MAD-003946M MDR Direct Flow Chip Kit en 2022-06-23-Traducere Autorizata

Kitul MDR Direct Flow
Chip
Detectarea agenților patogeni

multirezistenți la medicamente prin
PCR multiplex și hibridizare inversă.
pentru platformele manuale și automate hybriSpot
Compatibil cu versiunile hybriSoft HSHS 2.02.00.R09.01 și versiunile ulterioare.

Pentru compatibilitatea cu alte versiuni, vă rugăm să contactați producătorul/furnizorul.
Ref. MAD-003946M-HS12 24 determinări

Ref. MAD-003946M-HS 24 determinări
Numai pentru utilizare în diagnosticare in vitro

Directiva 98/79/CE și ISO 18113-2
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23
Calle Luís Fuentes Bejarano 60 Ed. Nudo Norte Local 3 41020 Sevilla (Spania)
Tel: +34 954 933 200. vitro@vitro.bio ; www.vitro.bio
1/36
CUPRINS
1 UTILIZARE INTENȚIONATĂ...................................................................................................................3
2 PRINCIPIUL METODEI ..........................................................................................................................5
3 COMPONENTE ....................................................................................................................................5
4 MATERIALE SUPLIMENTARE NECESARE CARE NU SUNT FURNIZATE ȘI MATERIALE OPȚIONALE ........7
4.1 Reactivi și materiale ......................................................................................................................... 7
4.2 Echipament ..................................................................................................................................... 7
4.3 Material suplimentar opțional ......................................................................................................... 8
5 CONDIȚII DE DEPOZITARE ȘI STABILITATE ...........................................................................................8
6 AVERTISMENTE ȘI PRECAUȚII ..............................................................................................................8
7 PREGĂTIREA PROBEI .......................................................................................................................... 10
7.1 Exudate rectale ............................................................................................................................. 10
7.2 Exudate/aspirate nazofaringiene ................................................................................................... 10
7.3 Exsudate rectale și exsudate nazale ca probă unică ....................................................................... 11
7.4 Hemoculturi .................................................................................................................................. 11
7.5 Colonii bacteriene ......................................................................................................................... 12
7.6 Protocoale pentru prelucrarea probelor cu mediu de transport și diluție (TDM)............................ 12
8 PROCEDURA DE ANALIZĂ.................................................................................................................. 13
8.1 Reacție de amplificare multiplexă a ADN-ului ................................................................................ 13
8.2 Hibridizare inversă în flux .............................................................................................................. 14
9 PROCEDURA DE ANALIZĂ PENTRU PLATFORMA HS12 PCR AUTO ..................................................... 16
10 PROCEDURA DE CONTROL AL CALITĂȚII ........................................................................................... 16
11 INTERPRETAREA REZULTATELOR ...................................................................................................... 17
12 CARACTERISTICI DE PERFORMANȚĂ ................................................................................................. 22
12.1 Performanță analitică în hybriSpot 12 (HS12) ................................................................................ 22
12.2 Performanță analitică în hybriSpot 24 (HS24) ................................................................................ 29
12.3 Performanță analitică în hybriSpot 12 PCR AUTO (HS12a) ............................................................. 30
12.4 Clinic ............................................................................................................................................. 32
13 LIMITĂRI ........................................................................................................................................... 33
14 DEPANARE ........................................................................................................................................ 33
15 BIBLIOGRAFIE ................................................................................................................................... 34
16 SIMBOLURI DE ETICHETE ȘI CUTII...................................................................................................... 35
17 GLOSAR ............................................................................................................................................ 35
18 JURNAL DE MODIFICĂRI .................................................................................................................... 36
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

2/36
1 UTILIZARE INTENȚIONATĂ
"Multidrug Resistance (MDR) Direct Flow Chip" este un kit de diagnostic in vitro care permite detectarea
calitativă rapidă a bacteriilor multidrog rezistente. Acesta se bazează pe PCR multiplex și include detectarea
a 5 specii bacteriene (S. aureus, K. pneumoniae, P. aeruginosa, E. coli și A. baumannii) și un total de 55 de
markeri de rezistență, inclusiv principalele mecanisme de tip "enzimatic" descrise pentru nouă clase diferite
de antibiotice: β-lactame, glicopeptide, oxazolidione, macrolide, aminoglicozide, sulfonamide,
fluorochinolone, polimixine, cloramfenicol, precum și mutațiile punctiforme cel mai frecvent detectate în
tulpinile de E. coli și P. aeruginosa rezistente la fluorochinolone. Printre acestea, kitul detectează
cincisprezece gene care oferă rezistență la carbapenem (alela kpc): 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14,
15, 16, 17, 18, 19, 20,
21, 22 și 23, alela sme: 1, 2, 3, 4 și 5, alela nmc/imi: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 și 9, alela ges: 1, 2, 3, 4, 5, 6,
7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 și 26, alela vim: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,
10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38,
39, 40, 41, 41, 42, 43, 44, 45 și 46, alela gim: 1 și 2, alela spm, ndm: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,
14, 15 și 16, sim, imp3, 15, 19_alele asemănătoare: 1, 2, 3, 5, 6, 8, 8, 9, 10, 11, 15, 19, 20, 21, 24, 25, 28,
29, 30, 40, 41,
42 și 47, alela oxa23_like: 23, 27, 49, 73, 133, 146, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171 și 225, oxa24_like
alela: 24, 25, 26, 40, 72, 139 și 160, alela oxa48_like: 48, 162, 163 și 181, alela oxa51_like: 51, 60, 65,
66, 67, 68, 69, 70, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 82, 83, 84, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 98, 99, 106, 107, 108, 109,
110, 111, 112, 113, 115, 116, 117, 128, 130, 131, 132, 138, 144, 148, 149, 150, 172, 173, 174, 175, 176, 177,
178, 179, 180, 195, 196, 197, 194, 200, 201, 202, 202, 203, 206, 208 și 223, alela oxa58_like: 58, 96, 97 și
164).
Testele se efectuează direct pe exsudate rectale, exsudate/aspirate nazofaringiene și/sau hemoculturi la

pacienții infectați sau la pacienții cu risc de colonizare, ca o măsură care să contribuie la controlul și
prevenirea acestui tip de infecții. Metoda se bazează pe amplificarea țintelor de ADN prin reacția PCR
multiplex, iar ulterior pe hibridizarea inversă dot-blot pe o membrană care conține sonde specifice.
Determinant genetic Rezistența asociată la antibiotice

aac (6´)-Ib
armA
rmtB Aminoglicozide
rmtC
rmtF
blaCMY
Antibiotice Β-lactame
blaDHA
blaCTX
blaSHV-SK
Cefalosporine
blaSHV-S
blaSHV
ges Cefalosporine /Carbapeneme
gim
imp_like
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

3/36
kpc Carbapeneme
ndm
nmc/imi
oxa23_like
oxa24_like
oxa48_like
oxa51_like
oxa58_like
sim Antibiotice Β-lactame
sme
spm Carbapeneme
vim
catB3 Cloramfenicol
mcr1
Colistin
mcr2
gyrE-S83L
gyrE-S83L-D87G
gyrE-S83L-D87G, parES80I
gyrE-S83L-D87N
gyrE-S83W-D87G Chinolone
gyrP-T83I
gyrP-T83I-D87G
gyrP-T83I-D87N
parE-S80I
cfr Macrolide/lincosamide/streptogramină
ermA
ermB
ermC Macrolide
mefA/E
msrA
mecA
Antibiotice Β-lactame
mecC
oqxA
Fenicol/chinolonă
oqxB
qnrA
qnrB Chinolone
qnrS
sul1
sul2 Sulfonamide
sul3
vanA
Vancomicină
vanB
Țintă Organism
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

4/36
nuc Staphylococcus aureus
ecfX Pseudomonas aeruginosa
ompA Acinetobacter baumannii
gyrA Escherichia coli
khe Klebsiella pneumoniae
Tabelul 1: Genele țintă utilizate pentru amplificarea markerilor de rezistență la antibiotice și bacteriene în kitul MDR Direct Flow Chip.
Starea microbiologică: Produs nesteril.
2 PRINCIPIUL METODEI
Kitul MDR Direct Flow Chip se bazează pe o metodologie care constă în amplificarea simultană a S. aureus,
K. pneumoniae, P. aeruginosa, E. coli și A. baumannii și a 56 de markeri de rezistență prin PCR multiplex
direct din extractele celulare, coloniile bacteriene și/sau hemocultura, urmată de hibridizarea membranară
cu sonde ADN specifice utilizând tehnologia DNA-Flow pentru platformele hybriSpot, atât automatizate cât
și manuale. Ampliconii biotinilați generați în urma PCR sunt hibridizați în membrane care conțin o matrice
de sonde specifice pentru fiecare țintă, precum și sonde de control al amplificării și hibridizării. Tehnologia
DNA-Flow permite o legare foarte rapidă a produsului PCR și a sondei sale specifice într-un mediu poros
tridimensional, în comparație cu hibridizarea pe o suprafață convențională. Odată ce a avut loc legarea între
ampliconii specifici și sondele lor corespunzătoare, semnalul este vizualizat printr-o reacție colorimetrică
imunoenzimatică cu Streptavidină-Fosfatază și un cromogen (NBT-BCIP) care generează precipitate
insolubile în membrană în acele poziții în care a avut loc hibridizarea. Rezultatele sunt analizate automat cu
ajutorul software-ului hybriSoft™.
3 COMPONENTE
Kitul MDR Direct Flow Chip este comercializat în două formate principale, în funcție de tipul de platformă
de hibridizare care urmează să fie utilizată pentru analiza probelor clinice. Ambele formate furnizează toți
reactivii necesari pentru amplificarea prin PCR multiplex și hibridizarea ulterioară a 24 de probe clinice.
Fiecare format de kit conține următoarele componente și referințe:
KIT/COMPONENTE FORMAT REFERINȚE

