Lucrlri practice dc fiziologic-simulator-

8. APARATUL DIGESTTV

Ohiectiye:
L Dctnonstrarea specificitdfiide substrat a amilazei salirare.
2. Eviden[icrca rolului bilei in asigurarea unei activitSfi optinrc a

pH-ului dc reaclie asupra chcacit5lii

8.1. Specificitatca dc substrat a amilazei salivare

Enzimele. in calitatea lor de biocatalizatori. sunt caracterizate de aga
numita specificitate de substrat. Aceasta proprietate rezidi in capacitatea
enzimelor de a identifica qi acliona asupra unui singur substrat (specificitate
absolutd de substrat) sau asupra 2-3 substraturi cu structuri chimlca
aseminAtoare (speci fici tate relativa de substrat).
.4nilaza salit,ara este o enzimi glicoliticl al clrei substrat specific este
reprezentat de amidon qi glicogen. Amilazr salivara zue drept activator
enzimatic ionul de Cl' . aclionind in condi{ii optime la o lemperatura de 37oC-
38'C gi un pH ugoralcalin (7.5-8).
hin c ipiu I I u cr dr ii p r a cti ce :
Se pune in conlact alrnila'za salivara cu trei substanle de natura glucidica
cu structuri diferite. eviden{iindu-se. prin realizarea reac{iei Troulner de
identificare a ozelor reducitoare (culoarea roSie-cdrdmizie la finele reacfiei).
faptul ca nurnai una dintre acestea este descornpusa de aceastd enzimi.
Modul de lucru:
Cadrul experimental (fig. 8. I
l. Instalaf ie de ternlostatare la la 38"C.
2. Epnrbeti.
3. Flacoane cu diferite substraturi glucrdicc (zzlmi'oz-d. amidon. celuloz-d)
J. Flacoane cu reactili necesari realizirii testului'lrommer.
5. Flacon cu amilizi salirar6.
6. Bec cu gaz.
.-llgoritm cle lucnt:
Se pune in tubul de reaclic zaharoz't 1- amilaza salilara.
Sc aclioneaz;i bLrtonul 'START' al instalalici dc inciilzirc cu tcnlroslzlt.
Dupa pcrioada dc incubarc sc adaugzi c:rter a picirturi dc hidrorittr tlc sotliu
{. Sc adauga apoi in tubul dc rcac[ic sulfut dc cupru l0%,
5. Sc aclioncazii butonul 'INCALZIRE PROBA'. llcrbindu-sc conlinutul
epnrbetei.
6. Sc analizeaza criloarea rczultata.
 78 Gl.Cotor Lucrirri practice dc fiziologie-simulator-

lipazci pancreaiice este favorizata in mod substanlial de bila (prodtts de excrefie

a hcatului) care. prin capacitdlile sale tensioactive. mileqle conr;iderabil frontul
de acliune al acestei enzime. ehcientiz-Atrdu-i activitatea.
Principiul lu cr firii p r actice :
Se introduc intubul de reactie gi se mentin la 38o C" lipazi
pancreatica+ulei vegetal in prezenta qi in lipsa bilei. La sfhrqitul determintrrii se
iutroduce in Lubul de reac[ie fenolftaleind (indicator de pH. cale in condifii de
alcalinitatea urediului se coloreazi in rogu)" obsenAndu-se ca mediul se
acidifica intens (apar' gi se disperseazd in acesta acizi graqi, produqi ai
descompunerii enzimatice a trigliceridelor) doar in tubul de reactrie in care s-a
introdus gi bila.
Modul de lucru:
C adrtt i experi me ntal (fig. 8. 2. ):
L Instala[ie de termostatare Ia 38"C.
2. Eprubet5.
3. Flacoane cu ulei \egetal. bil5, lipaz{ prancreaticd Ei fenolftalein{.

Specificitatea de substrat a arnilazei salivare-Cadrut eiperinientat

Care este rezultatul testului Trornmer'J

7. Se ac[ioneazd butonul'RELUARE E}C,ERIMENT'

8. Se pture in tubul de reacfie amidon* amilaza salivara. r,epetAndu-sc
acf iunile de la punctel
2.3. 1.5. 6 gi 7.
e
Care este rezultatul testului Trommer in caz_ul foiosirii ca substrat a
amidonului? '
9. Se pune in tubul de reacfie celuloza*amilaza salivara. r,:petan&r-se
ac{iunile de la punctele 2. 3, { .5. 6 qi 7
Care este rezultatul testului Trornmer in cazul folosirii ca substrat a celulo;lei?

