Proiect tiinific de cercetare

Titlul proiectului: Contributii in formularea si

optimizarea microsferelor cu ketoprofen
Nume:
Facultatea de Farmacie

Expunerea problemei
Microincapsularea este una dintre cele mai noi metode de formulare a
produselor medicamentoase cu eliberare intarziata, contribuind la
minimizarea efectelor adverse si astfel imbunatatind complianta
pacientilor.
Aceasta procedura este realizata prin invelirea particulelor
medicamentoase intr-un polimer ce prezinta proprietati specifice de
eliberare a substantei active, apoi capsulele nou create sunt dozate si
incorporata (de cele mai multe ori) intr-o capsula gelatinoasa tare.
Ketoprofenul este un anti-inflamator nesteroidian cu efect analgezic
marcat si cu efect antiartritic, fiinnd utilizat in mai multe afectiuni
reumatismale, dar intrucat metabolizarea acestuia in organism este
rapida, administrarea frecventa este necesara, fapt ce duce la complianta
scazuta a pacientilor si la fluctuatii ale concentratiei plasmatice
Se pune problema imbunatatirii eliberarii intarziate a ketoprofenului prin
formularea unor preparate prin tehnica microincapsularii.

Prezentarea general a proiectului

Scopul lucrarii: formularea unor preparate cu ketoprofen folosind tehnica
microincapsularii si evaluarea proprietatilor fizico-chimice si a activitatii
analgezice, anti-inflamatoare si a toxicitatii acute.
Formele farmaceutice au fost caracterizate prin morfologia suprafetei
microsferelor, prin marimea microsferelor si prin continutul de substanta
activa.
Toxicitatea, activitatea anti-inflamatoare si activitatea analgezica au fost
evaluate pe sobolani albinosi, rasa Wistar.

Principalele aspecte analizate in

timpul cercetarii:
Morfologia suprafetei microcapsulelor
Proprietatile micrometrice ale microcasulelor
Continutul substantei active
Studiul dizolvarii in vitro
Studiul toxicitatii acute
Evaluarea activitatii anti-inflamatorii

Variabile
Variabile controlate: umiditate, lumina, aparatura de
laborator, reactivi utilizati.
Variabile independente: ratia de ketoprofem:polimer
utilizata la microincapsulare; rata de amestecare.
Variabil/variabile dependent/e: Incapsularea substantei
active. Eliberarea substantei active in vitro.

Ipotez

Preparatul cu ketoprofen formulat utilizand

tehnica microincapsularii prezinta un profil
farmacocinetic optim.

Materiale si Metode

Carboximetilceluloza sodica
Cloroform;
Etil celuloza;
Ketoprofen;
Metanol;
Potentiometru ;
Tampon fosfat 0.1 M;
Solutie standard HCl 0.1 M;
Sistem electronic de calcul.
Spectrofotometru, agitator mecanic, aparatura de laborator, animale de
laborator, microscop electronic.

Materiale si metode

1) Designul experimental al microsferelor etil

celulozice umplute cu ketoprofen
Ketoprofenul si etilceluloza au fost dizolvate
intr-un amestec de diclormetan si cloroform
(2:3). Solutia rezultata a fost adaugata la 200
ml de carboximetilceluloza sodica 0.5% si au
fost agitate la viteze diferite. Agitarea a avut
loc pana cand tot solventul organic s-a
evaporat, rezultand microsfere. Produsul,
apoi, a fost colectat prin filtrarea la vid si apoi
a fost spalat cu aa de 3 ori si uscat la aer.
9 sarje de microsfere au fost preparate, avand
desemnate litera F, urmata de numarul sarjei.

Materiale si metode
2) Evaluarea microsferelor
Am studiat morfologia suprafetei
microsferelor prin invelirea in aur la
voltaj inalt (800-1500V), prin procedura
inveliri iionice. Probele au fost analizate
la microscopul electronic.
Marimea particulelor a fost determinata cu
ajutorul microscopului optic, iar
continutul de substanta activa a fost
determinat spectrofotometric la 260.5
nm in urma dizolvarii mcrocapsulelor in
metanol 75%.

