UNIVERSITATEA DE TIINE AGRICOLE I MEDICIN VETERINAR FACULTATEA DE ZOOTEHNIE I BIOTEHNOLOGII SPECIALIZAREA BIOTEHNOLOGII APLICATE

Diversitatea microorganismelor marine i aplicaiile acestora n biotehnologii

Prof. Coordonator: Criste Adriana

Masterant: Benchea Anamaria

2013
1

Contents

1.

Introducere....................................................................................................................................................... 3 1.1. Date generale despre microorganismele marine ...................................................................................... 3

2. 3. 4. 5. 6. 7.

Factorii care influeneaz prezena microorganismelor n mediile acvatice.................................................... 4 Rolul microorganismelor ................................................................................................................................. 5 Importana biotehnologiei marine ................................................................................................................... 5 Biotehnologia i resursele marine naturale...................................................................................................... 6 SCOPUL BIOTEHNOLOGIEI MARINE ...................................................................................................... 7 Exemple de microorganisme marine ............................................................................................................... 7 7.1. 7.2. Potenialul degradativ a bacteriilor marine izolate de la Posidonia oceanica ......................................... 7 Producerea de bioelectricitate produs din apele reziduale ..................................................................... 8

7.3. Analiza molecular i filogenetic pe tulpinile bacteriene izolate de la instalaia de tratare a apelor reziduale care conin PAHs ............................................................................................................................... 13 8. 9. Concluzii ....................................................................................................................................................... 14 BIBLIOGRAFIE ........................................................................................................................................... 15

1. Introducere
1.1. Date generale despre microorganismele marine Microbiologia studiaz procesele fizice, chimice i biologice legate de activitatea microorganismelor, pentru a putea folosi pe cele utile i pentru a contracara procesele duntoare omului. Microorganismele, cele mai vechi, mai numeroase i mai diversificate forme de via de pe pmnt, au rol n descompunerea materiei organice, menin fertilitatea solului, dar au un rol important n formarea zcmintelor petroliere, de crbuni, de salpetru (azotat natural de sodiu, salpetru de Chile, sau de potasiu, salpetru de India, folosii ca ngrminte minerale, la fabricarea acidului azotic etc. Din fr. Salptre) de sulf, n formarea minereurilor de fier. n mediul marin, microorganismele particip, prin transformarea substanelor din acest mediu, la circuitul elementelor biogene, la fenomenele geologice submarine cauznd, totodat i neajunsuri (diferite boli la peti, aciune coroziv, etc.). Mediile acvatice natural se clasific n funcie de natura habitatelor lor caracteristice i n funcie de concentraia n sruri. n apele deschise i la distan de sol, densitatea microorganismelor este rareori semnificativ pentru o contribuie eficient n ecosistem. n apele marine microorganismele sunt rspndite pe suprafee mari, datorit curenilor orizontali i verticali i prin amestecarea apelor de suprafa produs de vnt. Microorganismele din apele dulci au mai multe caractere n comun cu cele din sol, dect cu cele din apele marine. Apele curgtoare transport frecvent microorganismele din sol la distane mari. Odat ce au ajuns n mediul marin, acestea nu supravieuiesc deoarece factorii de mediu le sunt nefavorabili (salinitatea, temperatura, presiunea, diluia nutrienilor). Apele freatice sunt lipsite de obicei de microorganisme, deoarece acestea sunt reinute n straturile superioare ale solului. (Felicia Toma, 2005) CE SUNT MICROORGANISMELE MARINE? n genere, distincia ntre microorganismele terestre i cele acvatice, este destul de clar chiar dac acest lucru este atribuit n parte diferenelor tradiionale i istorice n abordrile tiinifice dintre acvatic i microbiologia solului. Distincia dintre ap dulce i microbiologia marin este mai puin cunoscut deoarece se bazeaz pe presupunerea c salinitatea este un factor de discriminare, adic microorganismele care cresc n ap dulce nu apar i n ocean i vice-versa. Dar acesta nu este cazul, deoarece microorganismele apar ntr-o gam larg de medii acvatice cu diferite medii de salinitate. Schimbul de gaze ntre suprafaa oceanului i atmosfer implic aer (cel mai mult oxigen i dinitrogen) precum i urme de CO2, N2O, CH4 i dimetilsulf (DMS).
3

http://www.marineboard.eu/images/publications/Microbial%20Diversity-117.pdf, Oliver Glckner i colab. , 2012