Kit MDR Direct Flow Chip (manual) 24 de teste MAD-003946M-HS12
1. Kitul MDR Flow Chip (reactivi PCR) 24 de teste MAD-003946M-P
MDR PCR Mix 1 3 benzi × 8 tuburi (verde) MAD-003946M-MIX1
MDR PCR Mix 2 3 benzi × 8 tuburi
MAD-003946M-MIX2
(galben)
2. Cipuri MDR 24 de teste MAD-003946M-CH-HS
3. Reactivi de hibridizare Flow Chip tip I (manual) 24 de teste MAD-003925M-HS12
Soluție de hibridizare (reactiv A) 40ml MAD-00393030MA-HS12-
24
Soluție de blocare (reactiv B) 10ml MAD-003930MB-HS12-24
Streptavidină-fosfatază alcalină (reactiv C) 10ml MAD-003930MC-HS12-24
Soluție tampon de spălare I (reactiv D) 35ml MAD-003930MD-HS12-24
Reactiv E 10ml MAD-003930ME-HS12-24
Soluție tampon de spălare II (reactiv F) 18ml MAD-003930MF-HS12-24
Tabelul 2: Reactivi furnizați în kitul MDR Direct Flow Chip (manual).
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23
5/36
KIT/COMPONENTE FORMAT REFERINȚE
Kit MDR Direct Flow Chip (Auto) 24 de teste MAD-003946M-HS12
1. Kitul MDR Direct Flow Chip (reactivi PCR) 24 de teste MAD-003946M-P
MDR PCR Mix 1 3 benzi × MAD-003946M-MIX1
MDR PCR Mix 2 3 benzi × 8 tuburi MAD-003946M-MIX2
2. Cipuri MDR 24 de teste MAD-003946M-CH-HS
3. Reactivi de hibridizare Flow Chip tip I (Auto) 24 de teste MAD-003925M-HS
Soluție de hibridizare (reactiv A) 60ml MAD-00393030MA-HS24-24
Soluție de blocare (reactiv B) 10ml MAD-003930MB-HS24-24
Streptavidină-fosfatază alcalină (reactiv C) 10ml MAD-003930MC-HS24-24
Soluție tampon de spălare I (reactiv D) 35ml MAD-003930MD-HS24-24
Reactiv E 10ml MAD-003930ME-HS24
Tabelul 3: Reactivi furnizați în kitul MDR Direct Flow Chip (Auto: hybriSpot 24 și hybriSpot 12 PCR AUTO).
-Ambele prezentări includ apă bidistilată fără DNază/RNază pentru manipularea probelor
clinice: APĂ DISTILATĂ FĂRĂ RNAZĂ/DNAZĂ; Ref: MAD-DDW; Vol 60mL.
 Kitul MDR Direct Flow Chip (reactivi PCR): este comercializat în format de 8 tuburi de 0,2 ml care
conțin reactivi liofilizați corespunzători celor două amestecuri PCR - Mix 1 și Mix 2.
- Tuburile corespunzătoare amestecului 1 (verde) sunt aranjate într-un format de sfere liofilizate roz
cu următoarele componente: Soluție tampon PCR, polimerază, ADN-glicozilază Uracil, dNTP-uri
(U/T), apă fără DNază, ADN dintr-un control de amplificare exogen și primere biotinilate. Primerele
incluse sunt specifice pentru amplificarea de: genele de rezistență la meticilină (mecA, mecC),
genele de rezistență la vancomicină (vanA, vanB), genele de rezistență la carbapenemază de clasă A
(kpc, sme, nmc/imi, ges), genele de rezistență la carbapenemază de clasă B (vim, gim, spm, ndm,
sim, imp_like), genele de rezistență la carbapenemază de clasă D (oxa23_like, oxa24_like,
oxa48_like, oxa51_like, oxa58_like), gena SHV ß-lactamazei (blaSHV), genele SHV ß-lactamazei cu
spectru extins (blaSHV-S, blaSHV-SK), gena CTX-M ß-lactamazei cu spectru extins (blaCTX),
Staphylococcus aureus (SA), Klebsiella pneumoniae (kpneum), Pseudomonas aeruginosa (Paer),
Acinetobacter baumannii (Abau). În plus, acesta include primeri pentru amplificarea unui fragment
de ADN genomic uman (BG) ca martor endogen și primeri pentru amplificarea ADN sintetic (CI-1)
adăugat ca martor de amplificare exogenă.
- Tuburile corespunzătoare amestecului 2 (galben) sunt aranjate într-un format de sfere liofilizate
albastre cu următoarele componente: Soluție tampon PCR, polimerază, ADN-glicozilază Uracil,
dNTP-uri (U/T), apă fără DNază, ADN dintr-un control de amplificare exogen și primere biotinilate.
Primerele incluse sunt cele specifice pentru amplificarea de: Genele de rezistență la colistină (mcr1,
mcr2), genele de rezistență la sulfonamide (sul1, sul2, sul3), genele β-lactamază AMPC (blaDHA,
blaCMY), genele de rezistență la macrolide (msrA, mef, ermA, ermB, ermC), genele de rezistență la
aminoglicozide (aac, armA, rmtB, rmtC, rmtF), gena Escherichia coli gyrase A WT (gyrA) pentru
detectarea Escherichia coli și a mutațiilor asociate cu rezistența la fluorochinolone (gyrE-S83L, gyrE-
S83L-D87G, gyrE-S83L-D87N, gyrE- S83W-D87G), gena topoizomerazei IV (parC) din Escherichia coli
pentru detectarea mutației parE-S80I asociată rezistenței la chinolone, gena gintei A a girasei A din
Pseudomonas aeruginosa (gyrA-Paer) pentru detectarea mutațiilor asociate
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23
6/36
rezistenței la fluorochinolone (gyrP-T83I, gyrP-T83I-D87N, gyrP-T83I-D87G), genele de rezistență la
chinolone sau fluorochinolone (qnrA, qnrB, qnrS), genele de rezistență la olaquindox (oqxA, oqxB),
gena de rezistență la linezolid (cfr), gena de rezistență la cloramfenicol (catB3). În plus, sunt incluși
primeri pentru amplificarea unui fragment de ADN genomic uman (RNazăP) ca martor endogen și
primeri pentru amplificarea ADN sintetic (CI-2) adăugat ca martor de amplificare exogenă.
 Cipurile MDR Chips: Kitul include un total de 24 de cipuri sau membrane (ref: MAD-003946M-CH-HS)
care conțin o matrice de sonde ADN specifice pentru fiecare dintre țintele incluse în analiză, precum și
altele corespunzătoare controalelor de amplificare încorporate în acest kit. Poziția tuturor acestora pe
cip poate fi menționată în secțiunea 10 din prezentul manual (INTERPRETAREA REZULTATELOR).
 Reactivi de hibridizare Flow Chip: Conține toți reactivii necesari pentru procesul de hibridizare inversă
prin Flow-Through.
4 MATERIALE SUPLIMENTARE NECESARE CARE NU SUNT FURNIZATE ȘI MATERIALE OPȚIONALE
4.1 Reactivi și materiale

A. Reactivi comuni pentru platformele manuale și automate:
 Mănuși de unică folosință.
 Vârfuri de pipete cu filtru fără DNază/RNază.
 Pentru manipularea probelor clinice: Apă bidistilată fără DNază/RNază.
B. Reactivi specifici (Auto, ref: MAD-003946M-HS24):

 Reactiv de spălare (ref: MAD-003930WSH).
4.2 Echipament
A. Echipamente comune pentru platformele manuale și automate:
 Microcentrifugă.
 Micropipete automate: P1000, P200, P20 și P2.
 Software HybriSoft.
B. Echipament specific:
 Cu kitul de cipuri MDR Direct Flow (manual) (ref: MAD-003936M-HS12)
o Termociclor.
o Bloc termic pentru încălzirea tuburilor PCR (poate fi înlocuit cu un termociclor).
o Placă de răcire (4 °C).
o Echipament manual pentru hibridizare hibridizare VIT-HS12 (VIT-HS12).
o Baie termostatică / încălzitor.
 Cu kitul MDR Direct Flow Chip (Auto: hybriSpot 24 și hybriSpot 12 PCR AUTO) (ref: MAD-
003936M-HS24)
o Echipament automat pentru hibridizare hybriSpot 24 (VIT-HS24) sau
hybriSpot 12 PCR AUTO (VIT-HS12a).
o Termociclor (nu este necesar pentru hybriSpot 12 PCR AUTO).
o Bloc termic pentru încălzirea tuburilor PCR (nu este necesar pentru hybriSpot 12
PCR AUTO).
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23
7/36
o Placă de răcire (4 °C).
4.3 Material suplimentar opțional

 Pentru a manipula probele clinice, se poate utiliza produsul Transport and Dilution Medium
(TDM) (Ref: MAD-003930TDM). Protocolul de lucru, în funcție de tipul de probă de plecare, este
reflectat în secțiunea 7. Pregătirea probei.
5 CONDIȚII DE DEPOZITARE ȘI STABILITATE

Kitul MDR Direct Flow Chip este format din două componente care sunt livrate în cutii separate:
 Kitul MDR Direct Flow Chip (reactivi PCR): Se expediază la 2-8 °C. La primire, trebuie păstrate la 2-
8 °C. Acestea vor fi stabile până la data de expirare specificată. Reactivii PCR trebuie depozitați în
zone fără contaminare cu ADN sau produse PCR. Odată deschis ambalajul care conține banda de
tuburi, depozitați tuburile rămase până la maximum o săptămână la 2-8 °C în ambalajul original.
 MDR Chips: Se expediază și se păstrează la 2-8 °C*. A nu se congela. Cipurile de hibridizare sunt
stabile până la data de expirare indicată.
 Reactivi de hibridizare: Se expediază și se păstrează la 2-8 °C*. A nu se congela. Reactivii de
hibridizare sunt stabili până la data de expirare indicată. Considerații anterioare privind reactivii de
hibridizare:
 Reactivul de hibridizare A trebuie să fie preîncălzit într-o baie termostatică sau într-un încălzitor
(numai înainte de a fi utilizat în echipament manual) la 46 °C înainte de utilizare.
 Restul reactivilor de hibridizare trebuie să fie utilizați la temperatura camerei (15-25 °C).
*Nota: În interiorul fiecărei cutii, există o bandă care indică ora și temperatura pentru a controla condițiile în timpul
transportului. Se recomandă să contactați producătorul înainte de a utiliza reactivii incluși în cutie dacă lanțul
frigorific a fost întrerupt.
6 AVERTISMENTE ȘI PRECAUȚII
 Citiți instrucțiunile de utilizare înainte de a utiliza acest produs.

 Precauțiile de siguranță și de eliminare sunt descrise în fișa cu date de siguranță a acestui produs. Acest
produs este destinat doar pentru scopuri profesionale de laborator și nu este destinat utilizării
farmacologice, casnice sau de orice alt tip. Versiunea actuală a Fișei cu date de securitate a acestui produs
poate fi descărcată de pe pagina web www.vitro.bio sau poate fi solicitată la regulatory@vitro.bio.
 Kitul MDR Direct Flow Chip utilizează ca material de plecare acizi nucleici extrași și purificați în prealabil
sau probe clinice care necesită o manipulare prealabilă pentru analiza lor. Sunt furnizate protocoale de
procesare pentru diferitele tipuri de probe clinice care au fost validate cu acest kit (a se vedea secțiunea
7.1).
 Considerații generale pentru a evita contaminarea cu produsul PCR:
Cea mai mare sursă de contaminare este, în mod normal, același produs PCR amplificat. Prin urmare, se
recomandă să se efectueze manipularea produselor amplificate într-o zonă diferită de cea în care se
efectuează reacția PCR. Se recomandă să se lucreze în zone diferite pre și post-PCR în care se
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

8/36
efectuează manipularea ADN-ului de test și pregătirea tuburilor PCR (pre-PCR) și manipularea și
hibridizarea produselor amplificate (post-PCR). Aceste zone trebuie să fie separate fizic și trebuie să se
utilizeze materiale de laborator diferite (halate de laborator, pipete, vârfuri etc.) pentru a evita
contaminarea probelor cu ADN-ul amplificat, ceea ce ar putea duce la diagnostice fals pozitive. Fluxul de
lucru trebuie să se desfășoare întotdeauna într-o singură direcție, de la zona pre-PCR la zona post-PCR și
niciodată în sens invers. Trebuie evitat fluxul de materiale și de personal din zona post-PCR în zona pre-
PCR. În plus, pentru a evita contaminarea cu produsele PCR anterioare, în kit este inclusă enzima Uracil-
ADN Glicozilază, care degradează produsele PCR care conțin dUTP. Se recomandă să se includă controale
negative de amplificare care să conțină toți reactivii manipulați în kit, de la extracție la amplificare, cu
excepția probei de ADN, pentru a detecta și controla orice posibilă contaminare a reactivilor cu probele
de test sau cu produsele amplificate. Hibridizarea în membrană a acestui control trebuie să fie negativă,
marcând doar controlul de hibridizare și controlul exogen de amplificare. În acest fel, se verifică dacă nu
există contaminare cu ADN de pacienți și/sau ADN amplificat în zona pre-PCR.
 Avertisment: utilizarea oxidului de etilenă pentru prepararea probelor clinice și/sau a amestecului PCR
ar putea interfera în dezvoltarea corectă a reacției PCR. Se recomandă evitarea utilizării acestei
componente în aceste scopuri.
 Eliminarea deșeurilor: Manipularea deșeurilor generate de utilizarea produselor comercializate de Vitro
S.A. trebuie să fie efectuată în conformitate cu legislația aplicabilă în țara în care sunt utilizate aceste
produse. Ca referință, tabelul următor indică clasificarea deșeurilor generate de acest kit în conformitate
cu legislația europeană, mai exact în conformitate cu Decizia Comisiei Europene din 18 decembrie 2014
de modificare a Deciziei 2000/532/CE privind lista de deșeuri în conformitate cu Directiva 2008/98/CE a
Parlamentului European și a Consiliului:
DEȘEURI POTENȚIALE GENERATE COD

