CURS14

Familia Enterobacteriaceae

Genuri principale: Escherichia------------specii E. Coli

Klebsiella----------------------K. Pneumoniae
Proteus--------------------------P. Mirabilis; P. Vulgaris
Salmonella ---------------------S. typhi
Shigella--------------------------Sh. Dysenteriae, Sh. Flexneri
Yersinia -------------------------Y. pestis, Y. enterocolitica

Dr. Anda Baicus

 Fam. Enterobacteriaceae>40 genuri/150specii,subspecii
Clasificare
: str.ag; proprietati biochimice; hibridizarea acizilor nucleici, secventiere
< 20 specii implicate in patologia umana->95% din infectii

• microorganisme ubicuitare: sol, apa, vegetatie, , flora intestinala

om/animale
• > 30-35% din totalul septicemiilor
• > 70% din infectiile urinare
• infectii intestinale
• Salmonella typhi, Shigella sp, Yersinia pestis- patogeni
• Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis –
oportunisti( comensali)
• Bacterii comensale care devin patogene prin achizitia de factori de
virulenta –plasmide, bacteriofagi- E.coli asociata cu gastroenterita

• Transmiterea infectiei-
• - de la animal , Salmonella, Shigella
• - purtator uman , Shigella sp, S. typhi
• - endogena in organisme susceptibile, E. coli
 Caractere generale

•bacili gram- , dimensiuni (0.3 to 1.0 × 1.0 to 6.0 μm)

•ag. comun (enterobacterial common antigen),
•imobi capsulati (Klebsiella, Yersinia),
•imobili necapsulati( Shigella)
•mobili cu cili peritrichi (E.coli, Proteus, Salmonella),
•pili comuni –adera la receptorii gazdei
•pili sexuali- conjugativi- tranferul materialului genetic
•nu formeaza spori
•aerobi facultativi anaerobi
•medii diferentiale- geloza sange; selective
•nevoi nutritive minime
•fermenteaza glucoza.
•catalazo +
•oxidazo-
•fermenteaza lactoza (e.g., Escherichia, Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter,
Serratia spp.)
•nu fermenteaza lactoza/ foarte incet ( Proteus, Salmonella, Shigella, and
Yersinia spp)
E. coli- cili peritrichi
Salmonella typhi – hemocultura , coloratia bipolara caracteristica Enterobacteriilor
•Capsula Klebsiella,
Shigella,Yersinia
•(pili)

• mediat cromozomial – pili

comuni

•sex pili sfer between

bacteria
LPS- termostabil – antigen major de perete : ag.O; core polizaharidic = ag. comun tuturor
Enterobacteriilor ; lipid A
ag. comun prezent ca un glicolipid liber in membrana externa

Clasificarea serologica este bazata pe trei grupuri majore antigenice :

- ag. O somatic polizaharidic (prezent la fiecare gen/ reactii incrucisate ( Salmonella cu
Citrobacter, Escherichia cu Shigella).
-ag. capsular K- termolabil
- ag. flagelar H- termolabil / absent/ variatie antigenica/ prezent in 2 faze
detectarea ag. reactii de aglutinare cu anticorpi specifici

Exista genuri ce poseda ag. comune :

E. coli K1 antigen prezent la Neisseria meningitidis si Haemophilus influenzae
K. pneumoniae reactioneaza incrucisat cu Streptococcus pneumoniae.
Factori de virulenta asociati cu Enterobacteriile
• endotoxina/ lipidul A – manifestari sistemice ; activarea C, eliberarea de
citokine, leucocitoza, trombocitopenie, CID, soc,
•Capsula- antifagocitar- ag hidrofilic respinge suprafata hidrofoba a
fagocitelor
•Variatia antigenica- exprimarea sau nu a structurii ag.
•Sistem secretor III
•Sechestrarea factorilor de crestere – producere de chelatori de Fe
(enterobactin)
•Rezistenta la efectul bactericid al serului + factori care se leaga de C
•Rezistenta antimicrobiana + plasmide transferabile

