Bioelectrogeneza i activitatea electric a celulelor esuturilor Bioelectrogeneza, adic generarea de electricitate de ctre materia vie este un proces permanent,

asociat materiei vii. Dispariia acestui fenomen conduce la lipsa transportului de materie i energie n lumea vie deci la moartea celulara i tisular. Fenomenul de bioelectrogenez const n meninerea unei polariti electrice transmembranare, fie la schimbarea tranzitorie a acestei stri electrice ca urmare a aciunii unor stimuli din mediul extern sau intern, modificare ce se poate propaga la distan. Potenialul membranar de repaus celular (electric) Prezena n citosol i n lichidul extracelular a ionilor atomici sau moleculari difuzibili i transferabili prin membrane, a macroionilor netransferabili prin membran precum i a unei activiti metabolice susinute pentru transportul ionilor mpotriva gradienilor electrochimici (cercetate la transport activ) fac ca fenomenele electrice s fie proprii celulelor vii animale i vegetale. Din punct de vedere electric transportorul de sarcin electric o constituie microionii. Asimetria ionic de o parte i de alta a membranei creeaz o asimetrie electric. Denumirea de repaus dat acestor poteniale de membrane se refer la existena unui potenial transmembranar constant a crui valoare depinde de natura celulei i de gradul de normalitate a strii celulare. Valoarea acestor poteniale se poate msura cu ajutorul microelectrozilor sau macroelectrozilor i se poate calcula cu ajutorul formulei de tip Goldman Hodgkin Katz. n general la celulele excitabile valoarea potenialelor de repaos depete 50mV dar nu sunt mai mari de 90 100mV. Condiiile de echilibru La stabilirea echilibrului de membran intervin o serie de factori, caracteristici membranei i a mediilor disperse pe care le separ membrana. a) organismul uman include aproximativ (60 70 %) ap structurat diferit. Acesta este mediul solvent n care avem sisteme disperse polifazice de cristaloizi sub form ionizat (Na+, K+, ClCa++, Mg++ etc.) molecule mici i molecule amfatere (n general anioni la Ph-ul fiziologic); b) mediul intracelular cuprinde i ioni, de tipul anioni proteici nedifuzibili prin membrana celular ceea ce impune o diferen de potenial ntre cele dou fee ale membranei i o repartiie C2 RT V1 - V2 = log C1 nF

inegal a ionilor nedifuzibili dat de relaia lui Nernst

c) Membranele biologice au o permeabilitate diferit pentru diversele specii ionice. n aceast situaie, ionul care difuzeaz mai uor determin apariia unui gradient electric, care va accelera difuzia ionului de semn opus astfel c la echilibru (egalitatea potenialului electrochimic n cele dou compartimente) nu se ajunge la egalitatea concentraiilor i anularea diferenei de potenial. Echilibrul se stabilete n funcie de permeabilitatea membranei pentru fiecare ion. Deci la echilibru avem gradiente de concentraie diferite pentru acelai ion de o parte i de alta a membranei, genernd gradient electric. d) Transportul activ impune un raport bine determinat al concentraiilor meninnd diferena de potenial electric. e) Acest transport activ, prin procese cuplate de transport diferit de ioni ndeprteaz echilibrul termodinamic plasndu-l ntr-o stare staionar. f) Gradienii diferii de concentraie, presiune osmotic, de potenial determin la un moment dat un transport pasiv prin difuzie i osmoz tinznd la echilibru termodinamic.

Potenialul celular de aciune Apare atunci cnd intensitatea excitantului depete un anumit prag (Stimul supralimitor) Reprezint o depolarizare puternic a membranei, pn la pozitiv. feei interne.

Prepotenialul La nceputul depolarizarea membranei crete lent ca i n cazul potenialului local. Faza ascendent La atingerea unei depolarizri critice se creeaz un proces n avalan (proces cu reacie pozitiv). Na+ ntr n celul determinnd depolarizarea membranei crete permeabilitatea membranei influx mare de Na+; depolarizarea se accentueaz, permeabilitatea crete din nou .a.m.d. Pragul la care se declaneaz potenialul de aciune corespunde depolarizrii la care influxul de Na+ = efluxul de K+, este deci o stare labil de la care sistemul poate evolua n 2 direcii: 1) dac efluxul de K+ depete puin influxul de Na+, sistemul revine, prin reacie negativ, la starea staionar de repaus; 2) n caz contrar, deci la cretere uoar a concentraiei de Na+, apare o reacie pozitiv dat de influxul masiv de Na+ n sensul gadientului electrochimic deosebit de puternic. Transportul activ, mai lent i efluxul de K+ nu pot compensa un influx de Na+ att de rapid. Rezultatul e o depolarizare puternic a membranei, poziionarea ei pn aproape de potenialul de echilibru electro-chimic al Na+, care ns nu e atins. Faza descendent Spre sfritul fazei ascendente scade din nou permeabilitatea pentru Na prin blocarea specific a canalelor datorit noii valori a potenialului membranar. Curentul de