Frank

2. Factorii care influeneaz prezena microorganismelor n mediile acvatice

Factorii care influeneaz prezena microorganismelor n mediile acvatice sunt: 1. Lumin reprezint un factor esenial pentru asigurarea vieii n ecosistemele acvatice, deoarece ea poate fi util pentru fotosintez, dar numai pn la o anumit adncime. n zonele mai puin iluminate ntlnim bacterii fototrofe anaerobe purpurii i verzi, care fac fotosintez utiliznd H2S. Lumin foarte intens de asemenea poate produce efecte inhibitorii, sau distructive, ceea ce ar fi o explicaie a numrului redus de microorganisme la suprafaa apelor oceanice. 2. Temperatura este rspunztoare de ncetinirea activitilor metabolice ntru ct la suprafaa apei mrii aceasta este de 280 C la tropi i de 00C la poli. 3. Presiunea hidrostatic crete odat cu adncimea i influeneaz natura organismelor i procesele biologice din mediul marin, solubilitatea i viteza de transport a nutrienilor prin membrana celular. 4. Turbiditatea apei condiioneaz adncimea pn la care radiaiile solare pot asigura procesul de fotosintez. 5. Salinitatea este un factor care influeneaz natura microorganismelor. Microorganismele din apele dulci sunt halofobe, iar dac sunt transferate n mediul marin mor. Cele halotolerante supravieuiesc n mediul marin, ns cresc mai lent dect n mediul lor natural, iar cele halofile prefer apele cu o salinitatea de pn la 4 %. http://www.scrigroup.com/educatie/biologie/NOTIUNI-DE-MICROBIOLOGIA-APELO83228.php nc de cnd a nceput viaa n ocean, microorganismele marine sunt descendenii cei mai apropiai a formelor originare de via. Ele sunt pionii principalii ai biosferei, iar metabolismul lor unic permit microbilor marini s efectueze multe etape ale ciclului biogeochimic, fa de alte organisme care sunt n imposibilitate de a finaliza. Buna funcionare a acestui ciclu este necesar pentru continuarea vieii pe pmnt. Microorganismele marine de asemenea au ajutat la crearea unor condiii n care ulterior viaa s-a dezvoltat. Cu mai bine de 2 milioane de ani n urm, generarea oxigenului de ctre microorganismele marine fotosintetice a ajutat (forma) mediul chimic n care plantele, animalele i celelalte forme de viaa au evoluat.
4

Rezultatul unui colocviu convocat de Academia n 2005 n San Francisco, unde experii n fiziologia microbian, ecologie, genetic, oceanografie, virusologie, arat importana microorganismelor marine pentru viaa pe aceast planet, rolul relaiilor de simbioz, capacitatea lor metabolic, impactul asupra oamenilor. http://www.terradaily.com/reports/Understanding_Oceanic_Microbes_Critical_To_Understan ding_Future_Of_Earth.html

3. Rolul microorganismelor
Cercetrile interdisciplinare au gsit un nou i neateptat rol o microbilor n ciclul biogeochimic de Carbon, azot, siliciu, fier i alte elemente din mri i oceane. Microorganismele marine produc materie organic i oxigen necesar vieii i faciliteaz stocarea, transportul elementelor biologice cheie. Microorganismele marine reprezint o mare diversitate genetic: oceanul conine peste 1 milion de microorganisme per mililitru i sute de specii microbiene; sunt cheia tuturor ciclurilor biochimice i sunt cruciale pentru buna funcionare a ecosistemelor marine. Sunt o larg surs neexploatat de compui bioactivi noi i ci metabolice care ar putea fi exploatate pentru noi aplicaii biotehnologice i produse. Microorganismele sunt responsabili pentru degradarea materiei organice n ocean i menin balana ntre producerea i fixarea CO2. Acestea joac un rol indispensabil n asigurarea unei provizii durabile de fructe de mare i oferirea unei soluii n reglementarea proceselor de acvacultur i bioremediere. http://www.marineboard.eu/images/publications/Microbial%20Diversity-117.pdf, Glckner i colab. , 2012 Frank Oliver