O varietate de bacterii au un sistem efector comun pentru eliberarea factorilor

de virulenta cand vine in contact cu celula eukariotica tinta cunoscut sub numele
de sistem secretor tip III ca o seringa moleculara formata din aprox 20
proteine (Yersinia, Salmonella, Shigella, enteropatogenic Escherichia,
Pseudomonas, Chlamydia)
Genul Escherichia
•5 specii - sepsis, infectii urinare , meningita, gastroenterita
•Factori de virulenta
•Adezine – factori ag. de colonizare (CFA/I, CFA/II, CFA/III); fimbrii
agregative de aderenta (AAF/I, AAF/III), pili , plasmide de invazivitate-
proteine Ipa, fimbrii Dr- se leaga de ag hematice de grup Dr
•Exotoxine –Shiga –toxine- Stx-1, Stx-2, termostabile Sta, STb,
termolabile (LT-I, LT-II), hemolizine (HLYA)- (E. coli uropatogen)

•Epidemiologie: septis , ITU, infectii intraspitalicesti, gastroenterite

(EPEC, ETEC, EHEC, EIEC, EAEC)
•Colita hemoragica, sindrom uremic hemoragic EHEC
•Cele mai multe infectii sunt endogene – pacientii cu imunodepresie
•Meningita neonatala – specia cu K1
•Infectii intraabdominale- perforatie intestinala
 Locul de actiune
Enteropathogenic E. coli (EPEC) Intestin subtire diaree copii – apoasa Mediata plasmidic, disruptia structurii
fara sange , normale a microvililor rezultand
malabsorptie si diaree

Enterotoxigenic E. coli (ETEC) Intestin subtire Diarea calatorilor, Mediata plasmidic, exotoxina Ts/TL care
Transmitere fecal-orala copiilor, apoasa,, stimuleaza hipersecretia de fluide si
Incubatie 1-2 zile crampe, electroliti
Recuperare in 3-4 zile greturi, TLI-similara str si functional cu toxina
subfebrilitate, holerica
varsaturi LTII nu este asociata cu boli umane
- Similara cu holera Sta-creste secretia de ciclic guanosin
dar simptomatologie monofosfat cGMP
redusa -Fara leziuni sau inflamatie intestinala
-- determinarea toxinei – pe culturi celulare

Enterohemorrhagic E. coli (EHEC)
73000 infectii/6o decese/an USA
-Ingestia < 100 bacterii cauzeaza boala
-> 50 serogrupuri deEHEC
-- majoritatea O157:H7
-EHEC – care produce ( bacteriofag lizogen)
-toxina Shiga (Stx-1/Stx-2, sau ambele)
Intestinul gros Initial apoasa apoi Mediata de Shiga –toxina , afecteaza
Simt medie- colita hemoragica hemoragica (30-65% sinteza proteica, distruge microvilii
Consum de carne de vita neprelucrata termic , din pacienti) , intestinali
lapte nepasteurizat, suc de fructe ( cidru din crampe abdominale, Dg. Detectia toxinei, cultura
fructe contaminate cu fecale de vite) subfebrilitate poate O157 nu fermenteaza sorbitolul continut in
3-4 zile incubatie progresa spre Mac Conkey
Recuperare in 4- 10 zile dar sdr. HU – sindromul uremic :
complicatie serioasadecesul in 3-5% din pacientii afectare renala,
cu sdr. HU, sechele: afectare renala, HTA, SNC trombocitopenie ,
HU- asociat cu toxina Shiga – distruge celulele anemie hemolitica la
endoteliale glomerulare 5-10% din copiii
infectati < 10 ani

Enteroinvasive E. coli (EIEC) Intestinul gros Febra, crampe, Mediata plasmidic- invadeaza si distruge
diaree apoasa ,poate epiteliul colonic- ulceratie
O124, O143, O168 progresa spre Asemanatoare cu Shigella
Genele plnv dizenterie , scaune
cu sange

