Grupul

Enterobacterales
LP2
GENUL
Escherichia
Caractere generale:
 bacterii mobile (E. coli inactiv –
imobil)
 fermentează glucoza cu producere
de gaz (a)
 fermentează lactoza – (lactozo +) (b)
c
 produc prompt β – galactozidază, b
 produc indol (c)
 produc lizindecarboxilaza (LDC+) – în
a d
mare parte (d)
 GENUL Escherichia
Caractere generale:
 nu cresc pe medii cu citrat (mediul
Simmons) (a) a b
 utilizează acetatul de Na. (ca unică
sursă de C.) (b)
 nu produc H2S
 nu produc urează
 fenilalanindezaminază (-)
 nu lichefiază gelatina
GENUL Escherichia

7 SPECII:
 E. coli
 E. coli inactiv
 E. fergusonii
 E. hermanii
 E. vulneris
 GENUL Escherichia

Habitat:
 componente ale microbiotei
intestinale a omului şi
animalelor cu sânge cald
 excepţie: E. blattae – izolată
numai la insecte (gândaci de
bucătărie)
 GENUL Escherichia
Patogenitate:
 E. coli – bacteria cel mai frecvent implicată în
patologia infecţioasă modernă

 E. hermanii
 E. fergusonii
 E. vulneris

implicare ocazională în diferite infecţii

E. coli
 enterobacterie condiţionat – patogenă cu
numeroase fenotipuri patogene (patotipuri diareigene
şi uropatogene)
 gene cromosomale,
 reasortarea a variaţi factori de patogenitate prin:
 transfer plasmidic
şi
 conversie lizogenă
Patotipuri diareigene de E. coli
 E. coli - Patotipuri diareigene

1. ETEC – E. coli enterotoxigen

2. EHEC - E. coli enterohemoragic
3. EIEC - E. coli enteroinvaziv
4. EaggEC - E. coli enteroagregativ
5. EPEC - E. coli enteropatogen
6. DAEC - E. coli enteroaderent difuz
E. coli - Patotipuri diareigene

Modalităţile prin care este alterat transportul de

electroliţi la nivelul intestinului pot fi determinate de:
 enterotoxine: ETEC, EHEC, EAggEC
 exotoxine: EHEC
 aderenţa la celulele epiteliale intestinale: EPEC, EHEC,
DAEC
 invazia celulelor epiteliale: EIEC
 combinarea acestor factori
E. coli - Patotipuri diareigene
E. coli - Patotipuri diareigene
E. coli - Patotipuri diareigene
 E. coli - Patotipuri diareigene

• EIEC – are mecanism identic de invazie cu Shigella

• celelalte patotipuri de E. coli au o fază iniţială de
adeziune la epiteliul intestinal, urmată sau nu, de
colonizarea intestinului
 E. coli - Patotipuri diareigene: ETEC

• agentul frecvent al unui sdr. diareic holeriform la copii

în ţările subdezvoltate
• determină “diareea călătorilor”, boală cunoscută la
adulţii din ţările dezvoltate economic care călătoresc în
ariile endemice ale acestui patotip.
Diareea călătorilor
E. coli - Patotipuri diareigene: ETEC
E. coli - Patotipuri diareigene: ETEC
E. coli - Patotipuri diareigene: ETEC
 E. coli - Patotipuri diareigene: ETEC

• Clinic: diaree apoasă, sdr.

holera – like
• Produs patologic: materii
fecale
• Izolare: medii slab –
selective pentru bacilii
Gram – negativi (Levine,
McConkey, Drigalski)
• Identificare biochimică
• Identificare antigenică Mediul Levine:
E. coli: colonii de tip S, lactozo
• Antibiogramă (+), cu aspect metalizat
 E. coli - Patotipuri diareigene: ETEC

Mediul Drigalski: Mediul McConkey:

E. coli: colonii de tip E. coli: colonii de tip
S, lactozo (+), culoare Mediul Hektoen:
S, lactozo (+) E. coli: colonii de tip
roz
S, lactozo (+),
culoare portocalie
 E. coli - Patotipuri diareigene: ETEC