4. Importana biotehnologiei marine

Peste 80% din organismele care triesc pe Pmnt se gsesc doar n ecosistemul acvatic, dei se cunosc puine despre caracteristicile biochimice. Peste 40% din apele Costelor sunt nefavorabile pentru not datorit bacteriilor i poluanilor. Provocarea const n a descoperi creterea de via i proprietile de salvare a acestor organisme unice.
5

Provocarea este de a dezvolta tehnologii biologice necesare pentru identificarea surselor de stres ecologic pentru a dezvolta strategiilor pentru a proteja i de a restabili resursele. Dezvoltarea de tehnologii molecular, care va permite oamenilor de tiin i managerilor s diferenieze populaiile i adresa boli emergente pentru a proteja i resurse ecologice reprezint o provocare pentru oamenii de tiin. http://www.research.noaa.gov/oceans/t_biotech.html

5. Biotehnologia i resursele marine naturale

Microorganismele marine (virusurile, bacteria i microalge) reprezint cea mai larg resurs de biotehnologie neexploatat de pe planet. Biotehnologia marin folosete organisme marine la nivel celular su nivel molecular, pentru a oferi soluii benefice societii. Un gigant virus a fost izolat i caracterizat de PML (Plymouth Marine Laboratory), care infecteaz o suprafa a fitoplanctonului marin i formeaz flori imense n Oceanul Atlantic. Aceste flori elimin milioane de tone de CO2 din atmosfer. Cercettorii au descoperit c acesta este un prim exemplu a unui virus care conine gene implicate n moartea celular i frecvent folosite i n cremele anti-mbtrnire. Studii suplimentare de multe gene descoperite de oamenii de tiin PML poate duce la noi terapii pentru mbtrnire i cancer, precum i la nelegerea importanei rolului care l joac microorganismele marine n schimbrile de clim. Multe bacterii nu au fost identificate sau cultivate n laborator deoarece cresc foarte greu. Datorit unui studiu asupra efectelor acidifierii oceanului, s-au secveniat milioane de fragmente de ADN, n care majoritatea genelor au fost noi i nu au fost descrise anterior. Acest e bacterii sunt o bogat surs de produse naturale care ar putea fi nepreuite n procesul de descoperire a medicamentelor pentru diferite boli cum ar fi cancerul, boli cardiovasculare, mbtrnirea, obezitatea i diabetul. Microalgeele, un aspect de viitor Microalgeele sunt plante microscopice cunoscute ca producnd multe beneficii substaniale cu un potenial folosit n mncare, cosmetice i industria farmaceutic. http://www.pml.ac.uk/pdf/Marine%20Biotechnology%20v1.pdf

6. SCOPUL BIOTEHNOLOGIEI MARINE

Mediul marin este bogat n biodiversitate cu noi specii de micro i macroorganisme, care ar putea servi pentru o varietate de noi produse i procese. Anumite produse biomedicale bazate pe biotehnologia marin deja au fost comercializate. Biotehnologia marin poate fi definit ca tehnologia care folosete organisme marine pentru a face sau a modifica produse. Oceanul acoper 75% din suprafaa Pmntului, iar biosfera marin este una din cele mai bogate habitate ale Pmntului. Biodiversitatea marin este extrem de mare i aceasta este consecina direct a variabilitii extraordinare a biosferei care cuprinde o gam termal mare (de la -1,50C n Oceanul Antarctic pn la 3500C n adncuri), o gam variat de nutrieni de la oligotrofic la eutrotrofic i de la zone fotice la non-fotice. (Horst i colab., 2008)