Enteroaggregative E. coli (EAEC) Intestin subtire Diarea calatorilor, Plasmid mediata agregarea bacililor si
E. coli O157:H7 blue/black
colonies: b-galactosidase
producing
E. coli O157:H12 grey
colonies: b-galactosidase
producing
E. coli O127 pink colonies: b-
glucuronidase producing
E. coli O455 magenta colonies:
b-glucuronidase producing
GENUL KLEBSIELLA
80 de antigene capsulare K, unele dintre ele dand reactivitate incrucisata cu specii de S. pneumoniae si H.
Influenzae. Cele mai comune serotipuri asociate patologiei respiratorii umane. sunt K1-6.
Antigenele somatice O, in numar de 5 sunt rareori folosite in reactiile de tipizare.
Specii principale:
K. pneumoniae, K oxytoca – pneumonie lobara ( alcoolici)- distructii necrotice ale spatiilor alveolare ,
formare de cavitati , sputa sanguinolenta
: K. ozenae: rinita cronica atrofica
:K. rhinoscleromatis- boala granulomatoasa nazala

K. granulomatis- granuloma inghinala ( endemica in Noua Guinee, America Sud, India, Vietnam,
Africa, Australia
Transmitere sexuala/ trauma geniala
Incubatie saptamani-luni

Dg: colorarea tesutului recoltat din leziune – col Giemsa, Wright- bacili mici in citoplasma
histiocitelor , PMN / 1-25 bacterii/PMN ; tratament tetraciclina, eritromicina
Specii Diagnostic de laborator
Klebsiella Produs patologic: sputa, exsudat nazal, urina, secreție de la nivelul
leziunii granulomatoase
Cultivare medii lactozate, ADCL, AABTL, Mac Conkey
Identificare
- cocobacili Gram –
- colonii mucoide M
-biochimică: TSI, MIU, Simmons: glucoza+, lactoza+, imobili, oxidaza -,
citrat+, indol -, exceptie K. oxytoca: indol +
-serologică: reacția de umflare a capsule (80 serotipuri)
-inoculare la șoarece- septicemie (amprenta ficat/splina, colorate albastru
de metilen, bacili înconjurați de halou luminos care evidențiază prezența
capsulei)
Tratament: multe specii sunt producatoare de β lactamaze cu spectru
extins (ESBL)
- se utilizeaza carbapeneme si fluoroquinolone
GENUL PROTEUS
•P. mirabilis, P. vulgaris, P. penneri.
•P. mirabilis produce o cantitate mare de urează responsabilă de degradarea ureei în
CO2 și amoniac, urina devine alcalină și este favorizată apariția calculilor renali de
struvită și apatită prin precipitarea magneziului și calciului. Proteusul este cea mai
mobilă enterobacterie și prezintă mai mult de 6 tipuri de fimbrii responsabile de
aderența la uroepiteliu.

Specii Diagnostic de laborator

Produs patologic : urina, puroi, exsudate purulente, materii fecale, lichid
de vărsătură, aliment suspectat
Cultivare: ADCL, Mc Conkey, bulion, geloza 2%, IM
Proteus Caractere de cultura
-dezvoltare rapidă pe medii peptonate lichide cu degajare de miros
caracteristic de putrefacție, tulbură uniform bulionul
- pe mediile gelozate 2% fără inhibitori – apare fenomenul de invazie sau
cațărare (de la locul însamanțării cultura se extinde pe toată suprafața
plăcii/ tubului sub forma de valuri succesive); dacă pe placa se
însamânțează în locuri diferite 2 tulpini de Proteus care migrează, la locul
de întâlnire apare o linie de demarcație, fenomenul Dienes
- pe mediile slab și moderat selective (ADCL, Mac Conkey) - colonii izolate
lactozo-, S
- pe IM , ADCL coloniile pot avea uneori centrul negru - aspect de ochi de
pisica
-caractere biochimice: MIU/TSI/ Simmons: fermentează glucoza+ gaz;
lactoza-; H2S+; ureaza+, indol- (P. mirabilis), indol + (P. vulgaris);
oxidaza - (caracterele biochimice subdivizează genul în 4)
Tratament - se folosesc asocieri cotrimoxazol, gentamicina, kanamicina
 CHROMagar
Orientation

Klebsiella pn.
 Deoxycholate Agar (DOC
A. Heavy lactose fermentation
B. Reduced growth of a Gram-
positive organism
C. No lactose fermentation
D. Light lactose fermentation
MacConkey agar plates.
Proteus produces colorless colonies as shown in
the left panel.
E.coli produces bright pink colonies as shown in
the right panel.
E. coli on blood agar plate.

