CONTRIBUII LA EXPERTIZA MEDICO-LEGAL A IDENTIFICRII PRIN METODA ADN

Dan Perju-Dumbrava

Generalitati

1. 2. 3. 4. 5. 6.

identificarea uman prin metoda ADN, este cea mai sensibila i specific metod de comparare a dou probe biologice este un domeniu nou, al geneticii legale aflat la nceput de drum n ara noastr i cred n rolul pe care l va avea n medicina legal ncepind cu anul 1988, testele ADN au fost acceptate ca proba n instan, la ora actual n ntreaga lume exist peste 1000 de laboratoare care execut profilul ADN Domeniul de aplicabilitate al acestei metode este foarte larg i este utilizat n mod curent pentru: Identificarea suspecilor pe baza probelor recoltate de la locul faptei; Disculparea inocenilor; Repararea erorilor judiciare; Stabilirea filiaiei pe linie patern sau matern ; Identificarea rmielor umane rezultate n urma unor catastrofe sau atentate; Stabilirea relaiilor de descenden biologic cu aplicabilitate n antropologie;

Structura Bibliografie

se constituie ntr-o iniiere n diferite metode de genotipare a ADN parcurgnd paii necesari pentru analiza unei probe biologice ncepnd de la recoltarea ei i pn la raportul de expertiz medicolegal formulat n urma genotiprii, considerat la ora actual o prob infailibil n justiie a reprezentat o adevarat provocare att datorit faptului c n ara noastr aceast metod este la nceput de drum ct i cantitii extraordinare de informaii existent n rile avansate n domeniu capitolele au fost astfel organizate nct s ofere pe fundamentul unor concepte de ordin general date statistice, definiii i prezentri ale celor mai importante tehnologii i aplicaii de genetica legal

BAZELE GENETICE SI MOLECULARE ALE GENOTIPARII ADN

ADN uman este format din 3.3 miliarde perechi de nucleotide dintre care 10% aparin ADN intragenic (codant) i 90% aparin ADN extragenic (necodant). Regiunile necodante: - DNA spacer - ADN satelit sau repetitiv ADN repetitiv:
-

prezint diferene interindividuale denumite polimorfisme ADN prin Numrul Variabil al Tandemurilor Repetitive (VNTRs) sevenele repetitive tip VNTR respect legile ereditii mendeliene (segreg independent i se regsesc n succesiunea generaiilor) la nivelul unui locus de tip repetitiv (pe cromozomii omologi) se regsesc ntotdeauna la descendeni dou alele: una de origine matern i una de origine patern

n genetica legala se descriu doua tipuri de tandemuri repetitive:

minisateliii
microsateliii ( STRs-short tandem repeats)

practica medico-legala este dominat n prezent de STRs, considerai standardul de aur n materie de genotipare uman

dintre sutele de microsatelii din genomul uman sunt utilizate sistemele STRs unilocus (cu localizare unic n genomul uman) formate din tetra- i pentarepetiii, cu potenial discriminatoriu ridicat i numr mic de microvariante (variaii individuale n populaiile studiate).

ANALIZA PROFILULUI GENETIC PRIN METODA RFLP

Este prima metod de analiz a ADN folosit n medicina legal i necesit urmtoarele etape:

Izolarea ADN Digestia ADN

Denaturarea ADN Hibridarea ADN Autoradiografia

Electroforeza Transferul (Southern Blotting)

ANALIZA PROFILULUI GENETIC PRIN METODA PCR

Reacia de polimerizare n lan (PCR) presupune amplificarea specific a regiunilor hipervariabile ale ADN, astfel pornindu-se de la o cantitate foarte mic de prob ADN se ajunge la o cantitate corespunztoarepentru genotipare

permite sinteza unor secvene int de ADN cu ajutorul unui set de procese fizico-chimice dirijate enzimatic de Taq-polimeraza, care se repet ciclic de un numr mare de ori rezultatul l constituie mrirea exponenial a cantitii de material genetic de interes (milioane de copii ale unei secvene int de ADN).