TIPUL DE DEȘEURI ÎN CONFORMITATE CU ELW
DUPĂ UTILIZAREA ACESTUI ELW*
PRODUS
1. Deșeuri/deșeuri generate de "Deșeuri lichide apoase cu conținut de substanțe
reactivii de hibridizare periculoase" după adăugarea a 10% din volumul total al unui
2. Eliminarea deșeurilor lichide agent dezinfectant. În cazul în care dezinfecția nu este
161001
("Deșeuri" în platformele HS12 și HS24) efectuată, aceste deșeuri trebuie considerate ca fiind
"deșeuri a căror depozitare și eliminare este supusă unor
cerințe speciale pentru a prevenirea infecțiilor"
3. Cipuri utilizate
4. Materiale perisabile (tuburi,
vârfuri, folie de aluminiu etc.) "Deșeurile a căror colectare și eliminare este supusă unor
180103
5. Orice element care a fost în cerințe speciale pentru prevenirea infecțiilor"
contact cu ADN
6. Recipient pentru reactivii utilizați
clasificați ca fiind periculoși (conform "Containerele care conțin deșeuri sau sunt contaminate de
150110
fișei cu date de securitate) substanțe periculoase"
Tabelul 4: Clasificarea deșeurilor generate de acest kit în conformitate cu legislația europeană. *ELW: Legislația europeană
privind deșeurile.
Notă: Această clasificare este inclusă ca ghid general de acțiune, îndeplinirea tuturor reglementărilor locale, regionale
și naționale privind eliminarea acestui tip de materiale fiind sub responsabilitatea finală a utilizatorului.
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

9/36
7 PREGĂTIREA PROBEI
7.1 Exudate rectale

Kitul MDR Direct Flow Chip a fost validat pentru utilizarea sa în PCR directă din suspensii celulare de
exsudate rectale, fără a fi necesară extragerea ADN-ului. Protocolul recomandat pentru procesarea
tampoanelor este următorul:
1. Se introduce tamponul în 0,5 ml de apă bidistilată fără DNază/RNază.
2. Agitați tamponul în tub, astfel încât celulele să se răspândească în lichid.
3. Se diluează suspensia rezultată 1:50 în apă bidistilată fără DNază/RNază (cu această diluție se
reduce concentrația de inhibitori potențiali în acest tip de probe): 10 µl de probă + 490 µl de
apă bidistilată fără DNază/RNază, se agită în vortex.
4. Se adaugă 30 µl din această diluție, omogenizată anterior, în cele două tuburi PCR cu Master
Mix liofilizat (Mix 1 și Mix 2).
În cazul în care se prelucrează tampoane cu mediu de transport, se recomandă să se agite tamponul manual
sau cu ajutorul unui vortex în mediul de transport timp de câteva secunde și să se procedeze la fel ca în cazul
tampoanelor uscate de la punctul 7.1.3.
NOTĂ: În cazul în care rămân inhibitori după diluția 1:50, se recomandă să se dilueze 1:2 din diluția 1:50 sau să se
purifice ADN-ul din suspensia inițială (0,5 ml).
Kitul poate fi utilizat, de asemenea, din ADN purificat din exsudate rectale. Acesta a fost validat cu
următoarele sisteme de extracție:
 NucliSENS® easyMag® (bioMérieux S.A.)

 MagNa Pure (Roche)
 Chelex® (Bio-Rad)
NOTĂ: Sistemul nu a fost validat cu alte sisteme de extracție a ADN-ului. Prin urmare, dacă se utilizează orice alt sistem
de purificare, acesta trebuie verificat în prealabil.
7.2 Exudate/aspirate nazofaringiene

Kitul MDR Direct Flow Chip a fost validat pentru utilizarea sa în PCR directă din suspensii celulare de
exsudate/aspirate nazofaringiene fără a fi necesară extragerea ADN-ului. Protocolul recomandat pentru
procesarea tampoanelor este următorul:
1. Se introduce tamponul în 0,5 ml de apă bidistilată fără DNază/RNază.
2. Agitați tamponul în tub, astfel încât celulele să se răspândească în lichid.
3. Se diluează suspensia rezultată 1:5 în apă bidistilată fără DNază/RNază (cu această diluție, se
reduce concentrația de inhibitori potențiali în acest tip de probe): 100 µl de probă + 400 µl de
apă dublu distilată fără DNază/RNază, se agită în vortex.
4. Se adaugă 30 µl din această diluție, omogenizată în prealabil în vortex, în cele două tuburi PCR
cu Master Mix liofilizat (Mix 1 și Mix 2).
În cazul în care se prelucrează tampoane cu mediu de transport, se recomandă să se agite tamponul manual
sau cu ajutorul unui vortex în mediul de transport timp de câteva secunde și să se procedeze la fel ca în cazul
tamponului uscat de la punctul 7.2.3.
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23
10/36
7.3 Exsudate rectale și exsudate nazale ca probă unică
Kitul MDR Direct Flow Chip a fost validat pentru utilizarea sa în PCR directă dintr-o extracție dublă de probe
de exudat rectal și exudat nazal de la același pacient, fără a fi necesară extragerea ADN-ului. Protocolul
aplicat pentru procesarea ambelor tampoane în paralel și analiza ulterioară ca probă unică a fost următorul:
1. Se pune fiecare tampon separat în 0,5 ml de apă bidistilată fără DNază/RNază.
2. Agitați fiecare tampon în tub, astfel încât celulele să se răspândească în lichid.
3. Adăugați 25 µl din fiecare suspensie obținută pentru fiecare tampon într-un singur tub
Eppendorf cu 450µl de apă bidistilată fără DNază/RNază, astfel încât fiecare să fie diluată 1:20.
Se agită în vortex.
4. Se adaugă 30 µl din această diluție, omogenizată în prealabil, în tuburile PCR cu Master Mix
liofilizat (Mix 1 și Mix 2).
În cazul în care se prelucrează tampoane cu mediu de transport, se recomandă să se agite tampoanele

manual sau cu ajutorul unui vortex în mediul de transport timp de câteva secunde și să se procedeze la fel
ca în cazul tampoanelor uscate de la punctul 7.3.3.
NOTĂ: Dacă rămân unii inhibitori după diluarea de 1:20, se recomandă diluarea de 1:50 a exsudatului rectal
și de 1:20 a exsudatului nazal. Pentru a face acest lucru, adăugați 10 µl din suspensia obținută din exsudatul
rectal și 25 µl din suspensia obținută din exsudatul nazal într-un singur tub Eppendorf cu 465µl de apă
bidistilată fără DNază/RNază.
7.4 Hemoculturi
Kitul MDR Direct Flow Chip a fost validat pentru utilizarea sa în PCR directă din hemoculturi, fără a fi necesară
extragerea ADN-ului. Protocolul recomandat pentru procesarea hemoculturilor este următorul:
1. Se agită bine recipientul de hemocultură până când se obține un amestec omogenizat, se
prelevează un volum de 100 µl și se introduce într-un tub Eppendorf.
2. Se diluează hemocultura 1:100 în apă bidistilată fără DNază/RNază, într-un volum final de 1
ml:
- 1:100: 10 µl de hemocultură + 990 µl de apă bidistilată fără DNază/RNază, se agită în
vortex.
3. Se adaugă 30 µl din această diluție, omogenizată anterior, în tuburile PCR cu Master Mix
În cazul în care sunt implicate probe pediatrice, diluția care trebuie aplicată la hemocultură este de 1:1000.
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

11/36
4. Se agită bine recipientul de hemocultură până când se obține un amestec omogenizat, se
prelevează un volum de 100 µl și se introduce într-un tub Eppendorf.
5. Se diluează hemocultura 1:100 în apă bidistilată fără DNază/RNază, într-un volum final de 1 ml:
- 1:100: 10 µl de hemocultură + 990 µl de apă bidistilată fără DNază/RNază, se agită în
vortex.
6. Se diluează la 1:10 hemocultura diluată anterior la 1:100 în apă bidistilată fără DNază/RNază,
într-un volum final de 1 ml:
- 1:10: 100 µl de hemocultură 1:100 + 900 µl de apă bidistilată fără DNază/RNază, se agită
în vortex.
7. Se adaugă 30 µl din această diluție, omogenizată în prealabil, în tuburile PCR cu Master Mix
7.5 Colonii bacteriene

Kitul MDR Direct Flow Chip a fost validat pentru a fi utilizat direct din colonii bacteriene. Protocolul recomandat
este următorul:
1. Se prelevează o cantitate mică de colonie cu un mâner steril.
2. Se resuspendă fiecare probă în 500 µl de apă bidistilată fără DNază/RNază.
3. Se agită bine în vortex până când se obține o suspensie celulară omogenă.
4. Se adaugă 30 µl din această diluție, omogenizată anterior, în tuburile PCR cu Master Mix
Exsudatele rectale, exsudatele/aspiratele nazofaringiene și hemoculturile trebuie tratate ca agenți infecțioși

potențiali. Orientările pentru manipularea acestui tip de probe pot fi consultate în publicațiile Centrului
pentru Controlul și Prevenirea Bolilor (CDC) din Statele Unite. Toate materialele periculoase sau contaminate
biologic trebuie eliminate în condiții de siguranță și în mod corespunzător, în conformitate cu liniile directoare
ale instituției dumneavoastră.
7.6 Protocoale pentru prelucrarea probelor cu mediu de transport și diluție (TDM)

Alternativ, se poate utiliza opțiunea Transport & Dilution Medium TDM (Ref: MAD-003930TDM) pentru
procesarea diferitelor tipuri de probe clinice descrise în secțiunile anterioare. Mai jos este prezentat un tabel
care descrie etapele de procesare a probelor cu acest reactiv în funcție de tipul de probă de plecare (tabelul
5).
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

12/36
FORMAT PROCESAREA PROBELOR DE PROTOCOL CU TRANSPORTUL ȘI DILUȚIA
PROBĂ DE PORNIRE
REACTIVILOR
MEDIUM (TDM) (Ref: MAD-003930TDM)
1. Se introduce tamponul într-unul dintre flacoanele cu 900 µl de mediu de
diluție și transport (TDM) prealiquoted.
Tampon fără mediu de 2. Se agită tamponul în tub, astfel încât celulele să se răspândească în lichid.
transport 3. Se prelevează un volum de 35 µl din această probă și se adaugă la un nou flacon
de TDM.
Exudate rectale 4. Se agită diluția rezultată în vortex și se utilizează 30 µl din această probă ca
șablon pentru a realiza amplificarea.
1. Se agită peletul manual sau cu un vortex în mediul de transport timp de
câteva secunde.
Tampon cu mediu de
2. Se adaugă 18 µl de probă în una dintre fiolele cu 900 µl de TDM.
transport
3. Se utilizează 30 µl din această diluție, omogenizată în prealabil, pentru PCR.
1. Se introduce tamponul în una dintre fiolele cu 900 µl de mediu TDM.

2. Se agită pelete în interiorul tubului astfel încât celulele să se răspândească în
Exudate Tampon fără mediu de
lichid.
nazofaringiene transport
3. Se prelevează un volum de 500 µl din această probă și se adaugă la un nou
flacon de TDM.
4. Se agită diluția rezultată în vortex și se utilizează 30 µl din această
probă ca șablon pentru a realiza amplificarea.
1. Se introduce tamponul rectal într-unul dintre flacoanele cu 900 µl de TDM și
tamponul nazofaringian într-un alt flacon de TDM.
Exsudate rectale și 2. Se agită fiecare tampon în tuburi, astfel încât celulele să se răspândească în
exsudate Tampoane fără mediu de lichid.
nazofaringiene ca transport 3. Se prelevează un volum de 100 µl din fiecare dintre suspensiile celulare
probă unică rezultate și se adaugă într-un nou flacon de TDM.
4. Se agită diluția rezultată în vortex și se utilizează 30 µl din această
1. Se agită bine flaconul de hemocultură până când se obține un amestec omogen.
2. Se prelevează un volum de 10 µl de hemocultură și se adaugă într-unul dintre
Mediu aerob și mediu flacoanele cu 900 µl de TDM.
Hemoculturi 3. Se agită diluția rezultată în vortex și se utilizează 30 µl din această
anaerob
1. Se prelevează o cantitate mică de colonie cu un mâner steril.