7. Exemple de microorganisme marine

7.1. Potenialul degradativ a bacteriilor marine izolate de la Posidonia oceanica Angiosperma marin Posidonia oceanica reprezint o pajite care se dezvolt de-a lungul Coastei Mediteraniene, avnd un rol ecologic important n mediul marin. Aceast pajite este n scdere, probabil datorit unei combinaii complexe de factori fizico-chimici. Oricum factorii biotici ar putea contribui la declinul ierburilor din mare. Activitatea enzimatic a bacteriilor izolate aparinnd ctorva genuri recuperate de la diferite esuturi de P. oceanica au fost analizate att de sistemul API ZYM ct i prin hidroliza componentelor plantei n plci de agar. Rezultatele au indicat faptul c tulpini din spp. Pseudoalteromonas i Altermonas au o activitate enzimatic bun. Gradul mare de degradare sugereaz c unele bacterii de la P. oceanica ar putea cauza plantei leziuni, fcnd-o mai susceptibil la atacul bacteriilor patogene sau alte microorganisme care ar putea folosii aceste portaluri de intrare, sau ar crete susceptibilitatea la orice alt factor de stres. Cele mai multe culturi izolate din rizomii, rdcinile i frunzele acestei ierbi, aparin spp. Vibro, Pseudoalteromonas, Alteromonas i Marinomonas genuri care se gsesc n diversitatea habitatelor marine, demonstrndu-se totodat i patogenitatea pentru peti i alge. Aceste specii bacteriene ar putea afecta variabilitatea angiospermelor marine, n ciuda studiilor fcute fa de activitatea bacterian i producia de iarb n mare. S-a realizat un studiu unde s-a evaluat potenialul enzimatic a unei colecii de bacterii izolate, aparinnd celor mai abundente genuri asociate cu P.oceanic. Abilitile enzimatice expuse de unele dintre aceste izolri sugereaz c unele specii bacteriene pot cauza anumite daune plantei, fcnd-o i mai susceptibil la factori de stres.
7

n acest sens pri din rdcini, rizomi i frunze au fost mrunite pe un mediu de ap artificial, dup care extractul a fost incubat 2ore la 25 0C. Tulpinile au fost cultivate pe agar marin (M) la 250C. Pe aceste eantioane izolate s-au identificat secvene de ADN ribozomal 16s. Secvenele de ADN au fost determinate prin PCR. Activitatea amilazei, pectinei i celulozei a fost determinat pe plci de agar (M) n combinaie cu amidon, pectine citrice sau carboximetil celuloz n conc. de 1%. Activitatea izolrilor a fost relevant dup 48 ore de incubare la 250C, dup apariia unei aure albe (pectinaz) sau clearance noiune introdus de Van Slyke care exprim cantitatea de plasm epurat de ctre rinichi n unitatea de timp, pentru o substan dat-(celuloz sau amilaz) n jurul coloniilor, direct sau dup adugarea soluiei Lugol s n cazul amidonului. Rezultatul probelor prelevate n primvara a fost acesta: majoritatea izolrilor (3 din 4 eantioane de pajiti) aparineau spp. Vibro (10-60% din totalul izolrilor), Marinomonas (8-30%) i Pseudoaltermonas. Aproape 95% din izolrile de la spp Pseudoaltermonas au fost capabile s degradeze amidonul, n jur de 55-65% dintre acestea aparinnd spp. Altermonas i Vibrio. Capacitatea de degradare a celulozei se pare c e mai puin extins i doar 20% din izolri au aceast abilitate. n cazul pectinei, rezultate pozitive s-au gsit doar la 9% din spp Pseudoaltermonas izolate i cteva la tulpinile spp Altermonas i Vibrio. Nici o izolare a spp Marinomonas a artat capacitatea de degradare a celulozei sau pectine i nici o tulpin a bacteriei marine nu a artat nici un fel de capacitate de a degrada orice substrat. n concluzie tulpinile spp. Pseudoaltermonas i Altermonas aproape 20% au fost capabile s hidrolizeze celuloza, chiar i pectina. Se sugereaz faptul c unele bacterii ar putea profita de abilitatea acestor enzime cnd sunt n contact cu P.oceanic, deoarece amidonul, celuloza i pectina sunt componente ale plantei. (Antonio Mendez-Vilas, 2007) 7.2. Producerea de bioelectricitate produs din apele reziduale O echip de cercettori americani a construit un dispozitiv descris ca revoluionar, capabil s genereze electricitate din aproape orice tip de ap rezidual. Specialitii Universitii de Stat Pennsylvania (Penn State) spun c tehnologia pe care au dezvoltat-o permite i purificarea apei n cursul aceluiai proces de exploatare energetic. O abordare similar este studiat de muli ani n Olanda, unde oamenii de tiin exploreaz ideea generrii de energie electric de-a lungul zonelor de coast n care apele dulci ale fluviilor ntlnesc apele srate ale mrii. Utiliznd un proces numit electrodializ inversat (RED reverse electrodialysis), apa dulce i apa srat sunt plasate n camere succesive, separate de membrane, crend astfel o sarcin
8

electrochimic. Echip american spune ns c tehnologia RED este problematic, n primul rnd pentru c necesit un numr foarte mare de membrane, dar i pentru c si stemul trebuie amplasat pe mare, fiind expus prea multor variabile de mediu.