1 2

8 3

7 4

6 5

Mediul Mueller – Hinton: se repică 8 –

10 colonii de E. coli, cu morfologie
identică a coloniilor de pe mediul Levine

Din fiecare sector se vor efectua reacții de aglutinare directă pe lamă cu seruri
polivalente anti-O pentru E. coli, care conțin Ag. O somatice: O6, 8, 12, 15, 20, 25, 27,
63, 78, 80, 85, 92, 128, 148, 153, 159, 167 și apoi se vor folosi seruri monovalente
 E. coli - Patotipuri diareigene :
ETEC
• tipuri antigenice: O6, 8, 12, 15, 20, 25, 27, 63, 78, 80,
85, 92, 128, 148, 153, 159, 167
• numeroase teste pentru evidenţierea enterotoxinelor
şi a enterotoxigenezei, atât LT I, cât şi STa
• imunogenicitatea ridicată a LT I – determină
dezvoltarea metodelor imunoradiometrice,
imunoenzimatice, latexaglutinante şi coaglutinante
• dezvoltarea metodelor ELISA pentru LT I a dus la
abandonarea modelelor in vivo (testul ansei ligaturate
la iepure).
• testul in vivo de patogenitate pentru mecanismul
enterotoxigen: testul ansei ligaturate la iepure
 E. coli - Patotipuri diareigene:
EHEC

• produce, prin conversie lizogenă, toxinele SLT I şi SLT II,

structural asemănătoare toxinei Shiga (de unde şi denumirea
Shiga – like – toxins = SLT)
• după activitatea patogenă asupra celulelor VERO, mai sunt
numite şi VeroToxine (VT).
• toxina SLT II este produsă singură sau în asociere cu SLT I de
97% dintre tulpinile EHEC.
E. coli - Patotipuri diareigene: EHEC
Epidemie EHEC în Germania în
2011
 E. coli - Patotipuri diareigene:
EHEC
• Clinic: diaree sangvinolentă
• Produs patologic: materii
fecale
• Izolare:
• medii slab – selective pentru
bacilii Gram – negativi
(Levine, McConkey, Drigalski);
• mediul selectiv pentru EHEC:
McConkey cu sorbitol: colonii
sorbitol (-)
• Identificare biochimică
Mediul Levine:
• Identificare antigenică E. coli: colonii de tip S, lactozo
• Antibiogramă (+), cu aspect metalizat
E. coli - Patotipuri diareigene: EHEC
Mediul McConkey
cu sorbitol:
EHEC: O157 H7,
colonii de tip S,
sorbitol (-),
transparente

Se vor efectua reacții

de aglutinare directă
pe lamă cu serul
monovalent anti-O și
anti-H pentru E. coli,
care conține Ag. O
somatic O157 și Ag.
H7 (H7+/-); uneori,
sunt implicate
serotipurile: O26,
O111, O104 H4
 E. coli - Patotipuri diareigene:
EHEC

Mediul Drigalski: Mediul McConkey:

E. coli: colonii de tip E. coli: colonii de tip
S, lactozo (+), culoare Mediul Hektoen:
S, lactozo (+) E. coli: colonii de tip
roz
S, lactozo (+),
culoare portocalie
E. coli - Patotipuri diareigene:
EHEC
1 2

8 3

7 4

6 5

Mediul Mueller – Hinton: se repică 8 –

10 colonii de E. coli, cu morfologie
identică a coloniilor de pe mediul Levine

Din fiecare sector se vor efectua reacții de aglutinare directă pe lamă cu serul
monovalent anti-O și anti-H pentru E. coli, care conține Ag. O somatic O157 și Ag. H7
(H7+/-); uneori, sunt implicate serotipurile: O26, O111, O104 H4
Reacţie de latexaglutinare: E. coli
O157H7
 E. coli
Patotipuri diareigene: EHEC

• identificarea:
• încadrarea în serogrupul O157 H7 (H7+/-)
• uneori: O26, O111, O 113, O 128, O104 H4, O 145
• determinarea capacităţii citotoxice asupra celulelor VERO
• determinarea genelor care codifică SLT I şi SLT II
• determinarea genei eae A care codifică intimina (proteina
responsabilă de adeziunea celulară)
 E. coli - Patotipuri diareigene: EIEC

• determină un Sdr. diareic dizenteriform – scaun cu

mucus, puroi și sânge
• capacitatea invazivă a enterocitelor – codificată
plasmidic
• serogrupe O: O28, 29, 112, 124, 136, 143, 144, 152,
164, 167, 173
 E. coli - Patotipuri diareigene: EIEC
• procesul invaziei, ca şi la Shigella, are 4 faze:
• penetrarea EIEC în celulele M din mucoasa colonului
• captate din aceste celule de către macrofage, bacteriile se
eliberează subepitelial şi se ataşează de suprafaţa
bazolaterală a celulei intestinale, care le endocitează
• bacteriile se multiplică activ intra- şi intercelular şi sunt larg
răspândite în submucoasă prin intermediul fagocitelor în
care supravieţuiesc
• moartea celulelor intestinale, ca urmare a blocării sintezei
proteice şi subsecvent a leziunilor citoplasmatice
ireversibile determină ulceraţiile tipice pe fond inflamator
Mecanism enteroinvaziv la
Shigella; mecanism identic la
EIEC
 E. coli - Patotipuri diareigene: EIEC
• Clinic: diaree muco-
sangvinolentă, sdr.
dizenteriform
• Produs patologic: materii
fecale
• Izolare: medii slab –
selective pentru bacilii
Gram – negativi (Levine,
McConkey, Drigalski)
• Identificare biochimică
• Identificare antigenică Mediul Levine:
E. coli: colonii de tip S, lactozo
• Antibiogramă (+), cu aspect metalizat
 E. coli - Patotipuri diareigene: EIEC