2. Se resuspendă proba în 900 µl de TDM.
4. Se agită diluția rezultată în vortex și se utilizează 30 µl din această probă ca
Colonii bacteriene - șablon pentru a realiza amplificarea.
Tabelul 5. Protocoale de prelucrare a probelor cu reactivul de diluție și transport TDM.
8 PROCEDURA DE ANALIZĂ
8.1 Reacție de amplificare multiplexă a ADN-ului

Reacția PCR se efectuează într-un volum final de 30 µL în două benzi de tuburi PCR de 0,2 ml care conțin
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23
13/36
amestecul de reacție PCR liofilizat. Sferele liofilizate de culoare roz și albastră corespund amestecului 1 și,
respectiv, amestecului 2 și sunt furnizate în benzi separate. Pentru fiecare probă trebuie utilizate două tuburi
PCR, unul pentru fiecare bandă.
Procesul este următorul:
 Se ia câte un tub, conținând fiecare dintre amestecurile PCR liofilizate, pentru fiecare probă care urmează
să fie analizată.
 Se adaugă până la 30 µl de probă în fiecare tub, urmând protocolul recomandat în secțiunea 7.
 Se omogenizează amestecul prin pipetare și se centrifughează timp de câteva secunde.
 În cazul în care numărul de probe care urmează să fie analizate este mai mic sau mai mare de opt,
tuburile necesare pot fi separate de bandă, fără a fi necesară utilizarea de benzi complete. Restul
benzii de tuburi liofilizate care nu va fi utilizat în acel moment trebuie păstrat timp de maximum 1
săptămână la 4 °C în ambalajul original.
 Se introduc tuburile în termociclor și se stabilesc următoarele condiții de amplificare:
PROGRAMUL DE AMPLIFICARE ÎN TERMOCICLOR
 Fie că se lucrează cu tuburi PCR individuale sau cu benzi de tuburi, după ce s-a adăugat ADN purificat
sau suspensie celulară, se introduc tuburile sau benzile în termociclorul și se programează condițiile
de amplificare de mai jos:
1 ciclu 25°C 10 min

1 ciclu 95°C 3 min
95°C 15 s
40 de cicluri 55°C 45 s
72°C 1 min
8°C ∞
Tabelul 6: Programul PCR.
Dacă nu veți proceda direct la hibridizare, puteți păstra tuburile sau benzile de tuburi cu produsul amplificat
în zona post-PCR la o temperatură de 8-10 °C timp de 1-2 zile. Pentru a le stoca pentru o perioadă mai lungă
de timp, se recomandă să faceți acest lucru la -20 °C.
8.2 Hibridizare inversă în flux

Toți reactivii sunt furnizați în format "gata de utilizare".
Cipurile sunt de unică folosință. Acestea trebuie manipulate cu mănuși și departe de orice sursă de
contaminare. În funcție de tipul de kit cu care lucrăm, vom proceda după cum urmează:
A. Pentru kitul MDR Direct Flow Chip (manual, ref: MAD-003946M-HS12):
Procesul complet de hibridizare se realizează în mod semi-automat în hybriSpot (HS12), urmând

instrucțiunile furnizate de asistentul sistemului. Gestionarea probelor, capturarea imaginilor, precum și
analiza și raportarea rezultatelor sunt realizate de software-ul hybriSoft.
Notă: Configurați instrumentul urmând instrucțiunile din manualul de utilizare (furnizat împreună cu instrumentul).
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

14/36
Înainte de a începe procesul de hibridizare, efectuați următorii pași:
1. Se preîncălzește reactivul A la 46 °C timp de cel puțin 20 de minute într-o baie termostatică.
2. Se amestecă produșii PCR obținuți cu amestecul 1 și amestecul 2 și se alicotează 50 µl din
amestec într-un tub nou, acesta fiind materialul utilizat în etapele următoare.
3. Se denaturează produsele PCR prin încălzire la 95 °C timp de 10 minute (într-un termociclor sau
bloc termic) și răciți rapid, menținând probele la 4 °C timp de cel puțin 2 minute.
4. Se așază fiecare cip MDR în poziția indicată pe platformă (HS12).
PROTOCOL DE HIBRIDIZARE
a) Se adaugă 300 µl de reactiv A (soluție de hibridizare) preîncălzit la 46 °C și se incubează timp de

cel puțin 2 minute la 46 °C.
b) Se îndepărtează reactivul A prin activarea pompei de vid.
c) Se adaugă 50 µl corespunzător amestecului de produse PCR din Mix 1 și Mix2 (denaturate anterior
și păstrate la gheață) la 230 µl de reactiv A (soluție de hibridizare) (46 °C) și distribuiți amestecul
pe cipul MDR-HS corespunzător.
d) Se incubează la 46 °C timp de 8 minute.
e) Se activează pompa pentru a îndepărta produsele PCR (asigurați-vă că pompa este activă timp de
cel puțin 30 de secunde).
f) Se spală de 3 ori 300 µl cu reactiv A (46 °C).
g) Se setează temperatura la 29°C.
h) Se blochează membranele timp de cel puțin 5 minute cu 300 µl de reactiv B (soluție de blocare).
i) Când temperatura atinge 29 °C, se activează pompa pentru a elimina reactivul B.
j) Se adaugă 300 µl de reactiv C (conjugat streptavidină-fosfatază alcalină) și se incubează timp de 5
minute la
29 °C.
k) Se activează pompa pentru a îndepărta reactivul.
l) Se setează temperatura la 36°C.
m) Se spală membranele de 4 ori 300 µl cu reactivul D (tampon de spălare I).
n) Dezvoltați membranele prin adăugarea a 300 µl de reactiv E (soluție de developare) și incubați
timp de 10 minute la 36 °C.
o) Se activează pompa pentru a îndepărta reactivul E.
p) Se spală membranele cu 2 x 300 µl cu reactiv F (soluție de spălare II).
q) Se activează pompa pentru a îndepărta reactivul.
r) Capturarea imaginilor, analiza și raportarea rezultatelor în conformitate cu instrucțiunile din manualul de
utilizare HS12.
B. Pentru kitul MDR Direct Flow Chip (Auto, ref: MAD-003946M-HS) pe platforma HS24:
Întregul proces de hibridizare este realizat automat de către hybriSpot. Gestionarea probelor, capturarea
imaginilor și analiza și raportarea rezultatelor sunt realizate de software-ul hybriSoft.
Notă: Configurați instrumentul urmând instrucțiunile din manualul de utilizare (furnizat împreună cu instrumentul).
Înainte de a începe procesul de hibridizare, efectuați următorii pași:

1. Se setează instrumentul urmând instrucțiunile din manualul de utilizare (furnizat împreună cu
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23
15/36
instrumentul).
2. Se denaturează produsele PCR prin încălzirea lor la 95 °C timp de 10 minute într-un termociclor
sau într-un bloc de încălzire și răciți rapid la gheață timp de cel puțin 2 minute.
3. Urmați instrucțiunile furnizate în manualul de utilizare al instrumentului pentru a efectua probele de date
intrare.
4. Urmați instrucțiunile din manual pentru a plasa tuburile PCR Mix 1 și 2, cipurile MDR și reactivii în
pozițiile corespunzătoare în hybriSpot 24.
5. După ce toți reactivii de hibridizare, probele și cipurile au fost plasate corect în instrument, apăsați
butonul Start din fereastra hS Control pentru a începe protocolul.
9 PROCEDURA DE ANALIZĂ PENTRU PLATFORMA HS12 PCR AUTO

Procesele de amplificare prin PCR și de hibridizare sunt realizate automat în platforma HS12 PCR AUTO.
Prelucrarea probelor, capturarea imaginilor și analiza rezultatelor sunt realizate de software-ul hybriSoft.
Înainte de a începe procesul, se recomandă să citiți cu atenție manualul de utilizare (inclus în platforma
HS12a). Urmați instrucțiunile din manual pentru a plasa benzile de tuburi PCR, Cipurile și reactivii de
hibridizare în instrument.
Protocol:
1. Se ia câte un tub care conține fiecare dintre amestecurile PCR liofilizate pentru fiecare probă care
urmează să fie analizată.
2. Se adaugă până la 30 µl de probă în fiecare tub, urmând protocolul recomandat în secțiunea 8.1.
3. Se omogenizează amestecul prin pipetare și se centrifughează timp de câteva secunde.
4. În cazul în care numărul de probe care urmează să fie analizate este mai mic sau mai mare de 8,
tuburile necesare pot fi separate de bandă, fără a fi nevoie să se utilizeze benzi complete. Restul
benzii de tuburi liofilizate care nu va fi utilizat în acel moment trebuie păstrat timp de maximum 1
săptămână la 4 °C în ambalajul original.
5. Urmați instrucțiunile descrise în manualul instrumentului HS12a pentru a plasa benzile de tuburi
PCR, cipurile și reactivii de hibridizare în instrument și pentru a începe procesul.
10 PROCEDURA DE CONTROL AL CALITĂȚII

Kitul MDR Direct Flow Chip conține diferite controale interne pentru controlul calității rezultatelor.
SPOTS CONTROL POZIȚIA INTERPRETARE
B Controlul hibridizării 1A-1B-2M-7G-12A 5 poziții sunt corecte
CI-1 Control de amplificare exogenă Amestec 1 1C-7H 0, 1 sau 2 poziții sunt corecte
CI-2 Control de amplificare exogenă Amestec 2 1D-7I 0, 1 sau 2 poziții sunt corecte
BG Controlul amplificării endogene Amestec 1 1E-7J 0, 1 sau 2 poziții sunt corecte
RNazăP Controlul amplificării endogene Amestec 2 1F-7K 0, 1 sau 2 poziții sunt corecte
Tabelul 7: Sonde de control incluse în cipul MDR.
 Controlul hibridizării: După dezvoltarea membranelor, trebuie să apară un semnal intens în toate
cele cinci poziții de control al hibridizării (B), care servesc drept control de calitate. Acest semnal
indică faptul că reactivii de hibridizare și developarea au funcționat corect. În cazul în care semnalul
nu apare, indică faptul că a avut loc o eroare în timpul procesului de hibridizare sau că un
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

16/36
reactiv nu a fost utilizat corespunzător. În plus, acest semnal permite software-ului să orienteze
corect panoul de sonde pentru a efectua analiza ulterioară.
 Control de amplificare exogenă (CI-1, CI-2): sondă pentru detectarea ADN sintetic inclus în
amestecul PCR. Acest ADN va fi coamplificat împreună cu materialul genetic al probei. Două semnale
pozitive în controlul de amplificare exogenă (CI) vor indica faptul că reacția PCR a funcționat corect.
Un rezultat negativ în acest control nu invalidează rezultatul dacă controlul endogen s-a amplificat
corect și/sau dacă proba a fost pozitivă pentru oricare dintre țintele incluse în panel.
 Control de amplificare endogenă (BG, RNazăP): sondă pentru detectarea beta-globinei umane și a
ADN-ului genei RNasaP amplificat în timpul PCR. Toate probele în care ADN-ul de test a fost
amplificat corect vor avea un semnal pozitiv în controlul amplificării endogene (BG, RNazăP). Acest
semnal arată calitatea/cantitatea ADN-ului utilizat în amplificare. Un semnal pozitiv indică faptul că
amplificarea a funcționat corect și că calitatea și cantitatea ADN-ului utilizat pentru aceasta au fost
optime. Absența semnalului pentru acest control înseamnă că a existat o eroare în timpul
amplificării, o calitate/cantitate scăzută a ADN-ului utilizat în amplificare sau absența ADN-ului uman
în amplificare. Acest din urmă caz poate apărea în cazul unor probe, ținând cont de diluția la care
sunt supuse probele clinice pentru pregătirea PCR. Acest semnal nu va apărea în cazul în care se
utilizează colonii bacteriene ca probă de plecare. Cu toate acestea, un rezultat negativ la acest
control nu invalidează rezultatul în cazul în care controlul exogen s-a amplificat corect și/sau proba
a fost pozitivă pentru oricare dintre țintele incluse în panel.
Probele care sunt pozitive pentru oricare dintre markerii de rezistență incluși în kit trebuie să furnizeze
semnal pentru unele dintre sondele specifice. În plus, trebuie să apară cele cinci semnale de control al
hibridizării (B), două semnale de control al amplificării exogene (CI) și două semnale de control al amplificării
endogene (BG, RNazăP) (atâta timp cât proba conține ADN uman). În cazul în care semnalele pentru
controalele de amplificare nu apar, dar apar pentru markerii de rezistență, în raport este inclus un mesaj de
absență a ADN uman/prezență a inhibitorilor PCR. În acest caz, utilizatorul trebuie să verifice calitatea
probelor înainte de a valida rezultatele.
În cazul în care probele sunt negative pentru toți markerii de rezistență incluși în kit, acestea vor prezenta
cinci semnale pozitive pentru controlul de hibridizare (B) și două semnale pentru controlul de amplificare
exogenă (CI). Semnalele pentru controlul de amplificare endogenă (BG, RNazăP) vor apărea, de asemenea,
dacă proba analizată conține ADN uman.
Utilizatorul este responsabil pentru determinarea procedurilor de control al calității adecvate pentru
laboratorul său și pentru respectarea legislației aplicabile.
11 INTERPRETAREA REZULTATELOR
Interpretarea rezultatelor se face în mod automat cu ajutorul programului de analiză hybriSoft. Următoarea
schemă prezintă dispunerea sondelor pe cipul MDR:
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

