ELEMENTE DE INVESTIGARE I IDENTIFICARE BIOCRIMINALISTIC PE BAZA PROFILULUI ADN

Conductor tiinific: Lector univ.dr. Gabriela Matei Masteranzi: Sandu Elena Cristiana Burcea Radu Constantin

Criminalistica, n calitatea sa de tiin a investigaiilor penale, s-a conturat la sfritul secolului XIX, graie nelepciunii magistratului i pedagogului austriac Hans Gross i a reprezentat una dintre primele tiine moderne de grani, oferind justiiei instrumentele desprinse din universalitatea cunotinelor, fundamentate pe descoperiri tiinifice, apte s contribuie mai eficient la descoperirea crimei i a celui care o comite. Criminalistica s-a consacrat ca una dintre principalele tiine ale procesului judiciar, ntruct servete la determinarea materialitii faptelor penale, la dovedirea infraciunii i la stabilirea vinoviei infractorului, identificat prin procedee criminalistice i, prin esena sa ca i prin spiritul pe care l promoveaz, este nchinat unui scop deosebit : aflarea adevrului, indiferent n favoarea cui este stabilit. Descoperirea acidului dezoxiribonucleic (A.D.N.) a condus la intelegerea conceptului de ereditate si, ulterior la identificare, prin decodarea informatiilor genetice pe care molecula de A.D.N. le are in componenta. Aceasta are structura moleculara si este continuta de toate celulele vii ale organismelor. Procesul de identificare a unei persoane incepe in momentul in care aceasta lasa in scena crimei o urma biologica care contine, in mod necesar, material genetic (A.D.N.). Urmeaza prelevarea probei de catre criminalist, urmata de analiza de laborator care are drept punct terminus traducerea materialului genetic intr-un cod, cu formula unica, irepetabila, specifica unui singur purtator al acelei informatii genetice.

Istoricul descoperirii ADN-ului

Structura ADN-ului a fost decodificat la nceputul anilor 1950. Americanul James D. Watson i britanicul Francis Crick sunt considerai drept primii care au descifrat structura de dubl spiral a ADN-ului. Conform propriilor afirmaii, saltul calitativ al descifrrii secretului vieii s-ar fi produs n ziua de 23 februarie 1953. Aflai n competiie contra cronometru cu alte echipe, mult mai celebre i mult mai bine dotate, aa cum a fost cea a chimistului american Linus Pauling, laureat al premiului Nobel pentru chimie n 1954, aparentul cuplu ciudat a nvins tocmai datorit orizontului lor intelectual foarte larg n care operau, a solidei i universalei lor pregtiri interdisciplinare precum i a minilor lor flexibile i deschise oricrei ipoteze confirmabile de ctre realitate[necesit citare], dar i datorit datelor de prim calitate furnizate comunitii n premier de Rosalind Franklin, asta dei, motivai probabil de sexism[1], Watson i Crick vor aminti n articolul lor din Nature de autorul celebrei "fotografii 51" n ultima poziie i doar nainte de "i alii".[2][3]. Este demn de remarcat faptul c impecabilele imagini luate unor molecule iluminate prin difracia razelor X de ctre Rosalind Franklin[4], specialist n fotografii de difracie create cu raze X, l-a fcut pe Watson i Crick s ntrevad structura de dubl elice a ADN-ului. Colegul acesteia, Maurice Wilkins, a contribuit de asemenea decisiv la luarea unor fotografii edificatoare. Din pcate Franklin a murit de cancer n 1958, n vrst de numai 37 de ani, probabil din cauza prea intensei iradieri. Cum premiul Nobel nu se confer post mortem, n 1962 doar Watson, Crick i Wilkins au fost rspltii cu aceasta prestigioas cunun de lauri tiinific, mult dorit de ctre toi savanii din lume.

ADN-ul

ADN este prescurtarea de la acidul dezoxiribonucleic (n englez: deoxyribonucleic acid, DNA). Acesta este format din molecule organice dintre cele mai complexe. Substana se gsete n fiecare celul a fiinelor vii i este esenial pentru identitatea oricrui organism, de la Euglena viridis, mica fiin unicelular aflat la grania dintre plante i animale, i pn la Homo sapiens sapiens, omul contemporan. Din punct de vedere chimic, ADN-ul este un acid nucleic. Este o polinucleotid, adic un compus n structura cruia se repet un set limitat de macromolecule numite nucleotide; n acest sens, el este definit ca fiind un copolimer statistic: un copolimer este un polimer n compoziia cruia se repet mai multe motive (monomeri); n cazul ADN-ului, monomerii sunt nucleotidele;