Mediul Drigalski: Mediul McConkey:

E. coli: colonii de tip E. coli: colonii de tip
S, lactozo (+), culoare Mediul Hektoen:
S, lactozo (+) E. coli: colonii de tip
roz
S, lactozo (+),
culoare portocalie
 E. coli - Patotipuri diareigene: EIEC

1 2

8 3

7 4

6 5

Mediul Mueller – Hinton: se repică 8 –

10 colonii de E. coli, cu morfologie
identică a coloniilor de pe mediul Levine

Din fiecare sector se vor efectua reacții de aglutinare directă pe lamă cu seruri
polivalente anti-O pentru E. coli, care conțin Ag. O somatice: O28, 29, 112, 124, 136,
143, 144, 152, 164, 167, 173 și apoi se vor folosi seruri monovalente
E. coli - Patotipuri diareigene: EIEC
E. coli - Patotipuri diareigene:
EaggEC
• determină diaree apoasă persistentă la copii
• legarea de enterocit asemănătoare cu ETEC
• nu invadează
• particularitate: se leagă “agregativ” de enterocite; nu aderă
uniform la suprafaţa mucoasei; formează un biofilm;
aşezate ca şi cărămizile
• serogrupuri O: O1, 3, 5, 15, 44, 77, 78, 86, 91, 92, 111, 113,
126, 141, 146
• determinism plasmidic: gena agg, care codifică AAF/I
(Aggregative Adherence Fimbriae I), poate fi depistată prin
reacţie de amplificare genică.
• enterotoxina termolabilă – EALT (ST-like toxin), antigenic
înrudită cu hemolizina E. coli, dar fără activitate hemolitică.
E. coli - Patotipuri diareigene:
EaggEC
 E. coli - Patotipuri diareigene:
EAggEC
• Clinic: diaree apoasă
• Produs patologic: materii
fecale
• Izolare: medii slab –
selective pentru bacilii
Gram – negativi (Levine,
McConkey, Drigalski)
• Identificare biochimică
• Identificare antigenică
• Antibiogramă Mediul Levine:
E. coli: colonii de tip S, lactozo
(+), cu aspect metalizat
 E. coli - Patotipuri diareigene:
EaggEC

Mediul Drigalski: Mediul McConkey:

E. coli: colonii de tip E. coli: colonii de tip
S, lactozo (+), culoare Mediul Hektoen:
S, lactozo (+) E. coli: colonii de tip
roz
S, lactozo (+),
culoare portocalie
 E. coli - Patotipuri diareigene:
EaggEC
1 2

8 3

7 4

6 5

Mediul Mueller – Hinton: se repică 8 –

10 colonii de E. coli, cu morfologie
identică a coloniilor de pe mediul Levine

Din fiecare sector se vor efectua reacții de aglutinare directă pe lamă cu seruri
polivalente anti-O pentru E. coli, care conțin Ag. O somatice: O1, 3, 5, 15, 44, 77, 78, 86,
91, 92, 111, 113, 126, 141, 146 și apoi se vor folosi seruri monovalente
E. coli - Patotipuri diareigene: EPEC

• pusee epidemice de diaree apoasă, malignă la copii

< 1 an în perioada 1940 – 1960.
• etiologie de vârf în diareea copilului mic (< 2 ani) în
ţările în curs de dezvoltare
• serogrupe O: O26, 55, 86, 111, 114, 119, 125, 126,
127, 128, 142, 158
• nu produce toxină
 E. coli - Patotipuri diareigene: EPEC

• leziunile caracteristice asupra celulelor intestinale sunt

de tip A – E (Adherence – Effacement): aderenţă –
ştergere, respectiv aderarea fermă în unele arii la
suprafaţa celulelor, colonizarea intestinală şi apoi
“ştergerea microvililor”
• sdr. diareic poate fi explicat cel puţin prin dispariţia
microvililor, fapt ce reduce capacitatea de retroresorbţie
a mucoasei.
E. coli - Patotipuri diareigene: EPEC
E. coli - Patotipuri diareigene:
EPEC
E. coli - Patotipuri diareigene: EPEC
 E. coli - Patotipuri diareigene: EPEC