n abordarea american, necesarul de membrane este redus drastic, iar eficiena energetic este crescut prin utilizarea aa-numitelor pile de combustie microbiene (MFC microbial fuel cells). Aceste MFC implic folosirea de materii organice n soluie (ape reziduale) pentru a genera curent electric. Prototipul dezvoltat de Penn State mai reuete i s elimine din ecuaie nevoia de ap srat, implicnd n sistem o substan chimic ieftin, bicarbonatul de amoniu. Bicarbonatul de amoniu nu este doar ieftin, ci i reciclabil, ceea ce face sistemul simplu i ieftin de aplicat chiar i n comunitile situate departe de mri i oceane. Profesorul Bruce Lang, a spus Dac tratm apa rezidual doar n pilele de combustie microbiene nu vom crea mult energie i ne va lua foarte mult timp s o facem. n procesul gndit de noi, avem partea MFC care trateaz apa rezidual i creeaz energie, dar i bateria RED care accelereaz procesul, fcndu-l mai eficient. http://www.scienceworld.ro/stiri/energie-din-ape-reziduale-11755.html PCB (pila de combustie) indirect, recomandat pentru a fi folosit n zborurile spaiale, capabil de a recupera apa sau oxigenul din unele deeuri, este sistemul ce conine bacteriile Chlorelle pyrenoidosa la catod i Micrococus ureae la anod. http://referate.unica.ro/referat-Pila_de_combustie_biochimica-9087.html O pil de combustie const dintr-un anod alimentat cu combustibil (H2) i un catod alimentat cu oxigen din aer, separai ntre ei printr-un electrolit care permite transferul de ioni ntre cei doi electrozi. Pil de combustie microbian (MFC) este un dispozitiv care transform energia chimic a unui substrat organic n energie electric folosind microorganismele ca i catalizator. Puterea maxim obinut a fost de 0.288mW, putere care s-a obinut cu ajutorul MFC. Aceste pile de combustie microbian are un rol dublu i anume producerea de de bioelectricitatea i totodat i tratarea apelor reziduale. Cu ajutorul acestor pile se reduce i costul de operare n tratarea apelor reziduale. Formele regenerabile a energiei sunt mai proeminent pronunate datorit epuizrii nonregenerabile. Producia de electricitate din surse regenerabile fr o emisie de dioxid de carbon este mult dorit. MFC reprezint o form nou de regenerare a energiei prin convertirea materiei organice n electricitate folosind bacteria ca i catalizator. Milioane de galoane de ape reziduale provenite din industriile, gospodrii au un coninut organic ridicat, iar utilizarea lor ar fi ideal ca un substrat n MFC. Tratarea apelor reziduale este foarte esenial pentru a menine un mediu curat, lipsit de poluare. Prin urmare, aceast metod este utilizat pentru a genera electricitate i a trata apele reziduale. Procesul
9

metabolismului microbian este complex, implic multe reacii catalizate de enzime. n metabolismul microbian, un substrat precum carbohidraii sunt oxidai fr participarea oxigenului, iar electronii sunt eliberai de reacii enzimatice. Aceste electronii sunt stocai ca intermediari i sunt utilizai n reacii Redox: ca urmare, energia este eliberat i este folosit pentru a alimenta n continuare reacii pentru meninerea i creterea celulei prin reacii bio-sintetice. Toate pilele de combustie au o structur asemntoare: acestea conin doi electrozi separai de un electrolit i care sunt conectai ntr-un circuit extern. Anodul este alimentat cu combustibili gazoi, aici avnd loc oxidarea lor direct, iar catodul este alimentat cu un oxidant (de exemplu oxigenul din aer). Electrozii trebuie s fie permeabili, aadar au o structur poroas. Electrolitul trebuie s aib o permeabilitate ct mai sczut (fig.1)

Fig.1 Schema unei pile de combustie http://www.ecomagazin.ro/americatesteaza-%E2%80%9Emotorulviitorului%E2%80%9C/

n celule de combustie, metabolismul anaerobic trebuie s fie promovat la un anod care s converteasc materia organic n electricitate n mod eficient. Fermentaia este un proces anaerob, dar produii rezultai nu reacioneaz uor cu electrozii ci i pstreaz. Sursa MCF este n general materia organic degradabil. Microorganismele catalizeaz i elibereaz electroni din materia organic i i transfer la diveri transportori de electroni care sunt activi din punct de vedere electrochimic. Separnd microorganismele de sursa de oxigen, pila de combustie ar interpreta fluxul de electroni la oxigen pe care microorganismele le-ar cataliza dac oxigenul ar fi viabil. Acest lucru faciliteaz transferul electronilor la anod (fig.2).