 iar statistic nseamn c monomerii se repet de manier aleatorie n lanul polimer, fr ca ei s fie dispui alternativ sau dup oricare alt aranjament repetitiv (aa cum se ntmpl, de exemplu, n etilen-acetatul de vinil (EVA) sau n acronitril-butadien-stiren (ABS). Nucleotida, ce reprezint unitatea de baz a ADN-ului, este o macromolecul organic (o N-glicozid) compus (prin policondensare) din: un carbohidrat, adic o glucid (mai exact o monozaharid) de tipul pentoz (n form furanozic) baz azotat heterociclic (inel sau ciclu aromatic n 5 atomi) de tipul pirimidinei, sau o variant a acesteia condensat cu inelul imidazolic, numit purin i un rest de acid fosforic (esterificat cu unul din hidroxilii pentozei), adic un grup fosfat.

Pentozele care intr n structura ADN-ului sunt D-2-dezoxiriboza (pentru acidul nucleic tip ADN) sau D-riboza (pentru acidul nucleic tip ARN).[B] Dou dintre bazele heterociclice azotate ale ADN-ului sunt purinice (adenina i guanina), iar celelalte dou sunt pirimidinice (citozina i timina). n ARN uracilul nlocuiete timina. n cadrul elicei caracteristice, n form de scar spiralat, resturile pirimidinice ale monomerului sunt orientate spre interior, formnd cu resturile purinice ale celuilalt monomer treapta scrii, n timp ce pentozele formeaz braele acesteia, de la o dubl unitate la alta (adic de la un cuplu purinic-pirimidinic la urmtorul), legtura fiind realizat de gruprile fosfat (prin atomii lor de oxigen). Legturile dintre resturile de purine i pirimidine sunt de natur molecular i nu chimic, ele fiind legturi de hidrogen.

Model simplificat
O form simplificat de reprezentare a ADN-ului:Carbonat ADN-ul este reeta necesar sintezei de proteine, molecule organice eseniale pentru organismele vii; molecul de ADN conine zone numite gene, zone fr funcie, precum i zone cu un rol nc necunoscut; Acidul dezoxiribonucleic are o structur de dublu helix. Scara este alctuit din dou lanuri organice elastice ce sunt conectate prin treptele realizate de legturile de hidrogen. Treptele sunt de fapt doar de patru feluri, unind perechi de baze azotate, ce pot fi patru tipuri diferite de molecule organice, adenin (notat A), citozin (C), guanin (G) i timin (T); Cele patru baze (A, C, T i G) nu se pot combina dect ntr-un anumit mod, i anume: adenina doar cu timina (A + T sau T + A), i citozina doar cu guanina (G + C sau C + G); cu alte cuvinte, o baz de tip A, n orice parte a lanului s-ar afla ea, nu se poate combina dect cu o baz de tip T, i invers; n mod similar, G nu se poate combina dect cu C, i invers; Ordinea conteaz: A + T nu este acelai lucru cu T + A; vezi codul genetic care e preluat de la ARN. Avnd n vedere c orice baz se poate combina ntr-un singur fel, pentru notaie se poate alege prin convenie doar o caten a dublei elici (secvena celeilalte catene rezult din regulile de combinare); Secvena de baze este forma canonic a informaiei, altfel spus, pentru a descrie n mod complet o secven ADN nu este nevoie de nimic altceva; Duplicarea moleculei de ADN este posibil prin desfacerea secvenei dea lungul ei (se dezintegreaz treptele) prin aciunea unor proteine; cele dou catene rezultante sunt copiate de un complex proteic numit ADNpolimeraz. Cum fiecare baz de pe catena iniial nu se poate combina dect cu perechea ei predeterminat, rezultatul final const din dou secvene ADN identice, n afar de cazul n care apar unele erori ce determin mutaiile genetice;