Materiale si metode
3) Studiul dizolvarii in vitro
Acest studiu a utilizat un aparat de
dizolvare de tip USP XXIII. Mediul de
dizolvare a fost constituit din 900 ml
tampon fosfat cu pH 7.4, mentinut la
temperatura de 47 grade Celsius si 100
rotatii/minut. Probele au fost retrase la
intervale fixe de timp si determinarea
eliberarii substantei active s-a facut
spectrofotometric la 260 nm.

Materiale si metode
4) Studiul toxicitatii acute
Acest studiu a fost efectuat pe sobolani albinosi din
rasa Wistar de sex feminin, avand o greutate de
170-190 .
Animalele au fost mentinute in repaus alimentar in
timpul noptii, administrandu-se dimineata, pe cale
orala o doza de 5 mg/kg de ketoprofen sub forma
microcapsulelor. Acestia au fost observati timp de
7 zile, dozele fiind progresiv crescute pana la 300
mg/kg corp. In a 8-a zi, sobolanii au fost sacrificati,
sangele fiind analizat pentru scanare.
Tesutul acestora a fost prelevat pentru studii
histopatologice

Materiale si metode
5) Evaluarea activitatii anti-inflamatoare
Studiul a fost efectuat pe aceeasi rasa de sobolani, acestia
fiind impartiti in 3 grupuri, fiecare grup avand 6 sobolani.
S-a utilizat metoda inducerii edemului in de tip
Carrrageenan.
Primului grup i-a fost administrata o solutie salina oral;
Al 2-lea grup a primit 9mg/kg corp solutie standard
ketoprofen pe clae orala
Al 3-lea grup a fost tratat cu microcapsule pe cale orala.
Dupa 30 de minute, 0.05 ml solutie carrageenan a fost
injectata in regiunea sub-plantara a labei stangi pentru
grupurile tratate, cat si pentru cel de control.
Volumul labelor a fost verificat la intervale de 15, 30, 60,
120, 180, 240, 300 si 360 minute.

Rezultate si discutii
1) Formularea preparatelor microincapsulate si dizolvarea in vitro
S-au obtinut de 9 sarje notate cu F. Acestea au fost formulate utilizand
proportiile inscrise in tabelul de mai jos. De asemenea, s-a inscris in
tabel continutul fiecarei sarje de substanta activa si procentajul de
substanta activa eliberata in 12 ore. In urma analizarii rezultatelor a
fost selectata o formulare optima (F8) cu o ratie de stubstnta activa la
polimer de 1:2.13, aceasta fiind desemnata cu numele KEC1. Aceasta,
mai apoi a fost supusa testelor morfologice, farmacocinetice si
farmacotoxicologice.
Formularea F8 a fost selectata intrucat a prezentat atat incorporarea
optima de substanta activa cat si eliberarea unei cantitati bune a
acesteia in 12 ore.
Se poate observa faptul ca ratia de substanta activa : polimer afecteaza
drastic cantitatea de substanta activa incorporabila dar si cantitatea de
substanta medicamentoasa eliberata de catre microcapsule.

Rezultate si discutii
Codul sarjei Variabile

Parametrii de raspuns

Ratia de
substanta
activapolimer (g)

Rotatii/minut

%Continut
substanta
activa

% Eliberare
substanta
activa in 12
ore

F1

1:4.62

1250

81

63

F2

1:2.50

1250

71

92

F3

1:2.55

189.34

55

90

F4

1:1.00

2000

53.1

94

F5

1:2.56

2310.66

77

91

F6

1:4.00

2000

82

64

F7

1:0.38

1250

43

101

F8

1:2.13

1500

75

96.55

F9

1:4.45

500

62

60

Rezultate si discutii
In ceea ce priveste analizarea dizolvarii si
eliberarii substantei active in vitro a
microcapsulelor, graficul urmator prezinta
profilul de dizolvare si eliberare pentru
formularea KEC 1

Rezultate si discutii
2) In urma analizarii la microscopul
electronic s-a observat uniformitatea
suprafetei microcapsulelor formularii
KEC 1.

Rezultate si discutii
3) In urma corelarii rezultatelor activitatii
toxice acute ale formularii KEC 1
rezultatele nu sugereaza diferente in
ceea ce priveste activitatea toxica acuta
a formularii KEC 1 fata de ketoprofen
standard.