10

Fig.2

Fotografia cu cele dou compartimente a MFC Antonio 2007 Mendez-Vilas,

Exist dou ci prin care microorganismele pot transfera electronii la anod: folosind mediatori precum Thionone, Rou neutru i mediatori produi de Bacteria (transfer direct de electroni prin sistemul respirator prin legarea membranei citocromului). Shewanella putrefaciens, Geobacter sulfurreducens, Geobacter metallireducens i Rhodoferax ferrireducens au fost gsite ca fiind implicate n transferul direct de electroni la anod. Aa cum deja am menionat MCF este alctuit din dou compartimente (anod i catod) ambele fiind fcute din electrozi de carbon de dimensiunea de 12.5 cm x 0.5 cm. n ambele suprafee s-a plasat 2 electrozi, iar volumul fiecrui compartiment cu electrod a fost de 1litru. S-a realizat un experiment pe trei medii cu surs de combustibil diferite i anume: pe medii sintetice provenite din apele reziduale (glucoz, 3 g/l; NH4Cl, 0,5 g/l; H2PO4, 0,20 g/l; K2HPO4, 0,20 g/l; MgCl2, 0.25 g/l; CoCl2, 20 mg/l; ZnCl2, 10 mg/l; CuCl2, 10 mg/l; CaCl2, 4 mg/l; MnCl2, 10 mg/l), ape reziduale de la separatorul de lamele i pe nmol anaerobic. Inoculul bacterian obinut prin inocularea a 5% de nmol (85% ap) a fost folosit pentru mediul sintetic de ape reziduale, s-au colectat plantele, iar microbii din ape i din nmol au fost inoculate. Experimentul s-a realizat la 30 0C. Sistemul a angajat srurile care au conectat compartimentele de anod i catod. Aceast punte de sruri a fost pregtit cu soluie de sruri sturate (NaCl, 5% agar pentru solidificare). Fluxul de electroni se face de la anod la catod printr-un circuit extern. Mecanismul biologic se desfoar astfel: microorganismele folosite sunt complet lipsite de oxigen n compartimentul anod i astfel fluxul de electroni la oxigen poate fi interceptat. Astfel electrozii acioneaz ca acceptori de electroni, iar electronii sunt transportai prin circuitul extern, formnd ap n compartimentul catod. Ambele compartimente sunt separate de o punte de sruri care restricioneaz difuzia oxigenului de la compartimentul catod la anod permind protonilor eliberai de metabolismul materiei organice s se mute de la anod la catod. La catod, electronii, protonii i oxigenul se combin pentru a forma ap.
11

Procesul de oxidare/reducere n compartimentul anod produce un gradient de hidrogen i permite protonilor (H) s difuzeze la o poriune de catod prin puntea de sruri. Datorit acestui lucru (catodul permite oxigenului s difuzeze din aer), apa este format. Energie disponibil din gradientul de protoni datorit anodul este valorificat prin conectarea unui circuit extern de la anod la catod pentru a permite fluxul de electroni. S-a fcut i un test pentru a msura eficiena, astfel c setrile au fost duplicate n triplei i au fost conectate n serie i n paralel. Rezultatul potenial a fost calculat c ieire unic, iar eficacitatea a fost testat. Citirile au fost nregistrate dup 3 zile, considernd perioada de aclimatizare i de cretere a bacteriilor. Tensiunea a fost nregistrat la un interval de 24h. Tensiunea produs a fost msurat cu un multimetru, apoi s-a calculat puterea folosind formula, P=VI, unde I este curentul generat care s-a calculat folosind legea lui Ohm, V=IR. Densitatea de putere PD s-a calculat folosind formula PD=P/A, unde A este suprafaa anodului (m2). Comparea rezultatelor obinute pe cele trei medii este prezentat n tabelul numrul 1. Tabelul 1 Substratul Tensiunea (V) Curent (m) Puterea (mW) Densitatea (mW/m2) Ape sintetice Ape reziduale din 0.7 Lamella separator Nmol anaerobic 1.25 0.070 0.0875 21.87 0.027 0. O189 .725 reziduale 1.563 0.070 0.1094 27.35