17/36
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
A B msrA catB3 ndm mcr1 rmtB qnrB nmc/imi B
B B mef gyrE-S83L mecA sim Abau sul1 rmtC qnrS ges oxa51_like
C CI-1 ermA gyrE-D87G vanA imp_like mcr2 sul2 rmtF oqxA vim oxa58_like
D CI-2 ermB gyrE-S83W vanB blaSHV-S mecC sul3 Ecoli oqxB gim SA
gyrE-S83W-
E BG ermC blaSHV blaSHV-SK gyrP-D87G blaDHA cfr spm kpneum
D87N
F RnaseP aac gyrP-T83I blaCTX oxa23_like parE-S80I blaCMY catB3 ndm Paer
G mcrl armA gyrP-D87N kpc oxa24 _like B msrA gyrE-S83L mecA sim
H sul1 rmtB qnrA sme oxa48_like CI-1 mef gyrE-D87G vanA imp_like Abau
I sul2 rmtC qnrB nmc/imi oxa51_like CI-2 ermA gyrE-S83W vanB blaSHV-S mcr2
gyrE-S83W-
J sul3 rmtF qnrS ges oxa58_like BG ermB blaSHV blaSHV-SK mecC
D87N
K blaDHA Ecoli oqxA vim SA RnaseP ermC gyrP-T83I blaCTX oxa23_like gyrP-D87G
L blaCMY oqxB gim kpneum aac gyrP-D87N kpc oxa24 _like parE-S80I
M B cfr spm Paer armA qnrA sme oxa48_like
Figura 1: Schema de dispunere a sondelor pe matrice. Sunt incluse sondele specifice pentru agenții patogeni și genele de rezistență
din studiu, precum și sondele utilizate ca martori de amplificare și hibridizare. De asemenea, sunt indicate coordonatele fiecăreia
dintre ele.
"B": controlul hibridizării

"CI": Control de amplificare exogenă
"BG": Control de amplificare endogenă (fragment de ß - g l o b i n ă umană, RNazăP).
"X": Sonde specifice pentru fiecare marker de rezistență
Toate sondele sunt duplicate pentru a garanta fiabilitatea în analiza automată a rezultatelor. Controlul
hibridizării (B) este repetat în 5 poziții și permite software-ului să orienteze corect panoul de sonde pentru
analiza ulterioară a acestora.
Tabelul următor prezintă tipul de sonde utilizate și pozițiile în care au fost plasate pe cipul MDR. Sunt incluse,
de asemenea, rezultatele potențiale obținute și interpretarea rezultatelor:
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

18/36
Sondă/poziții (coloană-rând)
Rezultate așteptate (organisme/rezistență) ID-ul
Sonda B CI-1 CI-2 BG RnazăP
sondei
1A-1B-
Staphylococcus aureus SA 5K-12D 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
1A-1B-
Gena de rezistență la meticilină mecA mecA 4B-10G 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
1A-1B-
VANCOMICIN-RESISTANCE GENE vanA vanA 4C-10H 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
1A-1B-
Gena de rezistență la VANCOMICINĂ mecB vanB 4D-10I 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
1A-1B-
CLASA A KPC CARBAPENEMAZĂ kpc 4G-10L 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
1A-1B-
CLASA A SME CARBAPENEMAZĂ sme 4H-10M 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
1A-1B-
CARBAPENEMAZĂ DE CLASĂ A NMC/IMI nmc/imi 4I-11A 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
1A-1B-
SHV ß-LACTAMAZĂ blaSHV 4E-10J 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
1A-1B-
SHV ß-LACTAMAZĂ CU SPECTRUM EXTINS (dublu blaSHV-SK 5E-11J
2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
mutant) blaSHV-S 5D-11I
12A
1A-1B-
SHV ß-LACTAMAZĂ CU SPECTRUM EXTINS (unică)
blaSHV-S 5D-11I 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
mutant)
12A
1A-1B-
CTX-M ß-LACTAMAZĂ CU SPECTRUM EXTINS blaCTX 4F-10K 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
1A-1B-
CLASA A GES CARBAPENEMAZĂ ges 4J-11B 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
1A-1B-
CLASA B VIM CARBAPENEMAZĂ vim 4K-11C 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
1A-1B-
CLASA B GIM CARBAPENEMAZĂ gim 4L-11D 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
1A-1B-
CLASA B SPM CARBAPENEMAZĂ spm 4M-11E 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
1A-1B-
CLASA B NDM CARBAPENEMAZĂ ndm 5A-11F 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
1A-1B-
CLASA B SIM CARBAPENEMAZĂ sim 5B-11G 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
1A-1B-
CLASA B CARBAPENEMAZĂ IMP3, 15, 19_like imp _like 5C-11H 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

19/36
1A-1B-
CLASA D OXA48_like CARBAPENEMAZĂ oxa48_like 5H-11M 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
1A-1B-
CLASA D OXA23_like CARBAPENEMAZĂ oxa23_like 5F-11K 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
1A-1B-
CLASA D OXA24_like CARBAPENEMAZĂ oxa24_like 5G-11L 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
1A-1B-
CLASA D OXA51_like CARBAPENEMAZĂ oxa51_like 5I-12B 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
1A-1B-
CLASA D OXA58_like CARBAPENEMAZĂ oxa58_like 5J-12C 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
1A-1B-
Gena de rezistență la colistină (mcr-1) mcr1 1G-8A 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
1A-1B-
sul1 1H-8B 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Gena de rezistență la sulfonamide (sul-1) 12A
1A-1B-
sul2 1I-8C 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
1A-1B-
sul3 1J-8D 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
1A-1B-
blaDHA 1K-8E 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
β-lactamază AmpC 12A
1A-1B-
blaCMY 1L-8F 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
β-lactamază AmpC 12A
1A-1B-
msrA 2A-8G 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Gena de rezistență la macrolide (msrA) 12A
1A-1B-
mef 2B-8H 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Gena de rezistență la macrolide (mefA/E) 12A
1A-1B-
ermA 2C-8I 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Gena de rezistență la macrolide (ermA) 12A
1A-1B-
ermB 2D-8J 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Gena de rezistență la macrolide (ermB) 12A
1A-1B-
ermC 2E-8K 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Gena de rezistență la macrolide (ermC) 12A
1A-1B-
aac 2F-8L 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Gena de rezistență la aminoglicozide (aac (6´)-Ib) 12A
1A-1B-
armA 2G-8M 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Gena de rezistență la aminoglicozide (armA) 12A
1A-1B-
rmtB 2H-9A 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Gena de rezistență la aminoglicozide (rmtB) 12A
1A-1B-
rmtC 2I-9B 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Gena de rezistență la aminoglicozide (rmtC) 12A
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

20/36
1A-1B-
rmtF 2J-9C 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Gena de rezistență la aminoglicozide (rmtF) 12A
1A-1B-
Ecoli 2K-9D 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
E. coli 12A
1A-1B-
Rezistență de nivel scăzut la fluorochinolone (mut. gyrE-S83L 3B-9G
2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
gyrE-S83L) Ecoli 2K-9D
12A
gyrE-S83L 3B-9G 1A-1B-
Rezistența la fluorochinolone (mut. gyrE-S83L-D87G) gyrE-D87G 3C-9H 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Ecoli 2K-9D 12A
Rezistența la fluorochinolone (mut. gyrE-S83L-D87G- gyrE-D87G 3C-9H 2M-7G-
--/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
parE- S80I) parE-S80I 6F-12L 12A
Ecoli 2K-9D
gyrE-S83W- 3E-9J 2M-7G-
Rezistența la fluorochinolone (mut. gyrE-S83L-D87N) --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
D87N 12A
Ecoli 2K-9D
gyrE-S83W 3C-9H 1A-1B-
Rezistența la fluorochinolone (mut. gyrE-S83W-D87G)
gyrE-D87G 3D-9I 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Ecoli 2K-9D 12A
1A-1B-
gyrP-T83I 3F-9K
Rezistența la fluorochinolone (mut. gyrE-T83I) 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Paer 5M-12F
12A
gyrP-T83I 3F-9K 1A-1B-
Rezistența la fluorochinolone (mut. gyrE-T83I-D87N) gyrP-D87N 3G-9L 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Paer 5M-12F 12A
gyrP-T83I 3F-9K 1A-1B-
Rezistența la fluorochinolone (mut. gyrE-T83I-D87G) gyrP-D87G 6E-12K 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Paer 5M-12F 12A
1A-1B-
qnrA 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Gena de rezistență la chinolone sau fluorochinolone 3H-9M 12A
(qnrA)
1A-1B-
qnrB 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Gena de rezistență la chinolone sau fluorochinolone 3I-10A 12A
(qnrB)
1A-1B-
Gena de rezistență la chinolone sau fluorochinolone qnrS 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
(qnrS) 3J-10B 12A
1A-1B-
oqxA 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Gena de rezistență la Olaquindox (oqxA) 3K-10C 12A
1A-1B-
oqxB 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Gena de rezistență la olaquindox (oqxB) 3L-10D 12A
1A-1B-
cfr 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Gena de rezistență la Linezolid (cfr) 3M-10E 12A
1A-1B-
catB3 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Gena de rezistență la cloramfenicol (catB3) 4A-10F 12A
1A-1B-
kpneum 5L-12E 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
12A
Klebsiella pneumoniae
1A-1B-
Paer 5M-12F 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Pseudomonas aeruginosa 12A
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23
21/36
1A-1B-
Abau 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Acinetobacter baumannii 6B-12H 12A
1A-1B-
mcr2 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Gena de rezistență la colistină (mcr-2) 6C-12I 12A
1A-1B-
mecC 2M-7G- --/1C-7H --/1D-7I -- / 1E-7J -- / 1F-7K
Gena de rezistență la meticilină (mecC) 6D-12J 12A
1A-1B-
MDR NEGATIV -- -- 2M-7G- 1C-7H 1D-7I 1E-7J 1F-7K
12A
1A-1B-
REZULTATE INVALIDE (prezența inhibitorilor PCR)
-- -- 2M-7G- -- -- -- --
(Absența controlului ADN uman)
12A
1A-1B-
MDR NEGATIV (Absența controlului ADN uman) -- -- 2M-7G- 1C-7H 1D-7I -- --
12A
Imagine indisponibilă/Imagine necorespunzătoare/Error -- -- -- -- -- -- --

de hibridizare
Tabelul 8: Poziția sondelor pe cipul MDR și interpretarea rezultatelor.
Alte rezultate posibile:
1. În exsudatele rectale și nazofaringiene, acestea prezintă adesea pozitivitate pentru sonda mecA
datorită prezenței în floră a stafilococului coagulazo-negativ rezistent la meticilină. În cazul
exsudatelor/aspiratelor nazofaringiene, în care se încearcă identificarea purtătorilor de SARM,
atunci când o probă este pozitivă pentru S. aureus, aceasta poate fi pozitivă și pentru mecA, iar
această genă de rezistență nu poate fi atribuită în mod necesar tulpinii de S. aureus.
2. β-lactamaza SHV-1 cu spectru limitat poate fi găsită în tulpinile de K. pneumoniae cu o frecvență
ridicată (între 80 și 90 %) și este codificată cromozomial. Cu toate acestea, există două posibilități
pentru ca această genă să asigure un fenotip cu spectru extins: una este prin supraexprimarea genei
(apare atunci când localizarea ei este plasmidică, care este forma întâlnită la alte Enterobateriaceae,
cum ar fi E. coli) și cealaltă se datorează apariției unor mutații specifice în secvența sa. Kiturile au
fost concepute și validate pentru a detecta toate variantele SHV, tulpina sălbatică SHV-1 și toate
formele mutate ale enzimei sunt detectate de sonda generică blaSHV, fără a le diferenția. Având în
vedere că K. pneumoniae poate fi găsit ca parte normală a florei, detectarea SHV nu ar indica în mod
necesar dovada fenotipică a producerii de β-lactamază cu spectru extins. În cazul în care se obține
un rezultat pozitiv pentru versiunea mutantă a SHV, atât pentru mutația simplă, cât și pentru cea
dublă, aceasta ar indica producerea unei β-lactamaze cu spectru extins.
12 CARACTERISTICI DE PERFORMANȚĂ
12.1 Performanță analitică în hybriSpot 12 (HS12)