Klebsiella
pneumoniae on a
blood agar plate
Proteus mirabilis on
Blood Agar.
-Cantitati mari de
ureaza

Colonies of Proteus mirabilis

bacteria grown on a Xylose
Lysine Sodium Deoxycholate
(XLD) agar plate.
MacConkey Agar
Contains crystal violet & bile salts to inhibit Gram
+ve bacteria, lactose & a pH indicator (neutral red)
to determine ability to ferment lactose

Salmonella typhi: Shigella sonnei: Proteus vulgaris

 - / +
Indole Tube Test: Klebsiella pneumoniae is indole -Ureaza test
negative as shown on the left and E. coli is indole
positive as shown on the right.

Testul ureazei: ureaza scindeaza

ureea din mediu in amoniac si CO2

Testul idol: triptofanaza prezenta la

unele bacterii (E.coli) scindeaza
triptofanul in indol, acid piruvic si amoniac
Koser’s citrate mediu: indicatorul bromothimol vireaza de la verde la bleu ca
rezultat al reactiei alcaline
TSI Simmons citrate agar

Producere de hidrogen sulfurat: evidentiaza

descompunerea aminoacizilor cu sulf sub actiunea
cistein desulfhidrazei
 Enterobacter
Edwardsiella

Providencia
Escherichia

Salmonella

Morganella
Citrobacter

Klebsiella

Ewingella
Yersinia
Shigella

Serratia

Proteus
Testul/ substratul

Glucoza-gaz TSI + - + + + + + d + D d - -
Zaharoza d D - - d + + + D d - D -
Lactoza + D - D d D d D - - - +
Citrat (Simmons) - - - + + D + + d + - - +
H2S/TSI - - + + D - - - + - - - -
Indol + d + - D D - - D + + D -
Lizin
d - + + - D D + - - - -
decarboxilaza
Ornitin
d D + + D - D + D - + D -
decarboxilaza
Fenilalanina
- - - - - - - - + + + - -
deaminaza
Ureaza - - - - D D D - + D + D -
Mobilitate -
d - + + + - + + + + + O +
37 C
UROCULTURA- cantitativa-nr. germeni /ml urina a. Metoda dilutiilor seriate in placi;b. Metoda
ansei calibrate; c. Test Uricult
•dilutii zecimale in ser fiziologic:1/10; 1/100; 1/1000; din fiecare dilutie se pun0,1 ml pe
suprafata a 2 placi Petri cu geloza sange si Mac Conkey-incubate 37C 18-20h. A doua zi se numara
coloniile izolate dezvoltate pe mediile de cultura-
nr. germeni/ml urina=nr. colonii x dilutiax10
se face media pentru fiecare tip de mediu—rezultatul=media cea mai mare obtinuta pe mediul fara
inhibant(geloza-sange)
•2 anse –volumul incarcat de o ansa=0,01ml urina ce corespunde dilutiei 1/100--intern al
ansei=5mm
- volumul incarcat de a 2 a ansa= 0,001ml ce corespunde dilutiei 1/1000--
intern al ansei =2,5mm
aceeasi placa serveste pentru cele doua dilutii- pe o jumatate se descarca ansa incarcata cu
0,01ml iar in cealalta jumatate ansa cu 0,001ml
nr. germeni/ml urina=nr. coloniix100 sau cu1000; se face media celor doua dilutii
INTERPRETARE: 0-10 000 bacterii/ml-contaminare in timpul recoltarii
10-100 000 bacterii/ml infectie probabila
100 000 bacterii/ml infectie sigura
detectia și confirmarea prezenței de beta lactamaze cu spectru extins (BLSE),
sinergia între activitatea cefalosporinelor de generațiile a treia și a patra și
acidul clavulanic, un inhibitor de beta lactamaza (prezent în combinația AMC)
confirmă producția acestora, aspectul de gaura de cheie, sau dop de sampanie
aparut intre AMC 60 si CTX 5 (Cefotaxim)