GENOTIPAREA STR - PCR

In practica medico-legal se utilizeaz doar sistemele STRunilocus (adic acei microsatelii cu localizare unic n genom), formai din patru sau cinci perechi de baze cu potenial discriminatoriu ridicat i un numr minim de artefacte genetice (microvariante).
Locii ADN care fac obiectul unei investigaii genetice medicale sau judiciare sunt denumii conform unei nomenclaturi specifice, standardizate la nivel internaional Rezultatul electroforetogramei pentru un marker STR unilocus l constituie un set format din maxim dou benzi al cror model este caracteristic pentru fiecare individ : indivizii heterozigoi, posesori a dou alele diferite ca greutate molecular, vor prezenta pe electroforetogram 2 benzi/locus n timp ce homozigoii, posesori a dou alele identice, doar o band/locus.

LOCALIZAREA CROMOZOMIALA A MARKERILOR STR

in SUA comunitatea tiintific a standardizat un set de 13 markeri ADN folosii n genotipare i a alctuit o baz de date cunoscut sub denumirea de CODIS (Combined DNA Index System) care conine att frecvenele de apariie n populaie ale alelelor ct i profilele genetice ale anumitor categorii de infractori folosind toi cei 13 markeri STR probabilitatea ca doua persoane s aib acelai profil genetic este mai mic de 1 x 10-9

ANALIZA SI INTERPRETAREA STATISTICA A REZULTATELOR

Se face cu ajutorul termenilor de probabilitate utilizndu-se teorema lui Bayes: P (A,B) = P(A) x P(B) Parametrii statistici utilizati: 1. Probabilitate de potrivire aleatorie: P = P1 x P2 x....Pn P = 2 x p x q pentru un individ heterozigot P = p2 + p(1-p) x pentru un individ homozigot 2. Probabilitatea de paternitate: PP = IP/(1+IP)
Locus GENOTIP
FRECVENTA ALELELOR

D3S1358 15,18 8.2 % D13S317 11,11 1.2 %

vWA 16,16 4.4 % D7S820 10,10 6.3 %

FGA 19,24 1.7 % D16S539 11,11 9.5 %

D8S1179 12,13 9.9 % TH01 9,9.3 9.6 %

D21S11 29,31 2.3 % TPOX 8,8 3.52 %

D18S51 12,13 4.3 % CSF1PO 11,11 7.2 %

D5S818 11,13 13 % AMEL XY (MALE)

LOCUS GENOTIP
FRECVENTA ALELELOR

Aplicatii

a vizat punerea n practic a metodelor de genotipare evideniate n partea special coninnd i cazuistica corespunztoare

a avut ca obiective principale evidenierea performanelor diferitelor tehnici de genotipare, importana genotiprii ADN cu aplicabilitate ei n cele mai diverse domenii i impactul asupra indivizilor

a evidentiat rolulul hotrtor pe care l-a avut genotiparea medicolegal a ADN n rezolvarea unor cazuri cu un impact major asupra opiniei publice i nu numai

Direcii noi de aplicabilitate a testelor genetice

Idei noi de utilizare a genotiprii ADN uman n contexul pericolului reprezentat de terorism la adresa securitii naionale i individuale:

Acordarea vizelor de cltorie dup efectuarea testelor genetice ADN Confirmarea identitii unui individ pn la ptrunderea n spaiul aerian al unui stat n timpul cltoriei cu avionul. Permiterea accesului ntr-o locaie sigur pe baza generrii i comparrii rapide a profilului genetic cu cel existent n baza de date. Capacitatea testelor genetice ADN de a prezice riscul de apariie a unei maladii genetice.

Concluziile generale
1. Lucrarea, se consituie ntr-o iniiere n domeniul geneticii moleculare cu aplicabilitate direct n medicina legal, domeniu nou n ara noastr, n care numrul specialitilor i al laboratoarelor de genetic legal este limitat Lucrarea a vizat o abordare stiintifica complexa cuprinzand toate tehnicile de genotipare a ADN existente la ora actuala Descrierea fiecrei etape n tehnica de identificare folosit se constituie ntr-un exerciiu valoros de nelegere a conceptelor i a fundamentelor tiinifice ce stau la baza fiecrei metode de analiz a profilului genetic Genotiparea ADN se poate impune ca cel mai important mijloc de investigare a paternitii n medicina legal de la noi din ar dac se conformeaz standardelor recomandate de forurile tiinifice

2. 3.