Care esle substratul specific al amilazei salir.are?

Fig.8 2. Er-idenfierca ac{iunii lipazei pancreatice in condiliile prezentci sau

absentei bilei-Cadnrl esperirnenlal
8.2. Evidcnticrea acf iunii lipazci plnt:rcaticc in conditiilc prczenlci sau
nbscnlci bilci .-llgoritu de ltcru:
I-ipazo pat?creatica cste o cnziura lipolitica al cirei subsrrat specific il t. Se pune in tubul de reacqie ulei vegetal+bila+lipaza pancreartica.
estc reprc/,entat de tfigliceride. pc carc lc dcscompune in glicerol qi acizi graqi. ;i z. Se ac[ioncazi bulonul 'START' al instalaliei de termc,statare.
Tcrnperatura optima la care lipaza pancreatica i$i desflrgoara actir.itatea 3. Dup{ epuizarea perioadei de incubare se adaug5 in tubul de reaclie
cslc de 37o-38o C. iar pH-ul optinr dc ac{iunc cstc usor alcalin. Activitatea
 G.Cotor
8(| Lucrlri ;lractice de fiziologie-simulator- 8l

I'enol{taleinI.
-1. Se analizeaz^i culoarea rezultata. 2. Eprubeta conliniind or,albumini solidificatd.
Cr: prH indicd culoarea tnediului de rcaclic? -3. Flacoane cu pepsind. acid clorhidric gi apa distilati.
.-tlgoritm de lucru:
Cum se explica acest PH? L ovalbumina din tubul de reacfie pepsina+acid crorhidr"ic
Se adaug.I peste
2. Se ac[ioncaza butonul 'START' al instala{iei de termostarare.
3. Se Lulriregte gradul de digerare a proteinei.
t l**"e"tte" gi tt
'ePttu
acfiunil: de la Punctele 2. 3 qi '1.
Cr: pH indicl culoarea mediului de reac{ie?

Cum se explica acest PH?

apol
A-S; " Pa"ct*utica' rePetdndu-se
acfiunile de la punctele 2. 3 9i {.
Cr: pH indictr culoarea rnediului de reaclie?

Curn se explici acest PH?

8.3. Infltrenta pH-ului asupra acliunii pe;lsinei

pepsiia este o enzirna proteolitica sintetizata sub fornm de pcpsinogen
inaL'tiv rle cdtre celulele principale ale giandelor gasuicc'
pepsinogenul este transionnat in pepsina acti'a in prezenta unui pH tnai Fig.8.3 lnfluenta pFl-ului asuprzr ac(iunii pcpsinei-Cadnrt experiiiieni-al
mic de 5. asigurat in cadrul su0ului gastric dc acidul clorhidric, Pepsina
intrl in
cartegoria enlopeptidazelor gi lidrolizeaza proteinele in lan{uri polipeptidice. Ce.se int6mpltr cu ovalburnina din cprubeta'l
avand un pH optim de acfiune situat injurul valorii de 2"
hincipiu I lu crdrii P ru dic e :
lncubarea la 38o C . tirnp de 3 ore a o'albuminei impreuna ctl pepsina
in {. Se adaugi pest. ,iliUum-ina ai,r se
gtadul de digerare a repeta acfiunile de la punctele l" 2 qi 3.
pre,lenta qi in absenta acidului clorhidric. eYalufrndu-se
albumina)' Ce se int6mpla cu ovalburnina din eprubetd'2
proteine,i (sclderea dirnensiunii fragrnenteior de or
Modul de lucru:
Cadrul exPerintetrtal (fig 8.3 ):
izttt:i Cum se explici accst lucru'J
I . lnstala{ic dc tcrtrtostatarc Ia Ia iti'-C- prcr cLt ccas'

-i lie aclaugi pi's** i,vrltiuffi,r arn r,,u,ri a.a-r.',"trc'cid ir,r.hid,'i.'+rr!;;

tlistilata gi sc rcpcta acliurrilc dc la punctclc I. 2 ;i .-i.
Ce sc inlAmpl:i cu ovalburnina din epmbctzi'.,
Cunr sc e.rplici acest lucru'J