12.1.1 Repetabilitate
Repetabilitatea metodei a fost analizată prin utilizarea de ADN sintetic pentru fiecare dintre țintele specifice
ale panoului. Au fost utilizate două concentrații diferite de ADN sintetic și din fiecare dintre ele s-au obținut
cel puțin cinci replici. Testul a fost efectuat de același operator, într-o singură locație și utilizând același lot
de reactivi.
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

22/36
Țintă Nr. exemplare/reacție Pozitiv/testat % pozitiv
2000 5/5 100%
aac (6´)-Ib
1000 7/7 100%
20 5/5 100%
Acinetobacter baumannii
10 7/7 100%
2000 5/5 100%
armA
1000 7/7 100%
100 5/5 100%
blaCMY
20 7/7 100%
500 5/5 100%
blaCTX
100 6/7 85%
250 5/5 100%
blaDHA
100 7/7 100%
100 5/5 100%
blaSHV
50 7/7 100%
blaSHV-S 1000 7/7 100%
500 7/7 100%
blaSHV-SK
250 6/7 85.7%
20 5/5 100%
catB3
10 7/7 100%
100 5/5 100%
cfr
20 7/7 100%
1000 5/5 100%
ermA
500 7/7 100%
ermB 100 5/5 100%
2000 5/5 100%
ermC
1000 7/7 100%
250 5/5 100%
Escherichia coli
100 7/7 100%
50 5/5 100%
ges
10 7/7 100%
100 5/5 100%
gim
50 7/7 100%
1000 5/5 100%
gyrE-S83L
100 7/7 100%
1000 5/5 100%
gyrE-S83W
100 7/7 100%
1000 5/5 100%
gyrE-S83W-D87N
100 7/7 100%
1000 5/5 100%
gyrE-D87G
100 7/7 100%
1000 5/5 100%
gyrP-T83I
100 7/7 100%
1000 5/5 100%
gyrP-D87G
100 7/7 100%
gyrP-D87N 1000 5/5 100%
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

23/36
500 5/5 100%
imp
250 7/7 100%
20 5/5 100%
Klebsiella pneumoniae
10 7/7 100%
kpc 500 7/7 100%
100 5/5 100%
mcr1
50 7/7 100%
20 5/5 100%
mcr2
10 7/7 100%
50 5/5 100%
mecA
10 7/7 100%
50 5/5 100%
mecC
10 7/7 100%
2000 5/5 100%
mef
1000 7/7 100%
2000 5/5 100%
msrA
1000 2/7 28%
ndm 500 7/7 100%
50 5/5 100%
nmc/imi
10 7/7 100%
50 5/5 100%
oqxA
10 7/7 100%
100 5/5 100%
oqxB
10 7/7 100%
100 5/5 100%
oxa23
50 7/7 100%
50 5/5 100%
oxa24
10 7/7 100%
100 5/5 100%
oxa48
50 7/7 100%
250 7/7 100%
oxa51
50 5/7 71%
100 7/7 100%
oxa58
50 4/5 80%
1000 5/5 100%
parE-S80I
100 7/7 100%
20 5/5 100%
Pseudomonas aeruginosa
10 7/7 100%
500 5/5 100%
qnrA
100 7/7 100%
20 5/5 100%
qnrB
10 7/7 100%
20 5/5 100%
qnrS
10 7/7 100%
1000 5/5 100%
rmtB
500 7/7 100%
rmtC 100 5/5 100%
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

24/36
20 7/7 100%
rmtF
10 5/5 100%
50 5/5 100%
sim
10 6/7 86%
50 5/5 100%
sme
10 7/7 100%
50 5/5 100%
spm
10 7/7 100%
100 5/5 100%
Staphylococcus aureus
10 7/7 100%
20000 5/5 100%
sul1
1000 7/7 100%
sul2 100 5/5 100%
1000 5/5 100%
sul3
500 7/7 100%
50 5/5 100%
vanA
10 7/7 100%
500 5/5 100%
vanB 250 7/7 100%
100 2/5 40%
50 5/5 100%
vim
10 7/7 100%
Tabelul 9: Testul de repetabilitate pentru fiecare dintre genele incluse în panel.
12.1.2 Specificitatea analitică
Pentru test, s-au utilizat 106 copii/reacție de ADN sintetic conceput pentru fiecare marker. Nu s-au observat
reacții încrucișate între genele incluse în test, cu excepția mutației parE-S80I, a cărei specificitate este mai
mare de 92%.
Țintă Specificitate
Staphylococcus aureus 100%
Klebsiella pneumoniae 100%
Pseudomonas aeruginosa 100%
Escherichia coli 100%
Acinetobacter baumannii 100%
aac (6´)-Ib 100%
armA 100%
rmtB 100%
rmtC 100%
rmtF 100%
blaCMY 100%
blaDHA 100%
blaCTX 100%
blaSHV-SK 100%
blaSHV-S 100%
blaSHV 100%
ges 100%
gim 100%
imp_like 100%
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23
25/36
kpc 100%
ndm 100%
nmc/imi 100%
oxa23_like 100%
oxa24_like 100%
oxa48_like 100%
oxa51_like 100%
oxa58_like 100%
sim 100%
sme 100%
spm 100%
vim 100%
catB3 100%
mcr1 100%
mcr2 100%
gyrE-S83L 100%
gyrE-S83W 100%
gyrE-D87G 100%
gyrE-S83W-D87N 100%
gyrP-T83I 100%
gyrP-T83I-D87G 100%
gyrP-T83I-D87N 100%
parE-S80I 92.31%
cfr 100%
ermA 100%
ermB 100%
ermC 100%
mef 100%
msrA 100%
mecA 100%
mecC 100%
oqxA 100%
oqxB 100%
qnrA 100%
qnrB 100%
qnrS 100%
sul1 100%
sul2 100%
sul3 100%
vanA 100%
vanB 100%
vim 100%
Tabelul 10: Specificitatea cipului cu flux direct MDR.
12.1.3 Sensibilitatea analitică
Limita de detecție (LoD) a kitului a fost calculată pentru fiecare dintre genele analizate. Determinarea
numărului minim de copii detectate a fost realizată prin diluții în serie ale ADN-ului sintetic al fiecăreia dintre
genele incluse în panel cu 5 ng de ADN genomic uman. Fiecare probă a fost analizată între 6 și 14 ori.
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

26/36
Toate PCR-urile au fost hibridizate cu ajutorul platformei hybriSpot 12. Rezultatele au fost analizate cu
hybriSoft, iar valoarea stabilită pentru a considera semnalele pozitive a fost 4 (intensitatea gri).
Nr. exemplare/ Pozitiv/ CI CI

Țintă Sonda Sensibilitate Specificitate
reacție testat 95% 95%
aac (6´)-Ib aac 1000 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
Acinetobacter 20 10/10 100% 65.54-100% 100% 99.08-100%
Abau 73.24-100% 100% 99.07-100%
baumannii 10 14/14 100%
armA armA 1000 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
blaCMY 100 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
blaCMY
blaCMY 20 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
blaCTX 500 10/10 100% 65.54-100% 100% 99.08-100%
blaCTX blaCTX 250 14/14 100% 73.24-100% 100% 99.07-100%
blaCTX 100 8/10 80% 44.22-96.46% 100% 99.08-100%
blaDHA blaDHA 100 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
blaSHV 100 10/10 100% 65.54-100% 100% 99.08-100%
blaSHV
blaSHV 50 14/14 100% 73.24-100% 100% 99.07-100%
blaSHV-S 1000 14/14 100% 73.24-100% 100% 99.07-100%
blaSHV-S
blaSHV-S 250 3/7 42.8% 20.14-79.86% 100% 99.08-100%
blaSHV-SK 500 12/12 100% 65.54-100% 100% 99.07-100%
blaSHV-SK
blaSHV-SK 250 6/7 85.7% 50.88-97.06% 100% 99.08-100%
catB3 20 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
catB3
catB3 10 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
cfr 100 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
cfr
cfr 20 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
ermA 1000 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
ermA
ermA 500 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
ermB 100 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
ermB
ermB 20 0/6 0% 0-48.31% 100% 99-100%
ermC ermC 1000 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
250 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
Escherichia coli Ecoli
100 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
ges 50 10/10 100% 65.54-100% 100% 99.08-100%
ges
ges 10 14/14 100% 73.24-100% 100% 99.07-100%
gim 100 10/10 100% 65.54-100% 100% 99.08-100%
gim
gim 50 14/14 100% 73.24-100% 100% 99.07-100%
gyrE-S83L 1000 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
gyrE-S83L
gyrE-S83L 100 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
gyrE-S83W 1000 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
gyrE-S83W
gyrE-S83W 100 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
gyrE-D87G 1000 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
gyrE-D87G
gyrE-D87G 100 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
gyrE-S83W- 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
1000
D87N
gyrE-S83W-D87N
gyrE-S83W- 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
100
D87N
gyrP-T83I 1000 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
gyrP-T83I
gyrP-T83I 100 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
gyrP-T83I- 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
1000
D87G
gyrP-D87G
gyrP-T83I- 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
100
D87G
gyrP-T83I- 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
1000
D87N
gyrP-D87N
gyrP-T83I- 0/6 0% 0-48.31% 100% 99-100%
100
D87N
imp imp_like 500 10/10 100% 65.54-100% 100% 99.08-100%
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