4.

5.

Prezentarea aspectelor practice legate de redactarea unui raport de expertiz medico-legal apreciez c reprezint un pas nainte n obinerea unor dovezi juridice incontestabile n instan prin genotiparea ADN uman Formularea raportului de expertiz medico-legal corelata cu respectarea de ctre expertul n genetic molecular a unui set de principii deontologice, formeaz cea mai bun modalitate de exprimare juridic, neuitnd de implicaiile majore i de consecinele incalculabile ce pot decurge de aici, cu impact direct asupra libertii individului

6.

7.

Datele statistice incluse in lucrare confirm faptul testul ADN este cea mai puternic dovad n justiie. De exemplu n SUA exis o comisie special care reanalizeaz cazurile n care dovezile biologice au fost pstrate, i n prezent peste 50 % dintre indivizii eliberai pe motivul unei false condamnri se datoreaz testrii sau retesrii ADN. Personal cred c acest lucru va fi posibil i n ara noastr, neuitnd nici o clip de performanele justiiei americane n comparaie cu sistemul juridic romnesc.

8.

O parte a lucrrii a fost dedicat descrierii comparative a sistemelor legislative din domeniul genotiprilor ADN uman in rile cu tradiie n domeniu i pe baza creia se poate concluziona c exist discrepane n funcie de sistemul politic, juridic i religios corespunztor fiecrei ri. Important n aria identificrilor medico-legale, analiza ADNmt ramne o investigaie relativ limitat, deoarece reprezint cel mai laborios i costisitor tip de analiz a ADN ce se efectueaz n scop de identificare (ntr-un laborator performant un expert realizeaz n medie 2 genotipri mitocondriale/lun). Aceast metod este util n cazul epuizrii celorlalte metode de genotipare, n cazul probelor biologice foarte vechi i n cazul studiilor antropologice n scopul validrii anumitor teorii prin urmrirea liniaritii maternale (migrarea unor grupuri populaionale).
Studiile populaionale genetice cu ajutorul metodelor statistice intr n prezent n practica curent a laboratoarelor ADN cu profil de identificare, de aceea cred c efectuarea de studii de genetic populaional contribuie ca instrument de lucru pentru evalurile statistice ale investigaiilor ADN, ajutnd implicit la crearea viitoarei Baze Naionale de Date ADN.

9.

10.

Concluzia care o desprindem la finalul redactrii acestei lucrri este c ea reprezint rezultatul unor acumulri de ordin teoretic i practic realizate pe parcursul anilor V i VI n cadrul Facultii de Medicin General din Cluj-Napoca. Sper ca lucrarea n ansamblu s fi reuit s prezinte ntr-o manier convingtoare impactul pe care l au testele genetice n diferite arii ale vieii ale vieii sociale impactul asupra familiei, asupra fenomenelor infracionale, anchetelor judiciare, catastrofelor n mas , stabilirea adevrului istoric i a studiilor antropologice. Fr a-i propune s epuizeze toate aspectele ce in de domeniul geneticii judiciare, lucrarea se dorete o sintez a teoriei i practicii n materie de identificare genetic, adresat att specialitilor de la noi din ar, medici legiti , practicieni n domeniul geneticii moleculare, juritilor dar i celor aflai la nceput de drum constituindu-se ntr-un punct de plecare pentru studii mai complexe. Ca un ntreg lucrarea conceput se constituie ntr-o pledoarie pentru introducerea i utilizarea metodelor de genotipare ADN uman pe scar larg i la noi n ar, datorit certitudinii i avantajelor evideniate de mine pe parcursul lucrrii.

Medicina

legala, avand o contributie fundamentala in demonstarea adevarului in justitie este o revansa pe care stiinta o da subiectivismului si non-valorilor DAN PERJU-DUMBRAVA