n concluzie tensiunea mare s-a obinut n apa rezidual sintetic simpl n comparaie cu celelalte substraturi folosite. ns substratul folosit din nmolul anaerobic a avut a generat un potenial de 80% din apa sintetic. Astfel: 1. Substratul de nmol anaerobic este ideal pentru tratarea apelor reziduale i servete totodat i ca substrat pentru MFC. 2. Exist civa factori care ar putea fi responsabili pentru electronii puini i pentru recuperarea de energie n MFC. Factorii depind fie direct sau indirect unii de alii. Implementarea la scar larg a acestei metode va necesita o dezvoltare a unei strategii. mbuntiri suplimentare pot fi fcute la MFC astfel configuraii pentru a mbunti recuperare de energie sau pentru a crete tensiunile prin legarea MFCs n serie. Acest lucru poate duce la noile tehnologii care vor genera electricitatea folosind MCF ca o metod practic n tratarea apelor
12

reziduale. (Antonio Mendez-Vilas,2007, Production of Bioelectricity from Wastewater using stacked Microbial Fuel Cells) 7.3.Analiza molecular i filogenetic pe tulpinile bacteriene izolate de la instalaia de tratare a apelor reziduale care conin PAHs S-a fcut o cercetare n ceea ce privete analiza molecular i filogenetic a hidrocarburilor care degradeaz bacteria, prelevndu-se probe de hidrocarboni policiclici aromatici (PAHs) de la o instalaie de tratare a apelor reziduale din Italia. Tulpina bacteriei ne arat o secven de gen n locusul 16S a ARN r, secven descris n GenBank (NCBI), care aparine genurilor Achromobacter, Acinetobacter, Bacillus, Cellulosimicrobium, Gordonia i Pseudomonas. n plus genele catabolice pentru metabolismul hidrocarburilor au fost investigate prin amplificarea PCR i secvenierea ANDului. Aadar pentru sp. Acinetobacter tulpina LU6 i pentru sp. Pseudomonas tulpina LU7 i LU9 concluziile filogenetice au fost obinute pe gene codificate de NOx reductaza a ci de denitrificare. Datele molecular obinute au fost abordate pentru detectarea simultan a oligonucleotidelor prin tehnica microarray. Se ncearc izolarea unor tulpini bacteriene care adpostesc oxigenazele (grup de enzime, oxigenaze, ce intervin n diverse procese oxidative din organism, http://www.revistagalenus.ro/indexmedical/item/8639-citocrom-p450.html), dar i alte enzime cu substrat specific. n acest scop se caracterizeaz un numr diferit de bacterii care provin n special din apele reziduale i se utilizeaz diferite tehnici molecular pentru a studia compoziia i diversitatea genetic a hidrocarbonilor care degradeaz bacteria, izolate de la o instalaie de tratare a apelor reziduale din Italia ce conin PAHs. Au fost determinate caracteristicile taxomonice a tulpinilor bacteriene n care s-a gsit secvena de gen 16S ARNr, tulpini care pot crete pe compui de hidrocarburi. Deoarece calea de oxidare anaerob poate reprezenta o importan n zona de oxido-reducere, iar diferitele bacterii denitrificate care folosesc hidrocarboni pot fi promitoare pentru aplicarea unei tehnologii de bioremediere a siturilor contaminate cu petrol, analizele molecular i filogenetice au fost efectuate cu ajutorul genelor codificate de NOx reductaza a ci de denitrificare. Ca metod de lucru s-a izolat tulpini de bacterii pe mediu de agar care aveau disel ca singur surs de carbon. Morfologia acestei tulpini a fost determinat urmrind tulpinile i examinndu-le prin contrast de faz i scanarea microscopic cu laser. ADNr 16S i doi factori de transcriere (rpoD i Rho) au fost amplificai prin PCR i secveniai. Pentru aplificarea ADNr s-au folosit primeri universali, n timp ce pentru gena codificatoare rpoD i Rho s-au creat special. Produi PCR au fost purificai i secveniai cu aceeai primeri PCR. Nucleotidele obinute i reziduurile de aminoacizi au fost comparate cu datele de acces din baza de date GenBank. Analizele filogenetice s-au efectuat cu ajutorul unor softuri i toate replicrile au fost calculate.
13