 Trei perechi de baze azotate formeaz n mod normal un codon. Acesta codific un aminoacid. Mai muli codoni la un loc codific o protein. Mutaiile nu sunt altceva dect imperfeciuni n procesul de sintez al ADNului: o baz este n mod accidental ignorat (srit), introdus sau copiat imperfect, sau lanul este tiat prea devreme sau i se adaug baze la capete; aceste operaii de baz genereaz toate mutaiile posibile. Mutaiile genetice sunt practic o alterare a unei pri din informaia din molecula ADN. Este suficient ca, de exemplu, s se tearg doar o pereche de baze azotate dintr-o gen, pentru ca toat funcia genei s fie abolit. Dac este tears o pereche de baze azotate, codonul din care fcea parte aceasta va codifica alt aminoacid, care va codifica alt protein, fapt ce, n cele din urm (aa se ntmpl probabil cel mai adesea, ns nu n mod obligatoriu), poate s-i altereze acesteia din urm funcia biologic. Mutaiile pot avea trei feluri de efecte: negative, pozitive sau neutre (nu influeneaz funciile nici n bine, nici n ru). Aceste mutaii sunt provocate fie de aa numiii factori mutageni (radiaiile cosmice, substane chimice .a.), fie de imperfecta fidelitate a sintezei enzimatice (ADN-polimeraza) a ADN-ului. Mutaiile genetice pot fi i induse intenionat de ctre specialiti. ADN-ul se gsete practic n orice celul (excepii: hematiile (eritrocitele) i celulele (fibrele) cristalinului ocular sunt celule care nu devin funcionale dect dup ce pierd (prin expulzare, ejecie) nucleul (i alte organite), moment n care ns nceteaz s mai rspund la criteriile care definesc o celul vie (pentru c nu se mai pot nici divide, nici ntreine ("repara") structural vorbind): de la organisme unicelulare cum ar fi bacteriile sau protozoarele, pn la organismele pluricelulare (fungi, vegetale sau animale), precum i n structura intern a unor virusuri. Structura ADN-ului este unic nu numai pentru o specie anume ci i pentru orice individ al oricrei specii animale sau vegetale. La om ADN-ul conine circa 3,27 miliarde de perechi de baze (3,27 miliarde de trepte n helixul dublu).

 Cantitatea de ADN coninut n celule (numit uneori i patrimoniu genetic) nu este corelat cu complexitatea organismului. Astfel, de exemplu, exist specii mai puin complexe dect omul, dar cu un patrimoniu genetic mai bogat cantitativ dect cel al omului.

PCR: diagnostic mai rapid prin amplificare de ADN

Biologia moleculara a fost revolutionata de aparitia PCR, o metoda care creste logaritmic si controlat cantitatea de molecule de ADN. Conceptul de amplificare ADN este simplu si impactul sau extraordinar, fapt ce a adus descoperitorului sau Kary Mullis Premiul Nobel in anul 1993. Aparitia PCR a insemnat ca, cantitatile prea mici de ADN nu mai erau un impediment in cercetarile de biologie moleculara sau proceduri de diagnostic. PCR este o metoda de diagnostic moderna, care se bazeaza pe amplificarea unor secvente de ADN. Chimia din spatele metodei depinde de complementaritatea bazelor azotate din helixul dublu de ADN. Daca o molecula de ADN este incalzita suficient legaturile de hidrogen ce tin unite cele 2 lanturi se rup. Lasate sa se raceasca cele 2 catene rezultate pot reforma helixul dublu initial. Pentru ca metoda sa funtioneze este nevoie de minim o jumatate de helix de ADN, si apoi cu ajutorul unor primeri se va forma jumatatea complementara. Principiul poate fi impartit in 3 pasi: Denaturarea: incalzirea la 94C separa ADN-ul tinta in cele 2 catene Hibridizarea primerilor: prin racire la aprox 50C primerii se vor lega la catenele complementare

 Elongatia: Solutia se incalzeste la 72C si in pezenta polimerazei ADN termostabila, a Mn2+ si deoxinucleotidtrifosfatilor incepe procesul de replicare. Cu fiecare repetare a ciclului cantitatea de ADN obtinuta se dubleaza, dupa aproximativ 30 de cicluri se obtin peste 1 milion de copii ale fragmentului initial.

Metodele de detectare clasice ale agentilor patogeni precum metoda microscopica sau examenele serologice necesita de obicei mult timp, prezenta patogenului viu sau un titru ridicat de antigeni sau anticorpi specifici. PCR este o tehnologie complet noua care analizeaza materialul genetic al agentilor patogeni si vine sa inlocuiasca sau sa completeze aceste teste.PCR rezolva problema timpului cat si a cantitatii de patogeni necesari pentru testare.

Recoltarea i pstrarea probelor biologice

Investigatorii i personalul de laborator trebuie s colaboreze pentru a stabili cele mai edificatoare componente ale probelor i pentru a decide prioritile. Fiecare poliist trebuie s fie atent la aspectele importante privind identificarea, recoltarea, transportarea i depozitarea probelor de ADN. Aceste probleme sunt eseniale att pentru echipajul de poliie constatator, ct i pentru ofierul specialist i cel criminalist. Materialul biologic poate conine ageni patogeni periculoi precum HIV sau virusul hepatitei B care pot cauza boli letale. Avnd n vedere natura sensibil a ADN-ului, poliitii trebuie s contacteze personalul laborant sau tehnicienii, care se ocup de ridicarea probelor atunci cnd exist ntrebri privind recoltarea lor.

1. Identificarea probelor ADN ntruct doar cteva celule sunt suficiente pentru a obine informaii asupra unui ADN viabil, lista de mai jos identific nite indicatori care v-ar putea ajuta s recoltai, s aflai posibile locaii de ADN sau sursa biologic a celulei.