• Clinic: diaree apoasă

• Produs patologic: materii
fecale
• Izolare: medii slab –
selective pentru bacilii
Gram – negativi (Levine,
McConkey, Drigalski)
• Identificare biochimică
• Identificare antigenică
• Antibiogramă Mediul Levine:
E. coli: colonii de tip S, lactozo
(+), cu aspect metalizat
 E. coli - Patotipuri diareigene: EPEC

Mediul Drigalski: Mediul McConkey:

E. coli: colonii de tip E. coli: colonii de tip
S, lactozo (+), culoare Mediul Hektoen:
S, lactozo (+) E. coli: colonii de tip
roz
S, lactozo (+),
culoare portocalie
E. coli - Patotipuri diareigene: EPEC

1 2

8 3

7 4

6 5

Mediul Mueller – Hinton: se repică 8 –

10 colonii de E. coli, cu morfologie
identică a coloniilor de pe mediul Levine

Din fiecare sector se vor efectua reacții de aglutinare directă pe lamă cu seruri
polivalente anti-O pentru E. coli, care conțin Ag. O somatice: O26, 55, 86, 111, 114,
119, 125, 126, 127, 128, 142, 158 și apoi se vor folosi seruri monovalente
E. coli - Patotipuri diareigene: EPEC
 E. coli - Patotipuri diareigene: EPEC

• identificarea antigenică a serogrupelor

• detectarea prezenţei genei eae A prin PCR
 E. coli - Patotipuri diareigene: DAEC

• produce diaree persistentă

• doză infectantă ridicată
• transmisie prin apă sau alimente contaminate, omul reprezentând
principala sursă de infecţie
• rol diareigen controversat întrucât singurul factor de virulenţă
cunoscut la acest patotip este aderarea difuză de celulele HeLa şi de
celule intestinale în culturi.
• aderenţa difuză (“stacked brick”) şi invazia celulară ar sta la originea
sdr. diareic produs de acest patotip
• determinarea fenomenului de aderenţă difuză pe culturi de celule
nediferenţiate HeLa
• determinarea prezenţei grupului de gene afa prin PCR
• serotipuri diareigene: O 11, 15, 18, 21, 75, 83, 128
E. coli - Patotipuri diareigene: DAEC
Primeri specifici pentru detecţia
patotipurilor diareigene de E.coli
Multiplex-PCR pentru detecţia
patotipurilor diareigene de E.coli
Patotipuri Codificare Diaree Localizare Vârsta Serogrupe O
diareigene genetică
de E. coli
ETEC plasmidică: apoasă, intestin < 2ani O6, 8, 12, 15, 20, 25, 27,
LT I; STa holeriformă subțire adulți 63, 78, 80, 85, 92, 128,
factori de 148, 153, 159, 167
adeziune (CFA)
EHEC fag lizogenic apoasă, colită colon 1 an O157 H7 , O26, 111,
hemoragică, bătrâni 113, 128, 145
SHU O104 H4,
EIEC plasmidic dizenteriform colon copii O28, 29, 112, 124, 136,
ă adulți 143, 144, 152, 164, 167,
173
EaggEC plasmidică: apoasă intestin copii O1, 3, 5, 15, 44, 77, 78,
AAF 1 persistentă subțire 86, 91, 92, 111, 113,
126, 141, 146
EPEC plasmidică: BFP apoasă intestin copii < 6 O26, 55, 86, 111, 114,
persistentă subțire, luni 119, 125, 126, 127, 128,
colon, rect 142, 158
DAEC cromosomal: apoasă colon copii: 2- O 11, 15, 18, 21, 75, 83,
F 1845 persistentă 6 ani 128
plasmidică: adulți
E. coli - Patotipuri urinare

• cel mai frecvent agent etiologic (> 80%) al infecţiilor

tractusului urinar (ITU)
• condiţia gazdei: factorul primordial ce contribuie la
instalarea ITU
• DZ
• imunodeficienţe constitutive sau dobândite
• malformaţiile colonului
• uropatii obstructive
• reflux vezico – ureteral
• sarcina

cresc receptivitatea gazdei

 Infecţie urinară
• infecţie urinară = prezenţa unei concentraţii bacteriene de
≥ 100.000 UFC/ml. urină
Ex: Urocultură pozitivă pentru E. coli - ≥ 100.000 UFC/ml.
urină
• prezenţa unui singur tip de bacterii sau a maxim 2 tulpini
bacteriene
• rezultat: ≥ 100.000 UFC/ml. urină – 3 (4, 5) specii
bacteriene diferite semnifică cultură microbiană mixtă
(urină contaminată cu microbi din regiunea periuretrală,
perineală, vaginală). Se recomandă în acest caz repetarea
recoltării cu respectarea condiţiilor de recoltare.
 E. coli - patotipuri urinare

