibilitatea se manifest prin ruperea pomilor n zona de altoire, acest fenomen putnd avea loc, la civa ani dup altoire. Posibilitatea de a utiliza o nou metod pentru depistarea timpurie a incompatibilitii la altoire a fost studiat de Pillar Errea (2001), prin fuzionarea calusurilor in vitro. Adeziunea dintre dou calusuri partenere, dezvoltarea celulelor la suprafaa de contact (aranjamentul celulelor, intensitatea colorrii pereilor celulari), prezena lipidelor i a compuilor fenolici sunt studiate n primele trei sptmni, dup altoire la combinaii compatibile i incompatibile. Diferenele sunt observate n cea de a doua i a treia sptmn a co-cultivrii calusurilor, pentru majoritatea caracterelor analizate. n ceea ce privete compuii fenolici au fost observate diferene nc din prima sptmn. Comportamnetul altoilor crescui in vitro a fost corelat cu aceleai combinaii crescute n cmp. (Blan, V., 2008)

8. Cultura de antere. Androgeneza Pentru iniierea culturii de antere, acestea se cultiv pe un mediu solid sau lichid, n funcie de specie. La cais, perioada optim pentru iniierea androgenezei este n faza de tetrad sau stadiul de microspor uninucleat. Din microspori se vor forma direct sau via calus embrioni somatici, ce se transfer pe medii proaspete, cu o balan hormonal care favorizeaz organogenez. Plantulele haploide obinute se aclimatizeaz, n urma tratamentului cu colchicin putndu-se obine plante dihaploide, homozigote. n 2004, Peixe i colab. au cultivat in vitro antere, recoltate de la cais, n scopul obinerii de plante haploide. Procentul cel mai mare de androgenez a fost obinut la iniierea culturii pe mediul Nitsch (Nitsch & Nitsch, 1969), suplimentat cu 1 mg/l 2,4D + + 1 mg/l zeatin + 0,5 mg/l IAA i 0,4% zaharoz. Culturile au fost meninute la ntuneric timp de 8 zile, la 28o C, dup care fotoperioada a fost de 16 ore i 23

temperatura de 22-24o C. Rspunsul la androgenez a fost corelat cu mrimea butonilor florali, stadiul fenologic i nivelul evolutiv al microsporilor. Calusurile albe-transparente sunt vizibile la suprafaa anterelor dup 30-40 de zile de la iniierea culturii. Calusurile transferate pe mediul MS modificat (1/2 macroelemente) suplimentate cu 1 mg/l IAA + 1 mg/l zeatin + 1 mg/l TDZ au format structuri nodulare cu elemente de xilem i celule cu citoplasma foarte dens. (Blan, V., 2008)

24

CONCLUZII Primele date cu privire la cais le gsim n nsemnrile fcute de Paul de Alep (1650-1660), care arat c "n grdina mnstirii Golgota a gsit zarzri i migdali acoperii cu flori proaspete" n ara noastr, meniuni despre cais apar n anul 1781, n lucrarea "Histoire de la Moldavie et de la Valachie" a lui M. Carra, unde se scrie c n Moldova i Muntenia se gsesc pepeni galbeni, pepeni verzi, prune, caise, piersici i alte fructe. n anul 1921, Nicola Krier, obine soiurile Dulci de Vian i Trzii de Bucureti Preocupri pentru cultura caisului au continuat totui s existe n cadrul catedrelor de pomicultur din Institutele Agronomice, Iai, Cluj, Bucureti, care au fost dezvoltate dup nfiinarea Institutului de Cercetri Agricole din Romnia (1944), a Institutului de Cercetri Horti-Viticole de la Bucureti (1957), a Institutului de Cercetare pentru Pomicultur de la Mrcineni Piteti (1967) i a Staiunilor de Cercetare pentru Pomicultur Bneasa-Bucureti, Constana, Oradea i Dolj (1977) Acestea sunt tot attea momente care reflect noi salturi n cunoaterea speciei cais sub multiple aspecte ale cerinelor fa de mediul nconjurtor i zonare, comportarea la factorii de stres (ger, iernare, boli, insecte, secet), verigi tehnologice, crearea de noi soiuri. Caisul reprezint o specie valoroas, cu multiple ntrebuinri, att n stare proaspt ct i procesat Se are n vedere obinerea de noi soiuri, mai rezistente fa de diferii ageni patogeni sau condiii climatice.

25

BIBLIOGRAFIE Blan, V.; Stanic, F.; Chira, L.; Hoza, D.; Tudor, V.; Caisul i caisele, Editura Ceres Bucureti, 2008, pag. 7-10, 36-67, 146-198, 198-227 Cociu, V.; Caisul, Editura Ceres Bucureti, 1993, pag. 13-21, 23-34, 219-248 Cociu, V.; Botu, I.; erboiu, L.; Progrese n ameliorarea plantelor horticole din Romnia, Volumul I Pomicultura, Editura Ceres Bucureti, 1999, pag. 96-113 Cociu, V.; Realizri n ameliorarea pomilor i arbutilor fructiferi din Romnia, Centrala pentru Legume i Fructe, Editura Ceres Bucureti, 1977, pag. 115-129 Cociu, V.; Blan, V.; Topor, E.; Tudor, V.; Fondul de germoplasm la speciile pomicole, de arbuti fructiferi i cpun din coleciile din Romnia, Institutul de Cercetare Dezvoltare pentru Pomicultur Piteti Mrcineni, Piteti 2006, pag. 151-179 Hoza, D.; Biotehnologie Pomicol, USAMV Bucureti, Facultatea de Horticultur, Catedra de Pomicultur, Pentru uzul studenilor, 1997, pag. 69-76 Ghena, N.; Branite, N.; Cultura special a pomilor, Editura Matrix Rom Bucureti, 2003, pag. 241-256

IMAGINI :

Fig. 1 : http://www.robsplants.com/images/portrait/Apricots050704.jpg Fig. 2 : http://www.infojardin.com/galeria/data/522/Prunus_armeniaca_IJ.jpg Fig. 3 : http://teeveebee.files.wordpress.com/2008/06/img_5452.jpg Fig. 4 : http://www.gourmetfoodstore.com/images/product/33046_large.jpg Fig. 5 : http://www.onlinesport.ro/forum/showthread.php?t=181757&page=252 Fig. 6 : http://www.scritube.com/biologie/botanica/BOLILE-PIERSICULUI-SICAISULUI1135142419.php Fig. 7 : http://www.statiuneabaneasa.ro/soiuri/index.php?id_soi=38 Fig. 8 : http://botanica.uaic.ro/laborator%20in%20vitro_detalii.htm Fig. 9 : http://biotehnologii.usamv.ro/studenti/laboratoarele-facultatii-debiotehnologii_/laborator-culturi-celulare Fig. 10 : http://sites.google.com/site/vitroscdpcluj/about-our-company Fig. 11 : http://www.biotech-vegetala.ro/rezultate_produse_en.html

26