Rezultate si discutii
4) Activitatea anti-inflamatoare a formularii KEC
1 a fost comparata cu cea a ketoprofenului
standard fiind obtinute urmatoarele rezultate:
Grupurile
tratate

Doza
administrata
(mg/kg)

Volumul mediu
al labei dupa 6
ore

% inhibitia
edemului labei
dupa 6 ore

Control (solutie
salina)

10 mg/kg

0.57

--

Ketoprofen
Standard

9.0

0.14

75.4

Se poate observa ca in ciuda unei diferente de

KEC 1
9.0
0.19
66.6
8.8% in inhibitia edemului, formularea KEC 1
prezinta rezultate optime in ceea ce priveste
activitatea anti-inflamatoare.

Alte studii
Un studiu condus de catre Wael A.
Abdelhafez si Khaled I. Saleh, ce a avut ca
scop formularea si evaluarea microcapsulelor
ce contin ketoprofen folosind acetatul de
celuloza a obtinut urmatoarele rezultate :

In urma obervarii la microscopul electronic,

microcapsulele prezinta suprafata neteda si
regulata.

Alte studii
Din punct de vedere al eliberarii substantei
active in vitro, autorii studiului au
constatat diferenta intre profilele de
eliberare in functie de ratia de substanta
activa la polimer folosita. Se poate observa
din graficele respective ca eliberarea este
pH dependenta si ca are loc predominant
in mediu alcalin, indiferent de tipul
formularii.
Ambele formulari au fost efectuate folosind
tehnica evaporarii solventului, acesta fiind
acetona.

Alte studii

Graficul de mai sus reprezinta profilul eliberarii unei formulari ce

contine substanta activa: polimer in proportie de 1:2
Graficul de mai jos reprezinta profilul eliberarii unei formulari ce
contine substanta activa:polimer in raport de 1:1

Concluzii
Tehnica microincapsularii folosind evaporarea
solventului se preteaza formularii microcapsulelor cu
ketoprofen de calitate inalta. Microsferele incapsulate
in metilceluloza prezinta un profil de eliberare bun si
formularea poate prezenta aplicatii clinice.
Atat ratia de substanta activa la polimer cat si rata de
amestecare a acestuia constituie factori importanti in
obtinerea unor microcapsule cu proprietati
farmacodinamice optime.
Profilul farmacotoxicologic nu a fost afectat de
microincapsulare.

Contributie personala
Am analizat datele obtinute din
referintele bibliografice.
Am corelat datele analizate si le-am
tradus in limba romana.
Am comparat studiile prezente in
bibliografie si am formulat concluziile
desprinse din compararea acestora.

Bibliografie
1. . Chowdary KPR, Madhavi BLR, A comparative evaluation of olibanum
resin, ethylcellulose and ethylene vinyl acetate coated microcapsules of
indomethacin for controlled release, The Pharma review, 2006
2. Perumal D, Dangor CM, Alcock RS, Hurbons N, Effect of formulation
variables on in- vitro drug release and Micromeritic properties of modified
release ibuprofen microspheres, J.Microencap, 1996;
3. Obeidat WM, Price JC, Preparations and evaluation of Eudragit S 100
microspheres as pH sensitive release preparation for piroxicam and
theophylline using the emulsion solvent evaporation method, J.Microencap,
2006;
4. R.Deveswaran, R.Manavalan, V.Madhavan, S.Bharath, Formulation and
Optimization of Ketoprofen Microspheres using Response Surface
Methodology, International Journal of PharmTech Research 2010
5. Roda A, Sabatini L, Mirasoli M, Baraldini M, Roda E, Bioavailability of a
new ketoprofen formulation for once daily oral administration, Int.J.Pharm,
2002;
ICH guidelines, Q1A(R2), 21 November 2003;
6. Wael A. Abdelhafez and Khaled I. Saleh, Formulation and evaluation of
ketoprofen
Cellulose acetate microcapsules, Bull. Pharm. Sci 2008
7. http://en.wikipedia.org/wiki/Micro-encapsulation