Factori de uropatogenitate recunoscuţi la E. coli:

 Adezinele: fimbriile Pap (Pili associated with pyelonephritis) –
numite şi pili P
 Hemolizina – prevalentă la tulpinile izolate din tractul urinar
superior şi acţionează ca citotoxină Ca. – dependentă
 Aerobactina – chelator de Fe.; permite multiplicarea E.coli în
condiţiile feriprive ale tractusului urinar sau ale mediului intern
 Factorul citotoxic necrozant (CNF I) – poate facilita răspândirea
bilaterală a tulpinilor uropatogene: din tractusul urinar spre şi din
torentul circulator
 Antigenele O - 8 serotipuri uropatogene: O 1, 2, 4, 6, 7, 16, 18, 75 –
cresc persistenţa bacteriilor în tractusul urinar
 Antigenele capsulare K: K1, 2, 5, 13, 51; tulpinile nefritogene
produc mai mult antigen K, fapt ce imprimă infecţiei o severitate
mai mare.
E. coli - patotipuri urinare
E. coli - patotipuri urinare
Patogeneza infecţiilor urinare
Dg. de laborator al infecțiilor urinare

• Clinic: febră, stare generală influențată, dureri

abdominale joase, tenesme vezicale, disurie,
polakiurie
• Produs patologic: urina – urocultură
• Examinare microscopică: sediment urinar
• Izolarea agentului patogen:
• medii de cultură neselective: geloză – sânge, medii
cromogene (UTI)
• medii de cultură slab selective pentru bacilii Gram –
negativi: mediul Levine, McConkey, Drigalski
Dg. de laborator al infecțiilor urinare

anse
calibrate de
10 µl. – de
unică
Urocultor steril folosință

Tehnica de însămânțare: se folosește ansa

calibrată de 10 µl. – urocultură semicantitativă
 Dg. de laborator al infecțiilor urinare

Mediul Levine:≥
100.000 UFC/ml.
urină, colonii de tip S,
lactozo +, cu aspect
metalizat, aspect
monomorf al culturii
Mediul McConkey:≥ 100.000
UFC/ml. urină, colonii de tip
S, lactozo +, de culoare roșie,
aspect monomorf al culturii
Mediul UTI:≥ 100.000
UFC/ml. urină, colonii de
tip S, de culoare
bordeux, aspect
monomorf al culturii

Aspect de infecție urinară cu E. coli - ≥ 100.000 UFC/ml. urină

Dg. de laborator al infecțiilor urinare

• Identificare biochimică: teste convenționale, sistem

Vitek®2 compact, sistem MALDI-TOF
• Antibiograma: standard CLSI și EUCAST
• se testează antibioticele care concentrează la nivelul
căilor urinare (U):
• Cefazolin (cefalosporină gen. I)
• Sulphonamide
• Trimethoprim
• Fosfomicină
• Nitrofurantoin
Antibiograma - metoda
difuzimetrică Kirby - Bauer
1. TEMA PENTRU STUDENŢI
• Caz clinic: pacientă de sex feminin, vârsta 30 ani,
prezintă dureri abdominale, febră, vărsături,
scaune diareice, simptome care au apărut după 12
ore de la ingerarea unor produse alimentare pe
baza de carne.
• Care ar fi diagnosticul clinic?
• Care este produsul patologic pe care îl recomandă
medicul de familie pentru analiză?
1. TEMA PENTRU STUDENŢI
• Cum se recoltează produsul patologic? Ce condiţii
trebuie să respecte pacientul?
• Cum se transportă produsul patologic la laborator?
• Ce medii de cultură va folosi medicul microbiolog
pentru izolarea bacteriilor patogene?
• Cum se însămânţează produsul patologic?
• Ce condiţii de incubare se vor folosi?
 1. TEMA PENTRU STUDENŢI

• Care sunt etapele diagnosticului de laborator?

• Cum se instituie tratamentul antibiotic?
2. TEMA PENTRU STUDENŢI

• Desenaţi în caietul de teme mecanismele

patogenetice de producere ale sindromului diareic
cauzat de patotipurile diareigene de E. coli.