K+ devine preponderent cu att mai mult cu ct crete i permeabilitatea pentru potasiu, care iese masiv din celul contracarnd influxul de sarcini pozitive. Aceste mecanisme determin scderea mai lent a depolarizrii pn la potenialul de repaus i uneori indicnd o uoar hiperpolarizare numit postpotenial datorat efluxului mai puternic de K+.

Schema de principiu a unui dispozitiv de nregistrare a biopotentialului: U R

t (s)

P depolarizea auriculilor QRS depolarizare ventricular T repolarizarea ntregului miocard Milivoltul etalon presupunem c are 8 mm msurm cu grad. de pe hrtie R 12 MM 8 mm ............................. 1 mV 12 mm ............................. x se desfoar depolarizarea ventricular. x = 1,5 mV coresp. unde R.

Viteza de derulare a hrtiei 25 mm/sec la om i 50 mm/sec care este intervalul de timp n care

interv. QRS pp. 2 mm 1 sec..............................25 mm x sec.............................2 mm x = 0,089

interv. ntre 2 unde RT pp. 9 mm 1 sec..............................25 mm x sec.............................9 mm x = 0,36

Concentraiile de Na+ i K+ vor fi restabilite prin transport activ (pompa de Na+ - K+)

gNa

gK

t(ms)

gNa, gk = conductanele canalelor ionice. Evoluia potenialului membranar i a conductanei canalelor ionice in timpul potenialului de aciune. Durata potenialului de aciune e de circa 1 ms din care faza ascendenta nu depete 1/3. Perioada refractar n faza ascendent i n mare parte a fazei descendente a P.A. membrana este insensibil la aplicarea unui nou stimul. Aceast perioad este perioada refractar

absolut spre sfritul fazei descendente i n timpul postpotenialului membrana prezint o excitabilitate sczut perioada refractar relativ dnd un rspuns de amplitudine mai mic. Rspuns repetitiv Dac intensitatea stimulului este mare sau excitaia e de lung durat, membrana neuronal rspunde printr-o succesiune de P.A. Frecvena de repetiie crete cu logaritmul intensitii (vezi Biofizica senzorial legea lui Adrian) i e limitat de perioada refractar. Se vede deci c procesul de declanare a P.A. reprezint o conversie analog discret. Semnalul analog modulat n amplitudine este convertit n semnale discrete modulate n frecven.

Stabilirea potenialului membranar de repaus Din condiia de anulare a curentului (a transportului net) pentru toate speciile ionice, se poate deduce diferena de potenial dintre cele dou fee ale membranei, n funcie de concentraie i de permeabilitate. Se obine relaia Goldman Hodgkin Katz care stabilete polarizarea membranei n repaus (VR). VR = log

P [C ] + P [ A ]
Cj

P [C ] + P [ A ]
Cj j + j i Aj j

+ j e

Aj

j i

j e

n care Cj+ = concentraia cationilor difuzibili Aj- = concentraia anionilor difuzibili PCj = permeabilitatea membranei pentru cationul j PAj = permeabilitatea membranei pentru anionul j j = 1, 2, ...... = nsumarea se face pentru toi ionii difuzibili e i i = desemneaz faa extern, respectiv intern membranei Relaia a fost scris pentru ioni monovaleni. Principalii ioni care intervin n echilibrul membranar sunt Na+ i K+ cuplai cu Cl- . Relaia n acest caz devine: VR = PK K + e + PNa Na + e + PCl Cl i RT log PK K + + PNa Na + i + PCl Cl e F

[ ] [ ]

[ ] [ ]

Pontenialul membranar se poate msura cu electrozi care se introduc n celul.