Tulpinile bacteriene au fost strns legate (98%-99% secvene ADNr identice) de datele prezente n GenBank, care aparineau genurilor Acinetobacter, Bacillus, Cellulosimicrobium, Gordonia i Pseudomonas. Pentru a se observa relaiile evolutive s-a realizat multiple alinieri de secvene i arborele filogenetic. Bacteriile care locuiesc n apele reziduale sunt un potenial agent de bioremediere a hidrocarbonului, numeroase studii arat c izolarea i caracterizarea tulpinilor aparin genurilor Acinetobacter, Bacillus, Cellulosimicrobium, Gordonia i Pseudomonas care au capacitatea de a crete folosind PAHs ca singura surs de carbon i energie. S-a sugerat faptul c grupul - i - de Probacteria i bacteriile Gram + joac un rol esenial n degradarea polurii cu ulei i petrol. Acest studiu a identificat bacteriile implicate n degradarea hidrocarbonului, dar nu a determinat rolul n degradarea diferitelor componente de hidrocarburi petroliere, deoarece numai tulpinile menionate mai sus pot crete cu disel ca singura surs de carbon. Deoarece diferite bacterii denitrificate pot folosi hidrocarbonii, pentru sp. Achromobacter tulpina LU6 i pentru sp. Pseudomonas tulpina LU7 i Lu9 interferenele filogenetice s-au obinut cu genele codificatoare NOx reductaza. Cultivarea bacteriilor este necesar pentru a studia capacitile fiziologice a fiecarei tulpini n parte. Tehnica bazat pe cultur se folosete n ecologia microbian dei izolarea subestimeaz diversitatea bacterian. O importan deosebit o au genele catabolice pentru metabolismul hidrocarburilor i au fost studiate prin izolarea lor i amplificarea prin PCR dup care a urmat secvenierea AND. Investigaii suplimentare de cuantificare a diferitelor grupuri denitrifiate prin tehnica FISH (hibridizarea in situ prin fluorescen) i ADN microarray sunt n curs de desfurare. (Antonio Mendez-Vilas,2007, Molecular and phylogenetic analysis on bacterial strains isolated from a PAHs wastewater treatment plant)

8. Concluzii
Microorganismele marine reprezint cea mai larg surs de biotehnologie neexploatat de pe planet, producnd materie organic i oxigen necesar vieii. Exploatarea acestora ar fi benefic pentru noi aplicaii biotehnologice cum ar fi bioremediarea solului, epurarea apelor reziduale, obinerea de electricitate etc. Studiile deja efectuate ne dau sperane n ceea ce privete noi terapii de anti -mbtrnire, descoperirea de noi medicamente pentru tratarea diferitelor boli precum cancerul, bolile de inim etc. Cu alte cuvinte microorganismele marine au un potenial n mncare, cosmetic, industria farmaceutic i nu numai.

14

9. BIBLIOGRAFIE A. Cri
1. Antonio Mendez-Vilas, 2007, Current research topisc n applied microbiology and microbila biotechnology, pp.208-213; 313-317; 327-333 2. 3. Felicia Toma, 2005- Curs de bacteriologie, Univ Med si Farm Tg Mures Frank Oliver Glckner i colab. ,2012, Marine Microbial diversity and its role in Ecosystem

Functioning and Environmental Change, p. 5; 12 4. Horst Werner Doelle si col, 2008, Biotechnology, Encyclopedia of Life support system, p. ,1

B. Site-ografie
1. http://www.ecomagazin.ro/america-testeaza-%E2%80%9Emotorul-viitorului%E2%80%9C/

2. 3.

http://www.marineboard.eu http://www.pml.ac.uk/pdf/Marine%20Biotechnology%20v1.pdf http://www.research.noaa.gov/oceans/t_biotech.html http://www.revistagalenus.ro/index-medical/item/8639-citocrom-p450.html http://www.scrigroup.com/educatie/biologie/NOTIUNI-DE-MICROBIOLOGIA-

4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.

APELO83228.php http://www.scienceworld.ro/stiri/energie-din-ape-reziduale-11755.htm http://referate.unica.ro/referat-Pila_de_combustie_biochimica-9087.html

http://www.terradaily.com/reports/Understanding_Oceanic_Microbes_Critical_To_Understand

ing_Future_Of_Earth.html

15

16