27/36
imp_like 250 14/14 100% 73.24-100% 100% 99.07-100%
Klebsiella Kpneum 20 10/10 100% 65.54-100% 100% 99.08-100%
pneumoniae Kpneum 10 14/14 100% 73.24-100% 100% 99.07-100%
kpc 500 10/10 100% 65.54-100% 100% 99.08-100%
kpc
kpc 100 14/14 100% 73.24-100% 100% 99.07-100%
100 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
mcr1 mcr1
50 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
10 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
mcr2 mcr2
20 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
mecA 50 10/10 100% 65.54-100% 98.43% 96.81-99.27%
mecA
mecA 10 14/14 100% 73.24-100% 98.43% 96.81-99.27%
50 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
mecC mecC
10 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
mef 2000 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
mef
mef 1000 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
msrA 2000 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
msrA
msrA 1000 2/6 33% 6-75.9% 100% 99-100%
ndm 1000 10/10 100% 65.54-100% 100% 99.08-100%
ndm
ndm 500 14/14 100% 73.24-100% 100% 99.07-100%
nmc/imi 50 10/10 100% 65.54-100% 100% 99.08-100%
nmc/imi
nmc/imi 10 14/14 100% 73.24-100% 100% 99.07-100%
50 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
oqxA oqxA
10 4/6 66% 24.1-94% 100% 99-100%
100 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
oqxB oqxB
10 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
oxa23_like 100 10/10 100% 65.54-100% 100% 99.08-100%
oxa23
oxa23_like 50 14/14 100% 73.24-100% 100% 99.07-100%
oxa24_like 50 10/10 100% 65.54-100% 100% 99.08-100%
oxa24
oxa24_like 10 14/14 100% 73.24-100% 100% 99.07-100%
oxa48_like 100 10/10 100% 65.54-100% 100% 99.08-100%
oxa48
oxa48_like 50 14/14 100% 73.24-100% 100% 99.07-100%
oxa51_like 500 10/10 100% 65.54-100% 100% 99.08-100%
oxa51 oxa51_like 250 14/14 100% 73.24-100% 100% 99.07-100%
oxa51_like 100 6/10 60% 27.37-86.31% 100% 99.08-100%
oxa58_like 100 8/8 100% 59.77-100% 100% 99.08-100%
oxa58
oxa58_like 50 5/10 50% 20.14-79.86% 100% 99.08-100%
parE-S80I 1000 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
parE-S80I
parE-S80I 100 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
Pseudomonas Paer 20 10/10 100% 65.54-100% 100% 99.08-100%
aeruginosa Paer 10 14/14 100% 73.24-100% 100% 99-100%
qnrA 500 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
qnrA
qnrA 100 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
qnrB 20 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
qnrB
qnrB 10 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
qnrS 20 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
qnrS
qnrS 10 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
rmtB 1000 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
rmtB
rmtB 500 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
rmtC rmtC 100 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
rmtF 20 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
rmtF
rmtF 10 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
sim 50 10/10 100% 65.54-100% 100% 99.08-100%
sim
sim 10 10/12 83.3% 50.88-97.06% 100% 99.07-100%
sme 50 10/10 100% 65.54-100% 100% 99.08-100%
sme
sme 10 14/14 100% 73.24-100% 100% 99.07-100%
spm 50 10/10 100% 65.54-100% 100% 99.08-100%
spm
spm 10 14/14 100% 73.24-100% 100% 99.07-100%
SA 100 10/10 100% 65.54-100% 100% 99.08-100%
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

28/36
Staphylococcus
SA 10 14/14 100% 73.24-100% 100% 99.07-100%
aureus
sul1 sul1 1000 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
sul2 sul2 100 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
sul3 1000 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
sul3
sul3 500 6/6 100% 51.56-100% 100% 99-100%
vanA 50 10/10 100% 65.54-100% 100% 99.08-100%
vanA
vanA 10 14/14 100% 73.24-100% 100% 99.07-100%
vanB 500 10/10 100% 65.54-100% 100% 99.08-100%
vanB vanB 250 14/14 100% 73.24-100% 100% 99.07-100%
vanB 100 4/10 40% 13.7-72.63% 100% 99.08-100%
vim 50 10/10 100% 65.54-100% 100% 99.08-100%
vim
vim 10 14/14 100% 73.24-100% 100% 99.07-100%
Tabelul 11: Sensibilitatea analitică (LoD): copii de ADN genomic ale fiecărei ținte care rezultă în 100 % din cazurile pozitive ale
replicilor, analizate cu software-ul hybriSoft și cu o valoare a punctului de tăiere a pozitivității de 4.
*Gena ges asigură rezistența la ampicilină și prezintă un anumit grad de omologie cu gena rezistentă la ampicilină blaTEM. Aceasta
din urmă este utilizată ca marker de selecție în construcția de plasmidă pentru obținerea proteinei recombinante Taq ADN
polimeraza în E. coli. Specificitatea de 97,3% pentru ges se poate datora prezenței unor cantități infime de E. coli cu acest marker
enzimatic.
** Gena mecA asigură rezistența la meticilină și este frecvent asociată cu Staphylococcus epidermidis, o bacterie caracteristică a
florei cutanate. Specificitatea de 98,4 % pentru mecA s-ar putea datora contaminării probelor în timpul manipulării.
12.2 Performanță analitică în hybriSpot 24 (HS24)

Performanța și robustețea kitului MDR Direct Flow Chip în instrumentul automatizat HS24 au fost validate
prin analizarea copiilor limită cuantificate ale fragmentelor sintetice din patru genotipuri incluse în panel.
Această validare dovedește reproductibilitatea rezultatelor între pozițiile 1 și 24 ale platformei HS24 și
reproductibilitatea rezultatelor cu diferite programe pentru un număr diferit de probe.
12.2.1 Reproductibilitatea rezultatelor în programe pentru un număr diferit de probe
Au fost realizate replici ale unei probe pozitive care conținea un număr limită de copii de ADN kpc (500 de
copii). Aceste replici au fost plasate în diferite poziții ale camerei de reacție din instrumentul HS24 și au fost
evaluate patru protocoale diferite:
 Protocol pentru 2 probe (2 replici)
 Protocol pentru 24 de probe (4 replici)
Rezultatele au fost analizate automat cu hybriSoft și au fost comparate cu cele obținute în HS12 (Control).
Nu au fost detectate diferențe între diferitele poziții ale camerei de reacție și nici protocolul utilizat.
12.2.2 Reproductibilitatea rezultatelor în diferite poziții de hibridizare în HS24
S-au realizat opt replici ale unei diluții limită a trei gene rezistente din panel, la care s-au adăugat 5ng de
ADN genomic uman. Replicile au fost amestecate într-un grup și au fost utilizate după cum urmează:
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

29/36
Au fost analizate -4 replici în HS24 distribuite în prima și ultima poziție a ambelor camere ale platformei,
pentru a acoperi cele mai bune și cele mai proaste condiții ale protocolului.
În fiecare serie, au fost analizate 3 genotipuri în conformitate cu distribuția de mai jos:

- Genotipul 1: pozițiile 1, 10, 13, 22
În paralel, două replici ale fiecărui genotip au fost utilizate ca martor pe HS12.
Rezultatele au fost analizate automat cu hybriSoft și au fost comparate cu cele obținute pe platforma HS12
(Control). În toate cazurile, probele au fost detectate ca fiind pozitive. Diferențele de intensitate observate
între poziții sunt acceptabile.
Țintă Nr. Pozitiv/testat Diferența dintre

blaCTX-M16 500 4/4 Nu
ndm 500 4/4 Nu
oxa51 250 4/4 Nu
Tabelul 12: Reproductibilitatea cipului de debit direct MDR în HS24. Rezultatele au fost analizate automat cu hybriSoft, stabilind o
valoare limită de pozitivitate de 4.
12.3 Performanță analitică în hybriSpot 12 PCR AUTO (HS12a)

Performanța și robustețea cipului MDR Direct Flow Chip au fost validate pe platforma automată HS12a.
Pentru aceasta, au fost realizate 3 replici din fiecare marker de rezistență și agent patogen din panoul de
diluții limită, care au fost amplificate și hibridizate în diferite poziții ale echipamentului. Întregul proces a
fost realizat automat în HS12a, iar rezultatele au fost analizate cu hybriSoft.
Nr.
Pozitiv/testat
Țintă Sonda exemplare/
reacție
aac (6´)-Ib aac 1000 3/3
Acinetobacter baumannii Abau 10 3/3
armA armA 1000 3/3
blaCMY blaCMY 20 3/3
blaCTX blaCTX 250 3/3
blaDHA blaDHA 100 3/3
blaSHV blaSHV 50 3/3
blaSHV-S blaSHV-S 1000 3/3
blaSHV-SK blaSHV-SK 500 3/3
catB3 catB3 10 3/3
cfr cfr 20 3/3
ermA ermA 500 3/3
ermB ermB 100 3/3
ermC ermC 1000 3/3
Escherichia coli Ecoli 100 3/3
ges ges 10 3/3
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

30/36
gim gim 50 3/3
gyrE-S83L gyrE-S83L 100 3/3
gyrE-S83W gyrE-S83W 100 3/3
gyrE-D87G gyrE-D87G 100 3/3
gyrE-S83W- 3/3
gyrE-S83W-D87N 100
D87N
gyrP-T83I gyrP-T83I 100 3/3
gyrP-T83I- 3/3
gyrP-D87G 100
D87G
gyrP-T83I- 3/3
gyrP-D87N 1000
D87N
imp imp_like 250 3/3
Klebsiella pneumoniae Kpneum 10 3/3
kpc kpc 100 3/3
mcr1 mcr1 50 3/3
mcr2 mcr2 10 3/3
mecA mecA 10 3/3
mecC mecC 10 3/3
mef mef 1000 3/3
msrA msrA 2000 3/3
ndm ndm 500 3/3
nmc/imi nmc/imi 10 3/3
oqxA oqxA 50 3/3
oqxB oqxB 10 3/3
oxa23 oxa23_like 50 3/3
parE-S80I parE-S80I 100 3/3
Pseudomonas 3/3
Paer 10
aeruginosa
qnrA qnrA 100 3/3
qnrB qnrB 10 3/3
qnrS qnrS 10 3/3
rmtB rmtB 500 3/3
rmtC rmtC 100 3/3
rmtF rmtF 10 3/3
sim sim 50 3/3
sme sme 10 3/3
spm spm 10 3/3
Staphylococcus aureus SA 10 3/3
sul1 sul1 1000 3/3
sul2 sul2 100 3/3
sul3 sul3 500 3/3
vanA vanA 10 3/3
vanB vanB 250 3/3
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

31/36
vim vim 10 3/3
Tabelul 13: Reproductibilitatea cipului de debit direct MDR în HS12a. Rezultatele au fost analizate automat cu hybriSoft, stabilind o
valoare limită de pozitivitate de 4.
12.4 Clinic
12.4.1 Identificarea mecanismelor de rezistență cu ajutorul MDR Direct Flow CHIP
Pentru validarea clinică a kitului MDR Direct Flow Chip, a fost efectuat un studiu retrospectiv cu un total de
70 de izolate clinice (ADN purificat) și 24 de probe clinice (PCR directă) de la Spitalul General Universitario
de Elche, care au inclus microorganisme multidrog rezistente la diferite clase de antibiotice. În plus, a fost
inclus un total de 44 de colonii bacteriene purtătoare de gene de rezistență multiplă de la Hospital
Universitario Virgen del Rocío (Sevilla). Tabelul următor prezintă genele de rezistență detectate în probe și
corelația cu profilurile de sensibilitate la antibiotice (AST) obținute pentru fiecare dintre ele.
Markerii de
Rezistența fenotipică la
rezistență detectați Gene izolate/gene
antibiotice
pe cipul MDR
8 mecA 1 S. epidermidis, 7 S. aureus
2 mecC 2 S. aureus
6 CMY 3 K. pneumoniae, 3 E. coli
5 DHA 2 K. pneumoniae, 2 E. coli, 1 Enterobacter
14 CTX 6 K. pneumoniae, 5 E. coli, 1 P. aeruginosa, Peniciline/Cefalosporine
1 Enterobacter, 1 Proteus
3 SHV-SK 1 K. pneumoniae, 1 E. coli, 1 Providencia
1 SHV-S 1 K. pneumoniae
6 SHV 5 K. pneumoniae, 1 Enterobacter
2 GES 2 P. aeruginosa
3 IMP 2 P. aeruginosa, 1 A. guillouae
6 VIM 3 P. aeruginosa, 3 K. pneumoniae
8 oxa48 5 K. pneumoniae, 1 Enterobacter, 2 E. coli Carbapeneme
5 NDM 1 K. oxytoca, 3 K. pneumoniae, 1
5 KPC Enterobacter
5 K. oxytoca
2 mef 1 S. maltophilia, 1 Providencia
3 ermA 3 S. aureus
2 ermB 2 Enterococcus Macrolide
2 ermC 1 S. aureus, 1 A. guillouae
6 msrA 6 S. aureus
23 aac (6')-Ib 5 P. aeruginosa, 9 K. pneumoniae, 5 E. coli,
3 Enterobacter, 1 K. oxytoca
Aminoglicozide
1 brațA 1 K. pneumoniae
1 rmtC 1 Enterobacter
32 sul1 16 E. coli, 11 P. aeruginosa, 2 Enterobacter,
3 K. pneumoniae
20 sul2 1 P. aeruginosa, 8 E. coli, 1 Proteus, 9 K. Sulfonamide
pneumoniae, 1 Enterobacter
6 sul3 6 E. coli
8 qnrS 4 K. pneumoniae, 3 E. coli, 1 P. aeruginosa
7 K. pneumoniae, 7 E. coli, 3 P. aeruginosa, Chinolone