Concentraia de Na+/ K+ este meninut de pompa de Na+/ K+ compensnd fluxul pasiv al respectivilor ioni. Circuitul echivalent (electric) al membranei celulare Membrana celular se comport din punct de vedere electric ca o reea de rezistene, condensatoare i surse de tensiune electromotoare. Dup cum s-a vzut anterior, concentraia principalilor (Na+, K+, Cl-) este diferit pe cele dou fee ale membranei celulare, diferen meninut prin transport activ ceea ce determin o diferen de potenial pe faa extern i intern. VR = C RT log e nF Ci

Aceast diferen de potenial ntre cele dou fee ale membranei determin un transport pasiv invers fa de transportul activ. Membrana prezint i o rezisten electric R1 ceea ce confer canalelor ionice o conductan de g1 = 1/ R1 . Conductana total a unitii de suprafa a membranei este dat de produsul dintre conductana unui singur canal i numrul canalelor ionice deschise pentru fiecare specie ionic g = g1N Cum se vede conductana membranei definete permeabilitatea acestei membrane. Membrana prezint i o capacitate electric care permite deplasarea unor sarcini (Q) de pe o fa pe alta proporional cu valoarea capacitii i cu viteza de variaie a potenialului (V). Valorile elementelor de circuit sunt date n tabelul de mai jos n care Ie = dQ dV =C (pentru capacitate) dt dt

ENa mV +55

EK mV -75

ECl mV -6/ mV

RNa m 2

RK m 0,1

RCl m 0,22

C F/cm2 1

VR mV -68mV

n care

VR = ENa + INaRNa = EK + IKRK INa = - IK Curentul total It este dat de relaia: curent de transport It= E Na E Cl EK + + RK R Na RCl

la echilibru avem

Conductana total este:

1 1 1 1 = + + Rt R K R Na RCl membrana are rol de condensator ntre armturile sale avnd tensiunea de mebran.

Modelul electric al unei portiuni de membrana excitabila. Transporturile exemplificate se numesc pasive deoarece ele se pot desfura i prin membrane nevii. Ele se desfoar identic conform legilor fizicii.

Echilibrul Donnan Este un caz particular al difuziunii simple cnd ntr-un compartiment avem un ion nedifuzibil. Acest caz este atunci cnd membrana este impermeabil pentru anionii proteici (Prot-) dar permeabil pentru K+, Cl-. De partea ionilor nedifuzibili se obine la echilibru o concentraie mai mare de ioni difuzibili de semn contrar cu cel al ionului nedifuzibil, pe cnd n partea opus membranei avem o concentraie mai mare de ioni difuzibili.

membran interior x celul K+ ClProtK+ ClClx- > Cly-

y-exterior celul

Kx++Clx-+Protx-=Ky++Clyla echilibru

Kx+> Ky+

+ KX + Ky

Cl y

= Cl x

Ionii de Cl- pentru care nu exist pompaj activ se vor distribui n mod pasiv n cele dou compartimente astfel nct s fie respectat echilibrul electro-chimic (difuzia datorit gradientului de potenial e compensat exact de fluxul datorat gradientului de concentraie). nlocuind n relaia Goldmann-Hodgkin-Katz valorile cunoscute (msurate experimental) ale concentraiilor i permeabilitilor principalilor ioni (Na+, K+, Cl-) se obine pentru diferite celule i diferite specii un potenial de repaus de -40 ... 90 mV n bun concordan cu datele experimentale. Micile diferene se datoresc altor ioni care se gsesc n concentraie mic (Mg ++, Ca+ etc) dar care prezint un rol important n funcia celular. Exemplu: Pentru axonul gigant de calmar, permeabilitatea ionic se afl n raportul PK : PNa : PCl = 1 : 0,04 : 0,45 Ionii K+ Na+ ClMediul citoplasmic (mm/l) 400 50 52 Mediul 20 440 560 Potenialul de interstiial (mm/l) echilibru electrochimic (mV) -75 +55 -61

Pentru VR din relaia de mai sus se obine: VR = -61 mV Din relaia lui Nernst pentru fiecare ion se poate calcula potenialul de echilibru electro-chimic: V
+ K

K+ RT = log + K F

+ Na

[ ] = -75 mV [ ] [ Na ] = +55 mV RT = log [ Na ] F

e i + e i +

VCl- =

Cl RT log Cl F

[ ] [ ]

e i

= -61 mV