2. Transportul i depozitarea urmelor biologice ce conin ADN Atunci cnd se transport i depoziteaz urme ce conin ADN, este important s se pstreze probele uscate i la temperatura camerei. Odat ce urina a fost asigurat n pungi de hrtie sau plicuri, trebuie apoi sigilat, etichetat i transportat ntr-un mod care s asigure identificarea adecvat a locului unde a fost descoperit i apoi s fie bine pstrat. Niciodat nu se vor pune probe care pot conine ADN n pungi de plastic, deoarece acestea vor reine umezeal nociv. Condiiile de cldur i lumin solar direct pot, de asemenea, s duneze ADN-ului, deci, se va evita pstrarea urmelor

n locuri care se pot nclzi, cum ar fi camerele sau mainile de poliie fr aer condiionat. Pentru depozitarea pe termen lung, se va contacta laboratorul local.

3. Proba ADN prin eliminarea mostrelor Asemenea amprentelor, uzul ADN, necesit colectarea i analizarea lor prin eliminare. Adesea, este necesar acest procedeu pentru a determina dac urma provine de la un suspect sau de la alt persoan. Un poliist trebuie s aib acest aspect n vedere, nainte de data procesului. De exemplu, n cazul unui furt din locuina unde suspectul poate a but un pahar de ap la locul faptei, poliistul trebuie s identifice persoanele apropiate - membrii casei sau menajera pentru eliminarea viitoarelor teste. Aceste probe ajut la comparaia cu saliva gsit pe pahar, pentru a determina dac saliva reprezint o prob viabil. n cazurile de omor, asigurai -v s se recolteze ADN-ul victimei de la autopsie, chiar dac respectivul cadavru este n faz avansat de descompunere.

4. CODIS CODIS (Combined DNA Index System) este o baz electronic de date a tipurilor de ADN, care poate identifica suspecii, este similar cu AFIS (Automated Fingerpritnt Identification System). Fiecare stat din SUA implementeaz un index ADN al condamnailor pentru diferite infraciuni, cum ar fi - violul, omorul, abuzul asupra copiilor. Astfel, profilele ADN ale infractorilor intr n baza de date.

Note si Referine
1. Covic, tefnescu, Sandovici (2004), p. 19[5] 2. Covic, tefnescu, Sandovici (2004), p. 19[5] 3. ^ Just before Dr Franklin was to leave King's College, Dr Wilkins wrote to the Cambridge scientists that "the smoke of witchcraft will soon be getting out of our eyes". Explaining the situation to BBC News, Nature's commissioning editor Sara Abdullah said it added to "the canon of awful things said about [Dr Franklin]". "I think 'sexist' is what we are groping around for. "Obviously, this is a different time, it's 1953. There was personal tension; she was very unusual in being a leading woman in science at that time. - 'Lost' letters show strain between DNA pioneers, Katia Moskvitch (Science reporter, BBC News, 29 September 2010) http://www.bbc.co.uk/news/science-environment-11438569 4. ^ In early 1953, Maurice Wilkins showed James Watson the famous "Photograph 51". It was the crucial X-ray image of DNA made by Dr Franklin in the previous months, and it helped the two Cambridge biologists to develop the historic - and correct - double-helix model. - 'Lost' letters show strain between DNA pioneers, Katia Moskvitch (Science reporter, BBC News, 29 September 2010) http://www.bbc.co.uk/news/scienceenvironment-11438569 5. ^ http://profiles.nlm.nih.gov/SC/B/B/Y/W/_/scbbyw.pdf 6. ^ Ardell, David, Rosalind Franklin (1920 - 1958) 7. ^ a b Covic, M., tefnescu D., Sandovici I. (2004), Genetic Medical, Ed. Polirom, Bucureti

Bibliografie
1) http://profiles.nlm.nih.gov/SC/B/B/Y/W/_/scbbyw.pdf 2) Ardell, David, Rosalind Franklin (1920 - 1958) 3) Covic, M., tefnescu D., Sandovici I. (2004) - Genetic Medical, Ed. Polirom, Bucureti 4) STANCU E. Tratat de criminalistic, Ed. Actami, Bucureti, 2001. 5) STANCU E. Tratat de criminalistic, ediia a II-a, Ed. Universul Juridic, Bucureti, 2002. 6) STANCU E. Tratat de criminalistic, ediia a III-a, Ed. Universul Juridic, Bucureti, 2004. 7) Daniel Kevles (Editor), Leroy Hood (Editor) - The Code of Codes: Scientific and Social Issues in the Human Genome Project 8) http://ro.wikipedia.org/wiki/ADN