20 qnrB 1 S. aureus, 1 S. epidermidis, 1 K. oxytoca
2 E. coli
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23
32/36
2 gyrA-S83L 15 E. coli
15 gyrA-S83LD87N 13 P. aeruginosa
13 gyrA-T83I 5 P. aeruginosa
5 gyrA-D87N 5 K. pneumoniae
5 oqxA/B
3 mcr-1 3 E. coli
Colistin
1 mcr-2 1 E. coli
1 vanA 1 E. faecium
Vancomicină
1 vanB 1 E. faecium
3 CatB3 2 K. pneumoniae, 1 E. coli Cloramfenicol
Tabelul 14: Genele de rezistență la antibiotice identificate cu ajutorul kitului MDR Direct Flow Chip.
Markerii de rezistență detectați pot explica profilul fenotipic al bacteriilor rezistente la antibiotice în 90%
din cazuri. În plus, au fost obținute rezultate preliminare care arată o performanță corectă a testului în PCR
directă din probe clinice fără a fi necesară extragerea ADN-ului, cum ar fi hemoculturile și exsudatele rectale
și/sau nazale.
13 LIMITĂRI
Utilizarea de probe necorespunzătoare: metoda a fost validată cu probe directe din exudate rectale,
exudate/aspirate nazofaringiene, hemoculturi, colonii bacteriene și material genetic purificat din exudate
rectale (a se vedea secțiunea 7). Analiza oricărui alt tip de specimen care nu este indicat poate duce la
rezultate greșite sau neconcludente din cauza inhibării reacției PCR de către agenții chimici inhibitori.
14 DEPANARE
Problema Potențial Soluții
Eroare în protocolul de hibridizare Verificați dacă toți reactivii de hibridizare au
fost adăugați în ordinea corectă (platformă
manuală). Verificați funcționarea hybriSpot
(platformă automată).
Repetați testul.
Nu se observă niciun Reactivii de hibridizare au expirat sau
semnal/ Nu există niciun nu au fost depozitați corespunzător Verificați data de expirare și condițiile de
semnal de hibridizare depozitare a reactivilor și a cipurilor. Repetați
Posibila degradare a ADN-ului de pe testul.
cipuri în timpul procesului de
decontaminare a suprafețelor și a Curățați cu multă apă distilată camerele de
materialului. reacție. Repetați testul.
Probleme de contaminare în zonele Decontaminați (1% înălbitor) zonele de lucru

Prezența rezistenței în
pre-PCR sau post-PCR. și repetați testul.
controlul negativ
Probleme în amplificarea prin PCR. Verificați dacă programul termociclorului este

cel adecvat, dacă amestecul master PCR a fost
Nici un semnal de control
pregătit corespunzător și dacă reactivii PCR
de amplificare exogenă
sunt depozitați corect. Repetați testul.
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

33/36
Prezența inhibitorilor PCR în proba de În cazul în care proba de plecare corespunde
test. unei diluții 1:100 a unei suspensii de exsudat
rectal, purificați ADN-ul cu oricare dintre
sistemele de extracție validate (a se vedea
pregătirea probei în secțiunea 7).
Cantitate insuficientă de ADN uman în Se repetă PCR prin creșterea cantității de

proba de test. probă inițială sau prin reducerea diluției
inițiale a probei. În orice caz, pentru
exsudatele rectale, nu se utilizează diluții mai
Nici un semnal de control mici de 1:40.
al amplificării endogene
Prezența inhibitorilor PCR în proba de Se verifică dacă sistemul de extracție a
test. materialului genetic utilizat funcționează
corect , inclusiv un control al extracției.
Reactivi PCR și/sau expirați sau Verificați data de expirare a reactivilor,

depozitați necorespunzător. depozitarea amestecului PCR și a reactivilor.
Eroare în protocolul de hibridizare. Verificați temperaturile și timpii de

hibridizare și verificați funcționarea
echipamentului hybriSoft.
Produsul PCR nu a fost denaturat
corect înainte de hibridizare. Se verifică dacă denaturarea a fost efectuată
Semnale slabe în
corect. Repetați testul.
hibridizare
Volum de probă incorect utilizat pentru
a repune în suspensie produsul Repetați testul utilizând volumul corect de
liofilizat. probă.
Inhibarea parțială a PCR.

Diluați proba în timpul prelucrării sau al
extracției ADN. Verificați funcționarea
corectă a sistemului de extracție a acizilor
nucleici utilizat.
15 BIBLIOGRAFIE
 Ariffin N, Hasan H, Ramli N, Ibrahim NR, Taib F, et al. (2012) Compararea rezistenței antimicrobiene
în unitățile de terapie intensivă neonatală și pentru adulți într-un spital universitar terțiar. Am J
Infect Control; 40: 572-575
 Burke JP (2003). Controlul infecțiilor - o problemă pentru siguranța pacienților. N Engl J Med; 348: 651-656.
 Boucher HWW, Talbot GH, Bradley JS, Edwards JE, Gilbert D, et al. (2009) Insecte rele, fără
medicamente: fără ESKAPE! O actualizare din partea Societății de Boli Infecțioase din America. Clin
Infect Dis; 48: 1-12
 Spangler R, Goddard NL, Thaler DS (2009). Optimizarea concentrației de polimerază Taq pentru
îmbunătățirea raportului semnal/zgomot în detectarea pe scară largă a bacteriilor cu abundență
redusă PLoS ONE; 4: e7010
 Benjamin AE, Sebastian GB Amyes (2014). OXA B-Lactamaze. Clinical Microbiology Reviews; 27:
241-263
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23
34/36
 Martínez-Martínez L, și González-López J.J. (2014). Carbapenemazele în Enterobacteriaceae:
Tipuri și epidemiologie moleculară. Enferm Infecc Microbiol Clin; 32 (supl 4): 4-9
 Chaves, J, Ladona, MG, Segura, C et al. (2001). SHV-1 β-lactamază este în principal o enzimă
specifică speciei codificată cromozomal la Klebsiella pneumoniae. Antimicrobial Agents and
Chemotherapy; 45, 2856-61.
 Bradford, PA (2001). Beta-lactamazele cu spectru extins în secolul XXI: caracterizarea,
epidemiologia și detectarea acestei importante amenințări de rezistență. Clinical Microbiology
Reviews; 14, 933-51.
 Shu Xia1, Xin Fan2, Zengguang Huang1, Liang Xia3, Meng Xiao2, Rongchang Chen1, Yingchun Xu2*,
Chao Zhuo1 (2014). Dominanța Escherichia coli producătoare de b-lactamază cu spectru extins
(ESBL) de tip CTX-M izolată de la pacienți cu infecții apărute în comunitate și în spital în China.
PLOS ONE; 9: e100707
16 SIMBOLURI DE ETICHETE ȘI CUTII
Dispozitiv medical de diagnosticare in Data expirării

vitro
Număr de catalog Limita de temperatură
Cod lot Producător
Consultați instrucțiunile de utilizare Conținut suficient pentru <n> teste
Fișă de date de securitate
17 GLOSAR
ADN: acid dezoxiribonucleic
PCR: reacție în lanț a polimerazei
HS12: hybriSpot 12 (platformă manuală)
HS24: hybriSpot 24 (platformă automată)
NBT-BCIP: nitro-albastru de tetrazoliu și 5-bromo-4-cloro-3-indolifosfat
MgCl2 : clorură de magneziu
dNTPs: drifosfați de deoxinucleotide
DNaze: deoxiribonucleaze
RNaze: ribonucleaze
dUTP: trifosfat de deoxiuridină
CDC: Centrul pentru Controlul și Prevenirea Bolilor din SUA
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

35/36
18 JURNAL DE MODIFICĂRI
Data Descriere
2021/08/03 Crearea documentului.
2022/01/07 Temperatura camerei este modificată în secțiunea 5.
2022/02/17 Referința MAD-DDW este inclusă în secțiunea 3 "Componente".
- Secțiunea 1 "Utilizare preconizată" se modifică (se face referire la detecția calitativă și la faptul că
kitul se bazează pe PCR multiplex).
2022/03/31
- Specificitatea pentru blaDHA este inclusă în tabelul 11.
- Specificitatea și IC 95% sunt modificate pentru ges în tabelul 11.
2022/06/23 În tabelul 8 a fost corectată o greșeală de scriere.
Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

36/36

MAD-003946M MDR Direct Flow Chip Kit en 2022-06-23-Traducere Autorizata

Încărcat de

Informații document

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

MAD-003946M MDR Direct Flow Chip Kit en 2022-06-23-Traducere Autorizata

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Kitul MDR Direct Flow

Detectarea agenților patogeni

pentru platformele manuale și automate hybriSpot

Compatibil cu versiunile hybriSoft HSHS 2.02.00.R09.01 și versiunile ulterioare.

Ref. MAD-003946M-HS12 24 determinări

Numai pentru utilizare în diagnosticare in vitro

Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

Testele se efectuează direct pe exsudate rectale, exsudate/aspirate nazofaringiene și/sau hemoculturi la

Determinant genetic Rezistența asociată la antibiotice

Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

Starea microbiologică: Produs nesteril.

KIT/COMPONENTE FORMAT REFERINȚE

4 MATERIALE SUPLIMENTARE NECESARE CARE NU SUNT FURNIZATE ȘI MATERIALE OPȚIONALE

4.1 Reactivi și materiale

B. Reactivi specifici (Auto, ref: MAD-003946M-HS24):

4.3 Material suplimentar opțional

5 CONDIȚII DE DEPOZITARE ȘI STABILITATE

 Citiți instrucțiunile de utilizare înainte de a utiliza acest produs.

Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

DEȘEURI POTENȚIALE GENERATE COD

Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

7.1 Exudate rectale

 NucliSENS® easyMag® (bioMérieux S.A.)

7.2 Exudate/aspirate nazofaringiene

În cazul în care se prelucrează tampoane cu mediu de transport, se recomandă să se agite tampoanele

Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

7.5 Colonii bacteriene

Exsudatele rectale, exsudatele/aspiratele nazofaringiene și hemoculturile trebuie tratate ca agenți infecțioși

7.6 Protocoale pentru prelucrarea probelor cu mediu de transport și diluție (TDM)

Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

1. Se introduce tamponul în una dintre fiolele cu 900 µl de mediu TDM.

1. Se prelevează o cantitate mică de colonie cu un mâner steril.

Tabelul 5. Protocoale de prelucrare a probelor cu reactivul de diluție și transport TDM.

8.1 Reacție de amplificare multiplexă a ADN-ului

PROGRAMUL DE AMPLIFICARE ÎN TERMOCICLOR

1 ciclu 25°C 10 min

8.2 Hibridizare inversă în flux

A. Pentru kitul MDR Direct Flow Chip (manual, ref: MAD-003946M-HS12):

Procesul complet de hibridizare se realizează în mod semi-automat în hybriSpot (HS12), urmând

Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

a) Se adaugă 300 µl de reactiv A (soluție de hibridizare) preîncălzit la 46 °C și se incubează timp de

Înainte de a începe procesul de hibridizare, efectuați următorii pași:

9 PROCEDURA DE ANALIZĂ PENTRU PLATFORMA HS12 PCR AUTO

10 PROCEDURA DE CONTROL AL CALITĂȚII

Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

A B msrA catB3 ndm mcr1 rmtB qnrB nmc/imi B

M B cfr spm Paer armA qnrA sme oxa48_like

"B": controlul hibridizării

Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

Imagine indisponibilă/Imagine necorespunzătoare/Error -- -- -- -- -- -- --

Alte rezultate posibile:

12.1 Performanță analitică în hybriSpot 12 (HS12)

Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

12.1.3 Sensibilitatea analitică

Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

Nr. exemplare/ Pozitiv/ CI CI

Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23

Vitro S.A. Rev.: 2022-06-23